中华鳖弗氏柠檬酸杆菌败血症病原分离鉴定与药敏试验

利用常规分离方法对病鳖肝、肾、肠组织进行细菌性病原分离,并对所获得的纯培养物进行VITEK-32鉴定、药敏及人工感染试验。试验结果表明,弗氏柠檬酸杆菌是该败血症的一种主要病原菌,它对左旋氧氟沙星、庆大霉素等多种药物敏感。

克氏原螯虾病原弗氏柠檬酸杆菌的分离鉴定及其药敏与黏附特性

为了明确安徽省当涂县淡水养殖克氏原螯虾暴发性疾病的病原,取濒临死亡的病虾分离病原。从肝胰腺中分离到一株优势细菌（命名为XLX1分离株）,人工感染试验证实其具有较强的致病性;采用形态学检查、生理生化特性测定和细菌16S r RNA基因序列分析,确定XLX1分离株为弗氏柠檬酸杆菌。进一步对XLX1分离株进行药物敏感性、携带黏附素基因情况和细胞黏附性进行检测。结果显示：该分离株对头孢噻肟、庆大霉素、阿米卡星、硫酸新霉素、恩诺沙星、诺氟沙星、替考拉宁和米诺环素敏感或中敏,对其他7种测试药物呈现耐药。该分离株携带黏附素基因cfa和ure基因簇;序列分析发现ure ABC结构基因和ure D关键辅助基因高度保守,在虾源分离株与人源参考株间前者的核苷酸和氨基酸序列同源性分别在93.2%～98.3%和91.7%～97.4%,后者的核苷酸和氨基酸序列同源性分别在90.8%～98.3%和94.7%～98.7%;与人源参考株相比,虾源分离株Ure ABC结构蛋白中第294、600和608位氨基酸,以及Ure D蛋白中的第62和122位氨基酸发生了有意突变。XLX1分离株可以聚集方式黏附于EPC细胞周围,平均黏附菌数为29.8±5.3,但随黏附时间延长,EPC细胞出现病变。上述研究结果可为防控弗氏柠檬酸杆菌引起的水产动物疾病提供理论依据。

41种中草药对3种鲟源病原菌的体外抑菌效果

采用平板打孔法在观察了弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)、鲁氏耶尔森氏菌(Yersinia ruckeri)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)等3种鲟源病原菌对41种中草药敏感性的基础上,进一步采用二倍稀释法测定了具有良好抑菌活性的中草药对3种病原菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度。实验结果表明,3种病原菌对乌梅、石榴皮、地榆、杞子等均高度敏感,对杜仲、柴胡、丹参、熟地黄等均中度敏感,对麦冬、当归、胖大海、玉竹均不敏感。此外,乌梅、石榴皮、地榆、杞子对3种病原菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别为7.81 mg/mL和15.625 mg/mL、15.625 mg/mL和31.25 mg/mL、15.625 mg/mL和31.25 mg/mL以及15.625 mg/mL和31.25 mg/mL,而杜仲、柴胡、丹参、熟地黄等中度敏感中草药对3种病原菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度均分别高于31.25 mg/mL和62.5 mg/mL。

Citrobacter freundii作用下球状碳酸盐矿物的形态演化过程研究

不少微生物都具有形成球状碳酸盐矿物的能力。对形成过程的动态跟踪研究是了解球状碳酸盐矿物形成机理的关键。利用光学显微镜和电子显微镜对Citrobacter freundii作用下球状碳酸盐矿物的形成过程进行了跟踪研究。结果表明,纳米晶体在有机物质的包裹下逐渐聚集,最终生长为具有辐射状内部结构和菱形表面纹理的球状构造。在球状构造形成之前,矿物集合体经历了花形、哑铃形、花菜形、纺锤形以及类似于十字形的多种过渡形态。对最初、过渡和最终形态进行总结,有助于理解微生物作用下的球状碳酸盐矿物形成机理,为识别微生物活动在沉积环境中遗留的痕迹提供更多有用的信息。以往的研究极少涉及Citrobacter freundii诱导碳酸盐矿物的形成。研究结果将丰富微生物促进球状碳酸盐矿化的研究内容。

