目的探讨人参炔三醇(panaxytriol,PXT)抑制氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)诱导单核巨噬细胞脂质沉积的作用机制。方法单核细胞THP-1经佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)诱导成巨噬细胞后,采用不...目的探讨人参炔三醇(panaxytriol,PXT)抑制氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)诱导单核巨噬细胞脂质沉积的作用机制。方法单核细胞THP-1经佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)诱导成巨噬细胞后,采用不同浓度(0、1、5、10、20μmol/L)PXT处理单核巨噬细胞24小时,通过MTT法检测其对细胞存活率的影响。THP-1单核巨噬细胞经PMA刺激后,利用oxLDL诱导脂质蓄积,PXT处理后利用流式细胞仪,荧光显微镜和油红O染色检测巨噬细胞对oxLDL的摄取。采用Western blot检测细胞内白细胞分化抗原36(cluster of differentiation,CD36)、三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)、清道夫受体B1(scavenger receptor class B type 1,SRB1)的蛋白表达水平变化。结果MTT实验结果显示,与正常组比较,20μmol/L PXT处理THP-1单核巨噬细胞24小时后显著抑制了细胞活力(P<0.05),且其他浓度对细胞活力均无显著影响。流式细胞检测、细胞荧光成像和油红O染色结果显示,与模型组比较,PXT浓度依赖地降低巨噬细胞内DiI-oxLDL荧光强度与细胞内脂质蓄积(P<0.05)。Western blot结果显示,与模型组比较,PXT浓度依赖地降低了巨噬细胞中CD36蛋白的表达(P<0.05),而对其他蛋白无显著影响。结论PXT通过抑制清道夫受体CD36的表达,抑制巨噬细胞对oxLDL的吞噬及泡沫细胞的形成,具有潜在的抗动脉粥样硬化活性。展开更多
探讨化合物E23869体外对脂代谢的作用及其机制。本研究利用前期已建立的人ATP结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)和清道夫受体B型I(scavenger receptor class B type I,SR-BI/CLA-1)表达上调剂筛选模型,对20 00...探讨化合物E23869体外对脂代谢的作用及其机制。本研究利用前期已建立的人ATP结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)和清道夫受体B型I(scavenger receptor class B type I,SR-BI/CLA-1)表达上调剂筛选模型,对20 000个化合物进行筛选,获得能上调ABCA1和CLA-1表达的化合物E23869,其上调活性分别为196%和198%,EC50值分别为0.25和0.66μmol·L-1;Western blotting实验结果表明,在RAW264.7和L02细胞中,活性化合物E23869均能显著上调ABCA1、SR-BI/CLA-1及ATP结合盒转运体G1(ATP-binding cassette transporter G1,ABCG1)的蛋白水平;体外功能实验证实,E23869能有效地抑制巨噬细胞泡沫化和促进细胞内胆固醇外排。进一步研究表明,化合物E23869能通过部分激活PPARα和PPARγ从而上调ABCA1、SR-BI/CLA-1和ABCG1的表达,并且对前脂肪细胞3T3-L1诱导分化的作用较弱。总之,化合物E23869能够上调ABCA1和SR-BI/CLA-1活性,并且具有较好的体外调节脂代谢的作用,为新型调血脂药物的先导化合物。展开更多
ATP结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)和清道夫受体B型I(scavenger receptor class B type I,SR-BI/CLA-1)是胆固醇逆转运过程中的重要蛋白。ABCA1和SR-BI/CLA-1的高表达能降低动脉粥样硬化的危险性。因此,本...ATP结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)和清道夫受体B型I(scavenger receptor class B type I,SR-BI/CLA-1)是胆固醇逆转运过程中的重要蛋白。ABCA1和SR-BI/CLA-1的高表达能降低动脉粥样硬化的危险性。因此,本研究利用前期已建立的人ABCA1和CLA-1表达上调剂筛选模型,对20 000个化合物进行筛选,获得能上调ABCA1和CLA-1表达的化合物E0869[4-甲磺酰甲基苯甲酸-1-(3,4-二甲基苯基)-1-丙酮-2-酯],其上调活性分别为160%和175%,EC50值分别为3.79和1.42μmol·L-1;进一步研究发现,活性化合物E0869能上调肝细胞Hep G2以及巨噬细胞RAW264.7中ABCA1、SR-BI/CLA-1以及ABCG1的m RNA和蛋白水平,但不影响FAS、SREBP-1c、CD36的表达;E0869能使泡沫化巨噬细胞RAW264.7胞内脂滴量明显减少,并能增加其胆固醇的流出。因此,化合物E0869能够上调ABCA1和CLA-1活性,并且具有较好的体外抗动脉粥样硬化效果。展开更多
