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miRNA调控claudin-2表达对溃疡性结肠炎小鼠巨噬细胞极化的机制
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作者 朱卫 曾婷婷 《河北医药》 CAS 2024年第2期176-180,共5页
目的探讨微小核糖核酸(MicroRNA,miRNA)通过封闭蛋白2(Recombinant,claudin-2)表达变化对溃疡性结肠炎小鼠的保护作用及对巨噬细胞极化的调控。方法选取BALB/c雌性小鼠按照体重随机分成对照组、模型组以及上调组和下调组,每组15只。对4... 目的探讨微小核糖核酸(MicroRNA,miRNA)通过封闭蛋白2(Recombinant,claudin-2)表达变化对溃疡性结肠炎小鼠的保护作用及对巨噬细胞极化的调控。方法选取BALB/c雌性小鼠按照体重随机分成对照组、模型组以及上调组和下调组,每组15只。对4组小鼠溃疡性结肠组织进行HE染色,观察分析小鼠溃疡性结肠炎评分情况、炎性因子、免疫细胞、巨噬细胞、claudin-2表达。结果与对照组比较,模型组、上调组、下调组miRNA表达升高(P<0.05);与模型组比较,上调组miRNA表达降低、下调组升高(P<0.05);与上调组比较,下调组miRNA表达升高(P<0.05);与模型组比较,上调miRNA第3 d、5 d、7 d的溃疡性结肠炎模型小鼠明显降低、下调组升高;与上调组比较,下调组miRNA表达升高(P<0.05);与对照组比较,模型组、上调组、下调组T淋巴细胞的糖蛋白(CD4^(+))、白细胞分化抗原(CD8^(+))水平升高(P<0.05);与模型组比较,上调组CD4^(+)、CD8^(+)水平降低,下调组升高(P<0.05);与上调组比较,下调组CD4^(+)、CD8^(+)水平升高(P<0.05);与对照组比较,模型组、上调组、下调组肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)水平升高(P<0.05);与模型组比较,上调组TNF-α、IL-6、IL-8水平降低(P<0.05);与上调组比较,下调组升高(P<0.05);与对照组比较,模型组、上调组、下调组诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平升高,巨噬细胞甘露糖受体(CD206)降低(P<0.05);与模型组比较,上调组iNOS水平降低、CD206水平升高,下调组iNOS水平升高、CD206水平降低(P<0.05);与上调组比较,下调组iNOS升高、CD206降低(P<0.05);与对照组比较,模型组、上调组、下调组claudin-2蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,上调组claudin-2蛋白表达降低、下调组claudin-2蛋白表达升高(P<0.05)。结论上调溃疡性结肠炎小鼠miRNA能够调节巨噬细胞极化,从而改善溃疡性结肠炎小鼠。 展开更多
关键词 微小RNA claudin-2 血清炎性因子 免疫细胞 溃疡性结肠炎 巨噬细胞极化
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清热化湿调枢方对葡聚糖硫酸钠结肠炎模型小鼠肠黏膜MUC-2、Claudin-2表达的影响
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作者 王倩影 杨晨 +7 位作者 钟卓泰 张涛 姚梦茜 王琳 张格知 班彦然 苏晓兰 魏玮 《环球中医药》 CAS 2024年第4期572-577,共6页
目的 本研究基于粘蛋白2(mucoprotein-2,MUC-2)和闭合蛋白2(Claudin-2)的表达变化,探讨了在预防和缓解小鼠肠黏膜损伤的DSS结肠炎模型中,清热化湿调枢方可能发生的机理。方法 24只C57BL/6小鼠随机抽取6只小鼠为正常组,其余18只小鼠均给... 目的 本研究基于粘蛋白2(mucoprotein-2,MUC-2)和闭合蛋白2(Claudin-2)的表达变化,探讨了在预防和缓解小鼠肠黏膜损伤的DSS结肠炎模型中,清热化湿调枢方可能发生的机理。方法 24只C57BL/6小鼠随机抽取6只小鼠为正常组,其余18只小鼠均给予2.5%葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate, DSS)水溶液自由饮用7天以制成每组6只的DSS结肠炎小鼠模型,然后再将其随机分为模型组,美沙拉嗪组,清热化湿调枢方组。对正常组、模型组的小鼠,每组用0.5 mL的纯净水进行灌胃;美沙拉嗪组的小鼠给美沙拉嗪混悬液灌胃,剂量为0.52 g/(kg·d);清热化湿调枢方组的小鼠给予1.69 g/(kg·d)的清热化湿调枢方中药颗粒剂灌胃;每组每天1次,共7天,与模型同步进行。7天后测定各组小鼠体质量,记录小鼠体质量变化,评分疾病活动指数(disease activity index, DAI),记录各组小鼠结肠长度,观察结肠组织病理变化,检测MUC-2和Claudin-2在结肠组织中的表达。结果 模型组的小鼠体质量较正常组显著下降,DAI评分显著上升,结肠长度变短,结肠组织中Claudin-2和MUC-2蛋白的表达明显下降(P<0.05)。与模型组相比,美沙拉嗪组和清热化湿调枢方组的小鼠体质量显著增加,DAI评分下降,结肠长度增加,Claudin-2、MUC-2蛋白在结肠组织中的表达均有明显提高(P<0.05)。从结肠组织的病理变化来看,模型组小鼠肠黏膜上皮可见明显缺损,杯状细胞减少,固有层和隐窝结构破坏严重,排列错乱,淋巴细胞浸润较多;清热化湿调枢方组和美沙拉嗪组小鼠结肠黏膜上皮近乎完整,炎性细胞少量浸润。结论 清热化湿调枢方对DSS结肠炎小鼠肠道黏膜屏障损伤具有一定防治作用,其机制可能是通过提高结肠组织MUC-2表达,刺激Claudin-2分泌促进黏膜修复,从而维持肠黏膜屏障的稳态。 展开更多
关键词 溃疡性结肠炎 清热化湿调枢方 粘蛋白2 闭合蛋白2 肠黏膜屏障
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理中丸对脾虚型腹泻大鼠结肠黏膜屏障IL-22-MUC2/claudin-2信号通路的影响 被引量:3
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作者 杜青 李心亮 +2 位作者 曾宏亮 徐琳本 谢芳一 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期217-224,共8页
