肺复方通过PI3K/Akt/Nrf2信号通路对A549/DDP细胞耐药性的影响

目的观察肺复方对人肺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞耐药性的作用及对PI3K/Akt/Nrf2信号通路的影响。方法选用A549/DDP细胞设立不含药血清的空白对照组、肺复方组、顺铂组、联合组,流式细胞术检测各组细胞周期分布和细胞中活性氧(ROS)的变化,Western blotting和RT-PCR检测PI3K/Akt/Nrf2信号通路及下游血红素氧合酶1(HO-1)、NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达变化。结果与空白对照组、顺铂组相比,联合组引起细胞G1期阻滞,增加细胞内活性氧的累积,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与空白对照组比,肺复方组和联合组能减少Nrf2核转位,下调p-Akt、HO-1、NQO1、MRP1蛋白表达和mRNA表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论肺复方能够通过调控PI3K/Akt/Nrf2信号通路增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。

声带癌前病变组织中基质金属蛋白酶抑制剂-1、果蝇母亲DDP同源物4表达水平与术后复发和恶变的相关性研究

目的探讨声带癌前病变组织中基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinases 1,TIMP-1)、果蝇母亲DDP同源物4(drosophila mothers against DDP homolog 4,Smad4)表达水平与术后复发和恶变的相关性。方法回顾性分析2018年8月~2021年8月郑州大学第一附属医院收治的162例声带癌前病变患者的临床和病理资料,收集手术切除癌前病变组织(癌前病变组)及病变旁正常黏膜组织(对照组),采用免疫组织化学法检测组织中TIMP-1、Smad4表达情况。分析TIMP-1、Smad4阳性率与临床病理特征的关系,并采用Kaplan-Meier法和Cox回归分析法分析其对术后复发和恶变的影响。结果与对照组正常黏膜组织比较,癌前病变组的TIMP-1阳性率较高,Smad4阳性率较低(P<0.05)。不同病变范围、是否累及前连合、不同程度上皮异常增生患者的TIMP-1、Smad4阳性率存在差异(P<0.05)。术后随访时间24~60个月,中位随访时间36个月,随访期间失访患者6例,随访率96.30%(156/162),随访期间术后复发35例(21.60%),术后恶变16例(9.88%);Kaplan-Meier生存分析显示,TIMP-1阳性患者术后复发率和恶变率高于TIMP-1阴性患者(P<0.05);Smad4阴性患者术后复发率和恶变率高于Smad4阳性患者(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,喉咽反流、病变范围>1/2、中/重度异型增生、TIMP-1阳性、Smad4阴性是复发的独立危险因素(P<0.05),年龄>60岁、累及前连合、TIMP-1阳性、Smad4阴性是恶变的独立危险因素(P<0.05)。结论声带癌前病变组织中TIMP-1高表达、Smad4低表达,且TIMP-1阳性、Smad4阴性表达者术后复发和恶变风险较高。

蒽醌修饰物KA-4s抑制SKOV3/DDP细胞增殖并诱导铁死亡

目的:探讨蒽醌修饰物KA-4s在体外对人顺铂耐药卵巢癌SKOV3/DDP细胞增殖的影响和诱导细胞铁死亡的机制。方法:将SKOV3/DDP细胞分为对照组和不同浓度(2μmol/L、5μmol/L和7μmol/L)的蒽醌修饰物KA-4s组。采用MTT法检测单药KA-4s和顺铂(DDP)对SKOV3/DDP细胞活力的影响,划痕实验检测细胞的迁移能力,线粒体绿色荧光探针(Mito-Tracker Green)检测线粒体形态改变,透射电镜观察线粒体超微结构。以铁死亡诱导剂RSL3为阳性对照组,用DCFA-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,比色法检测细胞内总铁蛋白含量,western blotting检测铁死亡相关蛋白GPX4、FSP1的表达情况。结果:KA-4s和顺铂作用48 h后,卵巢癌SKOV3/DDP细胞增殖均明显受到抑制,相比顺铂,KA-4s的抑制作用更强(P<0.001),并能抑制细胞迁移。经KA-4s处理后线粒体受损,线粒体结构改变,膜密度增大,嵴减少甚至消失。与空白对照组相比,阳性RSL3组和KA-4s组SKOV3/DDP细胞内ROS水平升高(均P<0.001),5μmol/L KA-4s组总铁离子含量显著升高(P<0.001),卵巢癌SKOV3/DDP细胞中GPX4、FSP1蛋白的表达均降低(P<0.01),但正常卵巢IOSE80细胞中GPX4表达均无改变。结论:KA-4s能抑制SKOV3/DDP细胞增殖、迁移并诱导细胞铁死亡。

