Establishment of a transplantation tumor model of human osteosarcoma in chick embryo

Objective: We established a transplantation tumor model of human osteosarcoma in chick embryo, studied its morphological and biological characteristics, and observed its dynamic process of angiogenesis induction so that a simple and practical model can be provided for studying osteosarcoma. Methods: Human osteosarcoma cells at different concentrations were inoculated in chorioallantoic membrane (CAM) of chick embryos at different embryonic ages to observe the factors affecting the survival of the transplanted osteosarcoma in chick embryo, growth characteristics of the transplantation tumor, and the morphological characteristics and biological characteristics of the transplantation tumor. Results: The transplantation tumor model of human osteosarcoma in chick embryo was successfully established. It was found that the transplantation tumor was easy to grow and it showed strong angiogenesis-inducing effects. Under the light microscope, the transplantation tumor showed a similar tissue structure to human osteosarcoma. Conclusion: It is feasible to establish a transplantation tumor model of human osteosarcoma in chick embryo. The model can be easily duplicated with a simple operation, which provides a useful animal model for studying osteosarcoma.

通心络促血管生成作用的实验研究

目的 探讨中药通心络对鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)模型血管生成作用的影响。方法 运用血清药理学的方法制备药物血清 ,鸡胚随机分为空白血清组、贝复济组及通心络大、小剂量组 ,检测尿囊膜的血管增生程度。结果 通心络大剂量组CAM的血管增生数明显高于空白血清组 (P <0 .0 5) ,而与贝复济组无明显差异 (P >0 .0 5) ;通心络小剂量组与空白血清组相比无明显差异 (P >0 .0 5)。结论 通心络可促进鸡胚绒毛尿囊膜的血管增生 。

华蟾素联合三氧化二砷抑制鸡胚尿囊膜血管生成的实验研究

目的:观察和比较华蟾素注射液、三氧化二砷注射液单药以及联合用药后对鸡胚尿囊膜(CAM)血管生成的抑制作用。方法:100只七日龄鸡胚随机分为4组(每组25只):生理盐水(NS)对照组、华蟾素组、As2O3组和华蟾素联合As2O3组。CAM上植入甲基纤维素碟,加入各组药物,观察对血管生长的影响。结果:华蟾素、As2O3以及两药联合对鸡胚尿囊膜新生血管均有抑制作用,以两药联合后抑制血管的作用最强。结论:华蟾素、As2O3以及两药联合均具有抗血管生成作用,两药联用后且具有协同作用。

重楼中几个甾体皂苷类成分对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的对重楼中的成分进行分离鉴定,结合药理模型筛选具有抑制血管生长活性的成分。方法采用乙酸乙酯提取和硅胶柱层析法进行提取分离;利用1HNMR、13CNMR、13CNMR-APT、MS、IR、UV确定其化学结构,并且应用鸡胚绒毛尿囊膜模型进行活性筛选。于鸡胚发育的第7天,将加药后的明胶海绵载体加于鸡胚绒毛尿囊膜上,孵育2 d后,固定鸡胚绒毛尿囊膜,取出观察。结果从重楼中分离得到了4个甾体皂苷类成分,分别为重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅴ和纤细薯蓣皂苷。通过活性筛选发现重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、纤细薯蓣皂苷3组鸡胚尿囊膜的小血管数目均小于空白组,其中重楼皂苷I经统计分析P<0.05具有显著性差异。结论重楼皂苷Ⅰ具有抑制血管生长的活性。

鸡胚绒毛尿囊膜技术的改进

目的 :摸索改进鸡胚绒毛尿囊膜 (chickchorioallantoicmembrane ,CAM)技术 ,为抗血管形成药物筛选提供良好的体内血管实验模型。方法 :对传统的蛋壳上开窗方式的CAM技术进行改进 ,将孵育 3d的鸡胚脱离蛋壳移入平皿中 ,继续孵育 3d后将待测药物植入到CAM和卵黄囊膜 (yolksacmembrane,YSM )上 ,2 4h后观察药物对CAM和YSM血管的作用。结果 :平皿中孵育鸡胚至第 6天 ,鸡胚存活率为 46 .7% ,生长状况良好 ,CAM直径达到1.2cm。检测的 6种药物出现两种不同的心血管效应 ,即抑制和吸引趋化血管的效应。结论 :平皿中孵育CAM技术在研究药物、生物因子、肿瘤等的血管效应方面有良好的应用价值。

