节律基因Period2对肿瘤细胞生长及放射敏感性的影响

目的探讨Period2(Per2)基因对细胞生长及放射敏感性的影响。方法体外培养C6神经胶质瘤细胞(C6g liom a ce lls),使用脂质体包裹法将Per2表达质粒(pcDNA3.1-Per2)转导入C6细胞内;以免疫组化及流式细胞术检测Per2表达;通过流式细胞术和克隆形成试验检测稳定转染Per2阳性表达的C6细胞在正常情况下和γ射线照射后的凋亡、生长。结果未经γ射线照射的Per2阳性表达的C6细胞较对照组细胞增殖减慢、凋亡率增加,但γ射线照射后的较对照组细胞增殖速度快、凋亡率减少。结论节律基因Per2过表达会增加肿瘤细胞的凋亡,但在射线照射情况下会降低肿瘤细胞对射线的敏感性。

pEGFP—N1-hPer2载体的构建及其在骨肉瘤细胞中的表达

目的构建人的生物钟基因Period2（hPer2）真核表达载体pEGFP-N1-hPer2，观察其在骨肉瘤细胞MG63中的表达。方法应用实时定量荧光反转录聚合酶链反应（FQ—PCR）技术从MG63细胞中扩增hPer2，并将PCR产物经双酶切后定向克隆入pEGFP—N1的多克隆位点，采用脂质体介导转染骨肉瘤细胞MC63，采用FQ-PCR和Westernblot分别检测hPer2的表达。结果重组质粒经PstI、KpnI双酶切和测序与hPer2基因序列一致，利用脂质体介导将pEGFP—N1-hPer2重组质粒成功转染到骨肉瘤细胞MG63中并获得了hPer2基因的过表达。FQ-PCR显示实验组（pEGFP—N1-hPer2组）的mRNA水平（7．84±1．17）明显高于空载体组（pEGFP—N1组，1．42±2．11）和空白对照组（1．21±1．61）；Westemblot显示实验组hPer2蛋白（0．382±1．131）的表达明显高于空载体组（0．178±2．110）和空白对照组（0．166±1．951），差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论成功构建pEGFP—N1-hPer2真核表达载体，并能够在骨肉瘤细胞MG63中过表达。