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Isolation and Expression Analysis of Two Genes Encoding Cinnamate 4-Hydroxylase from Cotton(Gossypium hirsutum) 被引量:3
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作者 NI Zhi-yong LI Bo +2 位作者 Neumann M Peter Lü Meng FAN Ling 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2014年第10期2102-2112,共11页
Two genes (GhC4H1 and GhC4H2) that encode putative cotton cinnamate 4-hydroxylases that catalyze the second step in the phenylpropanoid pathway were isolated from developing cotton fibers. GhC4H1 and GhC4H2 each con... Two genes (GhC4H1 and GhC4H2) that encode putative cotton cinnamate 4-hydroxylases that catalyze the second step in the phenylpropanoid pathway were isolated from developing cotton fibers. GhC4H1 and GhC4H2 each contain open reading frames of 1 518 base pairs (bp) in length and both encode proteins consisting of 505 amino acid residues. They are 90.89% identical to each other at the amino acid sequence level and belong to class I of plant C4Hs. GhC4H1 and GhC4H2 genomic DNA are 2 247 and 2 161 bp long, respectively, and contain two introns located at conserved positions relative to the coding sequence. GhC4HI and GhC4H2 promoters were isolated and found to contain many cis-elements (boxes P, L and AC-1 element) previously identified in the promoters of other phenylpropanoid pathway genes. Histochemical staining showed GUS expression driven by the GhC4H1 and GhC4H2 promoters in ovules and fibers tissues. GhC4H1 and GhC4H2 were also widely expressed in other cotton tissues. GhC4H2 expression reached its highest level during the elongation stage of fiber development, whereas GhC4H1 expression increased during the secondary wall development period in cotton fibers. Our results contribute to a better understanding of the biochemical role of GhC4H1 and GhC4H2 in cotton fiber development. 展开更多
关键词 cinnamate 4-hydroxylase Gossypium hirsutum promoter analysis phenylpropanoid pathway
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红芪HpC4H基因的克隆及其铁盐干预下的表达分析
