白术内酯Ⅰ调节PI3K/Akt/mTOR信号通路对肺脾气虚反复呼吸道感染模型大鼠肺损伤的影响

目的探讨白术内酯Ⅰ调节磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)通路对肺脾气虚反复呼吸道感染(RRTI)模型大鼠肺损伤的影响。方法将84只大鼠随机分为对照组、模型组、白术内酯Ⅰ低剂量组、白术内酯Ⅰ高剂量组、阳性药物组、胰岛素样生长因子1(IGF-1)组、白术内酯Ⅰ高剂量+IGF-1组,每组12只。除对照组外,其他组大鼠均采用疲劳结合饮食失节联合刨花加烟叶烟熏的方法构建肺脾气虚反复呼吸道感染大鼠模型,模型复制成功后,进行给药处理,给药每天1次,持续6周。动物肺功能仪检测大鼠呼气峰流速(PEF)、1秒用力呼气容积(FEV_(1))、用力肺活量(FVC)的变化;检测大鼠肺湿干质量比值变化;HE染色检测各组大鼠肺组织病理变化;ELISA法检测大鼠肺组织中白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western Blot法检测大鼠肺组织中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠PEF、FEV_(1)、FVC降低(P<0.01),肺湿干质量比值升高(P<0.01);肺组织肺泡间隔变大,肺间质水肿且存在大量炎性细胞浸润;肺组织中IL-6、TNF-α、MDA水平升高(P<0.01),SOD活性降低(P<0.01);肺组织中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达升高(P<0.01)。与模型组比较,白术内酯Ⅰ低剂量组、白术内酯Ⅰ高剂量组、阳性药物组大鼠PEF、FEV_(1)、FVC升高,肺湿干质量比值降低(P<0.01);肺组织病理损伤减轻;肺组织中IL-6、TNF-α、MDA水平降低,SOD活性升高(P<0.01);肺组织中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达降低(P<0.01),IGF-1组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.01)。与白术内酯Ⅰ高剂量组比较,白术内酯Ⅰ高剂量+IGF-1组大鼠PEF、FEV_(1)、FVC降低,肺湿干质量比值升高(P<0.01);肺组织病理损伤加剧;肺组织中IL-6、TNF-α、MDA水平升高,SOD活性降低(P<0.01);肺组织中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论白术内酯Ⅰ可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路改善肺脾气虚反复呼吸道感染大鼠肺损伤。

PI3K抑制剂对四氯化碳刺激的肝星状细胞增殖和Ⅰ型胶原表达的影响

目的探讨PI3K抑制剂对四氯化碳(CCl4)刺激的肝星状细胞(HSC)增殖和Ⅰ型胶原表达的影响,为肝纤维化的治疗提供理论基础。方法将液氮保存下的HSC株,于37℃,50mL/L CO2孵育箱中复苏传代培养,同步化后将细胞分为5组:空白对照组、CCl4组、CCl4+1μmol/L PI103组、CCl4+2μmol/L PI103组、CCl4+4μmol/L PI103组,分别培养48h。用透射电子显微镜初步观察了细胞形态改变;MTT比色法测定细胞增殖情况;免疫细胞化学测定细胞的Ⅰ型胶原表达情况。结果 CCl4组与空白对照组比较,细胞生长旺盛,细胞数目增多,Ⅰ型胶原表达增多;透射电子显微镜下可见CCl4+4μmol/L PI103组比CCl4组凋亡细胞显著增多,细胞数目减少;MTT和免疫细胞化学实验结果显示,与CCl4组比较,CCl4+1μmol/L PI103组、CCl4+2μmol/L PI103组、CCl4+4μmol/L PI103组细胞的增殖和Ⅰ型胶原的表达均减少,随着PI103剂量加大,细胞的增殖和Ⅰ型胶原的表达均减少,但CCl4+4μmol/L PI103组和CCl4+2μmol/L PI103组比较,细胞的增殖无明显变化。结论 PI3K抑制剂PI103可抑制活化的HSC的增殖,促进其凋亡以及减少其Ⅰ型胶原的表达。

