骨髓间充质干细胞复合富血小板纤维蛋白异位成软骨的实验研究

目的:探讨富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)复合兔骨髓间充质干细胞膜片在软骨微环境下异位成软骨的可行性。方法:取3～4月龄雄性新西兰兔骨髓,体外分离、培养骨髓间充质干细胞;经来源鉴定后,取第3代细胞诱导培养形成细胞膜片;抽取同一只兔动脉血制备PRF后与自体骨髓间充质干细胞膜片复合。取4周龄BALB/C裸鼠30只,随机分组;实验组(n=15)于背部两侧植入骨髓间充质干细胞膜片复合富血小板纤维蛋白与兔耳软骨碎块的双膜结构复合物;对照组(n=15)背部两侧仅植入骨髓间充质干细胞膜片与兔耳软骨碎块的单膜结构复合物。分别于植入后2、4、8周取材,HE、甲苯胺蓝染色,用IPP 6.0软件对图片进行着色强度分析。所得结果用SPSS 13.0软件进行统计处理。结果:HE染色显示,实验组2、4、8周均可见软骨细胞生成,对照组仅8周时有少量软骨细胞生成。IPP分析显示,实验组2、4、8周甲苯胺蓝着色强度呈逐渐增加趋势,各时间点间OD值相比差异均有统计学意义(P<0.05);而且实验组各时间点OD值均显著高于同时间点的对照组(P<0.05)。结论:骨髓间充质干细胞与PRF复合的双膜结构在软骨微环境中具成软骨能力。

淫羊藿苷促进入骨髓间充质干细胞成软骨分化的研究

目的探讨应用淫羊藿苷促进人骨髓间充质干细胞（hMSCs）成软骨分化的可行性及效果。方法体外分离培养hMSCs，取第3代细胞实验。将hMSCs分别用无血清高糖培养基（H．DMEM）和含1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5mol／L淫羊藿苷的软骨诱导液（CM）诱导，显微镜下观察细胞形态变化，噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞的增殖。以5×10 9/L的细胞密度离心构建微团，诱导培养3周。逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）检测各组蛋白多糖和Ⅱ型胶原mRNA的表达。免疫组织化学、甲苯胺蓝染色检测Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达。结果5组微团分别由无血清H．DMEM、含1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5mol／L淫羊藿苷的CM诱导3周后，除H—DMEM组无Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达外，其他各组Ⅱ型胶原蛋白和蛋白多糖的表达呈浓度依赖性增加，ImageProPlus6．0软件测得各组Ⅱ型胶原平均吸光度（A）值分别为0．0214±0．0035、0．1182±0．0105、0．1886±0．0184、0．2903±0．0261、0．3476±0．0287，各组差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论淫羊藿苷能促进hMSCs成软骨分化，软骨分化程度呈浓度依赖性增加。