目的 探讨理中丸对脾虚型腹泻大鼠结肠黏膜IL-22-MUC2/claudin-2信号通路的调控作用。方法 采用番泻叶水煎液1.2 g/mL联合疲劳游泳建立脾虚型腹泻大鼠模型。模型大鼠随机分为模型组、蒙脱石散组(0.9 g/kg)和理中丸低、高剂量组(0.81和3.... 目的 探讨理中丸对脾虚型腹泻大鼠结肠黏膜IL-22-MUC2/claudin-2信号通路的调控作用。方法 采用番泻叶水煎液1.2 g/mL联合疲劳游泳建立脾虚型腹泻大鼠模型。模型大鼠随机分为模型组、蒙脱石散组(0.9 g/kg)和理中丸低、高剂量组(0.81和3.24 g/kg),每组8只;另选8只正常大鼠作为空白组。连续给药14 d,造模结束后可见大鼠体重减轻,精神倦怠、眯眼聚堆、少动,大便质地偏软或者便溏,肛周污秽,提示模型复制成功。采用比色法检测血清淀粉酶和D-木糖水平,阿利新蓝和过碘酸雪夫(AB-PAS)染色检测结肠黏膜形态结构,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测黏蛋白2(MUC2)和水通道蛋白3/4(AQP3、AQP4)的表达,免疫荧光法检测结肠组织claudin-2蛋白表达,实时荧光定量-PCR(RT-PCR)法检测白介素-22(IL-22)和肠黏膜上皮跨膜蛋白2(claudin-2)基因相对表达量(2-ΔΔCt值)。结果 与空白组比较,模型组大鼠稀便率、稀便级和腹泻指数显著增加,结肠组织黏膜层上皮细胞出现不同程度的萎缩,黏膜表面结构疏松水肿,杯状细胞减少,血清淀粉酶和D-木糖含量减少,结肠组织中MUC2、AQP3和AQP4蛋白表达量相对降低,IL-22 mRNA表达量相对减少和claudin-2 mRNA表达量相对增加,claudin-2蛋白荧光强度明显增强(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,理中丸高剂量组大鼠稀便率、稀便级和腹泻指数均明显减少,结肠黏膜病理损伤明显减轻,血清淀粉酶和D-木糖含量增加,结肠组织中MUC2、AQP3和AQP4蛋白表达量相对升高,IL-22 mRNA表达量相对增加,claudin-2 mRNA和claudin-2蛋白表达量相对减少,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论 理中丸明显调节脾虚型腹泻大鼠结肠黏膜屏障结构功能,其机制可能与增加结肠AQP3/4表达,调控IL-22-MUC2/claudin-2信号通路有关。 展开更多
关键词 理中丸 脾虚型腹泻 黏膜屏障 水通道蛋白3/4 白介素-22 claudin-2
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肠屏障功能障碍及cingulin、claudin-2表达变化在溃疡性结肠炎中的作用 被引量:11
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作者 陈思羽 黄会云 +2 位作者 陈玉 平倩 张涛 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2016年第1期43-46,共4页
目的通过检测溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)结肠黏膜组织形态学、超微结构变化及结肠黏膜扣带蛋白(cingulin)、claudin-2表达,探讨UC发病的可能机制。方法 40只清洁级雄性Balb-c小鼠随机分为2组,其中正常组10只,模型组30只。除... 目的通过检测溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)结肠黏膜组织形态学、超微结构变化及结肠黏膜扣带蛋白(cingulin)、claudin-2表达,探讨UC发病的可能机制。方法 40只清洁级雄性Balb-c小鼠随机分为2组,其中正常组10只,模型组30只。除正常组外,模型组采用自由应用DSS法制备UC模型,于第8周末处死全部小鼠。应用光镜及透射电镜观察结肠黏膜组织形态学、超微结构及上皮黏膜屏障变化;应用AB-PAS及HID-AB染色观察结肠黏蛋白变化;应用Real-time PCR技术检测结肠黏膜cingulin、claudin-2表达。结果模型组光镜下见结肠黏膜不同程度缺损、溃疡形成,表面可见坏死组织及隐窝脓肿形成;电镜下见肠上皮细胞表面微绒毛稀疏,细胞连接间隙增宽,杯状细胞减少,线粒体肿胀,结构不清或呈空泡样变,部分可见核固缩,并见凋亡小体。模型组结肠黏蛋白表达明显较正常组减少,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组cingulin、claudin-2表达分别为2.32±0.47、2.41±0.65,与正常组比较,其表达呈下降趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 cingulin通过促进claudin-2表达上升,破坏肠黏膜屏障完整,增加肠黏膜通透性导致结肠黏膜免疫反应异常,可能在UC发病中占据重要地位。 展开更多
关键词 扣带蛋白 claudin-2 紧密连接 肠黏膜屏障 溃疡性结肠炎
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紧密连接蛋白claudin-1和claudin-2表达载体的构建
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作者 霍群 Tetsushi Kinugasa Masahide Kuroki 《广西医科大学学报》 CAS 北大核心 2008年第5期703-705,共3页
目的:为进一步研究紧密连接蛋白claudin-1和claudin-2在结肠直肠癌中的作用,分别构建包含claudin-1和claudin-2基因编码区的重组质粒,并在人类结肠癌细胞株T84中表达。方法:从T84细胞中提取总RNA,反转录PCR获得cDNA,插入pCRⅡ-TOPO质粒... 目的:为进一步研究紧密连接蛋白claudin-1和claudin-2在结肠直肠癌中的作用,分别构建包含claudin-1和claudin-2基因编码区的重组质粒,并在人类结肠癌细胞株T84中表达。方法:从T84细胞中提取总RNA,反转录PCR获得cDNA,插入pCRⅡ-TOPO质粒中测序鉴定。将测序正确的cDNA连接入pcDNA3.1(-)表达载体,进一步测序鉴定后转染入T84细胞,并采用反转录荧光定量实时PCR技术及Western blot技术检测重组质粒在T84细胞中的表达。结果:重组质粒经限制性内切酶酶切鉴定和DNA序列分析,显示所克隆的DNA分子大小及序列正确。经重组质粒转染的T84细胞能大量稳定地表达目标蛋白。结论:本研究成功地构建了claudin-1/pcDNA3.1(-)和claudin-2/pcDNA3.1(-)重组表达质粒,并能在结肠癌细胞中稳定表达。 展开更多
关键词 结肠直肠癌 claudin-1 claudin-2 基因重组
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健脾清热活血方介导keap-1-Nrf2信号调控claudin-2表达干预溃疡性结肠炎模型大鼠实验研究 被引量:6
