加味四逆散对肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ,Ⅲ型胶原mRNA影响的研究

目的观察加味四逆散对肝组织Ⅰ,Ⅲ型胶原mRNA影响,探讨其抗肝纤维化的药理机制和作用。方法采用二甲基亚硝胺腹腔注射制备大鼠肝纤维化模型,加味四逆散灌胃给药,采用实时定量PCR技术检测各组大鼠肝组织Ⅰ,Ⅲ型胶原mRNA表达的水平。结果加味四逆散能明显降低肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ,Ⅲ型胶原的含量,与病理模型组比较有显著性差异(P<0.05)。结论加味四逆散可有效的减少肝组织Ⅰ,Ⅲ型胶原的生成,对肝纤维化有肯定的治疗作用。

胶原纤维固化杨梅单宁对Cr(Ⅵ)的吸附

研究了胶原纤维固化杨梅单宁(IBT)对Cr(Ⅵ)的吸附特性及机理。实验表明,Cr(Ⅵ)吸附容量随pH值降低而增加,低温更有利于Cr(Ⅵ)的吸附。当吸附剂用量为0.100g,温度为303K,pH为2.0,溶液体积为100ml,Cr(Ⅵ)初始浓度为100mg·L-1时,IBT对Cr(Ⅵ)吸附容量为78.5mg·g-1。Freundlich方程可以很好地描述吸附剂对Cr(Ⅵ)的吸附等温线。动力学研究表明,初始吸附进行得很快,当吸附进行到500min时,吸附达平衡。吸附动力学可以很好地用拟二级速率方程来描述,计算所得平衡吸附量与实测值误差很小。IBT对Cr(Ⅵ)的吸附是氧化还原吸附。Cr(Ⅵ)被IBT还原成Cr(Ⅲ)后,再与吸附剂结合而被吸附。

不同诱导条件对人牙囊细胞合成非胶原蛋白的影响

目的探讨釉基质蛋白(enamelmatrixproteins,EMPs)、骨形成蛋白-(2bonemorphogeneticpro-tein-2,BMP-2)作用下对牙囊细胞合成非胶原蛋白的影响。方法酶消化联合组织块法获得人牙囊细胞,用100mg/L的EMPs、100μg/L的BMP-2对人牙囊细胞进行诱导,显微镜下逐日观察细胞形态变化,并在3d、7d两个不同时间点利用免疫组化方法和图像分析技术检测和分析细胞骨涎蛋白、骨桥蛋白表达的变化。结果100mg/L的EMPs、100μg/L的BMP-2对牙囊细胞均具有上调骨涎蛋白、骨桥蛋白的作用,呈时间依赖性。结论EMPs、BMP-2可使牙囊细胞表型向成骨、成牙骨质样细胞分化。

早期糖尿病大鼠视网膜HSP47表达的意义

目的探讨热休克蛋白47(HSP47)在早期糖尿病大鼠的表达及意义。方法雄性Wistar大鼠30 只,随机分为糖尿病模型组(DR组,n=20)及正常对照组(对照组,n=10)。用链尿佐菌素(STZ)腹腔注射制作大鼠糖尿病(DM)模型。于模型建立后1月处死大鼠,取眼球做石蜡切片及视网膜铺片。用胰酶消化视网膜并行 PAS视网膜血管染色,观察管视网膜血管形态变化,用免疫组化法检测HSP47在视网膜的表达。结果正常大鼠视网膜HSP47染色为阴性,但在早期糖尿病大鼠视网膜HSP47染色均为阳性,而视网膜血管形态变化不明显。结论HSP47作为一种胶原特异的分子伴侣,在胶原装配、合成过程中起作用,早期糖尿病大鼠视网膜HSP47表达增加,可能是导致增生性糖尿病视网膜病变(PDR)发展的重要因素之一。

精氨酸加压素对大鼠心肌成纤维细胞增殖及其胶原合成的影响

目的探讨精氨酸加压素(AVP)对心肌成纤维细胞(CFs)增殖及其胶原合成的影响。方法 SD大鼠静脉注射AVP,马松染色检测纤维化程度,Western Blot检测转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达。采用胶原酶消化法分离培养SD仔鼠的CFs,MTT法测定CFs细胞增殖数目,3H-脯氨酸掺入法测定CFs胶原合成功能。结果 AVP持续作用会促进大鼠心肌TGF-β1表达增加,从而促进心肌纤维化发生。随着AVP浓度的升高,CFs的MTT吸光度值(OD)及3H-脯氨酸掺入率均逐渐升高。当AVP浓度为10-6mol/L时,MTT OD值及3H-脯氨酸掺入率均明显高于对照组(P<0.05)。在10-7mol/L AVP干预下,随着培养时间的延长,CFs的MTT OD值及3H-脯氨酸掺入率均逐渐升高。在培养36 h时与培养6 h组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论高浓度AVP长时间作用可以通过促进大鼠心肌TGF-β1表达,促进CFs增殖及其胶原合成,从而导致心肌纤维化发生。

