假两性畸型小鼠睾丸胆固醇侧链裂解酶mRNA的异常表达

为了解假两性畸型（Ｔｆｍ）小鼠睾丸胆固醇侧链裂解酶（Ｐ４５０ｓｃｃ）ｍＲＮＡ的水平及影响其转录的机理，用反转录－多聚酶链反应比较了５ｄ、２０ｄ、２５ｄ和３０ｄ正常小鼠、Ｔｆｍ小鼠及３０ｄ手术隐睾小鼠睾丸Ｐ４５０ｓｃｃ的ｍＲＮＡ水平，正常小鼠在５～２０ｄ时，Ｐ４５０ｓｃｃｍＲＮＡ水平较低，从２５ｄ起明显增高，至３０ｄ时ｍＲＮＡ水平是５ｄ时的７５倍；Ｔｆｍ小鼠在５ｄ时，Ｐ４５０ｓｃｃｍＲＮＡ水平稍高于正常小鼠，但随后直至３０ｄ其水平未见明显增高，在３０ｄ时，Ｐ４５０ｓｃｃｍＲＮＡ总量低于正常小鼠１／１０；３０ｄ手术隐睾小鼠的Ｐ４５０ｓｃｃｍＲＮＡ水平低于正常３０ｄ小鼠１／２，高于Ｔｆｍ小鼠５倍。结果提示，２５ｄ的Ｌｅｙｄｉｇ细胞功能的形成需要受体介导的雄激素作用，而Ｔｆｍ小鼠由于编码雄激素受体基因突变，间接导致青春期Ｐ４５０ｓｃｃｍＲＮＡ的低水平。

胎儿游离CYP11A-mRNA表达水平对子痫前期的预测价值

目的探讨子痫前期不同妊娠阶段母血中胎儿胆固醇侧链裂解酶基因(CYP11A)的表达变化及规律,评判胎儿CYP11A-mRNA表达与子痫前期的相关性,为预测、控制子痫前期发病或降低其严重程度提供实验依据。方法选择我院2014年1月至2015年7月诊治的孕妇180例,60例子痫前期孕妇设为观察组,120例正常孕妇设为对照组。应用RT-MLPA技术检测胎儿游离CYP11A-mRNA的表达,观察两组不同孕周收缩压、舒张压以及24 h尿蛋白尿的变化。结果观察组胎儿游离CYP11A-mRNA水平与患者收缩压、舒张压以及24 h尿蛋白尿水平在孕20周后均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组患者CYP11A-mRNA水平与患者收缩压、舒张压和24 h尿蛋白尿水平呈现逐渐增高趋势。结论子痫前期患者胎儿游离CYP11A-mRNA呈现较强表达,并随着患者血压的升高、24 h尿蛋白尿水平的上升呈现增高趋势。

老年人睾丸间质细胞结构及StAR和P450scc蛋白表达的变化

目的:观察老年人睾丸间质细胞结构以及类固醇激素合成快速调节蛋白(steroidogenic acute regulatoryprotein,StAR)和胆固醇侧链裂解酶(cholesterol-side-chain cleavage enzyme,P450scc)蛋白表达的变化,以探讨迟发性性腺功能减退症的机制。方法:青年人(20～30岁)及老年人(70～90岁)睾丸标本各10例,对患者进行AMS(Aging Male’s Symptoms)评分。应用HE染色观察睾丸组织形态学变化,电子显微镜观察睾丸间质细胞的超微结构改变,Western blot法比较青年组和老年组睾丸组织中StAR和P450scc蛋白表达水平的差异,并用ELISA法检测其血清总睾酮水平的差异。结果:老年组AMS评分显著高于青年组(61.25±7.08 vs.20.75±3.73,P<0.001),且血清总睾酮水平显著低于青年组(3.12±0.58μg/L vs.6.29±1.17μg/L,P<0.05)。HE染色显示,老年人睾丸呈老年退行性改变,电子显微镜下观察到老年睾丸间质细胞线粒体肿胀,线粒体嵴消失。睾丸组织中StAR和P450scc蛋白表达水平显著低于青年组(P<0.05)。结论:老年人睾丸间质细胞结构、线粒体的损伤,以及StAR和P450scc蛋白表达水平的下降等病理变化均与老年人迟发性性腺功能减退症症状和血清总睾酮水平变化密切相关,其确切机制有待深入研究。