马兜铃酸Ⅰ对大鼠体内PI3K/Akt/NF-кB通路的影响к

目的探讨马兜铃酸Ⅰ(Aristolochic acidⅠ,AAⅠ)诱导的马兜铃酸肾病可能病变机制,分析其对PI3K/Akt/NFкB通路的影响。方法 SD雄性大鼠按随机数字表法分为空白对照组以及AAⅠ高、低剂量(9.0、2.25mg/kg)组,连续腹腔注射给药14d后,取血清检测肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、碱性磷酸酶(AKP),并用HE法染色观察肾脏病理组织学变化;用蛋白免疫印迹(Western blot)法分析PI3K、Akt、NFкB蛋白的表达,此外用免疫组织化学方法分析AAⅠ对肾脏组织IL-6和TNF-的表达变化。结果给药AAⅠ组与对照组比较,Cr、BUN、AKP水平显著升高(P<0.05);肾脏病理学检查显示肾脏病变和炎症改变,IL-6、TNF-表达显著增多(P<0.01);PI3K、Akt、NFкB及其磷酸化蛋白表达水平增高。结论 AAⅠ能导致肾脏毒性,并且可能通过激活PI3K/Akt/NFкB通路,诱发炎症,从而加重肾脏组织病理学改变。

基于PI3K/AKT信号通路及自噬探讨恒清Ⅰ号方治疗血管性痴呆的作用机制

目的基于PI3K/AKT信号通路及自噬研究恒清Ⅰ号方治疗血管性痴呆的作用机制。方法将60只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、恒清Ⅰ号方低剂量组、恒清Ⅰ号方中剂量组、恒清Ⅰ号方高剂量组和欧来宁组,每组10只。除假手术组外,其余组均采用双侧颈总动脉永久性结扎法建模。术后7 d,恒清Ⅰ号方低、中、高剂量组分别给予0.268 g/mL、0.535 g/mL、1.070 g/mL的恒清Ⅰ号方灌胃,欧来宁组给予欧来宁14.8 g/kg灌胃,假手术组、模型组给予等量生理盐水灌胃,均2次/d,持续灌胃30 d。灌胃结束后采用Morris水迷宫实验测试各组大鼠的逃避潜伏期、穿越平台次数,以ELISA法检测海马组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核因子-κB(NF-κB)含量,以Western blot法检测海马组织中PI3K、AKT、p-AKT、LC3-Ⅰ及LC3-Ⅱ蛋白表达情况。结果水迷宫实验第1~4天,模型组大鼠逃避潜伏期均明显长于假手术组(P均<0.05);恒清Ⅰ号方中、高剂量组和欧来宁组大鼠逃避潜伏期均明显短于模型组和恒清Ⅰ号方低剂量组(P均<0.05),且恒清Ⅰ号方高剂量组明显短于恒清Ⅰ号方中剂量组和欧来宁组(P均<0.05);模型组大鼠穿越平台次数明显少于假手术组(P<0.05),恒清Ⅰ号方中、高剂量组和欧来宁组大鼠穿越平台次数均明显多于模型组和恒清Ⅰ号方低剂量组(P均<0.05),且恒清Ⅰ号方高剂量组明显多于恒清Ⅰ号方中剂量组和欧来宁组(P均<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠海马组织中TNF-α、NF-κB含量和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均明显增高(P均<0.05),PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达量均明显降低(P均<0.05);与模型组和恒清Ⅰ号方低剂量组比较,恒清Ⅰ号方中、高剂量组和欧来宁组大鼠海马组织中TNF-α、NF-κB含量和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均明显降低(P均<0.05),PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达量均明显升高(P均<0.05);与恒清Ⅰ号方中剂量组和欧来宁组比较,恒清Ⅰ号方高剂量组大鼠海马组织中TNF-α、NF-κB含量和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均明显降低(P均<0.05),PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达量均明显升高(P均<0.05)。结论恒清Ⅰ号方可以呈量效关系改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力,且高剂量恒清Ⅰ号方的作用优于欧来宁,可能与其抑制炎症反应、阻滞细胞自噬和调控PI3K/AKT信号通路有关。