一株弗氏柠檬酸杆菌的分离鉴定及致病性研究

为确定导致罗非鱼患病的原因,本试验对濒临死亡的罗非鱼进行无菌解剖,从心脏部位分离得到1株细菌,通过形态学观察、生理生化鉴定和16SrDNA分析,确定菌株为弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)。药敏试验结果显示,该菌株具有很强的多重耐药性,测试的20种药物中,该菌株对恩诺沙星、青霉素等13种药物具有完全耐药性,仅对头孢曲松、头孢他啶、头孢拉定、哌拉西林、舒巴坦5种药物敏感。人工感染试验结果显示,该菌对草鱼、黄颡鱼、罗非鱼、禾花鲤具有较强的致病性。本试验结果阐明了罗非鱼患病的原因,同时在养殖过程中可指导养殖户合理用药。

罗非鱼肠道中弗氏柠檬酸杆菌的分离与鉴定

为了对罗非鱼肠道中弗氏柠檬酸杆菌进行细菌形态学观察、生化试验及药敏试验等研究,试验从罗非鱼肠道中分离、纯化获得2株典型细菌,分别编号为LF-1和LF-2。结果表明:2株细菌均为革兰阴性短杆菌,可以利用枸橼酸盐、葡萄糖产气,其中LF-1鸟氨酸脱羧酶为阴性,而LF-2鸟氨酸脱羧酶为阳性,查询数值编码表确定为弗氏柠檬酸杆菌。药敏试验结果显示,2株细菌均对氯霉素、庆大霉素、头孢孟多、奥复星、诺氟沙星等药物高度敏感。

羊源致病性柠檬酸杆菌4种佐剂灭活疫苗的免疫效果比较

为筛选羊源弗氏柠檬酸杆菌灭活菌体疫苗的合适佐剂,本研究以灭活羊源弗氏柠檬酸杆菌LK-1株为抗原分别制备其矿物油疫苗、铝胶疫苗、GEL疫苗和ISA201疫苗。将4种不同佐剂疫苗分别背部皮下免疫小鼠(0.2 mL/只)和颈部肌肉免疫羊(2 mL/只)进行疫苗安全性试验。用4种不同佐剂疫苗分别背部皮下免疫小鼠(0.2 mL/只)两次后使用3 LD50的LK-1株进行腹腔攻击;颈部肌肉免疫羊(2 mL/只)两次后使用2个致死剂量的LK-1株进行耳静脉攻击,比较4种不同佐剂疫苗对小鼠和羊的保护率并对小鼠和羊免疫血清进行微量凝集抗体检测。疫苗安全性试验结果显示,矿物油疫苗导致接种动物出现严重的精神沉郁、食欲减退、以及接种部位发生肿胀坏死和疫苗残留等不良反应;其它3种佐剂疫苗不良反应较轻微。动物免疫试验结果显示,4种佐剂疫苗对小鼠的攻毒保护率分别为85%、50%、80%、100%,对羊的保护率分别为100%、75%、0、100%。4种佐剂疫苗综合比较,ISA201疫苗使接种动物产生最轻微的副反应,而且能产生较高的抗体水平和最强的保护力。本研究为进一步开发羊柠檬酸杆菌病的灭活疫苗奠定基础。

鲫鱼弗氏柠檬酸杆菌的耐药表型及耐药基因检测

为了检测鲫鱼费氏柠檬酸杆菌的耐药表型及耐药基因,试验采用标准Kirby-Bauer纸片扩散法检测鲫鱼弗氏柠檬酸杆菌对13种抗生素的耐药表型,并用PCR法检测弗氏柠檬酸杆菌对四环素类和磺胺类抗生素的6种耐药基因(tetA、tetC、tetM、Sul1、Sul2和Sul3)。结果表明:鲫鱼弗氏柠檬酸杆菌对四环素、氨苄西林、强力霉素、红霉素、头孢拉定和阿莫西林耐药;仅检测出四环素类的tetA和tetM基因,而其他未检测出。

弗氏柠檬酸杆菌β-内酰胺酶的分类检测

目的研究弗氏柠檬酸杆菌所产各种β-内酰胺酶(-βlase)分布情况。方法采用头孢硝噻吩试验检测33株弗氏柠檬酸杆菌所产-βlase,多底物纸片法(协同法、拮抗法)、AmpC酶检测法、碳青酶烯酶分类检测检测其所产各种-βlase。结果33株弗氏柠檬酸杆菌,检出29株-βlase,总检出率为87.9%;头孢硝噻吩试验27株为阳性(81.8%);29株产酶菌株中,产青霉素酶2株,产头孢菌素酶3株,产广谱β-内酰胺酶5株,产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)11株,产ESBLs+AmpC酶6株,ESBLs总产酶率51.5%,产碳青酶烯酶2株(均为复合产超广谱酶+金属酶)。结论弗氏柠檬酸杆菌产-βlase率、ESBLs总产酶率和复合产酶率很高,产6种酶,以广谱酶、ESBLs为主。

