Protection of Intellectual Property and Authenticity of Chinese Herbal Medicine Chrysanthemum morifolium

This paper first introduced Chrysanthemum morifolium Ramat. and its medicinal value. Then, it studied agricultural intellectual property resources such as geographical indications, trademarks, patents, new plant varieties, biological genetic resources, and traditional knowledge related to C. morifolium . Finally, it summarized poverty-stricken areas ecologically suitable for planting C. morifolium , analyzed the GAP certification of C. morifolium , pollution-free agricultural product certification, green food certification, and organic food certification, and discussed the strategies for C. morifolium intellectual property protection and authenticity protection in the context of TCM development strategy and rural revitalization strategy.

Extraction and Purification of Depigmenting Agents from Chinese Plants

Depigmenting agents were solvent-extracted and purified by preparative and analytical HPLC from three Chinese plants; Chrysanthemum morifolium Ramat（ Xizang Caijuhua）, Rhodiola sachalinensis, and Terminalia chebula Retzius. Four fractions obtained from the ethyl ether layer of C. m. Rama and two fractions from the ethyl acetate layer of Rhodiola salientness show depigmenting effects. At 8 200, the ethyl acetate layers of Chrysanthemum morifolium Ramat, Rhodiola sachalinensis and the methanol extract of Terminalia chebula Retzius, can inhibit the melanin production of mouse B16 melanoma cells by 92%, 60% and 90%, respectively, whereas 46% inhibition was observed by commercially available depigmenting agents（arbutin）. These results show the potential of these three Chinese plants as a novel resource for depigmenting agents in the cosmetic industry.

怀菊花茎叶中聚炔类化合物对ox-LDL诱导的HUVECs细胞损伤的保护作用

研究怀菊花茎叶中分离得到的聚炔类化合物对氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用及初步探讨作用机制。采用ox-LDL(200μg/mL)处理HUVECs细胞建立内皮细胞损伤模型,同时给予聚炔类化合物1~10(100μg/mL)干预;通过CCK-8法检测细胞生存率,筛选出有细胞保护作用的目标化合物;采用目标化合物5和9(12.5、25、50、100μg/mL)干预细胞24 h,CCK-8检测细胞生存率,采用流式细胞术检测细胞凋亡率和活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成率,酶联免疫(ELISA)检测细胞上清液中白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量;细胞免疫印迹法(In-Cell Western)检测细胞中核转录因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)2p100/p52与NF-κBp65蛋白的相对表达水平。结果显示:与正常对照组(Con)相比,模型组(ox-LDL)中的细胞生存率明显下降,细胞凋亡率、ROS生成,炎性因子IL-1β、IL-6及TNF-α明显升高(P<0.01);与ox-LDL组相比,聚炔类化合物5和9可以明显提高HUVECs细胞的生存率、降低细胞凋亡率、ROS生成率,炎性因子IL-1β、IL-6及TNF-α的分泌(P<0.05或P<0.01),下调NF-κB2 p100/p52、NF-κB p65蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。综上所述,怀菊花茎叶中聚炔苷类成分可以改善ox-LDL诱导的HUVECs细胞损伤与功能障碍,其作用机制可能与NF-κB信号通路相关。

菊花中216种农药残留检测分析

目的:建立菊花中216种常用农药残留的快速检测方法。方法:样品经乙腈高速匀浆提取后浓缩,采用液相色谱-质谱法和气相色谱-质谱法,以多反应监测模式进行数据采集,采用空白基质匹配法及校准曲线法进行定量检测。结果:菊花中216种农药的线性关系良好,90%以上农药指标r>0.995,各待测农药指标回收率为70%~115%,符合农药多残留的痕量分析要求;78批菊花中检出农药68种。结论:菊花中农药残留检出率较高、检出品种较多,但检出的多为中低毒性农药。建立的方法有针对性地检测了菊花中高风险的农药品种,涵盖了大多数常用农药品种,检测方法快速、准确,适用于菊花中农药多残留的风险监测和日常快速筛查,可为基质类似的中药材农药多残留检测方法研究提供借参考。