抗菌肽Dermaseptin-PP协同化疗药物抗肿瘤并逆转A549/DDP细胞顺铂耐药性

目的:探究抗菌肽Dermaseptin-PP对多种化疗药物体外抗肿瘤活性的协同增效作用,以及其对人非小细胞肺癌顺铂(DDP)耐药细胞株A549/DDP耐药性的逆转作用,并进一步探究其作用机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)染色法检测不同质量浓度的Dermaseptin-PP对人非小细胞肺癌A549、H157细胞或小鼠乳腺癌4T1细胞的增殖抑制作用,考察低毒质量浓度Dermaseptin-PP与多烯紫杉醇(DTX)、阿霉素(DOX)或DDP联用对A549、H157或4T1细胞的协同抗肿瘤作用;采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测低毒质量浓度Dermaseptin-PP对A549/DDP细胞DDP耐药性的逆转作用。采用流式细胞术检测Dermaseptin-PP对DDP诱导A549细胞凋亡的影响,采用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验及碘化丙啶(PI)摄取实验考察Dermaseptin-PP对A549和A549/DDP细胞膜完整性的影响,最后通过扫描电镜观察Dermaseptin-PP处理后A549和A549/DDP细胞膜形态的变化。结果:Dermaseptin-PP可在体外抑制A549、H157和4T1细胞增殖且呈剂量依赖性;与低毒质量浓度Dermaseptin-PP(0.002、0.020、0.200μg·mL^(-1))联用后,DTX、DOX及DDP对A549细胞的增殖抑制率均有不同程度的提高,半数抑制浓度(IC50)均有所降低,药物联合指数(CI)基本均小于0.9,其中Dermaseptin-PP与DDP的协同作用最强(CI<0.4)。此外,Dermaseptin-PP与DDP联用对H157和4T1细胞的CI也均小于0.9,表现为协同作用。低毒质量浓度Dermaseptin-PP(0.2、2.0、4.0μg·mL^(-1))均能显著逆转A549/DDP细胞的DDP耐药性,逆转倍数(RF)分别为2.83、5.09、9.73。相比于单用DDP,与0.2μg·mL^(-1) Dermaseptin-PP联用可显著提高A549细胞的凋亡率(P<0.05);不同质量浓度的Dermaseptin-PP均可显著增加A549、A549/DDP细胞的LDH释放率和PI摄取率,且呈浓度依赖性;扫描电镜观察发现,经2×IC50的Dermaseptin-PP处理后,A549细胞的细胞膜明显受损、质膜解体、细胞形态发生改变,A549/DDP细胞的细胞膜也出现明显孔洞。结论:Dermaseptin-PP对多种化疗药物体外抗肿瘤活性均具有协同增效作用,其中与DDP的协同作用最强,并且能够逆转A549/DDP细胞的DDP耐药性,其增效及逆转耐药的机制可能与破坏肿瘤细胞膜,进而提高化疗药物入胞药量有关。

DDP功能化UiO-66纳米颗粒的制备及其作为润滑油纳米添加剂的摩擦学性能研究

金属有机框架(Metal-organic frameworks,MOFs)材料具有良好的机械性能、可设计的组成结构以及可调的表面物化性质,在润滑油纳米添加剂方面表现出潜在的应用前景,然而,MOFs纳米颗粒与基础油之间差的相容性限制了其进一步的发展.本文中选择具有良好化学、机械和热稳定性的UiO-66纳米颗粒作为润滑油添加剂,并通过将3种不同分子链长和结构的二烷基二硫代磷酸(DDP)分子在UiO-66上进行组装.借助透射电子显微镜、X-射线衍射仪、傅里叶变换红外光谱仪、激光动态光散射和高频摩擦磨损试验机对DDP修饰前后UiO-66的微观形貌、物相组成、化学结构、粒径分布和摩擦学性能进行了研究,发现DDP分子可以通过配位相互作用组装在UiO-66纳米颗粒表面而不会破坏初始MOFs的形状尺寸和结晶性,DDP的修饰有效改善了UiO-66纳米颗粒在溶剂以及基础油中的分散稳定性,进一步将其作为润滑油纳米添加剂,可表现出良好的减摩抗磨性能,并能有效提高基础油的抗载能力以及综合摩擦学性能.最后,通过X-射线光电子能谱仪对其摩擦机理进行了研究,结果表明:DDP分子修饰的UiO-66纳米颗粒通过DDP在摩擦副表面形成了摩擦反应膜以及Zr-MOFs的“滚珠轴承”效应,有效减少了摩擦副表面的摩擦磨损.