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作者 罗淑娟 陈小芬 +2 位作者 林逸婷 卢鑫 张涛 《中国中医急症》 2021年第11期1924-1928,共5页
目的通过观察keap-1-Nrf2通路调控claudin-2蛋白表达变化,探讨健脾清热活血方防治溃疡性结肠炎的效用机制。方法90只SPF级雄性SD大鼠随机分为6组,除外正常组,其余各组均采用TNBS灌肠法制备溃疡性结肠炎模型,自第7日起分组给药,模型组予... 目的通过观察keap-1-Nrf2通路调控claudin-2蛋白表达变化,探讨健脾清热活血方防治溃疡性结肠炎的效用机制。方法90只SPF级雄性SD大鼠随机分为6组,除外正常组,其余各组均采用TNBS灌肠法制备溃疡性结肠炎模型,自第7日起分组给药,模型组予等剂量生理盐水,中药低、中、高剂量组予不同剂量健脾清热活血方,西药组予美沙拉嗪灌胃,连续14d。末次给药后腹腔麻醉处死全部大鼠,截取病变部位肠段备测。HE染色检测结肠组织病理学变化;透射电镜检测结肠黏膜超微结构变化;免疫组化SP法检测结肠环氧氯丙烷结合蛋白1(keap-1)、Nrf2以及claudin-2蛋白表达变化。结果光镜提示模型组结肠黏膜表面出现缺损或脱落坏死,溃疡形成,隐窝结构消失、脓肿形成,固有层大量炎性细胞浸润,黏膜下层充血肿胀;治疗组较模型组有明显改善,见结肠黏膜尚完整,但存在黏膜缺损,隐窝脓肿,部分可见出血点,较多炎性细胞浸润固有层。电镜下见模型组结肠上皮细胞微绒毛稀疏,线粒体肿胀变大,细胞间紧密连接消失,可见细胞处于坏死期;中药组见上皮细胞体积明显变小、核固缩、凋亡小体形成,局灶可见坏死。模型组结肠keap-1、Nrf2蛋白表达下降,claudin-2蛋白表达上升;治疗后,中药组结肠keap-1、Nrf2蛋白表达上升,claudin-2蛋白表达下降;经比较,差异有统计学意义(P<0.05);但是中药组之间不存在组间差异(P>0.05)。结论健脾清热活血方通过上调Keap-1、Nrf2表达,下调claudin-2表达而发挥防治溃疡性结肠炎的效用。 展开更多
关键词 溃疡性结肠炎 健脾清热活血方 氧化应激 keap-1-Nrf2通路 claudin-2 大鼠
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Claudin-2在胆固醇结石形成过程中的作用及其机制研究 被引量:2
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作者 陈跃 冯亚东 赵向阳 《胃肠病学》 2019年第11期667-670,共4页
背景:Claudin蛋白家族是构成细胞紧密连接的重要分子,其中claudin-2是一种在肝细胞和胆管细胞中高表达的细胞旁通道形成蛋白,具有水分子和阳离子的选择渗透性,在消化和泌尿系统中发挥至关重要的生理调控作用。目的:探讨claudin-2在胆固... 背景:Claudin蛋白家族是构成细胞紧密连接的重要分子,其中claudin-2是一种在肝细胞和胆管细胞中高表达的细胞旁通道形成蛋白,具有水分子和阳离子的选择渗透性,在消化和泌尿系统中发挥至关重要的生理调控作用。目的:探讨claudin-2在胆固醇结石形成和胆汁分泌过程中的作用及其机制。方法:收集claudin-2基因敲除(Cldn-2-/-)小鼠和野生型(Cldn-2+/+)小鼠的肝脏和胆囊组织,以蛋白质印迹法检测claudin蛋白家族的表达,HE染色、免疫荧光染色和电镜观察敲除claudin-2基因对肝脏和胆囊组织结构的影响。并分析claudin-2蛋白对胆汁成分和流速的调控作用。结果:Claudin家族蛋白在Cldn-2+/+小鼠肝脏和胆囊组织中高表达。与Cldn-2+/+小鼠相比,Cldn-2-/-小鼠肝脏和胆囊组织结构无明显差异,胆汁流速明显降低(P<0.05),胆汁浓度明显增加(P<0.05),肝脏和胆囊胆汁中的胆汁酸、胆固醇、胆红素、磷脂含量显著增加(P<0.05)。结论:Claudin-2蛋白通过调控胆汁成分和细胞紧密连接中的水分子旁分泌过程,影响胆汁的形成,这一过程的失调显著增加了小鼠对胆固醇结石相关疾病的易感性。 展开更多
关键词 胆固醇结石 claudin-2 小鼠 基因敲除 胆汁
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溃疡性结肠炎组织中cingulin、claudin-2表达量与菌群紊乱、氧化应激及炎症的相关性 被引量:9
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作者 樊敏学 刘琰 冯义朝 《海南医学院学报》 CAS 2018年第24期2117-2120,2124,共5页
目的:探讨溃疡性结肠炎组织中cingulin、claudin-2表达量与菌群紊乱、氧化应激及炎症的相关性。方法:选取在本院确诊并作为UC组的UC患者70例,同期至本院进行肠镜体检的结肠息肉患者90例作为结肠息肉组。对比两者肠道病变组织中cingulin... 目的:探讨溃疡性结肠炎组织中cingulin、claudin-2表达量与菌群紊乱、氧化应激及炎症的相关性。方法:选取在本院确诊并作为UC组的UC患者70例,同期至本院进行肠镜体检的结肠息肉患者90例作为结肠息肉组。对比两者肠道病变组织中cingulin、claudin-2蛋白表达量以及粪便标本中菌群分布、血清中氧化应激及炎症相关指标的差异。结果:UC组结肠病灶中cingulin、claudin-2蛋白表达量高于结肠息肉组;肠道内大肠杆菌的计数高于结肠息肉组,双歧杆菌、乳酸杆菌的计数值低于结肠息肉组;血清中氧化应激指标GSH-Px、T-AOC的含量低于结肠息肉组,ROS、LHP的含量高于结肠息肉组;血清中炎症因子IL-4、IL-6、IL-17、IL-23、TGF-β的含量均高于结肠息肉组。相关性分析显示:UC病灶组织中cingulin、claudin-2蛋白表达量与菌群紊乱、氧化应激及炎症反应指标均直接相关。结论:UC病灶中存在cingulin、claudin-2异常高表达,可推进机体肠道菌群紊乱及全身炎症应激反应。 展开更多
关键词 溃疡性结肠炎 CINGULIN claudin-2 菌群紊乱 氧化应激反应 炎症反应
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慢性脑低灌注对大鼠回肠黏膜Occludin及Claudin-2表达的影响 被引量:2
9
作者 李思宇 王庆松 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2020年第32期5186-5191,共6页