39个传统秋菊品种扦插生根能力综合评价

为了筛选出扦插生根能力较强的传统秋菊(Chrysanthemum morifolium Ramat.)品种,对39个传统秋菊品种扦插12 d的8个根系形态指标进行差异分析、相关性分析和主成分分析,并对这些传统秋菊品种的扦插生根能力进行隶属函数分析和分级。结果显示:供试传统秋菊品种的总根数为3.3~44.0,总根长、平均根长和最长根长分别为2.463~129.174、0.632~4.470和1.610~7.964 cm,根直径为0.200~0.405 mm,根投影面积和根表面积分别为0.102~3.062和0.319~9.619 cm 2,总根体积为0.002~0.079 cm 3,且多数指标以‘火凤凰’(‘Huofenghuang’)最小。这些根系形态指标的变异系数为15.789%~51.605%,其中,总根长的变异系数最大,根直径的变异系数最小,其余指标的变异系数均大于32%。供试传统秋菊品种的多数根系形态指标间存在显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)正相关。主成分分析结果显示:前3个主成分的累计贡献率达97.976%。隶属函数分析和分级结果表明:供试传统秋菊品种的扦插生根能力分为优秀、良好、中等和偏差4个等级,‘龙都春丽’(‘Longdu Chunli’)、‘玉楼人醉’(‘Yulou Renzui’)、‘龙都月华’(‘Longdu Yuehua’)、‘圣光华宝’(‘Shengguang Huabao’)、‘龙都秋枫’(‘Longdu Qiufeng’)、‘龙都春晓’(‘Longdu Chunxiao’)的扦插生根能力优秀,综合得分均大于0.70。根投影面积、根表面积和总根体积在不同等级间差异显著。研究结果显示:不同传统秋菊品种间扦插苗的根系形态指标变异较大,其中,‘龙都春丽’等6个品种的扦插生根能力较强,可作为传统秋菊品种遗传改良的亲本。

药菊苗期抗旱性综合评价及抗旱鉴定指标筛选

为研究干旱胁迫对不同栽培类型药菊苗期生长的影响,并筛选耐旱性较强的药菊栽培类型和适宜的抗旱性鉴定指标,为抗旱药菊种质选择奠定基础,本研究以5个栽培类型药菊为材料,测定其在干旱胁迫下苗期的生长指标和生理生化指标,并使用相关性分析、主成分分析、隶属函数分析相结合的方法对其进行抗旱性综合评价。结果表明,干旱胁迫下药菊苗期植株变矮;随着干旱胁迫加重,其地下部干重、根冠比、总根投影面积等指标呈降低趋势,脯氨酸、可溶性糖和可溶性蛋白质含量呈增长趋势。抗旱性综合评价结果表明,怀菊抗旱性综合评价值最大(0.854),皇菊抗旱性综合评价值最小(0.093),5个栽培类型药菊抗旱性为怀菊>滁菊>亳菊>杭菊>皇菊;叶片相对含水量、叶片干重、地下部干重、根冠比、叶绿素相对含量(SPAD值)和过氧化物酶活性等可作为药菊苗期的抗旱性鉴定指标。

5个栽培类型药菊分枝期抗旱性综合评价

为研究干旱胁迫对不同栽培类型药菊分枝期生长的影响,并评价不同药菊种质资源的抗旱性,以5个栽培类型药菊为试验材料,分别测定其农艺性状、生物积累量、生理特性等相关指标,并利用隶属函数法、主成分分析、相关分析进行抗旱性综合评价和抗旱鉴定指标筛选。结果表明,干旱胁迫下药菊分枝期的生长受到抑制,株高降低、茎粗减小、分枝数变少、生物量积累减少;渗透物质脯氨酸、可溶性糖、可溶性蛋白含量普遍增加;抗逆酶活性增强,膜脂过氧化程度加剧。抗旱性综合评价表明,各栽培类型药菊在分枝期的抗旱性强弱依次为:怀菊(‘怀白菊’)>滁菊>亳菊>皇菊>杭菊(‘大洋菊’)。研究结果为药菊种质选育、高产高效栽培奠定了基础。