微量镉对胎鼠睾丸超微结构及P450scc表达的影响

目的研究孕期微量镉暴露对胎鼠睾丸超微结构的损伤及细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)表达的影响,探讨镉对雄性子代生殖发育的干扰作用。方法成熟雌性SD大鼠12只,随机分为2个镉染毒组[1.2、1.5 mg/(kg·d)]和对照组,于孕期第9、11、13天腹腔注射氯化镉,对照组给予等体积生理盐水。妊娠第18天行剖宫产取雄性胎鼠睾丸作光镜、电镜观察及P450scc免疫组化分析。结果光镜下1.5 mg/(kg·d)镉染毒组睾丸精曲小管内支持细胞排列紊乱,间质异常增生,1.2mg/(kg·d)镉染毒组无明显改变。电镜下两个镉染毒组均见支持细胞、精原细胞及间质细胞内线粒体肿胀、内质网扩张,间质细胞内脂滴堆积,尤以支持细胞和间质细胞损伤最为明显。镉染毒组间质细胞中P450scc阳性产物表达均显著低于对照组(P<0.01)。结论孕期微量镉暴露可致性分化期胎鼠睾丸超微结构损伤,降低睾酮合成关键酶的活力。

膜联蛋白5对大鼠睾丸间质细胞中类固醇急性调节蛋白和睾酮合成相关酶表达的影响

目的:研究膜联蛋白5(annexin 5)对大鼠睾丸间质细胞(Leydig细胞)睾酮合成相关蛋白和酶表达的影响。方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞24 h后,用10-9mol/L的annexin 5处理间质细胞12 h和24 h,分别提取细胞总RNA和总蛋白;反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测类固醇急性调节蛋白(steroidogenic acute regulatory,StAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)、17α-羟化酶(17α-hydroxylase,CYP17A)、17β-羟基类固醇脱氢酶Ⅹ型(17β-HSD10)mRNA表达的改变,并用蛋白免疫印迹方法(Western blotting)检测蛋白表达水平的变化。结果:与对照组相比,在mRNA水平上,annexin 5处理细胞12 h后,只有17β-HSD10的表达升高了26%(P<0.05),其他差异均无统计学意义,而处理24 h后,StAR、P450scc和3β-HSD的表达分别升高55%、69%和59%(P<0.05),17β-HSD10升高了104%(P<0.01),17α-hydroxylase表达则无显著差异;在蛋白水平上,annexin 5处理细胞12 h后,17β-HSD的表达升高了39%(P<0.05),而处理24 h后发现,除StAR表达无显著变化外,P450scc、3β-HSD和17β-HSD的表达分别升高了35%、88%(P<0.05)和47%(P<0.01)。结论:Annexin 5对睾酮合成具有调节作用,这种作用是通过在基因水平和蛋白水平上影响P450scc、3β-HSD和17β-HSD的表达而实现的。

女性胆固醇侧链裂解酶基因中(tttta)n多态性

目的研究中国女性胆固醇侧链裂解酶基因(CYP11α)启动子中(tttta)n的遗传多态性分布以及与体重指数和腰臀比之间的关系,比较分析其发生频率与高加索人发生频率的差异。方法测量中国女性的体重、身高、腰围和臀围,并采用Chelex-100法从血标本中提取总DNA。特异引物聚合酶链反应(PCR扩增),经6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,银染检测。结果被调查女性CYP11α启动子中(tttta)n多态性有6条等位基因片段,即(tttta)4,(ttt-ta)6,(tttta)7,(tttta)8,(tttta)9,(tttta)10,频率分别是0.207,0.667,0.003,0.105,0.001,0.006。与高加索女性CYP11α启动子中(tttta)n等位基因频率比较,差异有统计学意义,P<0.05;被调查女性各基因型之间的体质指数和腰臀比无统计学差异。结论CYP11α启动子中的(tttta)n多态性对被调查女性的体质指数和腰臀比没有影响。