背景:前期研究发现,慢性脑低灌注可致大鼠肠道黏膜屏障发生改变,而闭合蛋白occludin及claudin是构成肠道黏膜屏障的重要组成部分。目的:探讨慢性脑低灌注对大鼠回肠黏膜屏障的影响。方法:20只健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术... 背景:前期研究发现,慢性脑低灌注可致大鼠肠道黏膜屏障发生改变,而闭合蛋白occludin及claudin是构成肠道黏膜屏障的重要组成部分。目的:探讨慢性脑低灌注对大鼠回肠黏膜屏障的影响。方法:20只健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术和慢性脑低灌注组。慢性脑低灌注组通过永久结扎双侧颈总动脉建立大鼠慢性脑低灌注模型;假手术组双侧颈总动脉只分离而不结扎和剪断。术后4周通过苏木精-伊红染色观察大鼠回肠组织形态学变化并评分,TUNEL荧光染色检测回肠细胞凋亡情况,Westernblot检测回肠紧密连接蛋白Claudin-2,Occludin的表达水平,免疫组织化学检测Occludin表达变化。实验方案经西部战区总医院动物实验伦理委员会批准。结果与结论:①苏木精-伊红染色形态学观察显示,与假手术组相比,慢性脑低灌注组大鼠回肠组织形态结构出现损伤不明显,病理评分无显著升高(P>0.05);②Western blot结果显示,与假手术组相比,慢性脑低灌注组大鼠回肠组织claudin-2表达升高,而Occludin表达降低(P<0.05);③TUNEL荧光染色显示,与假手术组相比,慢性脑低灌注组的细胞凋亡比例显著升高(P<0.05);④免疫组织化学结果显示,慢性脑低灌注组大鼠回肠组织Occludin表达降低(P<0.05);⑤结果说明,慢性脑低灌注会导致回肠黏膜屏障紧密连接蛋白Occludin表达降低及Claudin-2升高,可能存在一定肠道黏膜屏障功能损伤。 展开更多
关键词 卒中 慢性脑低灌注 claudin-2 OCCLUDIN 肠黏膜屏障 动物 模型
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溃结灵IV号对溃疡性结肠炎大鼠结肠粘膜Claudin-2、ZO-1、ICAM-1、TLR2基因表达的影响
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作者 宋宁宁 程丽敏 +1 位作者 宋晓霞 黄爱凤 《临床医学进展》 2022年第2期838-845,共8页
目的:观察溃结灵IV号保留灌肠对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠黏膜claudin-2、ZO-1、ICAM-1、TLR2基因表达的影响,探讨其治疗UC的可能机制。方法:实验于2015年6~8月在哈尔滨工业大学生命科学与工程学院实验室进行... 目的:观察溃结灵IV号保留灌肠对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠黏膜claudin-2、ZO-1、ICAM-1、TLR2基因表达的影响,探讨其治疗UC的可能机制。方法:实验于2015年6~8月在哈尔滨工业大学生命科学与工程学院实验室进行。SD大鼠60只,留取10只作为空白对照(BC)组,其余大鼠利用TNBS溶液灌肠法诱导制作UC大鼠模型,造模后随机分为模型对照(MC)组,溃结灵IV号低剂量(LD)组、中剂量(MD)组、高剂量(HD)组和阳性对照组美沙拉嗓(PC)组。HD、MD、LD组分別采用溃结灵IV号高(40 g/kg)、中(20 g/kg)、低(10 g/kg) 3个剂量保留灌肠给药,PC组使用美沙拉嗪(0.4 g/kg)进行灌肠给药,BC组及MC组给等体积的蒸馏水,检测大鼠结肠黏膜claudin-2、ZO-1、ICAM-1、TLR2基因表达,观察溃结灵IV号保留灌肠对TNBS诱导的UC大鼠结肠组织的影响。结果:1) 闭合蛋白-2 (claudin-2),mRNA的表达:经PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳后,在200 bp至250 bp位置可见电泳条带(Cldn2 244 bp)。结果表明溃结灵IV号高剂量、中剂量组及美沙拉嗪组claudin-2的mRNA表达明显增强,与空白组的表达接近,甚至略强于空白组的表达,模型组、溃结灵IV号高低剂量组claudin-2的mRNA略有的表达,表达不明显。2) 细胞粘附分子-1 (intercellular adhesion molecule, ICAM-1) mRNA的表达:经PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳后,在200 bp至250 bp位置可见电泳条带(ICAM-1 211 bp)。结果表明正常组ICAM-1的mRNA表达不明,美沙拉嗪组ICAM-1的mRNA表达较正常组弱,溃结灵IV号高剂量、中剂量、低剂量及模型组ICAM-1的mRNA表达明显增强,明显高于空白组的表达。3) TLR2 (toll样受体2, Toll-like receptors 2) mRNA的表达:经PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳后,在200 bp至250 bp位置可见电泳条带(TLR2 246 bp)。结果表明正常组TLR2的mRNA表达较弱,美沙拉嗪组、溃结灵IV号高剂量、中剂量组TLR2的mRNA表达较模型组和溃结灵IV号低剂量组明显减弱,模型组和溃结灵IV号低剂量组TLR2的mRNA表达明显增强,明显高于正常组的表达。 展开更多
关键词 溃结灵IV号 claudin-2 ZO-1 ICAM-1 TLR2 美沙拉嗪
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Claudin-2蛋白在食管鳞癌组织中的表达及其对KYSE-450细胞恶性生物学行为的影响
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作者 尚晋文 贾培君 +1 位作者 张丽亚 张成娟 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期482-488,共7页
