人胆固醇酯水解酶在RAW 264.7巨噬细胞内瞬时表达对胆固醇代谢的影响

目的:以RAW264.7小鼠单核巨噬细胞为研究对象,探讨人胆固醇酯水解酶(Human cholesteryl ester hydrolase,hCEH)在鼠巨噬细胞内瞬时表达,对细胞内胆固醇代谢产生的影响。方法:利用FuGENE HD转染试剂将pEGFP-N1-hCEH质粒,转染RAW264.7小鼠单核巨噬细胞。24 h后将巨噬细胞与氧化型低密度脂蛋白(Oxidized low density lipoprotein,oX-LDL)(100 mg/L),共同孵育48 h。荧光显微镜观察及Western blot检测细胞内CEH的表达,油红O染色观察细胞内脂滴堆积情况,高效液相色谱检测细胞内游离胆固醇(Free cholesterol,FC)和胆固醇酯(Cholesterol esters,CE)含量。结果:转染72 h后,荧光细胞数最多,转染率接近40%。Western blot检测显示,hCEH蛋白在鼠巨噬细胞内大量表达并部分抑制鼠胆固醇酯水解酶(Cholesteryl ester hydrolase,CEH)表达。转染hCEH组与ox-LDL诱导组相比,油红O染色阳性细胞数显著减少,细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量明显下降。结论:hCEH基因在RAW264.7小鼠单核巨噬细胞内成功表达,减少细胞内胆固醇水平,抑制泡沫细胞的形成。

胆固醇酯水解酶与动脉粥样硬化

胆固醇酯以脂滴的方式存储在胞浆内是泡沫细胞的主要特点,也是动脉粥样硬化斑块发生发展的关键因素。只有游离胆固醇才能从细胞内外流到细胞外与胆固醇接受体结合,巨噬细胞内胆固醇酯代谢的第一步就是"水解"。水解是游离胆固醇外流的限速步骤,该反应由中性胆固醇酯水解酶催化。此外,胆固醇酯水解酶还调节胆固醇逆转运,从而参与体内胆固醇的最终清除。本综述旨在分析当前各种胆固醇酯水解酶的特点,阐述其参与细胞胆固醇酯水解来调节动脉粥样硬化的作用,为进一步明确能够作为防治动脉粥样硬化形成靶点的水解酶提供线索。

miR-146a促进动脉粥样硬化斑块形成调控机制研究

目的探讨miR-146a对动脉粥样硬化斑块的影响及其机制。方法利用miR-146a增强剂(miR-146a mimic)和miR-146a拮抗剂(miR-146a inhibitor)转染大鼠外周血单核巨噬细胞,转染成功后予巨噬细胞泡沫化。油红O染色和脂质染色的半定量分析miR-146a对细胞的脂质堆积情况的影响。Western blot检测胆固醇酯水解酶(cholesteryl ester hydrolase,CEH)、ABCA1和ABCG1的表达情况。结果 Western blot检测显示,miR-146a mimic转染组的CEH表达明显降低,miR-146a inhibitor转染组的ABCA1和ABCG1表达量较对照组和miR-146a mimic转染组明显增多。油红O染色显示miR-146a mimic转染组、对照组和miR-146a inhibitor转染组的阳性细胞比例分别为82.1%±3.1%、73.2%±0.16%和16.25%±2.1%。结论miR-146a能够抑制大鼠外周血单核巨噬细胞细胞内CEH的表达,进而阻碍游离胆固醇的外流,最终导致动脉粥样硬化斑块的形成。

中性胆固醇酯水解酶活性在COS细胞中高度表达

将激素敏感酯酶(HSL)基因转染至COS细胞株后,使得HSL的mRNA和中性胆固醇酯酶(CEH)活性得到高度表达。CEH活性随重组质粒DNA量的增加而增高,对其进行了动力学分析,并对CEH活性的检测方法进行了探讨。

TGF-β1/Smad7信号通路在白藜芦醇增强胆固醇酯水解酶表达中的作用

目的探讨TGF-β1/Smad-7信号通路在白藜芦醇增强胆固醇酯水解酶(cholesteryl ester hydrolase,CEH)表达中的作用。方法用氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)诱导小鼠单核巨噬细胞株RAW 264.7转化为泡沫细胞,将经泡沫化处理的巨噬细胞进行2次分组,第1次分为正常对照组、白藜芦醇组、LY2157299组和白藜芦醇+LY2157299组,第2次分为正常对照组、白藜芦醇组、Ad-Smad-7组和白藜芦醇+Ad-Smad-7组,均处理48 h,通过胆固醇流出试验检测各组巨噬细胞内胆固醇流出率,油红O染色检测细胞泡沫化情况,RT-PCR法和Western blot法检测细胞中p-Smad-7和CEH基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平。结果与正常对照组比较,白藜芦醇组巨噬细胞内胆固醇流出率明显升高(P<0.05),白藜芦醇+LY2157299组、LY2157299组、白藜芦醇+Ad-Smad-7组和Ad-Smad-7组胆固醇流出率均明显降低(P<0.05);白藜芦醇组巨噬细胞泡沫化程度明显下降(P<0.05),白藜芦醇+LY2157299组、LY2157299组、白藜芦醇+Ad-Smad-7组和Ad-Smad-7组巨噬细胞泡沫化程度明显增强(P<0.05);白藜芦醇组巨噬细胞中CEH基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平明显增强(P<0.05),p-Smad-7基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平明显下降(P<0.05),而白藜芦醇+LY2157299组、LY2157299组、白藜芦醇+Ad-Smad-7组和Ad-Smad-7组CEH基因mRNA的转录及蛋白的表达均明显被抑制(P<0.05),p-Smad-7基因mRNA的转录及蛋白的表达均明显增强(P<0.05)。结论白藜芦醇可能是通过TGF-β1/Smad-7信号通路来增强CEH的表达。