膜联蛋白5对雄性SD大鼠睾酮合成相关蛋白和酶表达的影响

目的研究注射膜联蛋白5后雄性SD大鼠睾丸类固醇急性调节蛋白(Steroidogenic acute regulatory protein,StAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450 cholesterol side-chain cleavage enzyme,P450scc)和3β-羟类固醇脱氢酶(3 beta-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)表达的改变,初步探讨膜联蛋白5影响睾酮分泌的机制。方法将20只SD大鼠随机分为对照组和实验组,实验组又分为7.5μg/kg组、15μg/kg组和30μg/kg组,每组5只。对照组大鼠腹腔注射等量的pH8.0 Tris-HCl,实验组腹腔注射不同剂量的膜联蛋白5,1次/d,连续20 d。用RT-PCR方法分别检测对照组和各实验组SD大鼠睾丸组织中睾酮合成相关的StAR、P450scc和3β-HSD mRNA的表达变化,并用Western blot方法检测以上3种物质蛋白质水平的变化。结果与对照组相比,在mRNA水平上,7.5μg/kg组和15μg/kg组大鼠睾丸组织P450 scc mRNA表达分别增加了25.9%[(0.68±0.04)vs(0.54±0.03),P<0.01]和27.8%[(0.69±0.04)vs(0.54±0.03),P<0.01];3β-HSD mRNA表达分别升高了32.9%[(1.05±0.07)vs(0.79±0.10),P<0.01]和53.2%[(1.21±0.07)vs(0.79±0.10),P<0.01];而30μg/kg组表达差异无统计学意义;在蛋白水平上,15μg/kg组大鼠睾丸组织P450 scc蛋白表达提高了34.2%[(0.37±0.04)vs(0.28±0.02),P<0.01],7.5μg/kg组和15μg/kg组的3β-HSD表达也分别增加了14.7%[(1.53±0.10)vs(1.34±0.05),P<0.01]和24.4%[(1.67±0.14)vs(1.34±0.05),P<0.01];而StAR的表达无论在转录水平还是在蛋白水平上,较对照组差异均无统计学意义。结论膜联蛋白5可通过调节P450scc与3β-HSD的表达来调节睾酮合成。

邻苯二甲酸二丁酯暴露对青春期雌性大鼠卵巢P450scc基因表达的影响

目的:探讨邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对青春期雌性大鼠的生殖毒性作用及作用机制。方法:21d龄SPF级雌性SD大鼠,随机分为DBP250 mg/kg、500 mg/kg、1 000 mg/kg 3个染毒组和溶剂对照组(玉米油),连续8周灌胃染毒。染毒结束后,在动情前期对大鼠实施处死,取动脉血,利用放射免疫荧光法检测血清中孕酮(P)水平;取卵巢组织提取mRNA,实时荧光定量RT-PCR检测大鼠卵巢组织细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)mRNA表达水平。结果:各处理组间大鼠血清P水平有统计学差异(F=4.306,P=0.014),与对照组比较,DBP 1 000 mg/kg剂量组大鼠血清P水平降低(P<0.05),与对照组比较,250 mg/kg及500mg/kg剂量大鼠血清P水平无统计学差异。各处理组间大鼠卵巢P450scc mRNA表达水平有统计学差异(H=15.591,P<0.01),与对照组比较,DBP 250 mg/kg、500 mg/kg、1 000 mg/kg剂量组大鼠卵巢P450scc mRNA表达水平降低(P<0.01),各剂量组间卵巢P450scc mRNA表达水平比较无统计学差异(P>0.05)。结论:DBP可使青春期雌性大鼠卵巢P450scc表达降低,提示DBP对雌性大鼠产生生殖毒性。

CYP11A与多囊卵巢综合征

CYP11A编码胆固醇侧链裂解酶P450scc是固醇类激素合成的第一步关键限速酶,几乎存在于所有动植物中。CYP11A受激素水平和自身启动子区域某些特定结构调控,其启动子区域的基因多态性可能与转录活性和基因表达相关。多囊卵巢综合征(PCOS)是一种很常见的女性生殖内分泌疾病,高雄激素是PCOS的主要特征。CYP11A基因是PCOS的一个重要遗传易感位点,在PCOS发病机制中其多态性表现的作用仍有争论,并未完全阐明,值得进一步深入研究。

