卷曲螺旋结构域蛋白2通过促进线粒体自噬抑制帕金森病SH-SY5Y细胞凋亡

背景:卷曲螺旋结构域蛋白2(coiled-coil-helix-coiled-coil-helix domain-containing 2,CHCHD2)能否调控PINK1/Parkin介导的线粒体自噬在帕金森病中发挥神经保护作用尚未可知。目的:探讨CHCHD2在6-羟基多巴胺诱导的帕金森病细胞模型中对PINK1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬发挥的作用及机制。方法:利用重组质粒转染技术过表达或敲低CHCHD2,用6-羟基多巴胺构建SH-SY5Y细胞帕金森病模型后分对照组、模型组、过表达阴性对照+6-羟基多巴胺组、敲低阴性对照+6-羟基多巴胺组、过表达CHCHD2+6-羟基多巴胺组和敲低CHCHD2+6-羟基多巴胺组。Western blot及RT-qPCR检测CHCHD2的表达;Western blot检测LC3Ⅰ/Ⅱ、p62、MFN1、COXⅣ、DRP1、PINK1、Parkin、TIM23、Bax、Bcl-2及cleavedcaspase3蛋白表达;CCK-8、JC-1和活性氧试剂盒检测细胞活性、线粒体膜电位和活性氧水平,单丹磺酰尸胺染色观察细胞自噬情况,透射电镜观察自噬溶酶体。结果与结论:①与对照组相比,模型组细胞活性、线粒体膜电位及CHCHD2、PINK1、Parkin蛋白表达降低,活性氧水平、凋亡水平及LC3Ⅰ/Ⅱ、p62蛋白表达升高(P<0.05),并观察到自噬溶酶体的存在;②与模型组相比,过表达CHCHD2能降低细胞活性氧水平,升高线粒体膜电位及PINK1、Parkin和MFN1蛋白表达水平,并观察到线粒体自噬溶酶体增多,而敲低CHCHD2后有与上述相反的作用,并伴有COXⅣ、TIM23和p-DRP1蛋白表达的升高(P<0.05);③与模型组相比,过表达CHCHD2能减少细胞凋亡,上调Bcl-2并下调Bax及cleavedcaspase3蛋白的表达,而敲低CHCHD2后有与上述相反的作用(P<0.05);④结果提示,CHCHD2在6-羟基多巴胺诱导的帕金森病细胞模型中可以通过促进PINK1/Parkin介导的线粒体自噬改善线粒体功能从而减轻细胞凋亡发挥神经保护作用。

中性粒细胞胞外诱捕网通过CCDC25促进骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的作用研究

目的探究中性粒细胞胞外捕获网(neutrophil extracellular traps,NETs)在骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭中的作用及其相关机制。方法纳入骨肉瘤患者和健康受试者各20例,通过ELISA检测血清中PAD4和H3cit水平。提取两组人群外周血中性粒细胞,比较NETs形成差异。将NETs与骨肉瘤细胞MG63共孵育,期间加入DNA降解酶DNaseⅠ,分为对照组、NETs组和NETs+DNaseⅠ组。通过蛋白质印迹检测CCDC25蛋白表达水平,CCK8检测细胞增殖水平,Transwell检测细胞迁移和侵袭水平。将si-NC和si-CCDC25转染至MG63,加入NETs共孵育,分为si-NC组和si-CCDC25组,通过蛋白质印迹检测CCDC25蛋白表达水平,CCK8检测细胞增殖水平,Transwell检测细胞迁移和侵袭水平。结果与健康受试者比较,骨肉瘤患者血清中PAD4和H3cit水平升高(P<0.05),NETs形成能力增强。与对照组比较,NETs组CCDC25蛋白表达升高,细胞增殖、迁移和侵袭水平升高(P<0.05)。与NETs组比较,NETs+DNaseⅠ组CCDC25蛋白表达降低,细胞增殖、迁移和侵袭水平降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-CCDC25组CCDC25蛋白表达降低,细胞增殖、迁移和侵袭水平降低(P<0.05)。结论NETs通过释放的DNA激活骨肉瘤细胞CCDC25表达,从而促进肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭。