目的:分析Claudin-2蛋白在食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinomas,ESCC)组织中的表达及其与患者临床病理特征、5年生存率的关系,探索其对ESCC细胞KYSE450的增殖、迁移和侵袭的影响。方法:选取河南省肿瘤医院2010至2013年间初治... 目的:分析Claudin-2蛋白在食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinomas,ESCC)组织中的表达及其与患者临床病理特征、5年生存率的关系,探索其对ESCC细胞KYSE450的增殖、迁移和侵袭的影响。方法:选取河南省肿瘤医院2010至2013年间初治的ESCC患者手术切除肿瘤组织52例及其中20例对应的癌旁组织标本,采用免疫组化和WB法检测Claudin-2的表达并分析其与患者临床病理特征和5年生存率的关系。WB法检测ESCC细胞(KYSE450、KYSE150、KYSE510、KYSE140)和人永生化食管上皮细胞SHEE中Claudin-2的表达,构建Claudin-2 shRNA慢病毒载体并转染KYSE450细胞构建敲低Claudin-2表达的细胞系,进一步通过克隆形成实验、细胞划痕实验及Transwell实验检测敲低Claudin-2对KYSE450细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果:ESCC组织中Claudin-2阳性率显著高于癌旁组织(P<0.05),ESCC组织中Claudin-2的表达与淋巴结转移有关(P<0.05)。Claudin-2表达阳性患者5年生存率显著低于阴性者(P<0.05)。成功构建敲低Claudin-2表达的KYSE450细胞系。sh-Claudin-2组细胞的克隆形成数、伤口愈合率和侵袭细胞数均显著低于sh-NT组和对照组(P<0.05)。结论:ESCC组织中Claudin-2的表达高于癌旁组织,且与患者5年生存率呈负相关,Claudin-2能够增强KYSE450细胞的增殖、迁移和侵袭能力。 展开更多
关键词 食管鳞癌 claudin-2 KYSE450细胞 增殖 侵袭
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Correlation of cingulin and claudin-2 expression in ulcerative colitis tissues with intestinal flora disturbance, oxidative stress and inflammation
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作者 Min-Xue Fan Yan Liu Yi-Zhao Feng 《Journal of Hainan Medical University》 2018年第24期15-19,共5页
Objective:To investigate the correlation of cingulin and claudin-2 expression in ulcerative colitis (UC) tissues with intestinal flora disturbance, oxidative stress and inflammation. Methods: 70 patients with UC who w... Objective:To investigate the correlation of cingulin and claudin-2 expression in ulcerative colitis (UC) tissues with intestinal flora disturbance, oxidative stress and inflammation. Methods: 70 patients with UC who were diagnosed in our hospitals between July 2013 and February 2018 were selected as the UC group, and 90 patients with colonic polyps who underwent colonoscopy in our hospitals during the same period were selected as the colon polyps group. The differences in cingulin and claudin-2 protein expression in intestinal lesions, intestinal flora distribution in feces specimens as well as indexes related to oxidative stress and inflammation in serum were compared between the two groups.Results: cingulin and claudin-2 protein expression in colon lesions of UC group were higher than those of colon polyps group;Escherichia coli count in intestinal tract was higher than that of colon polyps group whereas bifidobacterium and lactobacillus count were lower than those of colon polyps group;oxidative stress indexes GSH-Px and T-AOC contents in serum were lower than those of colon polyps group whereas ROS and LHP contents were higher than those of colon polyps group;inflammatory factors IL-4, IL-6, IL-17, IL-23 and TGF-β contents in serum were higher than those of colon polyps group. Correlation analysis showed that the cingulin and claudin-2 protein expression in UC lesion tissues were directly correlated with the intestinal flora disturbance, oxidative stress response indexes and inflammatory response indexes. Conclusion: Abnormal high expression of cingulin and claudin-2 in UC lesions can promote the intestinal flora disturbance and systemic inflammatory stress response. 展开更多
关键词 ULCERATIVE colitis CINGULAR claudin-2 Intestinal FLORA DISTURBANCE Oxidative stress RESPONSE Inflammatory RESPONSE
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35kDa透明质酸调控蛋白ZO-1和Claudin-2治疗新生小鼠坏死性结肠炎