金雀异黄素对青年雌性大鼠卵巢组织中雄激素生成关键酶StAR、P450scc、CYP19基因表达的影响

研究金雀异黄素(genistein,GEN)对青年雌性大鼠卵巢内类固醇合成急性调节蛋白(steroidogenic acute regulatory protein,St AR)、胆固醇侧链裂解酶(side-chain cleavage enzyme,P450scc)、细胞色素P450芳香化酶(cytochrome P450 aromatase,CYP19)基因表达的影响。选取40只SD青年雌性大鼠,按体质量随机分为阴性对照组(NC)、GEN低、中、高剂量组及己烯雌酚阳性对照组,剂量组分别灌胃GEN 15、30、60 mg/(kg·d),阳性对照组灌胃己烯雌酚0.5 mg/(kg·d),持续30 d。采用实时荧光聚合酶链式反应检测大鼠卵巢内St AR、P450scc、CYP19 m RNA水平;Western blot法检测卵巢内St AR、P450scc的蛋白水平。给予GEN后,与NC组相比,GEN中、高剂量组St AR、P450scc、CYP19 m RNA相对表达量显著增高(P<0.05)。卵巢内St AR、P450scc的蛋白检测结果显示:St AR表达量在GEN高剂量组增加明显(P<0.05);P450scc表达量在GEN中、高剂量组均增加明显,且与NC组相比差异显著(P<0.05)。得出结论为30~60 mg/kg的GEN可增强青年雌性大鼠体内雄激素生成关键酶的表达水平,影响卵泡的发育和成熟。

乌头、白及配伍存在基于CYP3A1/2的相互作用

目的:阐明基于药物代谢酶的乌头、白及配伍产生相互作用的机制。研究二者合用对主要药物代谢酶CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1/2在酶活性、mRNA水平和蛋白质水平的影响。方法:采用高效液相色谱法测定CYP1A2、CYP2E1活性;采用紫外-可见分光光度法测定CYP3A1/2活性;分别采用RT-PCR和WesternBlot方法评价药物对CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1、CYP3A2 mRNA及蛋白水平的影响。结果:乌头、白及合用后CYP3A1/2的酶活性明显下降;Western Blot检测显示CYP1A2、CYP3A1、CYP3A2的蛋白质表达水平下降;RT-PCR检测显示CYP1A2、CYP3A1、CYP3A2的mRNA水平均上升。结论:乌头、白及合用后抑制CYP3A1/2的酶活性,乌头、白及配伍存在基于CYP3A1/2的药物相互作用。

氟化钠对小鼠睾丸间质瘤细胞StAR和P450scc mRNA表达的影响

目的观察氟化钠对小鼠睾丸间质瘤细胞（mLTC-1）中类固醇急性调节蛋白（StAR）和细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶（P450scc）mRNA表达水平的影响。方法利用小鼠mLTC-1细胞为模型,用实时定量PCR法测定细胞中StAR和P450scc mRNA表达水平。采用放射免疫法测定细胞培养基上清中孕酮分泌量。结果与对照组比较,12、16和20μg/ml氟化钠浓度组的StAR和P450scc mRNA的表达量以及孕酮分泌量明显降低（P〈0.05）。结论氟化钠可以抑制mLTC-1细胞StAR和P450scc mRNA的表达,进而影响mLTC-1细胞孕酮的合成。