Rho激酶抑制剂法舒地尔作用BTBD7-ROCK2信号通路抑制肝细胞癌侵袭运动

目的:观察Rho激酶抑制剂法舒地尔(Fasudil)对人高侵袭潜能HCC细胞株3(human high metastatic liver cancer cells 3,HCCLM3)侵袭转移的影响,并且探讨其作用的机制。方法:应用100 mol/L Fasudil作用于HCCLM3细胞,采用肌动蛋白微丝荧光染色和侵袭小室实验观察HCCLM3细胞的运动侵袭能力。HCCLM3细胞经过处理后分为阴性对照组、Fasudil作用组、BTBD7干扰组,通过Western印迹检测BTB/POZ结构域蛋白7(BR-C,ttk and bab/pox virus domain containing 7,BTBD7)、Ras同系物家族成员C(ras homolog family member C,Rho C)、Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶2(Rhoassociated,coiled-coil containing protein kinase 2,ROCK2)、MMP2和MMP9蛋白表达水平,酶谱分析法检测MMP2和MMP9活性水平。BTBD7干扰组作为阳性对照。结果:Fasudil处理后HCCLM3侵袭运动能力下降,BTBD7,Rho C,ROCK2蛋白表达下调,MMP2和MMP9活性降低,与阴性对照组比较差异有统计学意义(均P<0.01)。结论:Fasudil具有干预BTBD7-ROCK2信号通路、抑制HCC侵袭转移的重要作用。

肾癌组织中卷曲螺旋结构域蛋白62的HLA-A2表位肽的筛选和鉴定

目的筛选和鉴定肾癌组织中癌睾抗原卷曲螺旋结构域蛋白62(CCDC62)的人类白细胞抗原(HLA)-A2的特异性细胞毒性T细胞(CTL)的表位肽,为肾癌的免疫治疗提供实验基础。方法通过NetCTL1.2软件预测CCDC62的HLA-A2限制性表位,对得分>1.0的表位肽进行合成。结合力实验检测候选表位肽与T2A2细胞表面HLA-A2分子的结合强弱,细胞内因子染色检测候选表位肽诱导CTL分泌干扰素-γ(IFN-γ)的能力。比较实验组的表位肽与对照组的差异来判断表位肽的活性。结果表位肽CCDC62-P137和CCDC62-P141有较好的HLA-A2结合力。细胞内因子染色表明表位肽CCDC62-P137相比于对照组能诱导肾癌的CTL分泌更多的IFN-γ。结论表位肽CCDC62-P137有较高的HLA-A2分子亲和力和诱导产生更多IFN-γ的能力,是CCDC62在肾癌组织中的HLA-A2限制性CTL候选表位肽,为肾癌的抗肿瘤多肽治疗提供实验基础。

兔抗小鼠卷曲螺旋结构域蛋白189(Ccdc189)多克隆抗体的制备与鉴定

目的制备兔抗小鼠卷曲螺旋结构域蛋白189(Ccdc189)多克隆抗体。方法构建pET⁃28a⁃Ccdc189原核表达质粒。将重组质粒转化入大肠杆菌E.coli BL21中,异丙基⁃β⁃D⁃硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导Ccdc189原核蛋白表达。将纯化的重组蛋白免疫成年雄性新西兰大白兔,获得兔抗小鼠Ccdc189多克隆抗体。Western blot法、间接ELISA及免疫荧光组织化学染色分析鉴定多克隆抗体特异性。结果成功构建pET⁃28a⁃Ccdc189重组质粒并诱导Ccdc189重组蛋白表达。ELISA检测多克隆抗体效价为1∶1000000,Western blot法及免疫荧光组织化学染色显示Ccdc189多克隆抗体能特异性识别Ccdc189原核蛋白及成年野生型小鼠睾丸组织中的Ccdc189蛋白。结论成功制备了特异性强的兔抗小鼠Ccdc189多克隆抗体。