去甲斑蝥素对人乳腺癌血管生成的抑制作用

背景与目的:去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)具有抑瘤作用,本文研究它对血管生成的作用,以及对人乳腺癌MCF-7细胞鸡胚绒毛尿囊膜(chorioallantoci membrane,CAM)移植肿瘤血管生成的影响。方法:①建立鸡胚绒毛尿囊膜模型,将明胶海绵载体置于两条前卵黄静脉间血管的CAM上,将不同剂量的NCTD加在载体上,以生理盐水对照,观察记录载体周围血管分支点数,计算血管生成抑制率。②建立人乳腺癌MCF-7细胞鸡胚移植模型。给予不同剂量的NCTD20μl[72、36、18μg/(胚.d)],以生理盐水对照,计算血管生成抑制率。结果:NCTD对以明胶海绵为载体的鸡胚绒毛尿囊膜血管生成具抑制作用,72、36、18、9μg NCTD组血管生成抑制率分别为77.7%、62.9%、50.6%及33.0%,并且呈剂量依赖性。移植肿瘤可诱发血管生成,NCTD能明显抑制MCF-7鸡胚移植肿瘤血管生成,72、36、18μg NCTD对移植瘤诱导的血管抑制率分别为66.2%、39.3%和22.8%。结论:NCTD能明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的生成,同时能抑制人乳腺癌MCF-7细胞鸡胚移植肿瘤的血管生成。其抗肿瘤作用与抑制肿瘤血管生成有关。

人肾癌鸡胚模型的建立及其肿瘤生物学特性的研究

目的建立人肾癌鸡胚模型,探讨其形态及生物学特性。方法将肾癌细胞系RLC-310接种于鸡胚绒毛尿囊膜,观察影响肾癌鸡胚移植瘤成活的因素、移植瘤生长特性、形态学特征和生物学性状。结果成功建立了人肾癌鸡胚移植瘤模型;移植瘤易于生长并具有较强的血管诱导作用;光镜下移植瘤具有与人肾癌类似的组织结构。结论该模型容易建立,能动态观察肾癌诱导血管生成的全过程,可用于肾癌的实验研究。

17400 鲨鱼软骨血管生成抑制因子的纯化及生物学活性研究

采用盐酸胍抽提、膜超滤、丙酮分级沉淀、Sephadex-75柱层析和C_4反相高效液相色谱等分离步骤,从广东阳江鲨鱼软骨中纯化获得新的鲨鱼软骨血管生成抑制因子SCAI-c(Shark Cartilage Angiogenesis In-hibitor-c,SCAI-c);SDS-PAGE电泳银染显示为一条带,根据蛋白质的相对迁移率计算,分子量为17 400;它对鸡胚绒毛尿囊膜血管的形成具有显著抑制效应,并有明显的浓度依赖关系.SCAI-c与SCAI-a具有类似的生物学特征.

胃癌细胞鸡胚移植模型中血清基质金属蛋白酶9检测意义

目的 :测定胃癌细胞接种至鸡胚绒毛尿囊膜后的成瘤过程中鸡胚血清基质金属蛋白酶 9( MMP- 9)含量变化。方法 :利用形态学方法观察胃癌细胞接种至鸡胚绒毛尿囊膜后的成瘤过程 ,并通过酶联免疫吸附测定 ( ELISA)法检测不同时间点鸡胚模型血清中 MMP- 9含量的变化 ,并结合胃癌生物学行为进行分析。结果 :1× 1 0 6·ml-1 胃癌细胞组于接种 72 h后 ,出现肉眼可见独立结节 ,随时间推移 ,结节体积增大 ,且鸡胚绒毛尿囊膜上较大血管向结节处集中 ;1× 1 0 6·ml-1胃癌细胞组 ,72 h后血清 MMP- 9含量明显增高 ,至 7d时达到最高值。结论 :胃癌细胞的成瘤过程中 MMP- 9水解酶含量明显增加 ,此模型用于胃癌特性的研究是可行的。