NOX-4调控PI3K信号通路参与TGF-β1诱导肺癌细胞表达Ⅰ型胶原蛋白

目的:研究NADPH氧化酶4(NOX-4)调控PI3K信号通路在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导肺癌细胞表达Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ)的作用及分子机制。方法:体外培养人肺癌A549细胞,予TGF-β1刺激后,观察NOX家族和collagen家族的mRNA和蛋白表达的变化,以及PI3K class I催化亚基的表达和PI3K信号通路活化的变化;NOX-4抑制剂二亚苯基碘鎓(DPI)预先处理肺癌细胞,观察TGF-β1刺激后collagen Ⅰ的mRNA和蛋白表达的变化以及PI3K class I催化亚基表达和PI3K信号通路活化。结果:TGF-β1可以诱导肺癌细胞中NOX-4和collagen Ⅰ的mRNA和蛋白表达升高,并诱导PI3K class I催化亚基中PIK3CD表达升高和PI3K信号通路的活化。NOX-4抑制剂DPI可以抑制TGF-β1诱导的collagen Ⅰ表达升高;抑制NOX-4并不影响TGF-β1诱导的PI3K催化亚基PIK3CD表达,但可以降低TGF-β1诱导PI3K信号通路的活化程度。结论:NOX-4经调控PI3K信号通路的活化参与了TGF-β1诱导肺癌细胞表达collagen Ⅰ的分子机制。TGF-β1/NOX-4/PI3K信号通路轴在肺癌细胞collagen Ⅰ的表达中发挥了调控作用。

Clinical review considerations of class I PI3K inhibitors in hematolymphatic malignancies by Center for Drug Evaluation

Several phosphoinositide 3-kinase(PI3 K) inhibitors are currently approved to treat hematolymphatic malignant diseases worldwide, and many drugs that have the same target are in the clinical research stage. In March 2022,duvelisib became the first PI3 K inhibitor approved in China indicated for the treatment of hematolymphatic malignant diseases. Meanwhile, linperlisib and copanlisib have almost completed the technical review of the clinical specialty. The Center for Drug Evaluation(CDE) of the China National Medical Products Administration(NMPA) found that class I PI3 K inhibitors can cause various degrees of immune-related adverse events, which are associated with action mechanisms, affecting the benefit-risk assessment of the drugs. On April 21, 2021, the United States Food and Drug Administration(FDA) convened the Oncologic Drugs Advisory Committee(ODAC)meeting to discuss the safety of PI3 K inhibitors indicated for hematolymphatic malignancies and their related risk of death. The hematological tumor group of CDE of the China NMPA summarized and combined the data on PI3 K inhibitors listed or under technical review for marketing authorization applications and found that such products may have unique efficacy and safety characteristics in Chinese patients with malignant lymphoma.

黄芪甲苷与人参皂苷Rg1配伍对PC12细胞氧糖剥夺复糖复氧后细胞自噬和PI3K信号通路的影响

目的:探讨黄芪甲苷和人参皂苷Rg1配伍对PC12细胞氧糖剥夺后再复糖复氧(oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)诱导的细胞自噬的影响及作用机制。方法:以PC12细胞建立OGD/R自噬性损伤模型,观察黄芪甲苷与人参皂苷Rg1配伍对细胞自噬的影响,并通过PI3KⅠ/Akt/m TOR和PI3KⅢ/beclin-1/Bcl-2信号通路研究黄芪甲苷与人参皂苷Rg1配伍的作用机制。结果:氧糖剥夺2 h复糖复氧24 h后,PC12细胞内LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白比值增加。黄芪甲苷、人参皂苷Rg1及黄芪甲苷与人参皂苷Rg1配伍均能下调OGD/R后PC12细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白比值,且配伍组的效应强于药物单用组。机制研究表明,人参皂苷Rg1单用及黄芪甲苷和人参皂苷Rg1配伍能升高PI3KⅠ、Akt、m TOR蛋白磷酸化水平,配伍的效应强于药物单用;黄芪甲苷单用及黄芪甲苷和人参皂苷Rg1配伍均能抑制PI3KⅢ、beclin-1蛋白表达,而配伍还能上调Bcl-2蛋白表达,且配伍的效应强于药物单用组。结论:PC12细胞在缺糖缺氧2 h再复糖复氧24 h后,细胞出现自噬;黄芪甲苷和人参皂苷Rg1均能减轻OGD/R诱导的PC12细胞自噬,且2者配伍对细胞自噬具有协同抑制作用,其机制可能与调节PI3KⅠ/Akt/m TOR和PI3KⅢ/beclin-1/Bcl-2信号通路有关。