不同粒径纳米硫化镉对雄性小鼠生殖毒性的研究

目的探讨不同粒径的纳米硫化镉(Nano-CdS)对雄性小鼠的生殖毒性。方法于2019年1月,将30只SPF级雄性小鼠随机分为对照组、实验组[CdS I组(粒径约5 nm)和CdSⅡ组(粒径约50 nm)],每组10只。实验组经口灌胃100 mg/kg Nano-CdS,1次/d,对照组灌胃等体积生理盐水,连续45 d。观察小鼠睾丸组织的病理学变化,使用透射显微镜观察睾丸组织中细胞核、线粒体等细胞器的超微结构,采用石墨炉原子吸收光谱法(AAS)检测睾丸组织中镉元素富集水平,采用ELISA试剂盒测定血清中睾酮激素水平,采用实时荧光定量PCR检测睾丸组织中基因细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、17α-羟化酶(P450c17)、17β羟基类固醇脱氢酶(17β-HSD)mRNA表达水平。采用Western Blot测定P450c17蛋白的表达水平。结果组织病理学结果显示实验组小鼠睾丸均出现不同程度损伤;超微结构观察显示各实验组的小鼠睾丸细胞的超微结构均不同程度线粒体膨胀和嵴消失,核膜的不规则,CdSⅠ组损伤程度轻于CdSⅡ组。与对照组比较,CdSⅠ组和CdSⅡ组小鼠血清睾丸镉元素含量明显增加(P=0.001、0.001),CdSⅡ组高于CdSⅠ组(P=0.001)。与对照组比较,CdSⅠ组和CdSⅡ组小鼠血清睾酮水平降低,差异有统计学意义(P=0.001、0.001)。实时荧光定量PCR结果显示:与对照组比较,实验组的P450scc、P450c17 mRNA表达水平明显降低,差异有统计学意义(均P<0.05),CdSⅡ组17β-HSD mRNA表达水平降低(P=0.001);且CdSⅡ组17β-HSD、P450c17 mRNA表达水平明显低于CdSⅠ组(P=0.001、0.036)。Western Blot测定结果显示:CdSⅠ组和CdSⅡ组小鼠睾丸中P450c17蛋白表达水平明显降低,差异有统计学意义(P=0.001、0.001);且CdSⅡ组明显低于CdSⅠ组(P=0.001)。经Spearman相关分析,睾酮水平与P450scc、P450c17、17β-HSD mRNA水平之间呈正相关,差异有统计学意义(rs=0.88、0.80、0.70,P=0.001、0.001、0.004)。结论纳米硫化镉可能通过降低小鼠的睾酮及其合成关键酶基因表达水平及酶蛋白活性从而产生生殖毒性,且CdSⅡ组毒性作用更强。

胆固醇侧链裂解酶CYP11A1基因多态性与多囊卵巢综合征发病的相关性

目的 探讨胆固醇侧链裂解酶CYP11A1基因多态性与多囊卵巢综合征（PCOS）发病的相关性.方法 收集2005年5月-2008年12月于安徽医科大学第一附属医院妇产科门诊就诊的PCOS患者290例为PCOS组,同期就诊的安徽籍非PCOS患者344例为对照组,从人类基因组单体型图谱（HapMap）11期汉族数据库中选择CYP11A1基因覆盖区域的r^2〉10.8的7个标签单核苷酸多态性（tSNP）位点（rs12438594、rs4077582、rs9806234、rs16968477、rs4887139、rs1843090、rs11632698）和3个微卫星位点（D15S1547、D16S520、D15S1546）;采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术分析两组患者的基因型和等位基因频率,并进行多个位点联合分析（即单体型分析）.结果 7个tSNP和3个微卫星位点中,两组患者的ra4077582、D15S1547、D15S1546和rs11632698位点的基因型频率比较,差异均有统计学意义（P=0.010、0.044、0.018和0.026）;两组患者的rs4077582、rs4887139、rs1843090、D15S1547和D16S520位点的等位基因频率分别比较,差异均有统计学意义（P=0.002、0.048、0.030、0.001和0.024）.ACGCA13/6/9AG、ACGTA16/6/11AA、GCACG12/8/8AA、GTACA14/4/7GG、GTGCA13/6/7AG 5种常见的CYP11A1基因单体型中,PCOS组患者的GTACA14/4/7GG和ACGCA13/6/9AG单体型频率分别为7.8%（45/580）和25.3%（147/580）,分别与对照组（11.9%和19.6%）比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）.两组rs4077582位点不同基因型患者血浆雄激素水平比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）.结论 CYP11A1基因多态性与PCOS有一定的相关性,但与PCOS患者高雄激素水平之间的相关性需通过对tSNP及微卫星覆盖区域的序列进行进一步分析确定.