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作者 何军刚 李昕蓉 +3 位作者 魏小成 谢耀慧 谢鑫明 李成义 《草地学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期2749-2758,共10页
肉桂酸-4-羟化酶(Cinnamate-4-hydroxylase,C4H)在调节植物生长发育方面具有重要的作用。为探究红芪(Hedysarum polybotrys Hand.-Mazz.)黄酮类成分合成的分子调节机制,本研究以红芪幼苗为材料,通过RACE技术,克隆HpC4H基因,并进行生物... 肉桂酸-4-羟化酶(Cinnamate-4-hydroxylase,C4H)在调节植物生长发育方面具有重要的作用。为探究红芪(Hedysarum polybotrys Hand.-Mazz.)黄酮类成分合成的分子调节机制,本研究以红芪幼苗为材料,通过RACE技术,克隆HpC4H基因,并进行生物信息学分析和表达模式分析。结果显示:HpC4H基因全长为1634 bp,编码477个氨基酸,蛋白分子量为54.94 kD,不含有信号肽和跨膜结构区。亚细胞定位预测显示,该蛋白定位于内质网中,具有C4H保守功能区并属于细胞色素P450超基因家族。序列分析发现,HpC4H氨基酸序列与柠条锦鸡儿(Caragana korshinskii Kom.)的相似性高达92.84%。qRT-PCR结果表明,HpC4H基因在红芪不同组织中的表达模式为:根>茎>叶,同时,该基因的表达量在不同浓度铁盐干预下有上调趋势,推测铁盐可能在调控红芪HpC4H基因表达中发挥一定作用,且低浓度铁盐溶液作用显著。 展开更多
关键词 红芪 肉桂酸-4-羟化酶 基因克隆 铁盐溶液 基因表达
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烟草苯丙烷代谢途径关键酶肉桂酸-4-羟化酶、4-香豆酸-辅酶A基因的分离及表达特性分析 被引量:15
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作者 于利 张彦 +4 位作者 陈爱国 梁洪波 Qamaruddin Jogi 徐文玲 许娜 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1067-1073,共7页
肉桂酸-4-羟化酶(C4H)、4-香豆酸-辅酶A(4CL)是烟草苯丙烷代谢途径的关键酶,其多酚类产物与烟草品质密切相关。本研究以酚类物质含量合成差异较大的2个烤烟品种红花大金元(HD)和K326为试验材料,利用同源克隆技术获得这2种烟草Ntc4h和Nt... 肉桂酸-4-羟化酶(C4H)、4-香豆酸-辅酶A(4CL)是烟草苯丙烷代谢途径的关键酶,其多酚类产物与烟草品质密切相关。本研究以酚类物质含量合成差异较大的2个烤烟品种红花大金元(HD)和K326为试验材料,利用同源克隆技术获得这2种烟草Ntc4h和Nt4cl基因的cDNA序列并进行表达特性分析。结果表明,在2个品种中Ntc4h和Nt4cl各有2个同源基因,Ntc4h1、Ntc4h2、Nt4cl1和Nt4cl2的ORF长度分别为1518 bp、1518 bp、1644 bp和1629 bp。Nt4cl1、Ntc4h1和Ntc4h2在编码序列上存在品种间差异。实时荧光定量PCR分析结果表明,该2种酶的基因在烟草中具有明显的时空表达特异性,2种酶基因在根、茎、叶、花和萼片中都有表达,在茎的木质部和韧皮部中的表达量均显著高于其他组织;在圆顶期和适熟期表达水平较高,在适熟期达到最高;且两品种中的表达模式存在差异。 展开更多
关键词 烟草 肉桂酸-4-羟化酶(C4H) 4-香豆酸-辅酶A(4CL) 基因分离 表达分析
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丹参C4H基因pET32a原核表达载体的构建 被引量:8
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作者 张婷婷 王春丽 +3 位作者 韩蕊莲 刘岩 赵旺生 梁宗锁 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2011年第7期158-162,共5页