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作者 李天如 张颖 +1 位作者 马明霞 谈宁 《解剖科学进展》 CAS 2023年第1期106-108,112,共4页
目的探讨35kDa透明质酸对新生小鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)的影响及可能机制。方法新生8日龄的C57BL/6J小鼠30只随机分为对照组、NEC模型组与NEC+HA35组,每组10只,建模3d后处死。HE染色观察各组小鼠肠组织病理学改变;酶联免疫吸附实验检... 目的探讨35kDa透明质酸对新生小鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)的影响及可能机制。方法新生8日龄的C57BL/6J小鼠30只随机分为对照组、NEC模型组与NEC+HA35组,每组10只,建模3d后处死。HE染色观察各组小鼠肠组织病理学改变;酶联免疫吸附实验检测各组小鼠血清炎症因子IL-6和TNF-α的表达水平;蛋白免疫印迹法检测各组小鼠肠组织中紧密连接蛋白ZO-1和Claudin-2的表达;实时荧光定量PCR检测各组小鼠肠组织中ZO-1 mRNA和Claudin-2 mRNA的表达。结果与对照组相比,模型组小鼠血清IL-6和TNF-α的表达水平明显升高,肠组织中ZO-1和Claudin-2的表达明显下调(P<0.05)。35kDa透明质酸能够降低模型组小鼠血清IL-6和TNF-α的表达水平,上调肠组织中ZO-1和Claudin-2的表达(P<0.05)。结论35kDa透明质酸能够减轻新生小鼠坏死性小肠结肠炎的炎症反应,机制可能与调控ZO-1和Claudin-2的表达相关。 展开更多
关键词 透明质酸35kDa 坏死性小肠结肠炎 ZO-1 claudin-2
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痛泻要方对肝郁脾虚型UC大鼠结肠组织Claudin-1、ZO-1及血清COX-2、iNOS表达的影响 被引量:2
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作者 樊俐慧 朱向东 +1 位作者 杨霞 王志刚 《中医药信息》 2023年第8期15-22,共8页
目的:探讨痛泻要方对肝郁脾虚型溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型大鼠血清中环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(induced nitric oxide synthase,iNOS)含量及结肠组织中密封蛋白1(Claudin-1)、紧密连接蛋... 目的:探讨痛泻要方对肝郁脾虚型溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型大鼠血清中环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(induced nitric oxide synthase,iNOS)含量及结肠组织中密封蛋白1(Claudin-1)、紧密连接蛋白1(ZO-1)基因及蛋白表达的影响。方法:100只Wistar大鼠用病-证结合法复建肝郁脾虚型UC模型,按随机数字表法将造模组大鼠分为模型组(10 g/kg蒸馏水灌胃),美沙拉嗪组(0.4 g/kg美沙拉嗪灌胃),痛泻要方高、中、低剂量组(20.8、10.4、5.2 g/kg痛泻要方灌胃),每组20只。另取20只正常大鼠作为空白组(10 g/kg蒸馏水灌胃),各组灌胃体积均为10 mL/kg,连续21 d。药物治疗结束后,取血清及结肠组织,ELISA法检测血清中COX-2、iNOS含量;观察结肠组织大体形态及损伤情况,HE染色观察病理表现,RT-qPCR法检测Claudin-1、ZO-1 mRNA表达,免疫组化法和Western blot法检测Claudin-1、ZO-1平均光密度值及蛋白表达。结果:光镜观察显示,模型组大鼠结肠黏膜充血、水肿,炎性细胞浸润,细胞间紧密连接断裂;经痛泻要方干预后,大鼠结肠黏膜病理变化明显改善,细胞间紧密连接正常。与空白组比较,模型组大鼠血清中COX-2、iNOS含量明显升高(P<0.01);Claudin-1、ZO-1 mRNA、平均光密度值和蛋白表达明显降低(P<0.01)。与模型组比较,美沙拉嗪组COX-2、iNOS含量降低(P<0.01);痛泻要方高、中剂量组COX-2、iNOS含量显著降低(P<0.01),痛泻要方低剂量组COX-2、i NOS含量降低(P<0.05);美沙拉嗪组及痛泻要方高、中剂量组Claudin-1、ZO-1 mRNA平均光密度值及蛋白表达量显著升高(P<0.01);痛泻要方低剂量组Claudin-1、ZO-1 mRNA表达量与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05);痛泻要方低剂量组Claudin-1、ZO-1平均光密度值升高(P<0.05),蛋白表达升高(P<0.01,P<0.05)。结论:痛泻要方治疗肝郁脾虚型UC的作用可能与上调关键蛋白Claudin-1、ZO-1的表达量及降低炎症细胞因子COX-2、iNOS的含量有关。 展开更多
关键词 痛泻要方 溃疡性结肠炎 密封蛋白1 紧密连接蛋白1 环氧合酶-2 诱导型一氧化氮合酶
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除湿胃苓汤对小鼠特异性皮炎的治疗作用及组织ERK1/2、Claudin 1表达的影响
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作者 徐舰 陈琳瑶 《浙江中医药大学学报》 CAS 2024年第5期541-547,共7页
[目的]探究除湿胃苓汤(Chushi Weiling Decoction,CSWLD)对特异性皮炎(atopic dermatitis,AD)小鼠的皮损改善效果,以及对组织细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2,ERK1/2)、紧密连接蛋白1(Claudin 1)表达... [目的]探究除湿胃苓汤(Chushi Weiling Decoction,CSWLD)对特异性皮炎(atopic dermatitis,AD)小鼠的皮损改善效果,以及对组织细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2,ERK1/2)、紧密连接蛋白1(Claudin 1)表达的影响。[方法]采用二硝基氟苯(dinitro fluoro benzene,DNFB)诱导建立小鼠AD模型,随机分为模型组(0.9%氯化钠溶液)和低、中、高CSWLD组(5、10、20 mL·kg^(-1)),另设置空白组(0.9%氯化钠溶液),各组均以相应药物灌胃1周。