Class Ⅲ PI3K/Beclin-1自噬通路参与mmLDL上调小鼠肠系膜动脉ETA受体的研究

目的探讨弱氧化性低密度脂蛋白(minimally modified low density lipoprotein,mmLDL)上调在体小鼠肠系膜动脉ETA受体的作用(endothelin type A receptors,ETA)并考察自噬是否参与这一过程。方法小鼠尾静脉注射mmLDL,腹腔注射ClassⅢPI3K自噬通路抑制剂6-氨基-3-甲基嘌呤(3-methyladenine,3-MA),探究自噬在mmLDL给药处理小鼠中的作用,微血管张力描记仪观察内皮素-1(endothelin-1,ET-1)引起的小鼠肠系膜动脉收缩量效曲线的变化,RT-PCR定量ETA受体mRNA,Western blot检测ETA受体和ClassⅢPI3K、Beclin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、p62及p-NF-κB、NF-κB的蛋白水平表达。结果mmLDL引起ET-1收缩量效曲线明显增强,表现为Emax值由生理盐水(NS)组的(184.87±7.46)%上升为(319.91±20.31)%(P<0.001),pEC50值由NS组的(8.05±0.05)上升为(9.11±0.09)(P<0.01)。mmLDL在上调ClassⅢPI3K、beclin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ和下调p62蛋白水平的同时,也引起ETA受体mRNA水平、蛋白表达明显增加,增加了p-NF-κB的蛋白水平;腹腔注射3-MA抑制了mmLDL的这些作用。结论mmLDL能通过ClassⅢPI3K/Beclin-1通路激活自噬及下游NF-κB通路上调ETA受体。

重楼皂苷Ⅰ通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路诱导人黑素瘤A375细胞凋亡与自噬

目的探讨重楼皂苷Ⅰ(Polyphylin Ⅰ,PPⅠ)对人黑素瘤A375细胞凋亡和自噬的影响以及相关机制,确定PPⅠ诱导的细胞自噬与其促进A375细胞凋亡的相关性。方法 PPⅠ处理 A375 细胞后,采用CCK-8法检测细胞活力;Annexin V-FITC /PI 双标法检测PPⅠ对人黑素瘤细胞凋亡的作用;免疫印迹法检测相关蛋白的表达水平;通过观察细胞内自噬标志分子LC3的分布与表达来确定PPⅠ对自噬的诱导作用;采用氯喹抑制细胞自噬后,观察PPⅠ对细胞凋亡的影响。结果 PPⅠ能抑制A375细胞增殖活力;PPⅠ抑制PI3K/Akt/mTOR通路的活化并促进了A375细胞内 Bax 和 cleaved-caspase 3的表达,抑制Bcl-2表达,诱导人黑素瘤细胞发生凋亡;PPⅠ促进了A375细胞LC-Ⅱ/LC-Ⅰ值和Beclin-1蛋白表达的升高,下调了p62蛋白的水平,促进了细胞自噬;PI3K/Akt/mTOR通路活化剂IGF-1处理A375细胞后抑制了PPⅠ的上述作用;PPⅠ与自噬抑制剂氯喹联用后,A375细胞凋亡数量明显减弱。结论 PPⅠ能抑制A375细胞的增殖,诱导细胞发生凋亡与自噬,抑制自噬减少了PPⅠ诱导的人黑素瘤细胞凋亡。