【目的】克隆丹参中肉桂酸-4-羟化酶基因(SmC4H)的核心区,并构建SmC4H基因的原核表达载体。【方法】设计合成SmC4H基因全长引物,应用PCR克隆SmC4H基因的编码区并添加酶切位点,应用EcoRⅤ、NotⅠ双酶切SmC4H-pGM-T后与原核表达载体pET32... 【目的】克隆丹参中肉桂酸-4-羟化酶基因(SmC4H)的核心区,并构建SmC4H基因的原核表达载体。【方法】设计合成SmC4H基因全长引物,应用PCR克隆SmC4H基因的编码区并添加酶切位点,应用EcoRⅤ、NotⅠ双酶切SmC4H-pGM-T后与原核表达载体pET32a连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行双酶切鉴定,诱导表达重组蛋白并进行SDS-PAGE电泳以及Western Blot分析。【结果】克隆得到了1 200 bp大小的基因片段,经测序鉴定其为SmC4H基因片段;连接表达载体测序结果表明,SmC4H-pET32a构建成功,其诱导表达蛋白经SDS-PAGE检测及Western Blot分析发现,重组蛋白表达效果较好,且主要以包涵体形式存在。【结论】成功构建了SmC4H-pET32a原核表达载体,并成功诱导了SmC4H-pET32a重组蛋白的表达。 展开更多
关键词 丹参 肉桂酸-4-羟化酶 pET32a 原核表达载体
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羽衣甘蓝中一个突变型肉桂酸-4-羟化酶基因的克隆及分析 被引量:12
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作者 陈安和 李加纳 +2 位作者 柴友荣 王瑞 吕俊 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期915-922,共8页
以羽衣甘蓝为材料,克隆了全长2431bp的肉桂酸-4-羟化酶基因BoC4H。它有两个内含子,mRNA为1715bp,编码一个481个氨基酸的推导蛋白,与其它植物C4H有广泛同源性。它含有细胞色素P450保守域和特征基序,如血红素结合域、E-R-R三联体、含T的... 以羽衣甘蓝为材料,克隆了全长2431bp的肉桂酸-4-羟化酶基因BoC4H。它有两个内含子,mRNA为1715bp,编码一个481个氨基酸的推导蛋白,与其它植物C4H有广泛同源性。它含有细胞色素P450保守域和特征基序,如血红素结合域、E-R-R三联体、含T的结合槽基序、酶正确定向必需的铰链基序。BoC4H具有C4H/CYP73A5的大部分特征性底物结合位点基序(SRSs)和酶活性位点残基,但与拟南芥等植物C4H相比其编码区3′发生了C2242单碱基缺失和相应移码,导致其蛋白C-末端缺失/变异了36个残基,SRS6基序和其上的活性位点残基也相应缺失,因此BoC4H可能无功能或活性低。BoC4H为膜蛋白,可能定位于内质网,其二级结构主要为α-螺旋和随机卷曲。Swiss-Model不能预测出其三级结构。甘蓝中存在一个至少由5个成员构成的C4H基因家族。 展开更多
关键词 羽衣甘蓝 克隆 肉桂酸-4-羟化酶(C4H) 突变 序列分析
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桑树肉桂酸-4-羟化酶基因(MmC4H)的克隆及在不同桑品种间的表达差异 被引量:7
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作者 黄满芬 王恒 +4 位作者 方荣俊 赵卫国 张林 潘刚 刘利 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期592-600,共9页
肉桂酸-4-羟化酶(C4H)是植物苯丙烷类代谢途径中的关键酶之一,影响黄酮类等次生代谢产物的生物合成。利用RT-PCR和RACE技术,以鲁桑(Morus multicaulis)品种育71-1的桑树幼叶cDNA为模板克隆了桑树肉桂酸-4-羟化酶基因,命名为MmC4H(GenBan... 肉桂酸-4-羟化酶(C4H)是植物苯丙烷类代谢途径中的关键酶之一,影响黄酮类等次生代谢产物的生物合成。利用RT-PCR和RACE技术,以鲁桑(Morus multicaulis)品种育71-1的桑树幼叶cDNA为模板克隆了桑树肉桂酸-4-羟化酶基因,命名为MmC4H(GenBank登录号:KJ013408)。该基因cDNA序列长1 794 bp,1 518 bp的ORF编码505个氨基酸残基,蛋白质序列包含一个植物P450保守区域,与包括川桑(Morus notabilis)在内的其它6种植物同源蛋白质序列的相似度达86%以上,其中与川桑同源序列的相似度达到98%。通过实时荧光定量PCR检测分析MmC4H在7个桑种的34个品种幼叶中的表达水平存在较大差异,并且该基因的表达水平与桑叶总黄酮含量有一定的相关性,供试华桑(Morus cathayana)和白桑(Morus alba)品种幼叶中的MmC4H表达水平及桑叶总黄酮含量均较高。 展开更多
关键词 桑树 肉桂酸-4-羟化酶 基因克隆 序列分析 实时荧光定量PCR 桑品种 桑叶总黄酮
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青稞C4H基因的克隆及组织表达分析 被引量:15
