益胆汤防治胆囊胆固醇结石作用机制及SCF/c-Kit信号通路分析

目的:探讨益胆汤防治胆囊胆固醇结石作用机制,分析SCF/c-Kit信号通路。方法:将60只豚鼠随机均等分为A、B、C三组。其中A组行常规饲料饲养,B组给予含高胆固醇的饲料进行饲养,C组行高胆固醇的饲料+益胆汤饲养。喂养6周后处死豚鼠以检测胆固醇结石生成情况。同时行Western blot法、RT-PCR法对小鼠胆组织中的c-Kit及SCF的含量进行检测。结果:A组成石率低于C组,且两组均低于B组(P<0.05);B组胆固醇浓度及胆汁酸浓度高于C组,且两组均高于A组(P<0.05),A组致石指数与C组较为一致,均显著低于B组(P<0.05);B组与A组豚鼠组织中,其c-Kit与SCF及GAPDH基因有效扩增,B组c-Kit与SCF的mRNA的表达明显低于A组(P<0.05)。而C组在c-Kit与SCF蛋白表达上明显高于B组,且均低于A组(P<0.05)。结论:益胆汤能够有效提高豚鼠体内SCF/c-Kit的表达,防治胆囊胆固醇结石效果较好。

蛋黄中胆固醇含量测定方法的研究

比较研究了高效液相色谱法(HPLC法)、皂化-比色法和试剂盒法3种测定蛋黄胆固醇含量的方法,结果表明,HPLC法能够准确、快速的分析出蛋黄中的胆固醇含量,较皂化-比色法和试剂盒法的准确度高。HPLC法测定蛋黄胆固醇含量的前处理为:用95%乙醇处理蛋黄稀释液,再用乙醚和石油醚混合萃取出胆固醇,用氮气吹干后加无水乙醇溶解,经0.45μm有机微孔滤膜过滤后制成样品。色谱条件为:C18柱,乙腈-异丙醇(41,V/V)作为流动相,流速为0.8mL·min-1,柱温35℃,检测波长210nm,进样量10μL,出峰时间14.578min。采用外标法定量。

国产血清胆固醇试剂盒测定蛋黄胆固醇的研究

以两种国产血清胆固醇酶法试剂盒(Ⅰ、Ⅱ)测定蛋黄胆固醇含量,评价用血清胆固醇试剂盒测定食品胆固醇的可行性。并将此法与国家标准方法(Feng法)进行比较。其结果是:试剂盒Ⅰ在胆固醇409μg/管,粗脂肪8878μg/管范围内线性良好,rⅠ=0.9999,YⅠ=0.00390X+0.0040;试剂盒Ⅱ在胆固醇205μg/管,粗脂肪4439μg/管内线性良好,rⅡ=0.9994,YⅡ=0.00414X-0.0005。批内变异:C·VI=3.286%,C·VⅡ=3.774%,批间变异:C·VⅠ=4.157%,C·VⅡ=4.906%;回收率:Ⅰ为97.6～104.0%,Ⅱ为98.38～104.9%。试剂盒法与国标法相关良好;rⅠ=0.9972,YⅠ=1.049X-2.083;rⅡ=0.9989,YⅡ=0.9984X-0.6266。试剂盒酶法比国标法省略了皂化,再萃取,再抽干和试剂配制的步骤,而且可以避免强酸伤害人体和腐蚀仪器。

豚鼠胆囊胆固醇结石形成过程中肠道传输功能下降的细胞及分子机制探讨

目的探讨豚鼠胆囊胆固醇结石形成过程中肠道传输功能下降的细胞和分子机制及其与胆石形成的关系。方法健康雄性豚鼠40只,4周龄,体质量120～125g。将其随机分为实验组与对照组,每组20只。实验组给予致石饲料(胆固醇含量2%),对照组给予正常颗粒饲料。8周造模结束后,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测小肠组织中c-kit及scf的mRNA的表达情况,利用末端回肠全层铺片免疫荧光化学染色及激光共聚焦显微镜观察各组Cajal样间质细胞(ICCs)数量的变化。结果 RT-PCR结果显示,与对照组相比,实验组豚鼠小肠c-kit(0.316±0.056vs0.912±0.103;t=6.582,P<0.01)和scf(0.499±0.012 vs 0.899±0.124;t=6.163,P<0.01)的mRNA水平的表达量下降;对照组豚鼠回肠ICCs平均阳性面积为(56.24±2.68)%,实验组为(22.26±1.14)%,较对照组明显降低(t=15.256,P<0.01)。结论饮食诱导的豚鼠胆囊胆固醇结石形成过程中,小肠c-kit和scf基因mRNA表达水平下降,ICCs数量明显减少。c-kit/scf通路抑制可能参与胆囊胆固醇结石的形成过程中肠道传输功能下降的发生。

HPLC和试剂盒两种测定鳗鱼胆固醇方法的比较

采用高效液相色谱法测定鳗鱼中的胆固醇含量,以C18(4.6mm×250mm,5μm)为固定相,乙腈-异丙醇(60∶40)为流动相,流速为1.0mL/min,检测波长为210nm,测定结果是,胆固醇浓度在6mg/L～600mg/L范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系(r=0.99947),最小检测限为1mg/L,低、中、高3个浓度的加标回收率分别为98.75、100.7、102.75%,方法精密度(CV)为0.4%。通过比较HPLC与胆固醇试剂盒测定的鳗鱼胆固醇结果表明,两种方法差异显著且试剂盒测定的鳗鱼中胆固醇比HPLC方法平均偏高67.7%,并讨论了试剂盒方法偏高的原因。