龙葵碱联合VEGF抗体对人结肠癌鸡胚移植模型血管生成的影响

目的建立人结肠癌鸡胚移植模型,探讨龙葵碱、VEGF抗体及两者联合对人结肠癌细胞诱导肿瘤血管生成及肿瘤增殖的影响。方法将人结肠癌HT-29细胞鸡胚移植模型分为实验组和对照组,实验组加入龙葵碱、VEGF抗体和龙葵碱+VEGF抗体混合液,对照组加入磷酸盐缓冲液(PBS)液。通过立体显微镜照相、IPP 6.0图像分析软件分析图片;免疫组织化学方法检测CD34抗原和ki-67抗原,观察龙葵碱、VEGF抗体和龙葵碱联合VEGF抗体对肿瘤血管生成及肿瘤增殖的影响。结果肿瘤血管面积、CD34抗原和ki-67抗原表达:龙葵碱+VEGF抗体组明显优于单药VEGF抗体组和龙葵碱组,VEGF抗体组优于龙葵碱组,3组均明显优于对照组(P<0.01)。结论龙葵碱、VEGF抗体及两者联合时均能抑制人结肠癌HT-29细胞系诱导的肿瘤血管生成及肿瘤增殖,为抗肿瘤血管生成提供了一种新途径。

芥子碱对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

目的:探讨芥子碱对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)新生血管生成的影响。方法:用溶剂萃取法制备芥子碱,通过CAM模型,检测芥子碱对CAM新生血管生成的影响。结果:与生理盐水对照组相比,中、大剂量芥子碱组(5.0、10.0g/L)CAM实验作用部位的血管生成明显受抑,周围血管网模糊,密度减少(P<0.01),抑制率分别达到54.24%和71.62%,而小剂量组(2.5g/L)差异不显著(P>0.05)。结论:芥子碱具有一定的抗血管生成活性,且其作用效果呈剂量依赖性。

用CAM技术评价鲨鱼软骨提取物抑制新生血管生长的活性

采用鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）技术，检测了鲨鱼软骨提取物（SCAE）抑制新生血管生长的活性。其方法是将肿瘤组织、SCAE等样品接种在置于孵化5d鸡胚CAM膜上的硅环中，继续孵育2d后取膜，观察新生毛细血管生长情况，并采用Crums顺序进行评判。结果表明，SCAE能显著地抑制CAM的新生血管生长，并对BI。黑色素瘤促新生血管形成作用亦有非常显著的抑制作用。

血管生成抑制剂对子宫内膜异位症作用的研究

目的探讨不同类型的血管生成抑制剂对子宫内膜异位症(EMs)血管生成的作用,为抗血管生成途径治疗EMs提供依据。方法建立子宫内膜异位症鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,鸡胚随机分成7组,其中5组每组20枚,接种子宫内膜24h后以无菌明胶海绵为载体,接种治疗组分别给予YH-165μg/(20μl.d)(YH-16组),沙利度胺10μg/(20μl.d)(沙利度胺组),LM60910μg/(20μl.d)(LM609组),VEGF单抗10μg/(20μl.d)(VEGF单抗组),接种组给予生理盐水20μl/d(NS组);另两组设为空白组,各10枚,不接种子宫内膜组织,其中空白载体组以无菌明胶海绵为载体并给予生理盐水20μl/d,单纯空白组则在开窗后即予无菌贴膜封口。通过显微血管计数、原位铺片及组织学观察等方法检测接种的子宫内膜组织对CAM血管生成和四种抑制剂对异位内膜病灶生长行为的影响。结果NS组CAM血管生成反应明显增强,血管数目高于两空白组(P<0.01);各接种治疗组血管数目低于NS组(P<0.01);接种治疗组病灶在光镜下可见腺体结构不完整,甚至腺体消失,间质伴有不同程度的坏死。结论子宫内膜能明显促进CAM的血管生成,血管生成抑制剂能够显著抑制异位病灶的血管形成,并抑制子宫内膜的生长。