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作者 罗小娇 刘新春 +2 位作者 杨晓云 袁金娥 冯宗云 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期589-596,共8页
为揭示大麦中黄酮合成的分子调控机制,利用反转录PCR结合同源克隆和RACE技术首次从青稞(裸大麦)叶片中克隆获得肉桂酸-4-羟化酶基因(HvC4H)的全长cDNA序列(Genbank登录号:KF927086),总长度1951 bp,ORF为1518 bp,编码505个氨基酸,等电点P... 为揭示大麦中黄酮合成的分子调控机制,利用反转录PCR结合同源克隆和RACE技术首次从青稞(裸大麦)叶片中克隆获得肉桂酸-4-羟化酶基因(HvC4H)的全长cDNA序列(Genbank登录号:KF927086),总长度1951 bp,ORF为1518 bp,编码505个氨基酸,等电点PI=9.01,平均亲水指数(GRAVY)为-0.170,属于亲水性碱性蛋白,高级结构分析表明其具有细胞色素P450家族保守域及C4H特异的功能性活性位点。利用实时荧光定量PCR分析胚乳发育5个时期不同组织(茎、叶及子粒)的表达情况,结果显示HvC4H基因在青稞胚乳发育期的表达情况存在着明显的组织差异性,在茎中的表达量最高。本研究为通过调控C4H基因的表达从而提高大麦黄酮的含量奠定了分子生物学基础,对于改良大麦的品质、抗性、生长发育等性状具有重要意义。 展开更多
关键词 青稞(裸大麦) C4H基因 同源克隆 RACE 实时荧光定量PCR 胚乳发育期
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紫苏肉桂酸4-羟基化酶基因的克隆与表达 被引量:3
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作者 宋西红 郝磊 +3 位作者 吕晓玲 郭宇 魏曼 赵辰辰 《广东农业科学》 CAS 2015年第11期124-129,共6页
为阐述紫苏中迷迭香酸合成的分子调节机制,应用同源克隆和RACE技术首次从紫苏叶片中克隆得到肉桂酸-4-羟基化酶基因(Per C4H)的全长c DNA序列(Gen Bank登录号:KM434189)。Per C4H基因总长度为1 667 bp,基因的开放阅读框(ORF)为1 518 bp... 为阐述紫苏中迷迭香酸合成的分子调节机制,应用同源克隆和RACE技术首次从紫苏叶片中克隆得到肉桂酸-4-羟基化酶基因(Per C4H)的全长c DNA序列(Gen Bank登录号:KM434189)。Per C4H基因总长度为1 667 bp,基因的开放阅读框(ORF)为1 518 bp,编码505个氨基酸残基,还含有长度为21 bp的5′非编码区(5′UTR)和95 bp的3′非编码区(3′UTR)。系统进化树分析得到Per C4H基因与唇形科植物丹参和黄芩的亲缘性最近。由实时荧光定量PCR分析可知,该基因在紫苏中具有组织表达特异性,根中的表达最高,茎中次之,而叶中最少。一定浓度的赤霉素与茉莉酸甲酯能提高Per C4H的表达量,而脱落酸和黑暗处理能降低Per C4H的表达量。 展开更多
关键词 紫苏 迷迭香酸 肉桂酸4-羟基化酶 基因克隆 表达分析
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苦荞C4H基因的cDNA克隆及生物信息学分析 被引量:6
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作者 刘荣华 王丽 +2 位作者 孙朝霞 侯思宇 李红英 《山西农业大学学报(自然科学版)》 CAS 2017年第11期767-773,共7页
[目的]为了解植物苯丙烷类代谢途径中关键酶——肉桂酸-4-羟基化酶基因结构特征及系统进化,拟克隆苦荞肉桂酸-4-羟基化酶(Cinnamate-4-hydroxylase,C4H)基因并进行生物信息学分析。[方法 ]本研究通过RT-PCR技术,克隆2个苦荞C4H基因cDNA... [目的]为了解植物苯丙烷类代谢途径中关键酶——肉桂酸-4-羟基化酶基因结构特征及系统进化,拟克隆苦荞肉桂酸-4-羟基化酶(Cinnamate-4-hydroxylase,C4H)基因并进行生物信息学分析。[方法 ]本研究通过RT-PCR技术,克隆2个苦荞C4H基因cDNA和DNA序列,并通过生物信息学分析其基因结构及蛋白理化性质,最大似然树法构建系统进化树。[结果]2个基因cDNA序列长度分别为1 812bp和1 476bp,各编码504和491个氨基酸残基。其DNA序列分别为2 774bp和2 364bp,均包含3个外显子和2个内含子,第1个外显子和2个内含子序列长度存在明显差异。蛋白分子量分别为58.002kDa和56.401kDa,等电点分别为9.18和9.09。2个基因编码氨基酸与苦荞肉桂酸-4-羟基化酶同源性分别为99%和86%,故暂且命名为FtC4H1和FtC4H2。FtC4H1和FtC4H2与其他物种直系同源蛋白聚为两类,FtC4H1和FtC4H2与莴苣和丹参同源蛋白亲缘关系较近,氨基酸序列同源性分别为88%和84%。[结论]本研究通过对苦荞2个C4H基因的核酸、氨基酸序列、蛋白结构及系统进化树进行分析,为后续苯丙烷代谢途径及荞麦基因挖掘利用提供理论基础。 展开更多