基于响应面法的杭白菊发酵工艺优化

为优化杭白菊发酵工艺条件,采用杭白菊为原料,在单因素试验基础上,以发酵时间、酵母接种量、发酵温度为自变量,以发酵液中的黄酮含量为评价指标,采用Box-Behnken响应面法对杭白菊酵母发酵工艺进行了条件优化.结果表明,酵母发酵杭白菊的最佳工艺条件为:发酵时间4 d、酵母接种量为3%、发酵温度为28℃,在此条件下,发酵液中黄酮含量为0.88 mg/mL.该发酵工艺设计合理可靠,试验结果可为菊花发酵产品开发提供一定的借鉴价值.

杭白菊木脂素类成分研究

目的 研究杭白菊木脂素类成分。方法 采用大孔吸附树脂、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和制备型HPLC对杭白菊80%乙醇提取物进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果 从中分离得到11个化合物,分别鉴定为ssioriside (1)、nudiposide (2)、lyoniside (3)、tortoside A (4), viburfordoside E (5)、tiliamuroside A (6)、开环异落叶松脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(7)、异落叶松脂醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(8)、异落叶松脂醇-9-O-β-D-吡喃木糖苷(9)、5′-甲氧基-异落叶松脂醇-9′-O-β-D-吡喃木糖苷(10)、(7R,8R)-4,7,9,9′-四羟基-3,3′-二甲氧基-8-O-4′-新木脂素(11)。结论 化合物1~11均为首次从该植物中得到。

RP-HPLC法同时测定亳菊总黄酮中3种黄酮类成分

目的建立亳菊总黄酮中木犀草素、芹菜素、金合欢素3种黄酮类成分的HPLC测定方法。方法采用Shim-pack VP-ODS(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;柱温25℃,甲醇-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱;体积流量0.8mL/min;检测波长350 nm;进样量20μL。结果亳菊总黄酮中木犀草素、芹菜素、金合欢素线性范围分别为0.140 8～0.704 0μg(r=0.999 9),0.110 2～0.551 0μg(r=0.999 9),0.008 1～0.040 50μg(r=0.999 1);平均回收率(n=6)分别为100.7%,100.5%,99.4%。结论本法灵敏、简便准确、重现性好,可用于亳菊总黄酮的质量控制。

应用ISSR对25个小菊品种进行遗传多样性分析及指纹图谱构建

【目的】揭示选育出的菊花新品种遗传多样性并建立ISSR指纹图谱,为品种知识产权保护提供依据。【方法】选用21个ISSR引物,对新选育的25个小菊品种的基因组DNA进行随机引物PCR扩增。【结果】共获得122条扩增带,其中多态性谱带114条,占扩增谱带数的93.4%;品种间相似系数变幅在0.282～0.757;平均有效等位基因数为1.6390,平均Nei’s基因多样性指数为0.3620,平均Shannon信息指数为0.5323;在21个引物中,引物ISSR35扩增的谱带可把25个品种完全区分开。【结论】ISSR标记技术能较好地从分子水平揭示出菊花品种的遗传多样性,并能有效应用于菊花品种指纹图谱的构建。

不同花色菊花品种花色素成分的初步分析

为了分析形成菊花花色的色素成分以搞清楚花色形成的机理,该文对17个菊花品种的花瓣进行了花色表型测定、特征显色反应和紫外--可见光谱扫描分析.结果发现:菊花不同花色(黄色、白色、红色、紫色和橙色)品种的色素由类黄酮和类胡萝卜素两大类组成.黄色花主要含有类胡萝卜素和黄酮类化合物;白色花仅含有黄酮类化合物;红色和紫色花主要由花色素苷和黄酮类化合物组成;橙色花的色素包括类胡萝卜素、黄酮类化合物和花色素苷.该项研究为菊花花色素成分的进一步分离和鉴定等工作奠定了基础,同时也为菊花花色的分子育种提供帮助.