抗胶质瘤Ⅰ号方对脑胶质瘤细胞侵袭性的影响

目的:探讨抗胶质瘤Ⅰ号对胶质瘤细胞侵袭性降低的作用及其与PI3K/PKB信号传导通路之间的关系。方法:MTT法检测抗胶质瘤Ⅰ号处理培养的C6胶质瘤细胞的抑制率,免疫印迹法检测肿瘤细胞内PI3K和PKB表达水平,最后,利用结晶紫染色法检测Transwell下室面的胶质瘤细胞数。结果:抗胶质瘤Ⅰ号可以抑制PI3K和PKB蛋白表达水平,抗胶质瘤Ⅰ号作用0.5 h时PI3K蛋白表达水平最低为(25.1±3.1),作用1 h时PKB蛋白表达水平最低为(25.1±3.8),与对照组的(99.1±1.6)、(91.2±3.5)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。而抗胶质瘤Ⅰ号作用3 h时对胶质瘤细胞的抑制程度最大,抑制率为(91.2±5.7)%,与对照组的(68.0±5.2)%比较,差异有统计学意义(P<0.01)。且此时Transwell下室面的细胞数最少,为(1.4±0.4)×106个,与对照组的(35.6±2.7)×106个比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:抗胶质瘤Ⅰ号可能是通过抑制PI3K/PKB而抑制胶质瘤细胞的增殖,从而引起胶质瘤细胞侵袭性的降低。

凝聚素Ⅰ复合物亚基G促进小鼠胃腺癌发展、诱导免疫逃逸

[目的]为研究凝聚素Ⅰ复合物亚基G(NCAPG)对胃腺癌发展及免疫逃逸相关因子的影响,通过干扰NCAPG后,观察胃腺癌AGS细胞的在体内外的变化,以期为胃腺癌的治疗提供新思路。[方法]将裸鼠和AGS细胞均分为3组:对照组、si-NC组和si-NCAPG组。采用CCK-8检测细胞增殖情况。采用实时定量PCR检测临床IL-2、IFN-γ、TNF-α和PD-L1 mRNA的表达水平。采用免疫组化法检测肿瘤组织中Ki-67的表达水平。采用流式技术检测NCAPG对AGS细胞凋亡的影响。通过蛋白免疫印迹实验检测PI3KAKT蛋白表达水平。[结果]与对照组和si-NC比较,si-NCAPG组的裸鼠体内肿瘤组织生长速度最慢,Bax/Bcl-2比值升高,Ki-67表达降低,IL-2、IFN-γ、TNF-α的mRNA水平升高,PD-L1的mRNA水平降低,PI3K和AKT蛋白的磷酸化水平降低(P<0.05)。与对照组和si-NC比较,si-NCAPG组的细胞增殖倍数最低、凋亡率最高,IL-2、IFN-γ、TNF-α的mRNA水平升高,PD-L1的mRNA水平降低,PI3K和AKT蛋白的磷酸化水平降低(P<0.05)。[结论] NCAPG可促进胃腺癌的发生及诱导免疫逃逸,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路相关。

化纤散结复方颗粒通过PI3K/AKT/NF-κB信号通路改善大鼠矽肺纤维化

目的研究化纤散结复方颗粒改善大鼠矽肺纤维化的作用及其机制。方法将无特定病原体级雄性SD大鼠随机分为对照组、矽肺模型组和干预组,每组6只。采用一次性呼吸机联合非暴露式气管内滴注法,矽肺模型组和干预组大鼠均予1.0 mL质量浓度为50.0 g/L的二氧化硅悬浊液建立染矽尘大鼠模型,对照组大鼠予等体积0.9%氯化钠溶液。染尘24 h后,干预组大鼠予剂量为10 mL/kg体质量的化纤散结复方颗粒混悬液(质量浓度为212.5 g/L)灌胃,对照组和矽肺模型组大鼠均予等体积0.9%氯化钠溶液灌胃,每日1次。分别于染尘后第14和28天处死各组大鼠3只,进行肺组织病理学检查;以酶联免疫吸附实验检测大鼠血清和肺组织中白细胞介素-6(IL-6)、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平,以蛋白质印迹法检查肺组织中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、核转录因子-κB(NF-κB)和Ⅰ型胶原(COLⅠ)蛋白相对表达水平。结果肺组织病理学检查结果显示,与同时间点矽肺模型组比较,干预组大鼠肺组织炎症反应、纤维结节、胶原纤维均明显减少,纤维化明显减轻。矽肺模型组大鼠第14和28天血清中IL-6和肺组织中IL-6、TGF-β1的水平均高于同时间点对照组(P值均<0.05),且第28天的上述指标均高于第14天(P值均<0.05)。矽肺模型组大鼠血清中TGF-β1水平和肺组织中PI3K、AKT、NF-κB、COLⅠ蛋白相对表达水平均高于对照组(P值均<0.05)。干预组大鼠第14和28天血清中IL-6和肺组织中IL-6、TGF-β1的水平均低于同时间点矽肺模型组(P值均<0.05);且干预组大鼠血清中TGF-β1水平和肺组织中PI3K、AKT、NF-κB、COLⅠ蛋白相对表达水平均高于对照组(P值均<0.05)。结论化纤散结复方颗粒可通过PI3K/AKT/NF-κB信号通路延缓和拮抗矽肺大鼠肺纤维化。