肿瘤转移相关基因蛋白1、基质金属蛋白酶-2和卷曲螺旋结构域67蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

目的探讨甲状腺乳头状癌（PTC）及癌旁腺体组织中肿瘤转移相关基因蛋白1（MTA1）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）与卷曲螺旋结构域67蛋白（CCDC67）表达水平及相关性。方法采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）法，检测61例PTC癌组织及癌旁组织石蜡切片MTA1、MMP-2及CCDC67蛋白的表达。利用慢病毒转染技术构建CCDC67过表达的TPC-1细胞株。采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测PTC细胞株中MTA1、MMP-2及CCDC67 mRNA的表达。结果MTA1蛋白在PTC组织中的表达率为63.9%（39/61），在癌旁组织中的表达率为18.0%（11/61）；MMP-2蛋白在PTC组织中的表达率为62.3%（38/61），在癌旁组织中的表达率为14.8%（9/61）；CCDC67蛋白在PTC组织中的表达率为49.1%（30/61），在癌旁组织中的表达率为96.7%（59/61）。CCDC67蛋白在PTC组织中的表达分别与肿瘤大小、TNM分期、病理分级、淋巴结转移因素中表达率差异有统计学意义（χ2＝3.911、7.289、10.353、8.826，P＝0.048、0.007、0.001、0.003），MTA1和MMP-2的表达与TNM分期、病理分级、淋巴结转移因素中表达率差异有统计学意义（χ2＝6.213、12.752、4.665，P＝0.013、0.000、0.031；χ2＝5.026、5.026、6.036，P＝0.025、0.025、0.014）。TPC-1细胞株中，MTA1和MMP-2 mRNA均有表达，未检测到CCDC67 mRNA表达。在构建的CCDC67高表达的TPC-1细胞株（OE组）中，MTA1与MMP-2 mRNA水平较正常TPC-1细胞株（CON组）及转染了空载体的TPC-1细胞株（NC组）中均呈现相对低表达。结论MTA1、MMP-2、CCDC67蛋白与PTC的转移和侵袭密切相关，CCDC67基因的抑癌功能可能与其抑制细胞转、移侵袭相关蛋白的表达有关。

卷曲螺旋结构域蛋白74B对纤毛生成和细胞周期调控作用研究

背景卷曲螺旋结构域蛋白(CCDC)参与基因转录、细胞凋亡及细胞周期过程,并调控恶性肿瘤细胞的侵袭和转移等多种生物学行为,然而多数CCDC的生物学功能目前尚未明确。目的探讨CCDC74B的细胞定位及对纤毛生成和细胞周期的影响。方法 2013年3—9月通过构建在人视网膜色素上皮(RPE1)中的Tet-On表达系统,实现CCDC74B在细胞内的蛋白表达,然后通过细胞免疫荧光染色观察CCDC74B的细胞定位,通过小干扰RNA(siRNA)转染敲除CCDC74B在RPE1细胞中的表达,分为对照组、siRNA#1组、siRNA#2组,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测CCDC74B mRNA表达水平;采用细胞免疫荧光染色及流式细胞术观察下调CCDC74B表达后纤毛生成情况和对细胞周期分布的影响。结果在正常上皮细胞中,CCDC74B位于中心体,细胞免疫荧光染色示,下调CCDC74B表达后细胞初级纤毛生成。siRNA#1组及siRNA#2组转染后36 h及48 h纤毛生成率分别高于对照组(P<0.05)。RT-PCR法结果显示,siRNA#1组及siRNA#2组均有效抑制了CCDC74B mRNA表达。细胞免疫荧光染色示,下调CCDC74B表达后cyclin A表达减少,提示存在细胞周期停滞;流式细胞术检测示,下调CCDC74B表达后G_1期细胞比例增高,S期及G_2/M期细胞比例减少。结论中心体蛋白CCDC74B在细胞增殖过程中参与对纤毛生成和细胞周期的调控。