不同钾肥用量对福田河白菊产量和质量的影响

目的研究钾肥施用量对福田河白菊产量和质量的影响,为其GAP栽培合理施肥提供指导。方法在中等氮、磷和其他矿质养分为肥底的基础上,设置不同钾肥施用量进行土壤培养试验,分别测定菊花产量和花中的黄酮、绿原酸、可溶性总氨基酸和粗蛋白的量以及苯丙氨酸解氨酶活性。结果盆栽试验结果表明,适量施钾能显著提高菊花产量与质量。在施钾(K2O)量为0～4.0g/株时,菊花产量和花中总黄酮的量与累积量同施钾量及花中钾的量成正比,而与花中N/K成反比;但施钾过高(6.0～8.0g/株)会抑制白菊生长,使菊花产量和花中总黄酮的量与累积量均有不同程度的降低。菊花中绿原酸的量同施钾量及花中钾的量成正比,而与花中N/K成反比。白菊不同花期花中总黄酮和绿原酸的量同花中可溶性总氨基酸和粗蛋白的量之间呈显著负相关。结论在中等氮、磷和其他矿质营养条件下,综合考虑菊花产量和花中总黄酮与绿原酸的量及累积量等因素,福田河白菊钾肥施用量以4.0g/株比较适宜。

菊花的化学成分研究

通过硅胶、Sephadex LH-20反复柱层析、纯化，从菊花的乙醇提取物中分离得到14个化合物，利用波谱方法分离鉴定为香叶木素（chrysoeriol，1），木犀草素（luteolin，2），芹菜素（apigenin，3），香叶木素7-O-β-D-葡萄糖苷（chrysoeriol 7-O-β-D-glucopyranoside，4），木犀草素7-O-β-D-葡萄糖苷（luteolin 7-O-β-D-glucopyranoside，5），金合欢素7-O-β-D-葡萄糖苷（acacetin 7-O-β-D-glucopyranoside，6），刺槐苷（acacetin 7-O-β-D-glucopyranosyl（6→1）-α-L-rhamnopyranoside，7），金合欢素7-O-（6″-O-乙酰）-β-D-葡萄糖苷（acacetin 7-O-（6″-O-acetyl）-β-D-glucopyranoside，8），金合欢素（acacetin，9），山奈酚（kaempferol，10），异泽兰黄素（eupatilin，11），大黄素（emodin，12），大黄酚（chrysophanol，13）和大黄素甲醚（physcion，14）。其中化合物8-14均为首次从菊花中分离得到。

氮、磷、钾配合施用对福田白菊产量和品质的影响

目的研究氮、磷、钾3种养分对福田白菊产量和品质的影响。方法采用湖北省麻城市福田河镇白菊种植基地土壤进行盆栽土培试验。结果在盆栽条件下施肥对白菊产量和品质的影响效应为氮>磷≥钾;氮、磷、钾3要素配合施用能促进白菊的正常生长发育,显著提高白菊的经济学产量、生物学产量、外观品质、茶用和药用品质。其中,白菊中可溶性总糖和总黄酮量呈显著正相关(r=0.813 1**),说明平衡施肥可能通过促进白菊中的可溶性总糖的合成来增加总黄酮的合成与积累。结论在白菊生产上要在合理施用氮肥的基础上增施磷、钾肥。