奥沙利铂联合复方苦参注射液抗血管生成作用的实验研究

背景与目的:肿瘤的生长、转移、复发和预后均与肿瘤血管生成密切相关。以肿瘤血管生成为靶点,开发血管生成抑制剂在抗肿瘤研究中是一个十分活跃的研究领域。近年来,研究发现某些化疗药物,在小剂量、高频率的给药方式下可以选择性地显著抑制肿瘤组织内新生血管内皮细胞的生长,使肿瘤细胞因为血供不足而生长受阻。这称为小剂量化疗或抗血管生成化疗。中医药治疗肿瘤具有独到的疗效,近年来发现许多中药制剂及中药来源的药物有抗血管新生作用。本研究旨在在国内外现有的研究基础上探讨奥沙利铂联合复方苦参注射液对体内外血管生成的抑制作用。方法:采用MTT法观察奥沙利铂(L-OHP)联合复方苦参注射液对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、人结肠癌LoVo细胞增殖的影响;采用transwell板,观察L-OHP联合复方苦参注射液对HUVEC迁移的影响;采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型,观察L-OHP联合复方苦参注射液对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管的抑制作用。结果:HUVEC和LoVo细胞对不同浓度两种药物进行联合的敏感性不同。2μg/m l奥沙利铂和25μl/m l复方苦参注射液对HUVEC增殖的抑制率分别为31.6%、32.1%,联合应用后的抑制率为54.4%,具有协同作用;0.5μg/m l奥沙利铂和6.25μl/m l复方苦参注射液具有抑制HUVEC迁移的作用,联合应用具有协同效应。奥沙利铂联合应用复方苦参注射液具有抑制鸡胚尿囊膜血管生成作用。结论:小剂量L-OHP和复方苦参注射液在体外有抑制细胞生长,在体内具有抑制血管生成作用,两者联合具有协同效应。

鸡胚及禽类细胞系在生物医药领域的应用及研究进展

鸡胚因发育过程清楚,长久以来作为基础和应用科学研究领域重要的实验模型,尤其在鸡胚发育早期绒毛尿囊膜阶段,因其血管丰富,是天然的免疫缺陷宿主,是病理学、药理学和肿瘤学等研究领域的理想实验模型。作者简述了发育早期的鸡胚组织结构,并介绍了鸡胚绒毛尿囊膜在肿瘤研究、血管生成、器官移植、烧伤等疾病机理研究中的应用,以及在鸡胚病理模型基础上进行的抗肿瘤药物筛选的应用。重点介绍了鸡胚及禽类细胞系在病毒繁殖和疫苗生产、治疗性蛋白和单抗生产方面的应用研究进展。多种人源病毒、禽源病毒、支原体等可在鸡胚及禽类细胞上增殖,并用于疫苗生产。作者对常用的禽类纤维原细胞和多能干细胞的发展和特点进行了阐述,并总结了商业化的禽类细胞系来源以及部分易感病毒。鸡胚表达系统能够在目的蛋白特定位点产生人源化糖基,减少目的蛋白对人的过敏反应,且禽蛋廉价易得,可作为生产人用单克隆抗体和治疗性蛋白的合适供体。作者介绍了鸡胚及禽类细胞系在生物医药领域应用的最新进展,并对鸡胚作为动物模型在未来的应用进行了展望。

赤魟软骨血管生成抑制因子的纯化及抗血管生成活性验证

以赤魟软骨为原料,通过盐酸胍抽提、离子交换层析、凝胶过滤、反相高效液相色谱等步骤,首次获得赤魟软骨血管生成抑制因子-I(Dasyatis akajei cartilage angiogenesis inhibitory factor-I,DCAIF-I)。12%的SDS-PAGE电泳-考染显示为一条带,根据蛋白质的相对迁移率计算,分子量约为62 ku。通过鸡胚绒毛尿囊膜活性抑制模型进行活性分析,结果表明,活性物质处理组(DCAIF-I组)与阳性对照组(CS组)抑制效果明显,CAM上的血管发生大面积褪色,血管结构模糊,分枝发生断裂,血管密度减少。PBS对照组血管网清晰,呈叶脉状、放射状生长。血管定量分析结果表明,随着活性物质处理组DCAIF-I含量的增加,CAM上血管的数量减少更加明显,当DCAIF-I含量为1μg时,对CAM上血管的抑制率达56%,结果表明,DCAIF-I对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管生成具有明显的抑制效果,且抑制活性具有一定的浓度依赖性。