川芎嗪对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP的逆转作用研究

目的建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP,探讨川芎嗪对COC1/DDP顺铂耐药性的逆转作用及其机制。方法采用逐步递增DDP浓度、体外间歇诱导法诱导建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP;CCK-8(cell counting kit-8)检测川芎嗪对COC1/DDP细胞顺铂耐药性的逆转作用;GSH和GSSG试剂盒检测细胞内GSH的水平,高效液相色谱测定细胞内顺铂的含量。结果历时5个月建立了在1.0μg/mL DDP作用下生长良好的耐药细胞株COC1/DDP,耐药指数为9.44,对卡铂、长春新碱和阿霉素有不同程度的交叉耐药性;川芎嗪0.25 mg/mL对COC1/DDP的顺铂耐药性有逆转作用,逆转倍数达到3.76倍;与COC1比较,COC1/DDP细胞内GSH水平增高,顺铂含量下降,但经川芎嗪0.25 mg/mL干预后,COC1/DDP胞内的GSH水平降低,顺铂的含量增加(P<0.01)。结论川芎嗪对COC1/DDP的顺铂耐药性有逆转作用,其机制可能与干预COC1/DDP细胞内GSH/GST-π解毒系统,增加细胞内顺铂的含量有关。

榄香烯乳诱导线粒体凋亡途径逆转肺癌A549/DDP细胞株耐药

目的:探讨榄香烯乳(elemene,ELE)逆转人肺腺癌耐顺铂(cisplatin,DDP)细胞A549/DDP的耐药性及作用机制。方法:采用MTT法检测榄香烯乳单用的细胞毒作用及与DDP合用时耐药逆转作用。荧光探针JC-1结合激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位的变化。DCFH-DA荧光探针结合流式细胞仪检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。用谷胱甘肽试剂盒结合分光光度法检测计算GSH/(GSSG+GSH)比值。蛋白质印迹法检测胞质中Cyto C、Pro-caspase-3、Caspase-3和Bcl-2家族蛋白表达情况。结果:不同浓度榄香烯乳抑制A549/DDP细胞株生长,呈时间-剂量依赖性效应,联合顺铂能提高A549/DDP细胞株对顺铂的敏感性而逆转耐药。不同浓度榄香烯乳联合顺铂使A549/DDP细胞株线粒体膜电位下降,ROS浓度增加,GSH/(GSSG+GSH)比值降低,上调胞质中Cyto C、Caspase-3、Bad蛋白表达,下调Pro-caspase-3、Bcl-2蛋白表达。结论:榄香烯乳逆转A549/DDP细胞株耐药性可能与其损伤线粒体膜,活化胞内氧化还原体系,诱导线粒体凋亡路径有关。

芦荟大黄素脂质体逆转人肺腺癌细胞A549／DDP对顺铂多药耐药的作用研究

目的:研究芦荟大黄素脂质体(aloe emodin liposomes,AE-L)在体外对耐药人肺腺癌细胞系A549/ DDP对顺铂(DDP)的耐药性。方法:采用MTT检测方法得出AE-L的无毒细胞浓度、低毒细胞浓度以及空脂质体(empty liposomes,E-L)的无毒浓度;再以E-L无毒浓度做对照组,分别测出AE-L无毒细胞浓度组、低毒细胞浓度组耐药细胞逆转倍数;电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定各组细胞内顺铂浓度。结果:AE-L无细胞毒浓度组(2.0 mg·L^(-1))使A549/DDP细胞对DDP的IC_(50)由16.81 mg·L^(-1)降至5.86 mg·L^(-1);低细胞毒浓度(7.0 mg·L^(-1))组的IC_(50)降至4.34 mg·L^(-1);2组均明显提高DDP在A549/DDP细胞内的浓度。结论:AE-L能部分逆转A549/DDP细胞的多药耐药(MDR),其机制与增加细胞内药物浓度有关。