低氧对雄性大鼠睾酮分泌及其合成相关蛋白和酶表达的影响

目的研究低氧对雄性大鼠睾酮分泌及其合成相关蛋白和酶表达的影响。方法36只雄性Wistar大鼠随机分为常氧、低氧5 d、低氧15 d和低氧30 d组。运用放射免疫测定法和反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,研究了模拟海拔5000 m高度低氧5 d、15 d、30 d对雄性Wistar大鼠血中睾酮浓度的影响,以及对睾丸组织中睾酮合成相关的类固醇急性调节蛋白(STAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)以及3β-羟甾脱氢酶(3β-HSD)mRNA表达的影响。结果模拟海拔5000 m高度低氧15 d,大鼠血中睾酮浓度显著高于常氧组(P＜0．05),低氧30 d,大鼠血中睾酮浓度显著低于对照组(P＜0．05);低氧不引起雄性大鼠睾丸组织StAR mRNA表达改变;低氧15 d、30 d,大鼠睾丸组织P450scc mRNA和3β-HSD mRNA表达分别显著低于常氧组(P＜0．05)。结论慢性低氧抑制了睾酮的分泌,并抑制了睾丸组织睾酮合成相关酶P450scc mRNA和3β-HSD mRNA的表达。低氧15 d大鼠血中睾酮浓度升高的机制需进一步研究。

中国汉族CYP11a微卫星多态性与多囊卵巢综合征高雄性激素血症关系的研究

目的 探讨胆固醇侧链裂解酶CYP11α基因微卫星多态性与多囊卵巢综合征(polycysticovary syndrome,PCOS)患者高雄激素血症形成的关系。方法 应用聚合酶链反应及聚丙烯酰胺凝胶电泳分离技术检测86例PCOS患者及5 0名对照妇女CYP11α基因微卫星多态性及其分布,比较CYP11α(tttta) n各等位基因与PCOS高雄激素之间的关系。结果 CYP11α基因有4种等位基因(4、6、8、9) ;PCOS及对照组基因频率分布为0 .17,0 .31,0 .39,0 .13和0 .2 2 ,0 .35 ,0 .33,0 .10 ,差异无统计学意义;CYP11α(tttta) n各等位基因与PCOS高雄激素无明显关系。结论 中国汉族CYP11α微卫星多态性对PCOS高雄激素血症的形成无明显关系,不是PCOS的主要致病因素。

胆固醇侧链裂解酶基因微卫星多态性与多囊卵巢综合征发病风险的关联

目的定量评价胆固醇侧链裂解酶基因（CYPlla）启动子（tttta）4、（tttta）6和（tttta）8微卫星多态性与多囊卵巢综合征（PCOS）发生的关联性及关联强度。方法制定原始文献的纳入和排除标准及检索策略。检索中外数据库，系统收集有关CYPlla多态性与PCOS相关性的研究报告，按照NOS标准对纳入文献进行质量评价。应用RevMan5．0软件对各文献进行异质性检验和Meta分析，得出合并后的OR值及其95％CI。结果共有8篇文献纳入Meta分析。数据合并结果显示，CYPlla启动子（tttta）。微卫星多态性与PCOS易感性之间关联性有统计学意义，OR值（95％C1）为O．75（0．59—0．95）；（tttta）。和（tttta）。微卫星多态性与PCOS易感性之间关联性无统计学意义，OR值（95％C1）分别为0．89（0．61～1．30）和0．84（0．64～1．11）。结论CYP11a启动子（tttta）。微卫星多态性是PCOS发病的保护因素，尚未见（tttta）4和（tttta）。微卫星多态性与PCOS发病风险之间的关联性。

吗啡依赖大鼠脑组织神经甾体合成酶基因表达的变化

目的研究吗啡依赖大鼠额叶皮质、杏仁核、海马、纹状体和中脑组织胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、17α-羟化酶(P450c17)、3β-羟基甾醇脱氢酶(3β-HSD)基因表达的变化,探讨神经甾体在吗啡依赖中的作用。方法21只雄性SD大鼠,随机分为3组:生理盐水对照组(C组)、吗啡依赖组(D 组)和吗啡戒断组(W组),D、W组采用剂量递增法腹腔注射吗啡制备吗啡依赖模型,连续注射7 d,每日2次,剂量分别为5、10、15、20、30、40、50 mg·kg-1,C组给予相应体积的生理盐水。C、D组在末次给药1 h后断头处死大鼠,迅速分离出额叶皮质、杏仁核、海马、纹状体和中脑组织。W组在末次给药1h 后注射纳洛酮(2 mg·kg-1),观察大鼠戒断症状,30 min后取不同脑区组织。RT-PCR方法检测大鼠不同脑区三种神经甾体合成酶mRNA的表达。结果与C组相比,D组脑组织P450scc mRNA在纹状体表达降低,3β-HSD mRNA在额叶皮质、纹状体和杏仁核表达降低,W组3β-HSD mRNA在额叶皮质、杏仁核表达降低(P<0.05)。与D组相比,W组P450scc、3β-HSD mRNA在纹状体表达升高(P<0.05)。结论内源性神经甾体可能与大鼠吗啡依赖的形成有关。