卷曲螺旋结构域67蛋白和B细胞淋巴瘤／白血病-2蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

目的观察甲状腺乳头状癌（PTC）及癌旁甲状腺组织中卷曲螺旋结构域蛋白67（CCDC67）与B细胞淋巴瘤／白血病．2（bcl-2）表达水平。方法应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白．过氧化物酶（SP）法检测57例PTC癌组织及癌旁组织石蜡切片CCDC67蛋白、bcl-2蛋白的表达，原位缺口末端标记法（TUNEL）检测57例PTC组织石蜡切片凋亡指数（AI）。结果CCDC67蛋白在PTC组织的表达率为43．86％（25／57），在癌旁组织中高表达（96．49％，55／57），bcl-2蛋白在PTC组织表达率为57．89％（33／57），在癌旁组织中的表达率为15．79％（9／57）。CCDC67蛋白在PTC组织中的表达与肿瘤大小、TNM分期、病理分级、淋巴结转移因素中表达率有关（x^2=3．944、4．711、6．068、7．143，P=0．047、0．030、0．014、0．008）。bcl-2蛋白在PTC组织中的表达与TNM分期、病理分级、淋巴结转移因素中表达率差异有关（x^2=8．757、4．765、8．449，P=0．003、0．029、0．004）。CCDC67蛋白和bcl．2蛋白在PTC组织中的表达明显相关（r=0．400，P=0．003）。PTC组织中CCDC67蛋白阳性表达组AI高于CCDC67蛋白阴性表达组（t=12．812，P=0．000）。结论CCDC67蛋白和bcl-2蛋白和PTC的发生发展密切相关。CCDC67基因抑癌功能可能与其产物促进肿瘤细胞凋亡有关。

RNA干扰卷曲螺旋结构域蛋白34表达对膀胱癌细胞生物学行为的影响

目的探讨卷曲螺旋结构域蛋白34(CCDC34)的表达对膀胱癌细胞生物学行为包括增殖、凋亡、克隆形成和侵袭能力的影响。方法选取膀胱癌5637细胞分别转染阴性对照siRNA(阴性对照组)和CCDC34-siRNA(CCDC34干扰组)慢病毒载体,荧光显微镜观察慢病毒感染效率;实时荧光定量PCR和Western blotting验证CCDC34的干扰效率;Brd U掺入实验、流式细胞术、克隆形成实验和Transwell小室侵袭实验检测干扰CCDC34表达对5637细胞增殖、凋亡、克隆形成及侵袭能力的影响。结果阴性对照组与CCDC34干扰组的慢病毒感染效率均在85%以上。与阴性对照组相比,感染CCDC34-siRNA的细胞中CCDC34 mRNA表达水平受到显著抑制(1.00±0.06 vs.0.16±0.01,P<0.01),且CCDC34蛋白表达下降。Brd U实验显示,CCDC34干扰组的细胞增殖能力较阴性对照组受到显著抑制(P<0.05),且细胞凋亡显著增加[(28.09±0.39)%vs.(9.50±0.01)%,P<0.01)]。克隆形成实验显示,CCDC34干扰组的克隆形成能力显著低于阴性对照组(22±4 vs.310±5,P<0.01)。Transwell小室侵袭实验显示,CCDC34干扰组膀胱癌细胞的侵袭转移率显著低于阴性对照组(0.53±0.03 vs.2.58±0.10,P<0.01)。结论慢病毒介导的RNA干扰技术可下调CCDC34蛋白在膀胱癌5637细胞中的表达,并显著抑制肿瘤细胞的增殖、克隆形成和侵袭能力;CCDC34有望成为膀胱癌的生物标记物和治疗的新靶点。

