不同产地板蓝根药材中clemastanin B的含量比较

目的：建立板蓝根中抗病毒有效成分clemastanin B的高效液相色谱测定方法,测定不同产地板蓝根中clemas-tanin B的含量。方法：采用反相高效液相色谱法,色谱柱为ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm,5μm） 流动相为乙腈-水11∶89 流速为1.0 mL.min-1 检测波长为225 nm,柱温为30℃。结果：clemastanin B在0.061 5~1.844 1μg与峰面积线性关系良好（r=0.999 5）,平均加样回收率为97.74%,RSD 1.4% 测得8批板蓝根中clemastanin B的质量分数为0.269~0.900 mg.g-1,其中以河北安国产板蓝根药材中clemastanin B含量最高,安徽阜阳、河北承德和安徽亳州产的次之,其他几个产地的含量相对略低,甘肃岷县产的最低。结论：该方法准确、可靠,可用于板蓝根药材的测定。

HPLC法测定板蓝根颗粒中直铁线莲宁B和异落叶松脂素的含量

目的建立板蓝根颗粒中抗病毒活性成分落叶松脂素-4,4'-二-O-β-D-二葡萄糖苷(直铁线莲宁B,clemastanin B)和异落叶松脂素(isolariciresinol)的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法。结果直铁线莲宁B、异落叶松脂素分别在0.1472μg～1.7664μg、0.0608μg～0.3648μg范围内与峰面积呈良好线性关系,r分别为0.9999、0.9991,平均加样回收率分别为95.76%、97.94%,RSD分别为2.76%、1.69%。结论本方法简便、灵敏、结果可靠,可作为板蓝根颗粒质量控制的定量方法。

直铁线莲宁B在人肝微粒体中的体外代谢研究

目的应用人源肝微粒体孵育体系考察直铁线莲宁B的体外代谢。方法将直铁线莲宁B与人肝微粒体共同温孵,用蛋白沉淀法处理样品,采用LC-MS/MS法对代谢产物进行定性和定量分析。色谱条件:Phenomenex Luna C18色谱柱(100 mm×2.0 mm,5μm);流动相:乙腈(含0.1%甲酸)-水(含0.1%甲酸),梯度洗脱;流速400μL·min^(-1);进样量10μL。质谱条件:电喷雾离子源,负离子模式检测。结果直铁线莲宁B(化合物1)在人肝微粒孵育体系中可代谢为落叶松脂醇-4-O-β-D-葡萄糖苷(化合物2)和落叶松脂醇-4′-O-β-D-葡萄糖苷(化合物3)。结论在人肝微粒孵育体系中,直铁线莲宁B可以部分代谢为抗流感活性更强的化合物2,提示在体内可能通过原型药和活性代谢物共同发挥抗流感药效,为该化合物药效评价提供了重要依据。

不同发育期菘蓝和毛状根中直铁线莲宁B的含量变化规律研究

目的:测定不同生长时期菘蓝及不同悬浮培养时间毛状根中抗流感病毒活性成分直铁线莲宁B的含量,研究其累积变化规律,为菘蓝的采收和菘蓝毛状根体系评价提供参考。方法:应用超高效液相色谱测定菘蓝叶片、根及毛状根中直铁线莲宁B的含量。结果:菘蓝叶片中未检测到直铁线莲宁B;在整个生育期内,菘蓝根中直铁线莲宁B动态累积变化曲线为"单峰型",含量在生长100 d左右达到峰值后逐渐降低;毛状根中直铁线莲宁B含量随悬浮培养时间持续增加,在20 d达到5.40 mg·g^(-1),超过根中最大含量。结论:整个生长周期内,菘蓝和毛状根中直铁线莲宁B累积变化呈一定规律性,原植物中直铁线莲宁B在九月下旬产量达到最大;毛状根在10~20 d期间直铁线莲宁B含量增长处于生长对数期,20 d后即超过原植物的最大含量,说明菘蓝毛状根体系是研究直铁线莲宁B生物合成的理想体系,也可为后续利用菘蓝毛状根体系大量制备直铁线莲宁B提供参考。