绝经后妇女骨密度与Ⅰ型胶原α_1链及α_2链基因多态性相关性研究

目的探讨人Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)及α2链(COL1A2)基因型与绝经后妇女骨密度相互关系。方法选取年龄≥42岁绝经后妇女(自然绝经≥2年)231例,采用双能X线吸收法(DEXA)测定其全身、腰椎2～4(L2～4)、股骨颈(Neck)、Ward?三角和大转子区等部位的骨密度(BMD)值,并采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测外周血白细胞基因组Ⅰ型胶原α1链及α2链基因型。结果231例受试对象中,Ⅰ型胶原α1链PCR扩增产物未发现ACCB7I酶切位点,SpⅠ结合位点不存在G→T突变,Ⅰ型胶原α1链基因型均为SS型;Ⅰ型胶原α2链基因型分别为EE型113例,Ee型91例,ee型27例(分别占48.9%、39.4%、11.7%),等位基因频率E和e各为68.6%、31.4%。基因型分布符合Hardy-weinberg定律。携带EE基因型的个体比Ee基因型和ee基因型个体的骨密度值为低,但只在腰椎侧位(L2-L4)、股骨颈(Neck)、大转子(Troch)、Ward?s三角(Ward?s)等部位的骨密度值EE基因型比Ee基因型携带者明显降低(P<0.05)。结论广州地区绝经后妇女COL1A1SpⅠ结合位点不存在G→T突变。COL1A2基因EE型个体较Ee基因型及ee基因个体的骨密度值低,绝经后妇女骨密度与COL1A2基因多态性存在一定相关性。

犬骨髓基质细胞复合nHAC/CSH裸鼠皮下成骨的实验研究

目的:评价纳米晶羟基磷灰石/胶原/硫酸钙(nHAC/CSH卜犬骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)复合物体内异位成骨能力。方法:犬骨髓基质细胞(dBMSCs)通过密度梯度离心法分离得到,与nHAC/CSH复合,构建可注射骨,扫描电镜观察细胞生长情况,并将构建的可注射组织工程骨植入裸鼠体内,4周后行HE染色观察异位骨形成情况。结果:扫描电镜观察细胞生长良好,体内研究表明,可注射组织工程骨植入裸鼠皮下4周后有类骨样结构形成。结论:nHAC/CSH复合BMSCs具有良好的成骨活性。

姜黄素对人胚肺成纤维细胞外基质影响的试验研究

目的:探讨姜黄素对经转化生长因子β(TGF-β1)诱导后人胚肺成纤维细胞一型胶原与c-jun,在人胚肺成纤维细胞中的表达的影响及其与特发性肺纤维化的关系。方法:细胞分为正常组、姜黄素组、模型组、治疗组采用采用RT-PCR,Western bloting法检测、I型胶原与c-jun在人胚肺成纤维细胞的变化。结果:治疗组与正常组、模型组相比,I型胶原与c-jun,表达明显减弱。结论:姜黄素可抑制人胚肺成纤维细胞的胶原沉积,在延缓肺纤维化形成中起一定作用,其作用机制可能是通过抑制核转录因子c-jun表达而实现的。

不同白酒对大鼠肝组织及血清透明质酸和Ⅳ型胶原的影响

目的:探讨饮用不同白酒对大鼠肝脏及中血清透明质酸和Ⅳ型胶原的影响。方法:雄性SD大鼠131只分为对照组、A酒组(高加低剂量组)、B酒组(高加低剂量组),于2、4、6月末各组随机抽取2只大鼠处死,取肝脏观察组织学改变;6月末,用黄曲霉素B1(AFB1)腹腔注射建立体内肝癌短期模型,6周后,处死大鼠,观察大鼠肝脏病理学变化,取血清进行透明质酸(HA)及Ⅳ型胶原(CⅣ)含量检测。结果:(1)在单纯灌酒后,A酒组发生肝纤维化的比例比B酒组低,AFB1造模后肝纤维化、肝硬化并肝癌的发生率A酒组低于B酒组;(2)与对照组相比,A酒组和B酒组纤维结缔组织增生明显(P<0.05);(3)HA、CⅣ在B酒组中的含量比A酒组中的含量高。结论:2种白酒对肝纤维化、肝硬化模型大鼠的血清及肝组织HA和CⅣ的影响不同,引起的肝损伤程度也不同,B酒可增加HA和CⅣ的水平,相对而言,A酒的作用要轻得多。