重组人血管内皮抑素联合5-Fu/DDP序贯腹腔注药治疗胃癌恶性腹水的临床观察

目的探讨重组人血管内皮抑素(恩度)联合化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)/顺铂(DDP)序贯腹腔注药治疗胃癌恶性腹水的疗效和不良反应。方法将58例胃癌恶性腹水患者随机分为治疗组(恩度+5-Fu+DDP)、对照组(5-Fu+DDP)两组,判断两组治疗胃癌恶性腹水的疗效、起效时间、生活质量及毒副反应。结果两组治疗胃癌恶性腹水的有效率:治疗组75.0%、对照组51.7%;起效时间:治疗组11.5 d、对照组17.0 d;对生活质量的影响:治疗组生活质量改善明显高于对照组;不良反应:治疗组不良反应与对照组相近。结论恩度联合5-Fu/DDP序贯腹腔注药治疗胃癌恶性腹水具有疗效高、起效时间快,可缩短疗程,提高生活质量,是治疗胃癌恶性腹水的有效方法。

人参单体Rh_2诱导人肺腺癌A549/DDP细胞凋亡的体外研究

背景与目的肺癌已成为人类癌症主要死亡原因之一。从植物中开发抗肿瘤药物是国内外抗肿瘤新药开发的一个热点。本研究的目的是观察人参单体Rh2诱导人肺腺癌A549/DDP细胞系凋亡的作用,并探讨其可能的分子机制。方法体外培养的人肺腺癌A549/DDP细胞经不同浓度梯度的人参单体Rh2干预,分别应用MTT实验观察其对细胞增殖的影响,用流式细胞术检测细胞周期、凋亡指数及相关基因表达的改变,以及用双抗体夹心ELISA法测定细胞上清液sApo-1/Fas浓度变化。结果①人参单体Rh2可抑制A549/DDP细胞的生长,并呈剂量、时间依赖作用。②人参单体Rh2处理A549/DDP细胞24h,实验组凋亡指数显著高于对照组(P<0.001),G0/G1期细胞比例显著高于对照组(P<0.01),S期细胞比例显著低于对照组(P<0.01),G2/M期细胞比例与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。③实验组p53、Fas阳性表达率显著高于对照组(P<0.01,P<0.001),Bcl-2阳性表达率显著低于对照组(P<0.001)。④实验组A549/DDP细胞培养上清液于不同时间sApo-1/Fas含量均显著低于对照组(P<0.05)。结论人参单体Rh2具有诱导人肺腺癌A549/DDP细胞凋亡的作用,其分子机制可能是上调p53和Fas及下调Bcl-2的表达、通过Fas/FasL系统途径诱导细胞凋亡。

消岩汤药物血清对A549/DDP多药耐药逆转作用的研究

[目的]探讨消岩汤药物血清对接种S180昆明小鼠肿瘤的抑制作用,及对耐顺铂人肺腺癌细胞系A549/耐顺铂(DDP)的耐药逆转作用。[方法]通过建立小鼠肿瘤模型,观察消岩汤对小鼠S180移植肿瘤生长的影响;以人肺腺癌敏感细胞A549和耐药细胞A549/DDP为研究对象,采用细胞毒实验(MTT)方法,探讨消岩汤对肺癌耐药细胞的多药耐药逆转作用。[结果]消岩汤高、低剂量组的抑瘤率分别是48.36%和27.87%;消岩汤荷瘤动物含药血清高、低剂量组分别与DDP合用时,对耐药细胞A549/DDP的杀伤作用分别是DDP组的1.78倍和1.57倍。[结论]消岩汤可改善小鼠生活质量,拮抗恶病质,并能够抑制肿瘤生长;消岩汤含药血清对A549及A549/DDP均有生长抑制作用,且能增强DDP对肺癌敏感细胞和耐药细胞的杀伤作用,具有耐药逆转作用。