HPLC法测定板蓝根颗粒中直铁线莲宁B的含量

目的:建立HPLC法测定板蓝根颗粒中直铁线莲宁B(落叶松脂素-4,4’-二-O-β-D-二葡萄糖苷clemastanin B)的含量测定法,并考察28批次产品中直铁线莲宁B的含量,为板蓝根颗粒的质量控制提供依据。方法:色谱为:Angilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为甲醇-水(22∶78),等度洗脱。柱温为30℃,流速:1 mL·min^-1,检测波长为224 nm,进样量为10μL。结果:直铁线莲宁B在0.038,8~3.88μg范围内线性关系良好,r=0.999(n=6);平均加样回收率为103.61%,RSD=2.15%(n=6)。结论:本方法选取的指标化合物稳定,且操作简便,结果准确、专属性强、重复性好,可对板蓝根颗粒中直铁线莲宁B进行含量测定。

扬子铁线莲的化学成分研究

目的研究毛茛科铁线莲属植物扬子铁线莲[Clematis puberulaHook.f.&Thoms.var.ganpiniana(L啨vl.&Van.)W.T.Wang]全草的化学成分。方法采用大孔树脂、硅胶、反相制备型高效液相、Sehadex LH-20等色谱分离手段进行分离纯化,通过理化性质和光谱分析鉴定结构。结果分离鉴定了7个三萜皂苷和1个木脂素,分别为HN saponin H(Ⅰ),huzhangoside B(Ⅱ),hederacholichiside F(Ⅲ),clematichinenoside B(Ⅳ),huzhangoside D(Ⅴ),clematichinenoside C(Ⅵ),prosapogenin CP11(Ⅶ),clemastanin B(Ⅷ)。结论所有化合物均为首次从该植物中分离得到,其中hederacholichiside F为首次从本属植物中分离得到,prosapogenin CP首次作为原型皂苷从天然产物中分离得到。

D101大孔树脂富集纯化板蓝根木脂素活性部位的工艺研究

本文以板蓝根总木脂素和Clemastanin B的含量为指标探讨D101大孔树脂纯化板蓝根木脂素活性部位的工艺。通过对树脂比容积、吸附容量、吸附流速、泄漏曲线、水洗终点、径高比、梯度解吸、解吸曲线等参数的考察,从而得出富集纯化板蓝根木脂素活性部位的最佳工艺条件为:上样量5 BV,径高比1∶3,吸附流速4 BV/h,1BV水洗,5 BV的50%乙醇洗脱。并证明了所选的大孔树脂纯化工艺稳定、可靠,有效成分损失少,杂质去除率高,值得在生产中推广应用。

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS技术比较板蓝根和大青叶的化学成分

目的采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用(UPLC-Q-TOF-MS/MS)技术比较板蓝根Isatidis Radix和大青叶Isatidis Folium的化学成分。方法采用Accliam 120 C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm;Thermo Fisher),以0.1%甲酸的乙腈溶液-0.1%甲酸的水溶液为流动相,梯度洗脱,体积流量为0.3 mL/min,柱温为40℃,采用电喷雾离子源(ESI),在正、负离子模式下进行数据采集,以PeakView 1.2质谱分析软件分析数据。结果通过化合物的保留时间、精确质荷比、二级质谱裂解碎片等信息,结合对照品、参考文献和Massbank等数据库共鉴定或指认出板蓝根和大青叶的71个共有成分,主要包括生物碱、黄酮、木脂素、含硫化合物、有机酸等类化合物;板蓝根特有成分6个,主要包括含硫化合物类等;大青叶特有成分2个,均为生物碱类。结论该方法能够系统、快速地比较分析板蓝根和大青叶的化学成分,为其质量控制和药效物质基础研究提供了重要依据。

Antiviral activities against influenza virus(FM1) of bioactive fractions and representative compounds extracted from Banlangen(Radix Isatidis)