用细胞培养法组建动脉壁及电镜观察

在体外用细胞培养的方法,将人脐带静脉内皮细胞种植在已培养成复层的人脐带动脉平滑肌细胞上面,人工组建成动脉壁结构。在营养液中含内皮细胞生长因子及维生素C条件下,两种细胞生长良好,构成活的具有代谢过程及增殖力的血管壁。光镜及电镜下观察,两种细胞组成典型的血管壁的结构层次,在内皮细胞与平滑肌细胞之间,在平滑肌细胞与平滑肌细胞之间,充填有大量胶原纤维、网状纤维与少量的弹力纤维,并发现这些纤维结构物质是由血管平滑肌细胞产生的。为研究血管壁的生理与病理过程提供了良好的血管壁模型。

活性胶原基纳米骨修复即刻种植体周围骨缺损的研究

目的:观察胶原基纳米骨(nHAC)及活性胶原基纳米骨(AnHAC)修复即刻钛种植体周围骨缺损的效果,为临床应用奠定理论依据。方法:犬下颌骨拔牙创区制造即刻种植体周围骨缺损,分别采用植入nHAC、AnHAC、自体牙槽松质骨及不植入任何材料4种不同方法修复种植体周骨缺损,术后6周、12周,采用X线摄片、骨密度测量及组织学检查,观察新骨形成情况和新骨与种植体的关系。结果:两组实验动物中,除空白对照组外,骨缺损区均愈合良好,未见种植体周围炎发生。1)nHAC组:术后6周已有新生骨小梁形成,术后12周修复骨缺损,种植体边缘可见较多新骨形成;2)AnHAC组:成骨过程较早,术后6周即有较多新生骨组织出现,术后12周新骨组织与宿主骨完全融合,并与种植体表面形成广泛的骨性结合。结论:nHAC具有良好的骨引导作用,可良好地修复种植体周骨缺损,复合rhBMP-2后效果更佳。临床上可根据具体情况选用修复即刻种植体周围骨缺损的方法。

Ⅰ型胶原蛋白代谢异常导致成骨不全症机制研究进展

Ⅰ型胶原蛋白（type Ⅰ collagen）是骨组织中含量最丰富的蛋白质，占骨基质蛋白的90％以上，对于维持骨骼结构完整性及骨强度具有重要作用。Ⅰ型胶原代谢异常可能引起胶原数量减少或结构紊乱，导致骨密度降低、骨强度减弱、反复骨折，

大麻素受体-2激动剂AM1241对肝纤维化小鼠肝组织血小板衍生生长因子表达的影响

目的研究大麻素受体-2（CB2）激动剂AM1241对四氯化碳（CCl4）诱导的实验洼肝纤维化小鼠肝组织中血小板衍生生长因子（PDGF）、Ⅲ-型胶原（Col-Ⅲ）基因与蛋白表达的影响。方法38只8周龄C57BL／6J雄性小鼠随机分为对照组、模型组、CB2受体激动剂（AM1241）3mg／kg组、9mg／kg组。除对照组外，其余组用30％CCl4复制肝纤维化模型，每周3次，5ml／kg，共16周，造模同时CB2受体激动剂干预组每天分别给予3mg／kg、9mg／kg AM1421，按实际体质量调整给药腹腔注射，对照组采用相同溶剂和方法。采用血清酶学检测血清天冬氨酸氨基转移酶（AST），采用组织切片苏木素-伊红染色观察小鼠肝脏炎症情况及纤维化程度，利用Real-time PCR和免疫组织化学法检测PDGF、Col-Ⅲ基因和蛋白在肝组织中的表达水平。多组间比较采用单因素方差分析。结果与对照组相比，模型组肝纤维化程度严重、血清AST均明显增高[（742±300．8）U／L对比（118．1±31．1）U／L]（P〈0．05），肝组织PDGF、Col-ⅢmRNA和蛋白的表达均明显增强（P〈0．05）；与模型组比较，A1241 3mg／kg组、9mg／kg组肝纤维化程度明显减轻，血清AST明显降低[分别为（116．6±13．68）U／L对比（742±300．8）U／L，（113．8±16．01）U／L对比（742±300．8）U／L]（P〈0．05），肝组织PDGF、Col-ⅢmRNA和蛋白的表达均有所降低护〈0．05）。结论CB2受体激动剂AM1241可抑制肝纤维化小鼠肝组织PDGF基因和蛋白的表达，使细胞外基质合成减少。