结直肠癌患者外周血CCDC12水平及基因多态性检测的意义

目的检测结直肠癌患者外周血中卷曲螺旋结构域蛋白12(CCDC12)基因R18Y位点多态性的情况及血清CCDC12的水平。方法选取就诊并确诊为结直肠癌的患者200例为病例组,同期健康体检者200例为对照组。留取外周血,应用PCR扩增联合DNA直接测序法检测CCDC12基因R18Y位点在病例组与对照组中的分布情况,同时检测外周血血清中CCDC12的水平。将病例组和对照组按基因型再次分组,观察各基因型血清CCDC12浓度的变化情况。应用Logistic回归分析探讨CCDC12基因R18Y位点多态性与结直肠癌的相关性。结果 CCDC12基因R18Y位点存在T和C两种等位基因,共发现3种基因型:CC(野生型纯合子)、CT(杂合突变型)、TT(纯合突变型)。病例组TT、CT基因型频率及T等位基因均显著高于对照组(P<0.05)。病例组血清中CCDC12的浓度水平明显高于对照组(P<0.05)。按基因型分组后,病例组和对照组中CC、CT、TT基因型者血清CCDC12的浓度逐渐升高(P<0.05)。Logistic分析显示,TT基因型是结直肠癌的独立危险因素(OR值为9.604,95%CI为3.427～46.128,P=0.005;OR值为1.973,95%CI为1.329～3.472,P=0.034)。结论 CCDC12基因R18Y位点多态性与结直肠癌有关。

基于TCGA数据库分析CCDC34基因在肝细胞癌中的表达及意义

目的研究卷曲螺旋结构域蛋白34(CCDC34)基因在肝细胞癌中的表达以及临床价值,预测CCDC34基因在肝细胞癌发生发展中的作用。方法从癌症基因组图谱(TCGA)下载肝细胞癌数据集,获得CCDC34基因表达谱和临床信息。利用生物信息学方法,分析CCDC34基因在肝细胞癌中的表达水平与临床病理指标的相关性以及对预后的影响。用基因集富集分析(GSEA)预测CCDC34基因在肝细胞癌中调控的可能通路。计量资料2组间比较分别采用独立样本t检验及配对t检验。生存分析采用Kaplan-Meier法及log-rank检验;并运用Cox比例风险回归模型分析影响患者预后的危险因素。GSEA判断显著性富集的标准为P<0.01,且错误发现率(FDR)<0.05。结果在TCGA数据库中,CCDC34基因在肿瘤组织中高表达,其表达水平在TNM分期和肿瘤分级之间差异均有统计学意义(t值分别为2.118、3.622,P值分别为0.035、<0.001)。CCDC34基因高表达的患者总生存期明显低于CCDC34基因低表达的患者(χ2=21.716,P<0.05)。多因素Cox回归分析提示CCDC34基因的表达水平(HR=2.287,95%CI:1.312~3.987)和TNM分期(HR=1.943,95%CI:1.101~3.429)是影响肝细胞癌患者总生存期的独立危险因素(P值均<0.05)。CCDC34基因高表达的样本存在碱基切除修复和剪接体等8个通路基因集的富集(P值均<0.01,FDR值均<0.05)。结论CCDC34基因可能在肝细胞癌的发生发展中发挥重要作用,有望成为判断肝细胞癌预后的指标和潜在的新治疗靶点。

