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分枝杆菌表达质粒的快速构建及ClpC2基因功能初步研究
1
作者
康月茜
卢楠
+2 位作者
孙菱
李岱容
杨春
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期158-163,共6页
目的通过一种不受到序列限制、酶切连接反应一步进行的分子克隆方法,构建分枝杆菌Clp C2重组表达质粒,检测其在耻垢分枝杆菌中的蛋白表达并对其功能进行初步探讨。方法利用识别甲基化位点的内切酶Fsp EⅠ进行一步法酶切、连接反应,构建...
目的通过一种不受到序列限制、酶切连接反应一步进行的分子克隆方法,构建分枝杆菌Clp C2重组表达质粒,检测其在耻垢分枝杆菌中的蛋白表达并对其功能进行初步探讨。方法利用识别甲基化位点的内切酶Fsp EⅠ进行一步法酶切、连接反应,构建重组质粒PMV261(+)-Clp C2。将重组质粒转入耻垢分枝杆菌,利用SDS-PAGE和Western blot检测Clp C2基因在耻垢分枝杆菌中的表达以及氧化应激、酸应激对其功能进行初步探讨。结果利用Fsp EⅠ快速构建了分枝杆菌表达质粒Clp C2,将其成功电转至耻垢分枝杆菌中,SDS-PAGEA和Western blot检测其蛋白的表达,His单抗和兔多抗均能检测到目的条带,Mr大小27 570。氧化应激及酸应激实验表明Clp C2重组耻垢分枝杆菌与空载耻垢分枝杆菌在对抗应激方面无明显差异。结论成功构建了一种不受序列限制的分子克隆方法以及分枝杆菌Clp C2重组表达质粒,Western blot表明其具有一定的免疫原性,氧化应激及酸应激表明Clp C2重组耻垢分枝杆菌对抗应激方面无明显改变,为进一步深入研究Clp C2基因的功能奠定了基础。
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关键词
FspEⅠ内切酶
耻垢分枝杆菌
CLP
C2基因
免疫原性
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职称材料
题名
分枝杆菌表达质粒的快速构建及ClpC2基因功能初步研究
1
作者
康月茜
卢楠
孙菱
李岱容
杨春
机构
重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心病原生物学教研室
重庆医科大学附属第一医院呼吸内科
出处
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期158-163,共6页
基金
重庆市教委科学技术研究项目(KJ1500203)
文摘
目的通过一种不受到序列限制、酶切连接反应一步进行的分子克隆方法,构建分枝杆菌Clp C2重组表达质粒,检测其在耻垢分枝杆菌中的蛋白表达并对其功能进行初步探讨。方法利用识别甲基化位点的内切酶Fsp EⅠ进行一步法酶切、连接反应,构建重组质粒PMV261(+)-Clp C2。将重组质粒转入耻垢分枝杆菌,利用SDS-PAGE和Western blot检测Clp C2基因在耻垢分枝杆菌中的表达以及氧化应激、酸应激对其功能进行初步探讨。结果利用Fsp EⅠ快速构建了分枝杆菌表达质粒Clp C2,将其成功电转至耻垢分枝杆菌中,SDS-PAGEA和Western blot检测其蛋白的表达,His单抗和兔多抗均能检测到目的条带,Mr大小27 570。氧化应激及酸应激实验表明Clp C2重组耻垢分枝杆菌与空载耻垢分枝杆菌在对抗应激方面无明显差异。结论成功构建了一种不受序列限制的分子克隆方法以及分枝杆菌Clp C2重组表达质粒,Western blot表明其具有一定的免疫原性,氧化应激及酸应激表明Clp C2重组耻垢分枝杆菌对抗应激方面无明显改变,为进一步深入研究Clp C2基因的功能奠定了基础。
关键词
FspEⅠ内切酶
耻垢分枝杆菌
CLP
C2基因
免疫原性
Keywords
FspE I enzyme
Mycobacterium smegmatis
clpc2 gene
Immunogenicity
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
分枝杆菌表达质粒的快速构建及ClpC2基因功能初步研究
康月茜
卢楠
孙菱
李岱容
杨春
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016
0
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