产NDM-1弗劳地枸橼酸杆菌整合子和插入序列共同区1检测及分型

目的研究临床分离产NDM-1弗劳地枸橼酸杆菌中整合子和插入序列共同区1(ISCR1)移动元件的分布和携带耐药基因盒情况,以及菌株的同源性。方法收集昆明医科大学第一附属医院2012年6月-2014年10月产NDM-1弗劳地枸橼酸杆菌18株,采用VITEK 2全自动药敏鉴定仪进行菌种鉴定和药敏试验;PCR及测序法检测Ⅰ~Ⅲ类整合酶基因和ISCR1元件保守区,以及可变区携带的耐药基因盒;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对菌株进行分型研究。结果检测菌株中77.8%(14/18)菌株Ⅰ类整合子保守区阳性,27.8%(5/18)菌株ISCR1元件保守区阳性,未检测到Ⅱ、Ⅲ类整合子;72.2%(13/18)菌株Ⅰ类整合子可变区阳性,未检测到ISCR1元件的可变区;整合子可变区含有编码对氨基糖苷类抗生素耐药的基因盒(aad A1、aad A5、aac(6')-Ib-cr)和编码对磺胺类抗菌药物耐药的基因盒(dfr A、dfr A15、dfr A17),可变区基因盒未检测到NDM-1耐药基因;PFGE分型将18株菌分成17种型。结论产NDM-1弗劳地枸橼酸杆菌克隆播散趋势不明显,Ⅰ类整合子广泛存在于此类菌中,ISCR1元件携带率较低,并且这两类移动元件与我院NDM-1基因的传播无关。

去除U(VI)的微生物组合构建及培养条件的优化

[目的]为了筛选U(VI)的抗性微生物及建立高效去除U(VI)的微生物组合。[方法]通过单菌株与混合菌株对U(VI)的抗性比较,采用正交试验对微生物组合的培养条件进行优化。[结果]除考式玫瑰菌外,XJ1、耐辐射奇球菌、柠檬酸杆菌3种微生物均能耐受50mg/L U(VI),其中耐辐射奇球菌和柠檬酸杆菌对30 mg/L U(VI)的去除率分别达到80.4%和84.8%;与单菌株对U(VI)的抗性相比,柠檬酸杆菌-耐辐射奇球菌组合对U(VI)的抗性有明显的促进作用。最佳条件为p H 6.0、温度30℃、U(VI)初始浓度10 mg/L,该组合对U(VI)的去除率可达到98.3%。[结论]筛选的微生物组合及其培养条件的优化可为微生物修复核素提供理论依据。

一次微生物盲样病原菌检测的分析

[目的]对浙江省省疾控发放的盲样根据其要求进行病原菌检测。[方法]参照GB/T4789-2003[1]的有关章节,对盲样进行病原菌检测。[结果]检出鼠沙门氏伤寒杆菌等3种致病菌,根据浙江省疾控的反馈信息,该市中心的考核成绩为满意。[结论]从比对试验结果显示,该市中心检验科的检测能力和水平明显提高,同时也增加了客户对该检测机构的信心。

中华鳖弗氏柠檬酸杆菌的分离、鉴定及药物敏感性试验

从患病中华鳖(Trionyx sinensis)内脏中分离到一株细菌(LCJY-002)。ATB Expression型微生物鉴定系统显示:该菌为弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)。16S rDNA分析得到1条长度为1456bp的核苷酸序列(GenBank登录号为KC691177);Blast分析显示:该分离株与弗氏柠檬酸杆菌的同源性达99%,在系统发育树上与C.freundii聚为一支。鉴定结果确认:菌株LCJY-002为弗氏柠檬酸杆菌。人工回归感染试验证实:该菌具有致病性,PCR检测表明:分离的弗氏柠檬酸杆菌具有cfa毒力因子。药敏试验结果显示:该菌对16种抗菌药物中的庆大霉素等7种药物敏感。