给药结束后,评价皮损改善情况,并行炎症评分。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清白细胞介素-33(interleukin-33,IL-33)、IL-6、IL-4、CC类趋化因子配体-5(C-C motif chemokine ligand-5,CCL-5)和CCL-2含量。取皮损部位组织,以免疫组化染色测定IL-33、肿瘤抑制素2(suppression of tumorigenicity 2,ST2)、Claudin 1含量;以定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)和免疫印迹检测ERK1/2、Claudin 1的mRNA和蛋白表达。[结果]与空白组比较,模型组小鼠皮肤红肿、干燥、结痂明显,炎症评分增加,血清IL-33、IL-6、IL-4、CCL-5、CCL-2含量升高,组织IL-33、ST2含量增加,Claudin 1 mRNA表达降低,ERK1/2 mRNA表达升高,Claudin 1蛋白表达降低,ERK1/2磷酸化产物(phosphorylated-ERK1/2,p-ERK1/2)与ERK1/2蛋白比值增加(均P<0.01)。在给予不同剂量CSWLD后,小鼠皮损部位红肿消退,结痂脱落,症状减轻。与模型组比较,中、高CSWLD组小鼠炎症评分降低,血清IL-33、IL-6、IL-4、CCL-5、CCL-2含量下降,组织IL-33、ST2含量降低,Claudin 1 mRNA表达升高,ERK1/2 mRNA表达降低,Claudin 1蛋白表达升高,p-ERK1/2与ERK1/2蛋白比值降低(P<0.05,P<0.01);而低CSWLD组小鼠的各项指标差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]CSWLD可下调炎性介质,并能抑制组织ERK1/2表达、促进组织Claudin 1表达,缓解AD小鼠皮损症状。 展开更多
关键词 除湿胃苓汤 特异性皮炎 皮损 IL-33/ST2信号通路 Claudin 1 ERK1/2
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Claudin-1、2、3、4在胃癌中的表达 被引量:1
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作者 刘志勇 欧阳忠 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期760-763,共4页
目的探讨Claudin-1、Claudin-2、Claudin-3及Claudin-4在胃癌组织中的表达及意义。方法选取手术切除的胃癌患者72例,术后均经病理证实为胃癌,且未合并其他肿瘤疾病,应用免疫组化ABC法检测胃癌手术标本中Claudin-1、Claudin-2、Claudin-3... 目的探讨Claudin-1、Claudin-2、Claudin-3及Claudin-4在胃癌组织中的表达及意义。方法选取手术切除的胃癌患者72例,术后均经病理证实为胃癌,且未合并其他肿瘤疾病,应用免疫组化ABC法检测胃癌手术标本中Claudin-1、Claudin-2、Claudin-3和Claudin-4的表达。结果 Claudin-2的表达率为73.6%,Claudin-4的表达率为44.4%。Claudin-1在腺癌中的表达水平明显降低,Claudin-3、Claudin-4在淋巴转移阳性中的表达更低,Claudin-3在T3、T4中的表达明显降低。Claudin-3与其他Claudin蛋白质具有显著相关性。在生存分析里,Claudin-4与良好的预后有关。结论 Claudin-3与Claudin-4可以作为胃癌的分子标志物,检测Claudin-3与Claudin-4在淋巴侵袭中具有重要意义。 展开更多
关键词 胃癌 claudin-1 claudin-2 claudin-3 claudin-4
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Claudin-1、Claudin-2、Claudin-3和Claudin-4在胃癌中的表达及其意义
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作者 刘志勇 欧阳忠 《国际免疫学杂志》 CAS 2013年第1期70-74,共5页
目的探讨Claudin-1、Claudin-2、Claudin-3和Claudin-4在胃癌组织中的表达及意义。方法选取手术切除的胃癌患者72例,术后均经病理证实为胃癌,且未合并其它肿瘤疾病,应用免疫组化ABC法检测胃癌手术标本中Claudin-1、Claudin-2、Claudi... 目的探讨Claudin-1、Claudin-2、Claudin-3和Claudin-4在胃癌组织中的表达及意义。方法选取手术切除的胃癌患者72例,术后均经病理证实为胃癌,且未合并其它肿瘤疾病,应用免疫组化ABC法检测胃癌手术标本中Claudin-1、Claudin-2、Claudin-3和Claudin-4的表达。结果本样品中Clau—din-2的表达率为73.6%,Claudin4的表达率为44.4%,Claudin-1在腺癌中的表达水平明显降低,Clau—din-3和Claudin-4在淋巴转移阳性中的表达更低,Claudin-3在r13、T4中的表达明显降低,Claudin-3与其它Claudin蛋白质具有显著相关性,在患者生存分析里,Claudin-4与良好的预后有关。结论Claudin-3与Claudin-4可以作为胃癌的分子标志物,在淋巴侵袭的病例中检测Claudin-3与Claudin-4具有显著意义。 展开更多
关键词 胃癌 claudin-1 claudin-2 claudin-3 claudin-4
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健脾清热活血类方药对溃疡性结肠炎肠黏膜功能障碍及claudin-2、claudin-5的影响 被引量:8
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作者 洪流东 黄会云 +2 位作者 陈玉 陈思羽 张涛 《中国中西医结合消化杂志》 CAS 2015年第9期599-603,607,共6页