OBJECTIVE: To study the antiviral activities of clemastanin B(CB), epigoitrin, phenylpropanoids portion(PEP) and the mixture of phenylpropanoids, alkaloids and organic acid fractions(PEP+ALK+OA)from Banlangen(Radix Isatidis).METHODS: The experiment consisted of four parts:therapeutic action, prophylaxsis action, inhibition of virus attachment, and direct virucidal action. Cytopathic effect(CPE) and 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium(MTT) were used to assess antiviral activity.RESULTS: CB, epigoitrin, PEP and PEP + ALK + OA fractions from Banlangen(Radix Isatidis) extract significantly increased the viability of MDCK cells pre-infected with the virus compared with the virus control group in all the dilutions(P < 0.01). Pretreated with either pure compounds or chemical frac-tions of Banlangen(Radix Isatidis) extract in all the dilutions significantly improved the viability of MDCK cells(P < 0.01). The inhibition of virus absorption to the host cells by CB, epigoitrin and PEP was in a dose dependent manner.CONCLUSION: CB, epigoitrin, PEP and PEP+ALK+OA exert their anti-influenza activity by inhibiting the virus multiplication, prophylaxsis and blocking the virus attachment. The primary mode of action of PEP and PEP + ALK + OA is the inhibition of virus replication. The inhibitory effects on virus attachment and multiplication are the main modes for epigoitrin.

双标线性校正法用于板蓝根的多成分定性分析

目的:建立同时检测板蓝根中6个成分(尿苷、腺嘌呤、鸟苷、(R,S)-告依春、腺苷、直铁线莲宁B)的HPLC方法,考察双标线性校正(LCTRS)法对于板蓝根多成分定性分析的可行性。方法:采用HPLC法,以甲醇为流动相A,水为流动相B,梯度洗脱(0~3 min,3%A;3~18 min,3%A→14%A;18~25 min,14%A→26%A;25~34 min,26%A;34~40 min,26%A→46%A;40~60 min,46%A→90%A),流速0.8 mL·min^(-1),柱温30℃,检测波长为0~32 min,254 nm;32~60 min,230 nm,进样量10μL;测定板蓝根中6个成分在16根不同品牌和型号的C18色谱柱的实际保留时间,以鸟苷和直铁线莲宁B 2个成分作为双标化合物,采用LCTRS法定位各成分色谱峰,并用3根未知色谱柱进行方法验证。同时以鸟苷为参照物,采用RRT法预测其他5个成分的保留时间。比较这2种方法的预测准确性和色谱柱符合率。结果:LCTRS法能够较好地对6个指标性成分进行保留时间的预测和定性分析。与RRT法相比较,LCTRS法所预测结果准确性更高,色谱柱普适性更优。结论:LCTRS法用于同时测定板蓝根中多成分可行且准确,操作简便,耐用性好,具有推广价值。

一测多评法测定板蓝根中6种化学成分的含量

目的建立板蓝根Isatis indigotica中(R,S)-告依春、直铁线莲宁B、胞苷、鸟苷、尿苷、腺苷6种不同类成分的一测多评方法。方法采用HPLC法,以(R,S)-告依春为内参物,建立了(R,S)-告依春与胞苷、鸟苷、尿苷、腺苷和直铁线莲宁B的相对校正因子,并考察相对校正因子的耐用性和重现性。比较外标法和一测多评法对新疆软紫草中6种成分的测定结果。结果各相对校正因子重复性良好,一测多评法测定结果与外标法测定结果无显著差异。结论建立同时测定6种成分的一测多评法控制板蓝根的质量准确、可靠。

HPLC同时测定板蓝根颗粒中2种关键抗病毒成分的含量

目的建立HPLC同时测定板蓝根颗粒中(R,S)-告衣春和直铁线莲宁B含量的方法。方法采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水,梯度洗脱,流速为0.8 mL·min^-1,进样量为10μL,柱温为30℃,检测波长230 nm。结果(R,S)-告衣春、直铁线莲宁B在2.39~47.80μg·mL^-1(r=1.000 0)和3.18~63.60μg·mL^-1(r=0.999 9)内线性关系良好,平均加样回收率分别为100.90%(RSD=1.56%)和99.48%(RSD=1.08%)。结论本方法操作简便、准确稳定、专属性强、重复性好,可为提高板蓝根颗粒质量标准提供依据。