CYP11A1基因单核苷酸多态性与多囊卵巢综合征的关系

目的CYP11A1基因单核苷酸多态性（SNP）与多囊卵巢综合征（PCOS）的关系。方法选择2005年10月至2010年3月于南京大学医学院附属鼓楼医院妇产科就诊的289例PCOS患者为研究对象,并纳入PCOS组;选择同期于本院参加健康体检的220例健康妇女纳入对照组。采用放射免疫法（RIA）检测患者血清中黄体生成素（LH）、促卵泡生成素（FSH）、雌二醇及睾酮水平等。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）法对两组受试者CYP11A1基因SNP rs4077582和rs11632698位点进行基因分型,分析两组受试者的等位基因型频率及等位基因频率,并对年龄、人体质量指数（BMI）及血清性激素水平在不同基因型受试者中进行比较。本研究遵循的程序符合南京大学医学院附属鼓楼医院医学伦理委员会制定的伦理学标准,本研究得到该委员会批准,分组征得受试者本人及其家属的知情同意,并与之签署临床研究知情同意书。结果 1两组受试者的年龄、BMI等基本资料和FSH、LH、LH/FSH、雌二醇和睾酮等激素水平比较,差异均有统计学意义（P〈0.001）。2CYP11A1基因SNP rs4077582等位基因型（CC、CT和TT）在PCOS组患者中的分布分别为24.9%、49.8%和25.3%,而在对照组中分别为34.5%、46.4%和19.1%,二者比较,差异有统计学意义（χ^2=6.399,P=0.041）。等位基因T在PCOS组中的频率显著高于对照组（χ^2=6.263,P=0.012）。而CYP11A1基因SNP rs11632698的等位基因型分布在两组受试者中比较,差异无统计学意义（χ^2=3.416,P=0.181）。3血清学检测结果显示,PCOS组中,CYP11A1基因SNP rs4077582位点3个不同基因型PCOS患者的年龄、BMI等基本资料和各性激素水平比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。而在对照组中,LH与LH/FSH在3个不同基因型受试者（CC、CT、TT）间比较,差异有统计学意义（F=9.362、21.046,P〈0.001）。结论 CYP11A1基因SNP rs4077582位点与PCOS的易感性有关,其作用机制可能是通过调节个体的LH水平最终影响雄激素合成速率,而SNP rs11632698则与PCOS发病无关。

CYP1A1基因多态性与卵巢上皮性癌遗传易感性的关系

目的:探讨细胞色素P450(CYP1A1)基因异亮氨酸(Ile)-缬氨酸(Val)位点和MspⅠ位点多态性与卵巢癌的相关关系。方法:以病例对照的研究方法,采用PCR-RFLP和AS-PCR技术检测78例卵巢癌患者和90名健康者对照的CYP1A1基因Ile-Val位点和MspⅠ位点多态性。结果:Ile-Va3种多态基因型在卵巢癌组和对照组分布差异有统计学意义(P<0.05),Ile/Val、Val/Val基因型在卵巢癌组的分布频率明显高于对照组;Ile/Val、Val/Val基因型患卵巢癌的危险分别是Ile/Ile基因型的1.313和3.472倍;MspⅠ位点多态性在卵巢癌和对照组差异无统计学意义。结论:CYP1A1第7外显子的Ile/Val、Val/Val基因型与卵巢癌的易感性有关,突变基因型增加了卵巢癌的患病风险;尚不能认为MspⅠ多态性与卵巢癌的易感性有关。