[目的]基于检测溃疡性结肠炎结肠黏膜组织形态、超微结构、上皮紧密连接,及紧密连接蛋白claduin-2、claudin-5表达的变化,探讨健脾清热活血方防治溃疡性结肠炎的可能机制。[方法]72只雄性Balb-c小鼠按体重随机分为6组,即正常组、模型组... [目的]基于检测溃疡性结肠炎结肠黏膜组织形态、超微结构、上皮紧密连接,及紧密连接蛋白claduin-2、claudin-5表达的变化,探讨健脾清热活血方防治溃疡性结肠炎的可能机制。[方法]72只雄性Balb-c小鼠按体重随机分为6组,即正常组、模型组、对照组、治疗组(低、中、高剂量),每组12只。除正常组外,其余各组小鼠均采用自由饮用3%DSS 6周法制备溃疡性结肠炎模型,自第7周起分组给药,模型组予等剂量生理盐水,对照组予艾迪莎,治疗组予不同剂量健脾清热活血方,连续给药4周,第11周末处死全部小鼠。应用光镜、透射电镜及免疫组织化学观察结肠黏膜组织形态、超微结构及黏蛋白变化;应用荧光定量PCR技术检测紧密连接蛋白claudin-2、claduin-5表达变化。[结果]模型组光镜下见结肠黏膜不同程度缺损、溃疡形成,表面可见坏死组织,以及隐窝脓肿形成;电镜下见肠上皮细胞表面微绒毛稀疏,细胞连接间隙增宽,杯状细胞减少,线粒体肿胀,结构不清或呈空泡变,部分可见核固缩,并见凋亡小体;结肠黏蛋白分泌下降。治疗组光镜下见结肠黏膜充血肿胀、少量炎性细胞浸润,可见隐窝脓肿,未见明显溃疡;电镜下见肠上皮细胞表面绒毛排列尚整齐,可见线粒体肿胀,核固缩及凋亡小体;结肠黏蛋白分泌增加,与模型组比较,有统计学意义(P<0.05)。模型组claudin-2表达呈上升趋势、claudin-5表达呈下降趋势;治疗组claudin-2表达下降及claudin-5表达上升,经比较有统计学意义(P<0.05)。[结论]健脾清热活血方药可能通过降低claudin-2表达、上升claudin-5表达,促进黏膜修复,达到缓解溃疡性结肠炎的效用。 展开更多
关键词 claudin-2 claudin-5 肠黏膜功能障碍 溃疡性结肠炎 健脾清热活血方
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从结肠黏膜超微结构变化及Claudin-2、5表达探讨健脾清热活血方干预溃疡性结肠炎的临床研究 被引量:6
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作者 绳荣湍 陈良荣 +2 位作者 方健松 张涛 邱燕婷 《中国中西医结合消化杂志》 CAS 2020年第9期688-692,共5页
[目的]从治疗前后中医症状、Claudin-2、5表达水平及黏膜超微结构变化,探讨健脾清热活血方干预溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。[方法]选取临床符合纳入标准的50例UC患者,随机分为治疗组和对照组,每组各25例,分别给予健脾清热活血方和美沙... [目的]从治疗前后中医症状、Claudin-2、5表达水平及黏膜超微结构变化,探讨健脾清热活血方干预溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。[方法]选取临床符合纳入标准的50例UC患者,随机分为治疗组和对照组,每组各25例,分别给予健脾清热活血方和美沙拉嗪治疗,疗程为12周。应用结肠镜复查及组织病理学技术比较治疗前后结肠黏膜组织学Geboes评分;应用免疫组化检测结肠黏膜Claudin-2和Claudin-5表达;应用透射电镜检测结肠黏膜超微结构改变;记录治疗前及治疗后4、8、12周中医证状积分,主客观指标合参评估健脾清热活血方的临床效用。[结果]从总体疗效分析,治疗组(80.0%)和对照组(76.0%)对比差异无统计学意义。从主要效应指标分析,治疗后,2组患者肠镜评分、肠黏膜组织学评分较治疗前显著降低(P<0.05),但组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。从次要效应指标分析,治疗前2组患者中医症状积分比较差异无统计学意义;治疗后12周综合症状积分较治疗前明显降低(P<0.05);治疗后4周及8周症状积分虽有下降,与治疗前比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后Claudin-2表达比治疗前显著下调;Claudin-5表达比治疗前显著上调(P<0.05)。电镜下治疗前上皮细胞微绒毛稀疏、变短,细胞间连接松散间隙增宽;治疗后上皮细胞微绒毛排列整齐结构基本完整,细胞间相互连接紧密。[结论]健脾清热活血方可能通过下调Claudin-2、上调Claudin-5表达,修复肠黏膜机械屏障,诱导肠黏膜炎症缓解,从而发挥治疗效用。 展开更多
关键词 溃疡性结肠炎 健脾清热活血方 claudin-2 claudin-5 结肠黏膜超微结构
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紧密连接蛋白claudin-2在急性肾损伤患儿肾组织中的表达及意义 被引量:1
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作者 张良 李志辉 +1 位作者 邓旭 银燕 《中国当代儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期361-365,共5页
目的研究紧密连接蛋白claudin-2在急性肾损伤(AKI)患儿肾组织中的表达变化,探讨claudin-2与肾脏病理损害及肾功能损害程度的关系。方法 2009年12月至2011年12月确诊为AKI并完善肾活检的24例患儿,依据病情严重程度分为轻症组(n=7)及重症... 目的研究紧密连接蛋白claudin-2在急性肾损伤(AKI)患儿肾组织中的表达变化,探讨claudin-2与肾脏病理损害及肾功能损害程度的关系。方法 2009年12月至2011年12月确诊为AKI并完善肾活检的24例患儿,依据病情严重程度分为轻症组(n=7)及重症组(n=17)。对照组为12例肾小球轻微病变的孤立性血尿患儿。采用全自动生化分析仪比色法检测血清肌酐水平;采用肾脏病理计量评分法对肾小管间质损害程度进行分析;免疫组织化学方法检测肾组织claudin-2的表达;Pearson相关分析评估claudin-2与患儿肾脏病理评分及血肌酐水平间的关系。结果 AKI轻症组(190±68μmol/L)与AKI重症组(477±128μmol/L)血清肌酐水平均高于对照组(29±7μmol/L)(均P<0.01),且AKI重症组血清肌酐水平高于AKI轻症组(P<0.01)。AKI轻症组患儿肾小管间质损害计分(10.4±1.7分)低于重症组(14.0±1.5分)(P<0.05)。AKI轻症组(5.0%±0.5%)与AKI重症组(3.7%±0.7%)claudin-2阳性表达面积均低于对照组(8.0%±0.7%)(均P<0.01),且AKI重症组claudin-2阳性表达面积低于AKI轻症组(P<0.01)。claudin-2阳性表达面积与血肌酐水平及肾小管间质的病理损害评分均呈负相关(分别r=-0.809、-0.903,均P<0.01)。结论 AKI患儿肾组织claudin-2的表达水平发生变化,且claudin-2的表达水平与肾脏病理损害程度及肾功能损害程度密切相关。 展开更多
关键词 急性肾损伤 CLAUDIN 2 病理 肾功能 儿童
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