杭白菊总黄酮的提取工艺及其含量的动态变化研究

目的 确定杭白菊总黄酮的最佳提取工艺 ,并考察总黄酮含量随杭白菊不同采摘时间的动态变化。方法 采用正交试验法 ,考察提取温度、提取时间、乙醇浓度及提取次数对提取液中总黄酮含量的影响 ,确定最佳提取条件 ,然后在该条件下对同一种植区域 ,不同时间采摘的杭白菊进行总黄酮提取并进行含量测定。结果 在所考察的因素中 ,对杭白菊黄酮提取影响程度为 :乙醇浓度 >提取温度、提取次数 >提取时间 ,不同时间采摘的杭白菊 ,其总黄酮含量未见明显变化。结论 杭白菊黄酮最佳提取条件为 :75 %乙醇 ,10 0℃水浴回流提取 3次 ,每次 1.5 h;

怀菊花中糖苷类化学成分研究

目的:研究怀菊花的化学成分。方法:利用各种色谱技术对怀菊花乙酸乙酯部位进行分离纯化,根据化合物的理化性质和光谱数据鉴定结构。结果:从怀菊花中分离并鉴定了13个糖苷类化合物,分别为:9-hydroxy-megastigma-4,7-dien-3-one-9-O-β-D-glucopyranoside(1)、corchoionoside C(2)、(6S,9R)-长寿花糖苷(3)、lippianoside E(4)、amarantholidol A glycoside(5)、4-甲氧基苄基-β-D-葡萄糖苷(6)、everiastoside E(7)、苯乙醇-β-巢菜糖苷(8)、二氢丁香苷(9)、苯甲醇-β-巢菜糖苷(10)、苯甲醇-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(11)、京尼平苷(12)、4-烯丙基-2,6-二甲氧基苯基葡萄糖苷(13)。结论:所有化合物均为首次从该植物中分离得到。

超声波辅助萃取杭白菊挥发油工艺研究

对超声波辅助萃取杭白菊挥发油的工艺进行研究,在单因素实验的基础上通过正交试验探讨超声波辅助萃取杭白菊精油的最佳工艺。研究结果表明:超声提取温度为50℃、超声提取功率为70 W、超声提取时间为25 min、提取次数为2次时提取效果最佳。

菊花不同花期及花序不同部位香气成分和挥发研究

以切花菊品种‘神马’为试材,采用顶空-固相微萃取和气相色谱-质谱联用(GC/MS)技术,分别测定菊花不同花期及花序不同部位的香气成分种类和含量,并利用生物显微镜观察花瓣的表皮细胞和横切面组织细胞的结构特征。结果表明:(1)菊花花蕾期共检测到香气成分24种,始花期31种,盛花期43种,终花期22种;随着花朵的开放和凋谢,酮类、萜烯类和醇类化合物的含量呈先上升后下降的趋势,在盛花期含量达到最高,而酯类、醛类和杂环类化合物则呈持续下降的趋势。(2)盛花期,在舌状花中共检测到香气成分种类31种,在管状花中共检测到50种;舌状花对菊花香气的贡献比管状花大;菊花舌状花由内轮向外轮香气成分种类变化不大,但是同类香气成分含量的变化出现由内轮向外轮逐渐减少的趋势。(3)异环柠檬醛、桉叶醇、α-蒎烯、β-金合欢烯和石竹烯等化合物可能为菊花的主要特征香气成分。(4)显微观察结果表明:舌状花的香气可能是通过表皮细胞间隙释放的,上表皮是菊花释放香气的主要部位。

ICP-MS法测定亳菊不同部位及其土壤中微量元素

目的：探究微量元素在亳菊不同部位的分布及富集规律。方法：采用微波消解处理亳菊不同部位及根系附近土壤,通过ICP-MS测定,并采用统计学软件对试验数据进行相关性分析。结果：亳菊不同部位及其土壤中8种微量元素含量存在差异;亳菊不同部位对8种微量元素的富集系数存在明显差异,变化范围为0.0054~0.9205;亳菊花序中Fe与Mg呈显著正相关;亳菊花序与土壤中的Fe呈显著正相关,亳菊枝叶与土壤中的Al、Ba和Mg呈显著正相关。结论：亳菊对微量元素的吸收存在选择性,可以通过改善栽培中的部分环节来提高亳菊的质量。