PI3K抑制剂类抗肿瘤药Sonolisib

磷脂酰肌醇-3-激酶（P13K）是一类重要的细胞信号传导分子，可调节细胞的生长、代谢、增殖以及血管生成，在许多肿瘤组织中被异常激活，其信号通路如P13K／mTOR（哺乳动物雷帕霉素靶蛋白）／Akt通路，在肿瘤发生发展中起重要作用，其中IA类P13K与肿瘤的关系最为密切，也已成为肿瘤治疗的重要靶标。早期的I类P13K抑制剂如渥曼青霉素，虽具有体内抗肿瘤活性，但因溶解性、药动学、生物利用度和稳定性较差，尤其是对I类P13K的特异性较差，易产生明显的肝毒性，故未能进入临床开发。

龟鹿二仙胶含药血清干预大鼠T细胞化疗后自噬的初步研究

[目的]初步研究龟鹿二仙胶含药血清干预大鼠T细胞化疗后自噬的机制。[方法]将大鼠T细胞分为空白对照组、顺铂组、中药血清组、顺铂+中药血清组,干预12h、24h后使用RT-PCR、Western Blot技术检测各组细胞ATG5、ClassmTORPI3K、Class I PI3K、mTOR mRNA及蛋白的表达情况。[结果]干预12h后,RT-PCR结果显示,与空白对照组比较,顺铂组ATG5、ClassⅢPI3K、ClassⅠPI3K、mTOR mRNA表达上升,差异有统计学意义(P<0.01)。中药血清组ATG5、ClassⅢPI3K、mTOR mRNA表达下调,差异有统计学意义(P<0.01)。与顺铂组比较,顺铂+中药血清组ATG5、ClassⅢPI3K、ClassⅠPI3K、mTOR mRNA表达均下降,差异有统计学意义(P<0.01)。Western Blot结果显示,顺铂组mTOR蛋白表达较空白对照组上升(P<0.05),其余组别各蛋白变化不明显(P>0.05)。干预24h后,RT-PCR结果显示,与空白对照组比较,顺铂组ATG5、ClassⅢPI3K、ClassⅠPI3K、mTOR mRNA表达上升,差异有统计学意义(P<0.01);中药血清组ATG5 mRNA表达下降,差异有统计学意义(P<0.01),ClassⅢPI3K、mTOR mRNA表达上升,差异有统计学意义(P<0.05);与顺铂组比较,顺铂+中药血清组ATG5、ClassⅢPI3K、ClassⅠPI3K、mTOR mRNA表达下降,差异有统计学意义(P<0.01)。Western Blot结果显示,顺铂+中药血清组ATG5、ClassⅢPI3K蛋白表达较顺铂组下降(P<0.05),ClassⅠPI3K、mTOR蛋白变化不明显(P>0.05)。[结论]龟鹿二仙胶含药血清对大鼠T细胞化疗后自噬蛋白ATG5、ClassⅢPI3K、ClassⅠPI3K、mTOR的表达具有一定的调节作用。