关键词 苦荞 肉桂酸-4-羟基化酶 电子克隆 生物信息学分析
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固体超强酸SO_4^(2-)/TiO_2催化合成肉桂酸乙酯的研究 被引量:12
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作者 龙德清 宋秀坤 《化学世界》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期250-251,256,共3页
合成了固体超强酸 SO2 -4/Ti O2 ,并在其催化下 ,由肉桂酸和无水乙醇发生酯化反应 ,合成肉桂酸乙酯。考察了催化剂用量、酸醇比、反应时间及催化剂重复使用次数对酯化率的影响 ,结果表明 :当 0 .0 2 mol肉桂酸、0 .1 0 mol无水乙醇和 1 ... 合成了固体超强酸 SO2 -4/Ti O2 ,并在其催化下 ,由肉桂酸和无水乙醇发生酯化反应 ,合成肉桂酸乙酯。考察了催化剂用量、酸醇比、反应时间及催化剂重复使用次数对酯化率的影响 ,结果表明 :当 0 .0 2 mol肉桂酸、0 .1 0 mol无水乙醇和 1 .2 0 g催化剂一起加热回流 4h,产品收率可达89.3%。 展开更多
关键词 固体超强酸SO4^2-/TIO2 催化剂 肉桂酸乙酯 合成
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枫香C4H基因的克隆及生物信息学分析 被引量:3
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作者 刘雄盛 尹国平 +3 位作者 肖玉菲 王仁杰 黄荣林 王勇 《热带农业科学》 2022年第6期45-52,共8页
肉桂酸-4-羟基化酶(cinnamate4-hydroxylase,C4H)是花色素苷合成过程第二步中的重要酶。以变色期枫香叶片为试验材料,根据前期研究获得的枫香叶片RNA-Seq数据库中筛选的C4H基因序列设计一对引物,利用RT-PCR技术克隆C4H核苷酸序列,命名为... 肉桂酸-4-羟基化酶(cinnamate4-hydroxylase,C4H)是花色素苷合成过程第二步中的重要酶。以变色期枫香叶片为试验材料,根据前期研究获得的枫香叶片RNA-Seq数据库中筛选的C4H基因序列设计一对引物,利用RT-PCR技术克隆C4H核苷酸序列,命名为LfC4Hb;将基因上传至GenBank数据库获得枫香C4H基因的登录号(OL871170),并对其进行生物信息学分析。结果显示:枫香LfC4Hb基因长度为1 551 bp,包含一个1 518 bp的完整开放阅读框,编码505个氨基酸;保守结构域分析显示,LfC4Hb基因编码的蛋白包含一个p450家族蛋白的结构域,分子量为58.00 kDa,理论等电点为9.13,为亲水性的不稳定蛋白质,定位在内质网,存在多个磷酸化位点,无信号肽,不含有跨膜结构域,蛋白的二级结构主要为α-螺旋和无规则卷曲,LfC4Hb基因在氨基酸水平与莲同源性最高(94.5%);进化分析结果表明,LfC4Hb与青脆枝亲缘关系相对较近。本研究成功克隆了枫香C4H基因,并分析了LfC4Hb的蛋白质结构功能,对下一步利用基因工程技术进行枫香叶色调控及新品种培育具有重要意义。 展开更多
关键词 枫香 肉桂酸-4-羟基化酶 基因克隆 生物信息学分析
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4-羟基-3-甲氧基肉桂酸衍生物除草活性研究 被引量:1
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作者 张明月 刘策 +2 位作者 杨鹏 张利辉 董金皋 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期76-80,共5页