吴茱萸碱逆转人肺癌细胞株A549/DDP耐药机理的实验研究

目的观察吴茱萸碱逆转人肺腺癌耐药株A549/DDP细胞耐药性的效果并探讨其与阻断NF-κB信号传导通路的相关性。方法采用MTT法检测单用吴茱萸碱、顺铂(DDP)以及两药联用在不同时间对A549/DDP细胞的增殖影响,计算IC50及耐药逆转倍数。流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况。RT-PCR检测各组MDR1、NF-κB、Bcl-2、MMP-2和VEGF的mRNA表达。Westernblot法检测各组细胞的pIκB-α、pIKKα蛋白表达水平。结果吴茱萸碱0.125mg/L、0.25mg/L针对A549/DDP细胞对DDP的耐药逆转倍数分别为3.668和11.48。RT-PCR显示在吴茱萸碱作用下检测基因的mRNA表达随着吴茱萸碱浓度的增加和时间的延长其表达逐渐下降。当吴茱萸碱与DDP联用时,可明显提高A549/DDP细胞对化疗药的敏感性,凋亡细胞显著增加(P<0.05)。Westernblot法结果提示A549/DDP细胞中pIκB-α的表达水平随着吴茱萸碱作用时间的延长逐渐下降,pIKKα表达则无显著变化。结论吴茱萸碱可以通过抑制IκB-α的磷酸化阻断NF-κB信号通路,促进细胞凋亡,抑制细胞增殖,增加耐药细胞对DDP的敏感性。

黄芪多糖(APS)及联合顺铂(DDP)抑制小鼠Lewis肺癌复发瘤生长的机制

目的观察黄芪多糖(APS)及联合顺铂(DDP)对小鼠Lewis肺癌术后复发瘤病理形态及转移相关蛋白CD44、CD62P和骨桥蛋白(OPN)表达的影响。方法选取C57BL/6J小鼠10只作为供瘤组,另外80只随机分为模型组、(50、100、200)μg/mL APS处理组、6 mg/kg DDP处理组、3 mg/kg DDP联合(50、100、200)μg/m L APS处理组,每组10只。取供瘤组小鼠瘤组织制备Lewis瘤单细胞悬液接种于每只小鼠左侧后肢爪垫内侧皮下10 d后,切除爪垫瘤组织,建立肺癌术后复发转移模型;造模次日起给药,第16天脱颈处死。采用HE染色法观察术后复发瘤组织病理形态,免疫组织化学染色法检测复发瘤中CD44、CD62P和OPN的表达。结果与模型组相比,各处理组复发瘤组织坏死加重,尤以DDP联合200μg/mL APS处理组更明显,且各处理组CD44、CD62P和OPN蛋白的表达均有降低,以DDP以及DDP联合(100、200)μg/m L APS处理组最为显著。结论DDP联合APS能抑制Lewis肺癌细胞生长并降低瘤组织CD44、CD62P和OPN蛋白表达。

洛铂诱导顺铂耐药卵巢癌SKOV3/DDP细胞的凋亡

目的探讨洛铂体外诱导人卵巢癌顺铂耐药SKOV3/DDP细胞凋亡及其机制。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定不同浓度和时间洛铂对SKOV3/DDP细胞的生长抑制作用,并与其亲本细胞SKOV3(敏感株)相比较;进一步通过光镜及透射电镜观察SKOV3/DDP细胞的形态学改变;并采用流式细胞仪检测细胞周期变化。结果洛铂作用SKOV3/DDP细胞的增殖呈时间剂量依赖模式受到抑制,与SKOV3细胞相比,差异无统计学意义(P>0.05);一定浓度的SKOV3/DDP作用一定时间,可诱导SKOV3/DDP细胞发生凋亡;光镜和透射电镜下可见典型的凋亡细胞形态学改变;流式细胞技术分析发现洛铂作用首先引起细胞周期分布的改变,随用药时间的延长,凋亡率逐渐升高。结论洛铂通过诱导凋亡而抑制体外培养的SKOV3/DDP细胞生长,其机制可能与细胞G0/G1期阻滞有关。