阿托伐他汀对谷氨酸引起大鼠神经元损伤保护作用机制的研究

目的探讨阿托伐他汀对谷氨酸所致培养大鼠皮层神经元损伤保护作用的机制。方法 MTT法测定细胞存活率;Hoechst33258核染色观察细胞凋亡的形态学改变;Western blot检测活性的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)和钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达水平。结果谷氨酸(100μmol.L-1)可使神经元细胞存活率下降,细胞凋亡百分比明显增加,活性的caspase-3和钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达增加。阿托伐他汀明显对抗谷氨酸诱导的神经元存活率下降及细胞凋亡百分比增加,同时明显抑制活性的caspase-3和钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达增加。磷酯酰肌醇-3激酶(phos-phoinositide3-kinase,PI3K)/磷酸化蛋白激酶B(protein ki-nase B,Akt)通路特异性阻断剂LY294002(10μmol.L-1)能抑制阿托伐他汀对抗谷氨酸引起神经元细胞存活率下降,细胞凋亡百分比增加及活性caspase-3和钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达增加的作用。结论阿托伐他汀能够明显对抗谷氨酸引起的皮层神经元损伤作用,这种作用可能与激活PI3K/Akt信号转导通路有关。

过表达THEM4对高糖诱导的人肾小管上皮细胞胶原分泌的影响

目的观察过表达硫酯酶超家族成员4(thioesterase superfamily member 4,THEM4)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞胶原分泌的影响。方法体外培养人肾小管上皮细胞(human renal proximal tubular epithelial cell,HKC),将细胞随机分为正常对照组(5.5 mmol·L^(-1)normal glucose,Control)、高糖组(30 mmol·L^(-1)high glucose,HG)、高糖+p Yrads-4-THEM4质粒转染组(HG+THEM4)、高糖+p Yr-adshuttle-4空质粒对照组(HG+V)。后3组经高糖刺激48 h后终止培养,Western blot检测THEM4、phospho-Akt(Ser473)、TGF-β1、α-SMA的表达;免疫细胞荧光检测THEM4蛋白表达和定位;ELISA方法检测细胞上清液中Ⅰ型胶原(collagenⅠ,ColⅠ)、Ⅲ型胶原(collagenⅢ,ColⅢ)分泌情况。结果高糖刺激可导致人肾小管上皮细胞内THEM4表达降低,phospho-Akt(Ser 473)、TGF-β1、α-SMA的表达增强及ColⅠ、ColⅢ分泌;过表达THEM4能够逆转高糖刺激所导致人肾小管上皮细胞phospho-Akt(Ser 473)蛋白的活化,下调α-SMA、TGF-β1表达,抑制ColⅠ、ColⅢ的分泌。结论过表达THEM4能够降低高糖诱导的胶原分泌,可能是通过抑制phospho-Akt(Ser 473)蛋白的活化,下调α-SMA、TGF-β1表达而实现的。

GLO1在胰腺癌细胞和胰腺癌干细胞中表达及其对细胞增殖、侵袭的影响

目的研究乙二醛酶Ⅰ(GLO1)在胰腺癌(PC)细胞和PC干细胞(CSCs)中的表达,并探讨其对PC细胞和CSCs增殖、侵袭的影响。方法选取PC细胞系SW1990、PANC-1、BxPC3和人正常胰腺导管上皮细胞HPDE6-C7细胞,采用qRT-PCR法和Western blotting法分别检测GLO1 mRNA和蛋白表达。将呈对数生长期时的PANC-1细胞、CSCs细胞胰酶消化后铺至6孔板中,分为si-NC组和si-GLO1组,按照说明书分别将si-NC和GL01 siRNA转染试剂与脂质体2000混合后转染至si-NC组和si-GLO1组细胞中,48 h后,MTS检测细胞增殖能力,Boyden实验检测细胞侵袭能力;磁珠分选PC细胞系PANC-1中的CSCs。qRT-PCR法检测干性标志分子Nanog、OCT4、SOX2及GLO1在CSCs中的表达;si-GLO1组和si-NC组CSCs经脂质体分别转染GLO1 siRNA和si-NC 48 h后,MTS检测CSCs增殖能力,Boyden实验检测CSCs侵袭能力;Western blotting法检测干扰GLO1表达后细胞中pPIK和pAKT蛋白表达。结果qRT-PCR和Western blotting检测结果显示,GLO1 mRNA和蛋白在PC细胞系SW1990、PANC-1、BxPC3中的表达均高于人正常胰腺导管上皮细胞HPDE6-C7(P均<0.05)。干性标志分子Nanog、OCT4、SOX2在CSCs中表达增加(P均<0.05);GLO1在CSCs中的表达高于PC细胞系PANC-1(P<0.05);si-GLO1组转染GLO1 siRNA后,与si-NC组相比,PANC-1和CSCs细胞的增殖和侵袭能力均下降,细胞中pPIK和pAKT蛋白表达下降(P均<0.05)。结论GLO1在PC细胞系和CSCs中均呈高表达,干扰GLO1表达可能通过下调PI3K/AKT信号通路抑制PC细胞PANC-1和PC CSCs的增殖、侵袭。