为了寻找新的除草活性化合物,利用茎叶处理、叶绿体光密度测定及相对电导率测定等方法对天然产物4-羟基-3-甲氧基肉桂酸及其3个衍生物进行了除草活性研究。结果表明:4-羟基-3-甲氧基肉桂酸、4-羟基-3-甲氧基肉桂酸酰肼、4-乙酰氧基-3-... 为了寻找新的除草活性化合物,利用茎叶处理、叶绿体光密度测定及相对电导率测定等方法对天然产物4-羟基-3-甲氧基肉桂酸及其3个衍生物进行了除草活性研究。结果表明:4-羟基-3-甲氧基肉桂酸、4-羟基-3-甲氧基肉桂酸酰肼、4-乙酰氧基-3-甲氧基肉桂酸和4-羟基-3-甲氧基肉桂酸乙酯在光照条件下对马唐的抑制中浓度(IC50)分别为4.31,1.97,4.26和0.67mg/mL;黑暗条件下分别为2.65,0.83,2.54和0.36mg/mL;4-乙酰氧基-3-甲氧基肉桂酸对马唐叶绿体光密度的影响呈上升趋势;4-羟基-3-甲氧基肉桂酸酰肼、4-乙酰氧基-3-甲氧基肉桂酸和4-羟基-3-甲氧基肉桂酸乙酯处理后,马唐的相对电导率分别增加了19.24%,11.96%和18.33%。可见这3个衍生物的除草活性均高于母体化合物。 展开更多
关键词 4-羟基-3-甲氧基肉桂酸衍生物 作用机制 天然除草剂
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3种肉桂酸(4-X-(Z)-2烯-丁基)酯(X=OH,Cl,I))的合成、表征及理论研究 被引量:1
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作者 汪必琴 梁晓琴 《四川师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 2001年第5期485-487,共3页
报导了 3种肉桂酸 ( 4 X (Z) 2 烯 丁基 )酯 (X =OH ,Cl,I) )的制备 ,测定了标题化合物的红外和核磁共振谱 ,并用HF/ 4 3 1g方法优化了 3种化合物构型 ,在此基础上计算了其红外光谱 ,再用GIAO从头计算方法计算了 3种化合物的NMR谱 ... 报导了 3种肉桂酸 ( 4 X (Z) 2 烯 丁基 )酯 (X =OH ,Cl,I) )的制备 ,测定了标题化合物的红外和核磁共振谱 ,并用HF/ 4 3 1g方法优化了 3种化合物构型 ,在此基础上计算了其红外光谱 ,再用GIAO从头计算方法计算了 3种化合物的NMR谱 ,其结果与实验值符合较好 .显然 ,IR、NMR的量子化学计算可为确定化合物的结构提供一种新的工具 . 展开更多
关键词 肉桂酸(4-X-(Z)-2-烯-丁基)酯 IR NMR GIAO 合成 结构表征 红外光谱 核磁共振谱 羰基 氯碘
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AgNORs在桂皮酸诱导NB_4细胞分化研究中的表达及意义 被引量:2
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作者 张颢 曾宪昌 +1 位作者 韩秋珍 张克俭 《四川肿瘤防治》 2001年第4期200-202,共3页
目的 :探讨桂皮酸对NB4 细胞增殖和诱导分化作用。方法 :通过细胞形态学及银染技术对对照组和桂皮酸诱导组癌细胞核仁组成区嗜银蛋白(AgNORs)的数目及形态进行观察。结果 :1mmol/L和3mmol/L桂皮酸诱导NB4 分化成熟 ,同时发现平均每个细... 目的 :探讨桂皮酸对NB4 细胞增殖和诱导分化作用。方法 :通过细胞形态学及银染技术对对照组和桂皮酸诱导组癌细胞核仁组成区嗜银蛋白(AgNORs)的数目及形态进行观察。结果 :1mmol/L和3mmol/L桂皮酸诱导NB4 分化成熟 ,同时发现平均每个细胞AgNORs颗粒数由13.6±4.07降至5.68±0.80和3.07±0.43(P<0.001) ,结论 :在桂皮酸作用下 ,NB4 细胞向成熟方向发生一定分化 。 展开更多
关键词 桂皮酸 诱导分化 NB4细胞 核仁组成区 肿瘤
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4-羟基肉桂酸衍生物清除羟自由基活性的构效关系 被引量:2
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作者 唐灵芝 黄华永 +1 位作者 张鲁勉 郑锦鸿 《汕头大学医学院学报》 2007年第1期18-20,共3页
目的:研究4-羟基肉桂酸(4-HCA)衍生物清除羟自由基(.OH)活性并初步分析其构效关系。方法:用邻菲罗啉化学发光法测定4-HCA衍生物清除.OH活性。结果:化学结构不同的4-HCA衍生物体外清除.OH的能力有较大差异。结论:4-HCA苯环上3、5位取代... 目的:研究4-羟基肉桂酸(4-HCA)衍生物清除羟自由基(.OH)活性并初步分析其构效关系。方法:用邻菲罗啉化学发光法测定4-HCA衍生物清除.OH活性。结果:化学结构不同的4-HCA衍生物体外清除.OH的能力有较大差异。结论:4-HCA苯环上3、5位取代基的引入可以明显地影响此类化合物抗.OH活性,甲氧基和乙氧基可明显提高活性,溴次之,硝基则降低活性。 展开更多
关键词 4-羟基肉桂酸 羟自由基 构效关系