在顺铂耐药的A549/DDP人肺腺癌细胞中乙醛脱氢酶表达增加

目的观察乙醛脱氢酶(ALDH)在A549/DDP人肺腺癌耐顺铂细胞中的表达及在顺铂耐药性中的功能。方法流式细胞术检测肿瘤干细胞标志分子CD44、CD90、CD73、CD105、上皮细胞黏附分子(Ep CAM)、ATP结合盒式超家族G成员2(ABCG2)以及ALDH在A549细胞和A549/DDP细胞表达的阳性率;MTT法检测100μmol/L二乙氨基苯甲醛(DEAB)处理前后A549/DDP细胞的增殖能力和对顺铂的敏感性;实时定量PCR检测ALDH各亚型在A549细胞与A549/DDP细胞中的mRNA水平的表达;Western blot法检测实时定量PCR有明显差异结果的ALDH的亚型ALDH1A3和ALDH1B1在A549细胞与A549/DDP细胞中的蛋白水平的表达。结果与A549细胞相比,ABCG2和ALDH在A549/DDP细胞的阳性率增加,ALDH阳性率达97.7%,在A549细胞中仅仅为4.3%;CD44、CD90、CD73、CD105在二者间阳性率无明显差异,而Ep CAM在A549/DDP细胞阳性率降低;经100μmol/L DEAB处理后,A549/DDP细胞对顺铂的耐药性显著低于未处理前;与A549细胞相比,ALDH1A3和ALDH1B1的mRNA在A549/DDP细胞中表达水平增高;ALDH1B1蛋白表达升高,ALDH1A3表达降低。结论 ALDH可作为顺铂耐药人肺腺癌细胞的标志分子之一,其中ALDH1B1在顺铂耐药性中可能发挥一定作用,为临床上治疗肺腺癌耐药患者提供新的治疗靶点和策略。

榄香烯乳剂对肺癌A549/DDP细胞株耐药逆转作用及其机制

目的:探讨榄香烯乳(elemene,ELE)逆转人肺腺癌A549/DDP细胞株耐药性及其机制。方法:采用MTT法检测榄香烯乳单用的细胞毒作用及与顺铂(cisplatin,DDP)合用时耐药逆转作用;采用流式细胞术检测榄香烯乳对A549/DDP细胞内罗丹明-123(rhodamine-123,Rh123)蓄积的影响;采用Western blot检测榄香烯乳对耐药细胞A549/DDP细胞膜上P-gp蛋白表达的影响。结果:不同浓度榄香烯对A549/DDP细胞均有一定的抑制作用,呈时间-剂量依赖性效应。单用DDP的IC50为15.46μg/ml,合用20μg/ml榄香烯24h,IC50为4.15μg/ml,逆转耐药倍数为3.63。同时,榄香烯增加A549/DDP细胞内Rh123的蓄集,降低细胞膜上Pgp的表达,且呈剂量依赖性,表明榄香烯能减少A5 4 9/DDP细胞对药物的外排和抑制P-gp蛋白的表达。结论:榄香烯在体外逆转肿瘤细胞耐药性可能与其抑制P-gp的功能和表达有关。

大蒜素对人卵巢癌SKOV3/DDP细胞增殖与凋亡的影响及机制

探讨大蒜素(DT)对人上皮性卵巢癌SKOV-3/DDP细胞的增殖抑制及诱导其细胞凋亡的分子机制。用人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV-3/DDP细胞随机分为4组:①正常对照组;②DT组:于培养基中加入DT(终浓度分别为5、10、20、40μg·mL-1)分别作用细胞24、48和72h;③顺铂(DDP)组(5μg·mL-1);④DT+DDP组(20μg·mL-1 DT和5μg·mL-1 DDP)。MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR和Western blot分别检测基因bax、bcl-2的mRNA和蛋白表达。与正常对照组比较,DT组SKOV-3/DDP细胞增殖抑制率与凋亡率均有显著的增加(P<0.05),且作用呈剂量和时间依赖性,Bax mRNA和蛋白表达上调,Bcl-2mRNA和蛋白表达下调(P<0.05);与DT或DDP组比较,DDP+DT组的细胞生长抑制率及凋亡率均有显著增加(P<0.05),且Bax mRNA及蛋白表达上调,Bcl-2mRNA和蛋白表达下调的程度大于单用组(P<0.05)。大蒜素对SKOV-3/DDP细胞有显著的抑制增殖和促凋亡的作用,增加SKOV-3/DDP细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与大蒜素调控Bax/Bcl-2蛋白表达有关。

姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖活性的影响

目的:探讨姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖活性的影响.方法:采用细胞计数法绘制亲代A549和A549/DDP细胞生长曲线,MTT法测定A549/DDP对顺铂的耐药指数以及姜黄素对A549/DDP细胞抑制率.将不同浓度姜黄素作用于A549/DDP细胞24h后,Hoechst33258染色荧光显微镜下观察细胞核形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率.以20μmol/L的姜黄素作用细胞24h后,流式细胞仪分析细胞周期.结果:亲代A549细胞和A549/DDP细胞的生长曲线相似,倍增时间分别为(33.24±0.24)h和(32.88±0.11)h(P>0.05);顺铂处理A549和A549/DDP细胞72h后,半数抑制浓度(IC50)分别为13.57μmol/L和146.79μmol/L,A549/DDP细胞对顺铂的耐药指数为10.82.姜黄素对A549/DDP细胞增殖有抑制作用,并且呈时间浓度依赖性(P<0.05).姜黄素作用后,Hoechst染色显示A549/DDP细胞核缩小变形,致密浓染荧光成团块分布.流式细胞仪分析结果示细胞凋亡率呈明显剂量依赖关系(P<0.05).20μmol/L的姜黄素作用细胞24h,引发G2期阻滞.结论:姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖具有抑制作用,并呈时间、浓度依赖.其作用可能是通过阻滞细胞周期进程和诱导细胞凋亡来实现的.

姜黄素逆转卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP耐药性及机制的研究

目的：探讨姜黄素对耐药卵巢癌细胞增殖、凋亡及对顺铂敏感性的影响并探讨其机制。方法：采用MTT法检测顺铂、姜黄素、顺铂与姜黄素合用对COC1/DDP细胞的生长抑制作用;用流式细胞仪检测2.5μg/ml顺铂、20μmol/L姜黄素、2.5μg/ml顺铂与20μmol/L姜黄素合用作用于COC1/DDP细胞48h后的细胞凋亡率;RT-PCR法检测上述各组细胞凋亡相关基因Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达。结果：姜黄素浓度在（15-35）μmol/L以内时对COC1/DDP有明显的增殖抑制作用,且呈一定的剂量-效应关系。顺铂的浓度在（1.25-5）μg/ml时加入姜黄素20μmol/L后耐药细胞生存率下降明显（P〈0.05）,尤以顺铂2.5μg/ml和姜黄素20μmol/L联合作用时,耐药细胞生存率下降最明显;COC1/DDP中顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比,凋亡率明显增加（P〈0.05）;顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比Bcl-2、Sur-vivin mRNA的表达明显降低（P〈0.05）,Caspase-3 mRNA的表达明显增高（P〈0.05）。结论：姜黄素能够显著抑制COC1/DDP增殖,并能增强该细胞系对顺铂的敏感性,其机制可能与降低Bcl-2、Survivin基因的表达,增加Caspase-3基因的表达有关。

雷公藤内酯醇对耐顺铂人卵巢癌细胞株(COC1/DDP)体外活性影响机制的初步探讨

目的:通过研究雷公藤内酯醇(TP)对COC1/DDP体外活性的影响,初步探讨雷公藤内酯醇促进COC1/DDP细胞凋亡的机制,为TP成为治疗晚期或耐顺铂卵巢癌药物提供实验依据。方法:采用MTT法检测顺铂(DDP)、TP及两者联用对COC1/DDP的生长抑制作用;用透射电镜观察TP作用24h后细胞超微结构的变化;采用流式细胞术分析不同浓度TP对COC1/DDP细胞周期和细胞凋亡的影响;用DNA电泳分析用药后细胞基因组DNA断裂状况;以免疫组化分析TP对Caspase-7蛋白表达的影响。结果:DDP在24h、48h和72h三个时间段对COC1/DDP细胞的半数抑制量(50%concentration of inhibi-tion,IC50)分别为5.567μg/ml、2.866μg/ml和1.161μg/ml,其对COC1/DDP细胞增殖表现出浓度-时间依赖性的抑制作用(P<0.05);TP可抑制COC1/DDP细胞增殖,其抑制率呈浓度-时间依赖性(P<0.05);TP作用细胞24h后,电镜下可见凋亡小体形成;流式细胞术分析表明,各浓度TP组G1期细胞明显升高,细胞凋亡率呈浓度依赖性(P<0.05);DNA电泳分析可见细胞凋亡特有的DNA断裂形成的"梯形"条带;免疫组化表明Caspase-7参与了TP诱导COC1/DDP细胞凋亡过程。结论:TP对COC1/DDP具有明显的杀伤和促凋亡作用,凋亡机制与Caspase-7蛋白表达上调有关。