血清卷曲螺旋蛋白49及胃动蛋白2诊断胃癌的临床价值

目的 ：探讨血清卷曲螺旋蛋白49（CCDC49）及胃动蛋白2（GKN2）对胃癌诊断的临床价值。方法 ：应用ELISA检测205例胃癌组、96例癌前病变组及94例正常对照组共395例血清样本中CCDC49及GKN2的表达水平,结果以中位数和四分位数间距表示,并对结果进行统计学分析,以ROC曲线下面积（ROC-AUC）评价诊断的准确性。结果：胃癌组血清CCDC49表达水平高于正常对照组及癌前病变组（P〈0.05）。血清CCDC49的AUC为0.69,95%CI：0.64-0.74。血清CCDC49取临界值为83.0 pg/m L时,CCDC49诊断胃癌的灵敏度和特异度分别为81.5%（167/205）和51.6%（98/190）。胃癌组血清GKN2表达水平低于正常对照组及癌前病变组（P均〈0.05）。血清GKN2的AUC为0.77,95%CI：0.72-0.82。血清GKN2取临界值为93.2 pg/m L时,GKN2诊断胃癌的灵敏度和特异度分别为77.1%（158/205）和65.8%（125/190）。用Logistic回归方程求出CCDC49和GKN2联合预测因子Y,Y的AUC为0.88,95%CI：0.85-0.92,当Y取临界值为2.4时,其诊断胃癌的灵敏度和特异度为84.9%（174/205）和65.8%（125/190）。结论 ：血清CCDC49的高表达水平及GKN2的低表达水平对胃癌具有一定的诊断价值,CCDC49和GKN2联合预测因子Y可作为一种新的、较好的胃癌诊断参考指标。

靶向Rho通路的抗高血压治疗策略研究进展

在过去几十年中,高血压的患病率呈逐年上升趋势。它不但增加左心室肥厚、心绞痛、心肌梗死和心力衰竭等心血管疾病的患病风险,还可能导致卒中(中风)、肾衰竭等相关后遗症。尽管目前有多种降压方案可供选择,但经过药物治疗后,只有半数患者可有效控制血压,这意味着需要进一步了解潜在的致病因素并寻求更有效的治疗方法。然而血压稳态非常复杂,涉及多个系统的综合控制,其中平滑肌收缩力和动脉阻力是重要因素。来自临床前动物模型和全基因组关联研究的有力证据表明,平滑肌收缩和血压稳态受小分子GTP酶RhoA及其下游靶点Rho激酶控制。本文总结了平滑肌细胞中对RhoA活性进行严格控制的信号通路及调节器的相关进展,并讨论了当前针对这些RhoA通路成分的高血压治疗策略。还讨论了RhoA通路中已知的等位基因变异,并介绍了这些遗传多态性对高血压遗传风险的影响及其临床表现。

CCDC80对巨噬细胞源性泡沫细胞炎症因子表达的影响及机制

目的探讨卷曲螺旋结合域蛋白80(CCDC80)对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞炎症因子表达的影响及相关分子机制。方法体外培养的THP-1细胞用佛波酯(160 nmol/L)处理,诱导分化为巨噬细胞,然后使用氧化型低密度脂蛋白(50 mg/L)处理使其荷脂形成泡沫细胞,并进行常规细胞体外培养。ELISA检测细胞炎性因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达,实时荧光定量PCR和Western blot检测Toll样受体4(TLR4)、脂蛋白脂肪酶(LPL)和核因子κB(NF-κB)的表达。TLR4 siRNA和LPL siRNA分别处理泡沫细胞,采用荧光定量PCR和Western blot检测CCDC80对泡沫细胞TLR4、LPL、NF-κB和p-NF-κB表达的影响。结果 CCDC80显著增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞炎症因子分泌以及p-NF-κB表达。TLR-4 siRNA处理细胞后,TLR4、LPL和p-NF-κB的表达显著降低。LPL siRNA处理泡沫细胞后,LPL和p-NF-κB的表达显著降低。结论 CCDC80通过TLR4/LPL途径促进NF-κB信号通路激活,从而增加细胞炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α和MCP-1分泌。

CCDC家族蛋白与恶性肿瘤研究现状

卷曲螺旋结构域(CCDC)蛋白是存在于多种天然蛋白质中的一种蛋白质结构域,具有多项生物学功能,主要参与细胞间跨膜信号转导、遗传信号转录、促进细胞增殖和凋亡、调控恶性肿瘤细胞的侵袭和转移等多种生物学行为。CCDC19、CCDC67、CCDC134、CCDC12、CCDC66、CCDC34、CCDC85B蛋白表达异常,可导致鼻咽癌、甲状腺癌、胃癌、结直肠癌、膀胱癌以及肺癌等多种恶性肿瘤的发生。研究CCDC蛋白在恶性肿瘤细胞中的分子机制,可以为恶性肿瘤的诊断和靶向治疗提供理论依据。