隐丹参酮对鸡胚尿囊膜血管生成的抑制作用

目的评价隐丹参酮对鸡胚尿囊膜(CAM)新生血管生成的抑制作用。方法在六日龄CAM上植入含隐丹参酮的甲基纤维素膜片并孵化48 h。解剖显微镜下计数加药组和对照组局部血管数,用抑制率反映药物对CAM新生血管形成的影响。结果隐丹参酮0.1μg/egg和0.2μg/egg剂量相关性减少CAM局部的血管数,抑制率分别达到65%和72%;与对照组相比用药组局部血管明显变细受损。结论隐丹参酮对CAM血管生成有显著的抑制作用。

三氧化二砷对鸡胚尿囊膜血管形成的抑制作用

背景与目的:三氧化二砷(As2O3)注射液,临床对肝癌等实体瘤的治疗具有一定的疗效,其作用机制有待阐明。本研究探讨三氧化二砷注射液对鸡胚尿囊膜(ch ick embryo chorioallantoic m embrane,CAM)血管生成的影响。方法:应用CAM模型和计算机图像分析技术,观察三氧化二砷注射液对血管形成的影响。结果:三氧化二砷注射液10、20和40μg/m l作用3 d后,CAM上的血管面积分别为(25.7±4.2)%、(24.7±2.5)%和(21.5±6.7)%,与生理盐水对照组[血管面积为(30.7±4.6]%]相比,差异有显著性(P<0.05,P<0.01,P<0.01);不同剂量组间比较,差异无显著性(P>0.05)。结论:三氧化二砷注射液对于CAM血管形成具有较强的抑制作用,可以研究试用于抗肿瘤血管形成治疗。

丹红注射液促进鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的实验研究

目的探讨丹红注射液对鸡绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的影响。方法种蛋在(37.5±0.5)℃条件下孵育,第7天开窗暴露CAM建立模型。将60枚存活鸡胚随机分为生理盐水组(N组)、正常血清组(C组)、丹红注射液治疗组(T组)、血管内膜损伤组(I组)、血管内膜损伤后丹红注射液治疗组(IT组)以及血管内皮生成因子(VEGF,20μg/mL)组(V组),每组10枚鸡胚。新西兰大白兔腹主动脉用球囊导管损伤建立血管内膜损伤模型,丹红注射液治疗组及血管内膜损伤后丹红注射液治疗组于大白兔耳缘静脉注射丹红注射液2mL/kg,各组连续7d后取血清。第8天,在鸡胚CAM上放一直径为5mm的滤膜作为载体,分别加样5μL,每日1次,连续3d,第11天取CAM,数码相机拍照后平铺于载玻片上,计数载体周围血管数目及滤膜周围0.5cm范围内的血管分支点数并进行比较。结果比较CAM周围血管数目,T组(31.80±3.08)条与C组(28.40±3.75)条比较,血管以载体为中心呈辐辏状生长,血管总数明显增多,具有统计学意义;I组(47.30±3.27)条与C组相比较,载体周围血管数量明显增多,具有统计学意义;与IT组(47.60±3.89)条相比较,血管总数无统计学意义。结论含丹红注射液的兔血清能够明显促进CAM上血管生成,血管内膜损伤后的血清和内膜损伤丹红治疗组也分别强于血管内膜未损伤时。

几种收涩中药对鸡胚尿囊膜血管生成影响的实验研究

目的研究收涩中药乌梅、椿皮、金樱子、五味子、五倍子、赤石脂、禹余粮对鸡胚尿囊膜生成的影响。方法采用血清药理学方法,制备收涩药物的大鼠血清;建立鸡胚绒毛尿囊膜模型,并应用鸡胚绒毛尿囊膜模型进行活性筛选。于鸡胚发育的第5天,将加药物血清后的明胶海绵载体加于鸡胚绒毛尿囊膜上,孵育48 h后,固定鸡胚绒毛尿囊膜,取出,采用医用图像采集系统分析结果。结果收涩药物金樱子、五味子、五倍子、乌梅、赤石脂、椿皮对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管数目有一定抑制作用(P<0.05);乌梅组、椿皮组对抑制新血管生成有一定的趋势,与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论收涩中药对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管有一定的抑制作用。