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[木奈]肉桂酸-4-羟化酶基因及其启动子克隆与表达分析
16
作者 王玉珍 陈桂信 +3 位作者 赵利 吕恃衡 潘东明 姜翠翠 《北方园艺》 CAS 北大核心 2014年第18期122-127,共6页
以不同发育时期的果实为试材,采用两步法逆转录与抑制PCR技术相结合的方法构建均一化全长cDNA文库,筛选出一条编码肉桂酸-4-羟化酶的全长cDNA(命名为PsC4 H);采用APA-Walking技术,分离获得该基因的启动子序列;采用实时荧光定量PCR技术,... 以不同发育时期的果实为试材,采用两步法逆转录与抑制PCR技术相结合的方法构建均一化全长cDNA文库,筛选出一条编码肉桂酸-4-羟化酶的全长cDNA(命名为PsC4 H);采用APA-Walking技术,分离获得该基因的启动子序列;采用实时荧光定量PCR技术,检测该基因在果实不同发育时期的表达动态。结果表明:PsC4 H基因全长为1 772bp,ORF(Open Reading Frame)为1 515bp,编码504个氨基酸,相对分子量为145 719.6,等电点为4.94,经序列同源性分析发现,PsC4 H氨基酸序列与李属果树高度同源;经PlantCare软件预测,PsC4 H基因的启动子除具有TATA/CAAT-box外,还含有G-box、HSE等特异作用元件;实时荧光定量结果显示,PsC4 H在果实整个生长发育过程中呈下调-上调的表达趋势,其中在成熟果中表达量最高。 展开更多
关键词 [木奈]肉桂酸-4-羟化酶 启动子 实时荧光定量PCR
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烟草C4H2基因的克隆与表达特性分析
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作者 刘晨 王祯 +3 位作者 朱先约 王文婷 黄申 翟玉俊 《轻工学报》 北大核心 2022年第1期68-78,共11页
以中烟202无菌幼苗为供试材料克隆出C4H2基因的CDS区,对该基因进行生物信息学分析,构建原核表达载体,在大肠杆菌中对重组质粒进行诱导表达及纯化分析,考查其在不同组织中的表达特性,以及叶片中黄酮含量变化趋势。结果表明:1)NtC4H2蛋白... 以中烟202无菌幼苗为供试材料克隆出C4H2基因的CDS区,对该基因进行生物信息学分析,构建原核表达载体,在大肠杆菌中对重组质粒进行诱导表达及纯化分析,考查其在不同组织中的表达特性,以及叶片中黄酮含量变化趋势。结果表明:1)NtC4H2蛋白属于细胞色素P450超家族成员,有1个跨膜区,为不稳定亲水蛋白,二级结构中α螺旋和无规则卷曲占比较高;2)重组NtC4H2蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于表达细菌中;3)Nt C4H2基因在烟草不同组织的表达水平为下部叶<茎<中部叶<根<上部叶,NtC4H2蛋白活性大小与基因表达量变化趋势相同,表明试验植株在不同生命阶段中的木质化进程会直接影响该基因在各个组织中的表达丰度;4)不同采样时间内上部叶中Nt C4H2基因表达量有明显波动,48 h表达量达峰值,确定了该基因表达模式与叶中黄酮的积累呈正相关。 展开更多
关键词 烟草 C4H2基因 生物信息学 原核表达载体 黄酮
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茶树肉桂酸4-羟基化酶基因的克隆及表达分析 被引量:11
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作者 姚胜波 王文钊 +5 位作者 李明卓 许玉娇 王云生 刘亚军 高丽萍 夏涛 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期35-44,共10页
肉桂酸4-羟基化酶(Cinnamate 4-hydroxylase,C4H)是茶树苯丙烷代谢途径中的关键酶,能够影响木质素和类黄酮等次级代谢物的生物合成。本文采用5′-RACE技术,克隆了茶树肉桂酸4-羟基化酶基因(Cs C4H)的全长序列,其中开放阅读框长1 518 bp... 肉桂酸4-羟基化酶(Cinnamate 4-hydroxylase,C4H)是茶树苯丙烷代谢途径中的关键酶,能够影响木质素和类黄酮等次级代谢物的生物合成。本文采用5′-RACE技术,克隆了茶树肉桂酸4-羟基化酶基因(Cs C4H)的全长序列,其中开放阅读框长1 518 bp,编码505个氨基酸,推测蛋白分子量为58.15 k D,理论等电点为9.29。利用基因组步移技术克隆得到该基因上游1 840 bp的启动子序列。该启动子区域除了分布有TAAT-box和CAAT-box等基本转录元件外,还存在多个诱导型和组织特异型的顺式作用元件。实时荧光定量PCR结果表明该基因在芽、叶、茎、根中都有表达。将该基因重组至表达载体p YES-DEST52上,并在酿酒酵母WAT11中进行真核表达。利用LC-MS方法检测酶反应产物,结果表明目的蛋白能够催化肉桂酸生成p-香豆酸。 展开更多