CBP/P300介导的PTIP乙酰化可能促进下游肿瘤相关基因CCDC121和GPR75的转录

PTIP (Pax transactivation domain-interacting protein,PAXIP1)蛋白参与MLL3 (lysine methyltransferase 2C,KMT2C)/MLL4(lysine methyltransferase 2B,KMT2B)组蛋白H3K4甲基转移酶复合体,促进基因的转录激活。但关于PTIP蛋白的乙酰化修饰及人宫颈癌细胞中PTIP转录激活靶基因的研究尚无报道。本研究以稳定表达SFB-PTIP蛋白的293T细胞株为对象,通过免疫沉淀和Western印迹法发现,PTIP蛋白能够发生乙酰化修饰,乙酰转移酶CBP/P300介导PTIP蛋白的乙酰化过程,CBP是主要乙酰转移酶。去乙酰化酶HDAC1/2/3介导PTIP蛋白的去乙酰化过程。选择性HDAC1-3抑制剂MS-275促进PTIP蛋白乙酰化水平上升,且呈剂量和时间依赖性。以人宫颈癌HeLa细胞为研究对象,RNA-seq和RT-qPCR证明,CCDC121 (coiled-coil domain containing121)和G蛋白偶联受体75 (G protein-coupled receptor 75,GPR75)是PTIP的转录激活靶基因(P<0. 01)。和对照相比,MS-275介导的蛋白质乙酰化水平上升,促进基因CCDC121和GPR75的mRNA转录呈现不同程度的剂量依赖性上升(P<0. 01,P<0. 05)。由此推测,MS-275有可能是通过促进PTIP蛋白的乙酰化水平,促进CCDC121和GPR75的转录。但其详细机制有待进一步研究。本研究对今后深入探讨PTIP乙酰化修饰对下游肿瘤相关基因转录的调节和功能,如肿瘤发生、进展等方面的调控机制提供了基础。

CHCHD2在恶性肿瘤中的研究进展

作为进化上相对保守的、核编码的含“卷曲-卷曲-螺旋-卷曲-卷曲-螺旋”结构域(CHCHD)蛋白家族成员之一,CHCHD2在线粒体和细胞核中执行不同的生物学功能。CHCHD2在多种肿瘤组织中高表达,且其表达水平与临床病理参数、患者生存预后显著相关,而抑制CHCHD2的表达可导致肿瘤细胞对化疗药物敏感。CHCHD2通过自身突变以及调控肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭、凋亡和血管生成等在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。因此,CHCHD2有望成为肿瘤诊断和治疗、预后分析与评估的新靶标。未来,深入研究CHCHD2在恶性肿瘤中的作用,可以为肿瘤患者的治疗提供新思路。