基于GPER介导途径的二氢丹参酮Ⅰ抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖的分子机制研究

目的:基于G蛋白偶联雌激素受体(GPER)途径探讨二氢丹参酮Ⅰ(DHⅠ)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的调控作用及其分子机制。方法:①将细胞分为对照组和DHⅠ不同浓度(0.1、0.2、0.3、0.4、0.5μg/ml)组,各组分别予以DMSO或相应浓度的DHⅠ干预。细胞培养48 h后,MTT法检测各组细胞增殖抑制率。②将细胞分为对照组、DHⅠ组、DHⅠ+激动剂组和DHⅠ+抑制剂组。先给予DHⅠ组、DHⅠ+激动剂组和DHⅠ+抑制剂组0.1μg/ml DHⅠ处理48 h,再向DHⅠ+激动剂组和DHⅠ+抑制剂组分别加入1μg/ml GPER激动剂G1和1μg/ml磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)抑制剂LY294002干预,继续培养24 h后,Western blot检测GPER、PI3K、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、细胞周期蛋白依赖激酶2(CDK2)、蛋白激酶B(AKT)的蛋白表达。结果:①0.1~0.5μg/ml DHⅠ作用48 h后均可显著抑制MCF-7细胞的增殖,细胞增殖抑制率较对照组显著升高(P<0.01)。②0.1μg/ml DHⅠ作用48 h后,MCF-7细胞GPER、cyclinD1、CDK2、PI3K、AKT蛋白表达量较对照组明显降低(P<0.05,P<0.01)。③激动剂干预后,与DHⅠ组相比,DHⅠ+激动剂组细胞的GPER蛋白表达量明显升高(P<0.05),且PI3K、AKT、cyclinD1蛋白表达量显著增多(P<0.05,P<0.01)。④抑制剂干预后,与DHⅠ组相比,DHⅠ+抑制剂组cyclinD1蛋白表达水平进一步降低(P<0.05)。结论:DHⅠ可能通过GPER介导的PI3K/AKT途径抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖。

人参皂苷Rg1抗PC12细胞氧糖剥夺复糖复氧后损伤与自噬关系的研究

目的:探讨人参皂苷Rg1(Rg1)对PC12细胞氧糖剥夺后再复糖复氧(OGD/R)诱导的细胞自噬性损伤的作用及作用机制。方法:以PC12细胞建立OGD/R自噬性损伤模型,观察Rg1抗OGD/R后细胞自噬性损伤的作用,并从PI3KⅠ/Akt/m-TOR和PI3KⅢ/Becline-1/Bcl-2信号通路研究其作用机制。结果:Rg1能增加OGD/R诱导的PC12细胞存活、减少乳酸脱氢酶(LDH)漏出;同时抑制细胞自噬体的形成,降低胞浆LC3-Ⅱ阳性斑片的数量、下调LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白比值而上调p62蛋白表达。机制研究结果表明,Rg1提高了PI3KⅠ、Akt、m-TOR蛋白磷酸化水平,对PI3KⅢ、Becline-1和Bcl-2蛋白表达没有影响。结论:在缺糖缺氧2h再复糖复氧24h,细胞出现过度自噬和损伤,Rg1均能减轻OGD/R诱导的PC12细胞自噬性损伤,其机制可能与激活PI3KⅠ/Akt/m-TOR信号通路有关。