再生水中柠檬酸杆菌对铜合金腐蚀机理研究

以再生水中弗氏柠檬酸杆菌为研究对象,采用原子力显微镜(AFM)、接触角测量仪、扫描电子显微镜(SEM)和能谱仪(EDS)等试验方法,从微观形貌表征、热力学分析等方面,研究了HSn70-1AB铜合金表面生物膜的结构特性,并分析了生物膜疏水性能对生物膜结构的影响以及生物膜下HSn70-1AB铜合金的腐蚀机理。研究结果显示,HSn70-1AB合金表面生物膜的均匀性随浸泡时间的延长而逐渐变差;较强的亲水性使得后期生物膜的整体结构比较完整;弗氏柠檬酸杆菌对HSn70-1AB主要以局部腐蚀为主,尤其是点蚀。

奶粉中弗氏柠檬酸杆菌影响因素的研究

目的:对奶粉中弗氏柠檬酸杆菌的影响因素进行研究,提供奶粉安全保藏和消费的参考数据。方法:采用人工污染不含弗氏柠檬酸杆菌奶粉作为实验材料,对冷藏、冷冻温度、热水冲调、标准菌株D值、水活度(aw)、pH值影响因素进行实验。结果:D4℃=15周,4℃时,第18周有霉菌生长。冷冻(-18℃)温度下,细菌数量下降不明显;用大于55℃的水冲调奶粉时,细菌数明显下降,D55℃=70s,D60℃=7s;当aw≤0.75时,aw越大,随奶粉保存时间的延长弗氏柠檬酸杆菌减少的数量越多,aw≥0.75时,则随保存时间延长,细菌减少的数量变缓;弗氏柠檬酸杆菌生长的pH值范围约为3.5～9.5。结论:对弗氏柠檬酸杆菌而言,刚加工后的奶粉适宜在室温下短期保存;开袋后的奶粉在冷藏状态下保存不宜超过18周;中心温度大于60℃为奶粉冲调的安全温度。

碳青霉烯类药物耐药的弗劳地枸橼酸杆菌耐药机制研究

目的 对耐碳青霉烯类弗劳地枸橼酸杆菌进行同源性分析及多种耐药基因的检测.方法 用琼脂稀释法测定其最低抑菌浓度（ MIC）值,采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析耐碳青霉烯类弗劳地枸橼酸杆菌的同源性,以聚合酶链反应（PCR）检测β-内酰胺酶、膜孔蛋白的缺失等多种耐药基因.结果 PFGE显示1、2、4、5号菌株均有19个条带,具有同源性；PCR试验检测结果1、4号菌携带blaCTX-M型超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）；2、3、5号菌携带携带blaDHA,3号携带bla ACT/MIR型AmpC 基因,1、2、4、5号菌携带bla KPC-2碳青霉烯酶基因；2号、4号菌株缺失膜孔蛋白基因ompF,3号菌株同时缺失ompC和ompF；其中3号菌株的16S rRNA基因定量确定AmpC基因的表达为阴性菌的106.7倍.结论 宁波市第一医院碳青霉烯类耐药的弗劳地枸橼酸盐杆菌具有同源性,其耐药机制由KPC酶、AmpC酶、ESBLs、膜孔蛋白缺失等共同作用所形成,多数耐药基因定位在质粒上易引起耐药性的播散,临床应引起高度重视.

弗氏柠檬酸杆菌耐药分析及碳青霉烯酶基因型研究

目的监测本院弗氏柠檬酸杆菌临床耐药情况,研究产碳青霉烯酶菌株相关基因表达,为临床合理用药提供直接依据。方法取本院2014年-2017年分离的弗氏柠檬酸杆菌菌株做临床常用抗生素耐药性分析;PCR扩增经改良Hodge试验验证的产碳青霉烯酶菌株相关酶基因初步分型。结果共分离出266株菌株,大多来自于重症医学科、神经外科和肝胆外科;Hodge确证试验共得到21株菌株产碳青霉烯酶,其对头孢类抗生素、氨曲南及碳青霉烯类抗生素完全耐药,对哌拉西林/他唑巴坦、环丙沙星和四环素耐药率分别为88.46%、76.92%和30.77%;21株产酶菌株PCR扩增出20株KPC基因,1株NDM-1基因。结论本院筛选出的产碳青霉烯酶菌株主要为KPC基因型,为造成碳青霉烯类抗生素耐药的主要原因,临床应引起重视。