抑制成纤维细胞生长因子受体2-卷曲螺旋结构域蛋白6融合基因表达在人胆管癌异种移植小鼠的作用

目的探究抑制成纤维细胞生长因子受体2-卷曲螺旋结构域蛋白6(FGFR2-CCDC6)表达在人胆管癌异种移植小鼠的抗肿瘤作用。方法选择购自美国模式培养物集存库(ATCC)的人正常肝内胆管上皮细胞HIBEC和稳定转染FGFR2-CCDC6表达质粒的人肝内胆管癌细胞系Hucct1, 分组为沉默FGFR2-CCDC6阴性对照(si-NC)组和沉默FGFR2-CCDC6(si-FGFR2-CCDC6)组。利用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测融合基因表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测FGFR2、成纤维细胞生长因子2(FGF2)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK1/2)蛋白表达。噻唑蓝(MTT)检测抑制FGFR2对细胞增殖的抑制作用。小鼠荷瘤模型探究抑制FGFR2表达对移植瘤体积的抑制作用。应用SPSS 21.0软件进行分析。结果 Hucct1中的FGFR2-CCDC6表达显著高于HIBEC(1.00±0.05比1.92±0.09, t=15.480, P<0.05);FGFR2、FGF2和p-ERK1/2的蛋白表达均明显高于HIBEC(FGFR2:0.54±0.03比1.29±0.05, t=20.360, FGF2:1.32±0.06比1.87±0.09, t=9.207, p-ERK1:0.84±0.05比1.54±0.07, t=14.920, p-ERK2:1.42±0.06比2.11±0.11, t=9.391, 均P<0.05)。si-FGFR2-CCDC6组的FGFR2-CCDC6的mRNA表达水平显著低于si-NC组(1.00±0.06比0.39±0.03, t=19.540, P<0.05);FGFR2、FGF2和p-ERK1/2的蛋白表达均显著低于si-NC组(FGFR2:1.32±0.05比0.77±0.04, t=13.080, FGF2:1.93±0.08比1.23±0.07, t=11.12, p-ERK1:1.48±0.07比0.73±0.06, t=15.260, p-ERK2:2.03±0.12比1.44±0.07, t=7.488, 均P<0.05);转染后24 h和48 h细胞增殖率明显低于si-NC组(24 h:0.74±0.06比0.48±0.04, t=6.245, 48 h:0.97±0.07比0.65±0.06, t=6.012, 均P<0.05)。小鼠荷瘤模型发现, si-FGFR2-CCDC6转染荷瘤组移植瘤体积明显小于si-NC参照组(598.00±50.00比476.00±39.00, F=12.530, P<0.05)。结论抑制FGFR2-CCDC6融合基因表达可抑制FGF2/FGFR2/p-ERK1/2通路的激活, 抑制细胞增殖和肿瘤生长, 进而发挥抑癌作用。

夏枯草对甲状腺乳头状癌细胞抑制作用及卷曲螺旋结构域蛋白67基因的影响

目的 观察夏枯草（PV）对甲状腺乳头状癌细胞（TPC-1）的抑制作用,并探讨其对卷曲螺旋结构域67基因（CCDC67）的影响.方法 不同浓度的PV作用TPC-1细胞48h后,通过细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞毒性;用PV作用TPC67（含有目的基因CCDC67的TPC-1）48 h,采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞中CCDC67 mRNA的表达.结果 PV对TPC-1有明显抑制作用（F=133.476,P＜0.01）,且抑制作用具有明显浓度依赖性（r2 =0.983）;经PV处理TPC67细胞48h后CCDC67 mRNA的表达量增强,实验组（0.779±0.055）明显高于阴性对照组（0.318±0.109,p＜0.05）.结论 PV对TPC-1细胞的增殖有明显抑制作用,PV可上调CCDC67基因的表达.

甲状腺乳头状癌中卷曲螺旋结构域蛋白67基因mRNA和蛋白的表达及其相关性

目的 探讨甲状腺乳头状癌（PTC）细胞株TPC-1、甲状腺鳞癌细胞株SW579、分化型甲状腺癌细胞株FTC-133以及PTC组织中卷曲螺旋结构域蛋白67（CCDC67）基因mRNA和蛋白表达的相关性.方法 采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot技术,检测甲状腺癌细胞株以及56例PTC及对应癌旁组织中CCDC67基因mRNA和蛋白表达.结果 甲状腺癌细胞株中均无CCDC67基因mRNA和蛋白的表达.癌旁组织中均出现CCDC67 mRNA和蛋白的表达.PTC组织中CCDC67 mRNA的表达率为41.4％ （23/56）,蛋白的表达率为46.4％（26/56）,两者均与患者的TNM分期、病理分级及淋巴结转移明显相关（P＜0.05）.CCDC67 mRNA与蛋白的表达明显相关（P＜0.05）.结论 CCDC67在甲状腺癌细胞株中表达缺失,CCDC67 mRNA及其蛋白在PTC组织中表达水平均低于癌旁组织,CCDC67基因在PTC的发生、发展中起着重要作用.