直接法测定低密度脂蛋白胆固醇

为了提高血脂检验技术 ,探讨直接法测定低密度脂蛋白胆固醇 (LDL C) ,选用市售的两种直接测定LDL C的试剂盒进行方法学的实验评价 ,结果表明 :直接法具有简便、快速、准确和适合自动分析等特点 .两种试剂盒的测定结果都能满足建立分析方法要求的目标 ,不精密度 <4% ,两法显著相关r =0 994,^y=1 0 5 72x -0 10 5 2 ,Sy/x=0 1913 ,且各种方法学检验结果相近 。

高胆固醇饮食豚鼠胆囊组织中c-kit和scf mRNA及蛋白的表达变化研究

目的探讨豚鼠胆囊胆固醇结石形成过程中c-kit及scf mRNA及蛋白的表达变化情况。方法将20只豚鼠随机分为2组,分别给予普通饲料及致石饲料,致石周期为6周。RT-PCR检测胆囊组织中c-kit及scfmRNA的表达情况,Western blot检测c-kit及scf蛋白的表达情况。结果 RT-PCR结果显示,与对照组相比,致石组豚鼠胆囊c-kit mRNA(t=6.985,P<0.01)和scf mRNA(t=6.028,P<0.01)的表达量下降。Western blot结果显示,与对照组相比,致石组豚鼠胆囊c-kit(t=10.256,P<0.01)及scf蛋白(t=9.586,P<0.01)表达量下降。结论饮食诱导的豚鼠胆囊胆固醇结石形成过程中,豚鼠胆囊c-kit和scf mRNA及蛋白表达水平均下降。c-kit/scf通路抑制可能参与胆囊胆固醇结石的形成。

小而密低密度脂蛋白胆固醇方法学性能验证及与冠心病严重程度相关性分析

目的对酶法检测小而密低密度脂蛋白胆固醇（sdLDL-C）进行方法学性能验证，并评估其与冠心病严重程度相关性的分析。方法方法学性能验证。评估酶法检测sdLDL-C试剂盒的正确度、精密度和线性范围。收集2016年7月至12月复旦大学附属中山医院体检120名表面健康人群（平均年龄45.8岁，其中男59名，女61名）建立sdLDL-C参考区间。收集因胸闷胸痛入院行冠状动脉造影手术患者212例，其中冠状动脉造影结果阳性110例，冠状动脉造影结果阴性102例。分别比较冠状动脉造影阳性组、冠状动脉造影阴性组和健康对照组之间的sdLDL-C水平；使用Gensini积分判断冠状动脉狭窄严重程度，分为冠状动脉堵塞严重组（Gensini积分〉30）和冠状动脉堵塞轻微组（Gensini积分≤30），比较两组间sdLDL-C水平；进一步采用Logistic二元逐步回归方程分析sdLDL-C与冠状动脉堵塞严重程度的关系。结果1水平校准品重复检测均值1.40 mmol/L，偏倚3.7%，符合厂商的允许偏差范围；3水平混合血清的批内、批间精密度分别为1.77%和1.49%，1.07%和1.65%，1.75%和1.46%，符合厂商声明；在0.06-2.45 mmol/L范围内线性良好（Y＝0.993 7X- 0.106 3，R2＝0.99）。120名表面健康人群建立血清sdLDL-C参考范区间0.15-0.97 mmol/L，年龄、性别无需分组。冠状动脉造影阳性组sdLDL-C水平明显高于阴性组和健康对照组（P〈0.01）；冠状动脉堵塞严重组的sdLDL-C水平明显高于冠状动脉堵塞轻微组（P〈0.05）；经过Logistic二元逐步回归方程分析得到sdLDL-C是冠心病严重程度的独立风险因素（OR＝3.101，P〈0.05）。结论酶法检测sdLDL-C试剂盒的检测性能符合要求。sdLDL-C水平与冠心病发生严重程度显著相关，是冠心病严重程度的重要独立风险因素。

2种鸭蛋中胆固醇测定方法的比较

为确定蛋黄样品中的蛋白质对鸭蛋中胆固醇测定结果的影响程度,采用直接试剂盒法和间接试剂盒法对市售鸭蛋中的胆固醇含量进行了测定,并对2种方法的测定结果进行了比较。结果表明,直接法和间接法的测定值具有极显著的相关性,但直接法测定值较间接法测定值高。

胆固醇对体外分离培养的豚鼠胆囊Cajal样间质细胞的影响

目的研究胆固醇对体外分离培养的豚鼠胆囊Cajal样间质细胞(ICLCs)增殖、凋亡的影响。方法体外分离培养豚鼠胆囊ICLCs,用含不同质量浓度[0 mg/L(空白组)及12.5、25、50、100 mg/L(实验组)]的胆固醇培养液作用于细胞24 h后,CCK-8法检测细胞的增殖率,流式细胞术检测细胞的凋亡率,Western blot检测细胞受体酪氨酸激酶(c-kit)蛋白的表达量,实时荧光定量PCR检测细胞c-kit mRNA的表达水平。结果用含25、50、100 mg/L质量浓度胆固醇的培养液培养ICLCs后,与空白组相比,实验组ICLCs的增殖率明显下降(P<0.05);ICLCs的凋亡率明显增加(P<0.05);c-kit蛋白表达及c-kit mRNA表达均明显下降(P<0.05)。结论高浓度的胆固醇能够抑制ICLCs的增殖并促进ICLCs的凋亡,ICLCs增殖率下降可能是SCF/c-kit信号通路受阻所致。