文摘目的探讨人参炔三醇(panaxytriol,PXT)抑制氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)诱导单核巨噬细胞脂质沉积的作用机制。方法单核细胞THP-1经佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)诱导成巨噬细胞后,采用不同浓度(0、1、5、10、20μmol/L)PXT处理单核巨噬细胞24小时,通过MTT法检测其对细胞存活率的影响。THP-1单核巨噬细胞经PMA刺激后,利用oxLDL诱导脂质蓄积,PXT处理后利用流式细胞仪,荧光显微镜和油红O染色检测巨噬细胞对oxLDL的摄取。采用Western blot检测细胞内白细胞分化抗原36(cluster of differentiation,CD36)、三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)、清道夫受体B1(scavenger receptor class B type 1,SRB1)的蛋白表达水平变化。结果MTT实验结果显示,与正常组比较,20μmol/L PXT处理THP-1单核巨噬细胞24小时后显著抑制了细胞活力(P<0.05),且其他浓度对细胞活力均无显著影响。流式细胞检测、细胞荧光成像和油红O染色结果显示,与模型组比较,PXT浓度依赖地降低巨噬细胞内DiI-oxLDL荧光强度与细胞内脂质蓄积(P<0.05)。Western blot结果显示,与模型组比较,PXT浓度依赖地降低了巨噬细胞中CD36蛋白的表达(P<0.05),而对其他蛋白无显著影响。结论PXT通过抑制清道夫受体CD36的表达,抑制巨噬细胞对oxLDL的吞噬及泡沫细胞的形成,具有潜在的抗动脉粥样硬化活性。
文摘目的:观察氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)干预是否刺激分化成熟的3T3-L1脂肪细胞胆固醇流出,并探讨其机制。方法:3T3-L1细胞促分化成熟后,给予不同浓度的ox-LDL(0～50μg/mL)干预8或24h;在以25μg/mL ox-LDL预处理脂肪细胞24h后,再以10μmol/L22(R)-羟基胆固醇干预24h,收集细胞,采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymer-ase chain reaction,RT-PCR)测定脂肪细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP binding cassette transporterA1,ABCA1),B族I型清道夫受体(scavenger receptor class B type I,SR-BI)和肝X受体α(liver X receptorα,LXRα)mRNA表达,采用液体闪烁计数器检测载脂蛋白A-I(apolipoprotein A-I,apoA-I)介导的细胞内胆固醇流出。结果:低浓度ox-LDL(12.5～25μg/mL)干预24h可增加脂肪细胞ABCA1,LXRα和SR-BImRNA的表达,并促进apoA-I介导的胆固醇流出,而高浓度(50μg/mL)则无此作用。将脂肪细胞用25μg/mL ox-LDL预处理24h,再用10μmol/L22(R)-羟基胆固醇干预细胞,ABCA1和LXRαmRNA表达均有显著增加(P<0.01),同时apoA-I介导的胆固醇流出增加,而SR-BImRNA表达无明显改变。结论:低浓度ox-LDL不仅可促进脂肪细胞LXRα-ABCA1-apoA-I通路,还可上调SR-BI表达,加速细胞内胆固醇流出。Ox-LDL这种新的作用不仅有利于维持脂肪细胞内胆固醇的动态平衡,还可能具有抗动脉粥样硬化作用。
文摘探讨化合物E23869体外对脂代谢的作用及其机制。本研究利用前期已建立的人ATP结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)和清道夫受体B型I(scavenger receptor class B type I,SR-BI/CLA-1)表达上调剂筛选模型,对20 000个化合物进行筛选,获得能上调ABCA1和CLA-1表达的化合物E23869,其上调活性分别为196%和198%,EC50值分别为0.25和0.66μmol·L-1;Western blotting实验结果表明,在RAW264.7和L02细胞中,活性化合物E23869均能显著上调ABCA1、SR-BI/CLA-1及ATP结合盒转运体G1(ATP-binding cassette transporter G1,ABCG1)的蛋白水平;体外功能实验证实,E23869能有效地抑制巨噬细胞泡沫化和促进细胞内胆固醇外排。进一步研究表明,化合物E23869能通过部分激活PPARα和PPARγ从而上调ABCA1、SR-BI/CLA-1和ABCG1的表达,并且对前脂肪细胞3T3-L1诱导分化的作用较弱。总之,化合物E23869能够上调ABCA1和SR-BI/CLA-1活性,并且具有较好的体外调节脂代谢的作用,为新型调血脂药物的先导化合物。
文摘ATP结合盒转运体A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)和清道夫受体B型I(scavenger receptor class B type I,SR-BI/CLA-1)是胆固醇逆转运过程中的重要蛋白。ABCA1和SR-BI/CLA-1的高表达能降低动脉粥样硬化的危险性。因此,本研究利用前期已建立的人ABCA1和CLA-1表达上调剂筛选模型,对20 000个化合物进行筛选,获得能上调ABCA1和CLA-1表达的化合物E0869[4-甲磺酰甲基苯甲酸-1-(3,4-二甲基苯基)-1-丙酮-2-酯],其上调活性分别为160%和175%,EC50值分别为3.79和1.42μmol·L-1;进一步研究发现,活性化合物E0869能上调肝细胞Hep G2以及巨噬细胞RAW264.7中ABCA1、SR-BI/CLA-1以及ABCG1的m RNA和蛋白水平,但不影响FAS、SREBP-1c、CD36的表达;E0869能使泡沫化巨噬细胞RAW264.7胞内脂滴量明显减少,并能增加其胆固醇的流出。因此,化合物E0869能够上调ABCA1和CLA-1活性,并且具有较好的体外抗动脉粥样硬化效果。