关键词 茶树 肉桂酸4-羟基化酶 启动子 表达分析 真核表达
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水杨酸和茉莉酸诱导水稻化感关键基因C4H的表达分析 被引量:5
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作者 刘亚洲 张翠 +4 位作者 孙一丁 杨奕 李铷 卢红 郭怡卿 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第9期1967-1972,共6页
【目的】肉桂酸4-羟化酶(C4H)是苯丙烷合成途径次生代谢的重要酶,通过对不同化感潜力水稻中4个C4H基因:OsOlgO82O000、OsO2g467O00、OsO2gO4676O0、OsO5gO32O7O0的表达分析,研究它在不同化感潜力水稻中的区别,有助于揭示水稻化感抗(耐)... 【目的】肉桂酸4-羟化酶(C4H)是苯丙烷合成途径次生代谢的重要酶,通过对不同化感潜力水稻中4个C4H基因:OsOlgO82O000、OsO2g467O00、OsO2gO4676O0、OsO5gO32O7O0的表达分析,研究它在不同化感潜力水稻中的区别,有助于揭示水稻化感抗(耐)性的内在机制。【方法】选用非化感水稻Lemont和化感水稻PI312777,进行水杨酸(SA)和茉莉酸(JA)处理,通过q-PCR对4个C4H基因的表达进行分析比较,同时以水稻叶片水浸提液测定其对稗草根生长的影响。【结果】经过JA和SA处理的非化感水稻Lemont叶片水浸提液对稗草根生长的抑制率分别提高了22%和18%,而化感水稻PI312777的抑制率分别提高了40%和28%。q-PCR结果表明,JA和SA处理后,Os01g0820000和C)s02g0467000在2种水稻中相对表达量相似;而Os02g0467600和Os05g0320700两个基因在PI312777中相对表达量上调程度均高于Lemont,表明这2个基因在PI312777中可能更多的参与到C4H的合成代谢。【结论】JA和SA处理后的2种水稻化感潜力增强,OSO2gO4676O0和OSO5gO32O7O0在PBl2777和Lemont中表达差异较大,因此推测这2个基因是造成2种水稻化感潜力不同的重要因素。 展开更多
关键词 水稻化感 C4H(肉桂酸4-羟化酶) 水浸提液 焚光定量PCR
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甘薯肉桂酸-4-羟化酶基因克隆及序列分析 被引量:3
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作者 张华玲 刘绪 +3 位作者 杨春贤 黄元射 傅玉凡 张启堂 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期501-508,共8页
肉桂酸-4-羟化酶(Cinnamic acid-4-hydroxylase,C4H,EC 1.14.13.11)是苯丙烷途径中第二步反应酶,同时也是花色素苷前体生物合成途径中关键酶。该研究根据植物C4H的同源序列设计引物,通过RTPCR结合RACE的方法,在紫色甘薯中获得了与其相应... 肉桂酸-4-羟化酶(Cinnamic acid-4-hydroxylase,C4H,EC 1.14.13.11)是苯丙烷途径中第二步反应酶,同时也是花色素苷前体生物合成途径中关键酶。该研究根据植物C4H的同源序列设计引物,通过RTPCR结合RACE的方法,在紫色甘薯中获得了与其相应的C4H基因,命名为Ib C4H(Gen Bank登录号GQ373157)。结果表明:(1)序列分析表明Ib C4H长1 668 bp,编码505个氨基酸,该氨基酸序列与其c DNA序列与Ib C4H蛋白与马铃薯C4H蛋白序列最为接近,与苹果、黑莓、大阿米芹、油菜一致性很高,均在70%以上。(2)二级结构预测表明α-螺旋和无规则卷曲是Ib C4H蛋白最大量的结构元件,而延伸链则散布于整个蛋白中。(3)三维结构建模预测,Ib C4H蛋白具备细胞色素P450氧和铁离子结合位点等典型的C4H结构。该研究结果为进一步了解花色素苷生物合成途径中的作用奠定了基础,也为花青素生物合成分子机理和代谢调控提供了靶位点和理论参考。 展开更多
关键词 甘薯 肉桂酸-4-羟化酶 基因克隆 序列分析
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