益气活血方对非破裂型腰椎间盘突出退变髓核细胞ColⅡ、Aggrecan及TIMP-1 mRNA的影响

目的探讨益气活血方对人体非破裂型腰椎间盘突出退变髓核细胞中Ⅱ型胶原(ColⅡ)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)及金属基质蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)mRNA的表达的影响。方法选择非破裂型腰椎间盘突出症(LDH)的住院患者经手术摘除的腰椎间盘组织,采用组织块法培养原代细胞;以SPF级雄性SD大鼠制备药物血清。将传代第1代的退变髓核细胞分为3组,实验组分别予体积比为5%、10%的益气活血方血清DMEM培养液;对照组加入生理盐水血清DMEM培养液。通过Realtime PCR检测ColⅡ、Aggrecan、TIMP-1mRNA的表达。结果与生理盐水组比较,益气活血方血清可上调非破裂型腰椎间盘突出退变髓核细胞中ColⅡ、Aggrecan mRNA的表达(P<0.05),未检测出TIMP-1mRNA的变化。结论益气活血方可能通过影响非破裂型腰椎间盘突出髓核细胞中ColⅡ、Aggrecan含量,进而发挥防治非破裂型腰椎间盘突出髓核细胞的退变作用。

不同运动方式对大鼠骨骼肌急性拉伤修复过程中MHC-Ⅱ,COL-Ⅰ、COL-Ⅲ的影响

目的:了解不同运动方式(离心运动、向心运动)对骨骼肌拉伤愈合过程中肌肉再生和纤维化过程的影响。方法:将120只成年雌性SD大鼠随机分为空白组(BC组,n=8)、即刻组(IM组,n=8)、第1周组(1W组,n=8)、自然愈合组(NC组,n=32)、向心运动组(CE组,n=32)、离心运动组(EE组,n=32)。造成腓肠肌急性拉伤模型1周后,对CE组、EE组分别进行为期4周的向心和离心训练。IM组造模即刻、1W组造模后7天、BC组造模后18天取材;其余各组分别在造模后第14天、第21天、第28天、第35天4个时间段,每个时间段随机选择8只大鼠取材,用免疫组化的方法检测大鼠腓肠肌Ⅱ型肌球蛋白重链(MHC-Ⅱ)及Ⅰ、Ⅲ型胶原(COL-Ⅰ和COL-Ⅲ)水平。结果:损伤恢复的各个阶段,CE组MHC-Ⅱ水平较NH组和EE组高,并且恢复速度较快,而COL-Ⅰ和COL-Ⅲ水平较NH组和EE组低;EE组MHC-Ⅱ水平较NH组和CE组低,COL-Ⅰ水平较NH组低但高于CE组;COL-Ⅲ水平高于CE组和NH组。结论:不同运动方式对骨骼肌急性损伤后的修复过程影响不同,向心运动能有效促进损伤骨骼肌MHC-Ⅱ合成,从而加快骨骼肌再生,离心运动对MHC-Ⅱ合成的影响不明显。运动通过减少COL-Ⅰ表达和合成来抑制骨骼肌的纤维化,向心运动作用比离心运动更加明显。在损伤修复早期,COL-Ⅲ水平提高,使骨骼肌具备一定的强度和力学稳定性,有利于损伤后功能的快速代偿,而后期COL-Ⅲ水平持续增高可能促进和延长骨骼肌的纤维化过程。

大鼠骨骼肌急性拉伤修复过程中MHC-Ⅱ和COL-Ⅰ、COL-Ⅲ变化的研究

目的:通过研究大鼠骨骼肌急性拉伤修复过程中MHC-Ⅱ和COL-Ⅰ、COL-Ⅲ的变化,了解拉伤愈合过程中肌纤维再生过程及纤维化过程。方法:将56只SD大鼠分为对照组、即刻组、第1、2、3、4、5周组,造成腓肠肌急性拉伤模型后对各组进行取材并检测MHC-Ⅱ和COL-Ⅰ、COL-Ⅲ。结果:MHC-Ⅱ水平第1周降到最低,第2周开始增加,第3周恢复正常;Col-Ⅰ水平第1周降到最低,随后逐渐增加,在第3周超过正常,持续到第5周;Col-Ⅲ从第1周开始上升,第3周达到峰值,随后逐渐下降。结论:骨骼肌急性拉伤后,骨骼肌的再生过程约在损伤1周后开始,伤后3周达到高峰,并持续5周以上。纤维化过程在损伤后1周以内开始,并持续到5周以后。其中Col-Ⅲ的水平恢复早;Col-Ⅰ的恢复较晚,但在高水平维持时间更长。

益气逐瘀利水方对破裂型腰椎间盘突出退变髓核细胞Col Ⅱ及Aggrecan mRNA的影响

目的:探讨益气逐瘀利水方对人体破裂型腰椎间盘突出退变髓核细胞中Ⅱ型胶原(ColⅡ)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)mRNA的表达的影响。方法:选择破裂型LDH的住院患者经手术摘除的腰椎间盘组织,采用组织块法培养原代细胞;以SPF级雄性SD大鼠制备药物血清。将传代第1代的退变髓核细胞分为3组,实验组分别予体积比为5%、10%的益气逐瘀利水方血清DMEM培养液;对照组加入生理盐水血清DMEM培养液。通过Realtime PCR检测ColⅡ、Aggrecan mRNA的表达。结果:与生理盐水组比较,体积比为10%的益气逐瘀利水方血清可上调破裂型腰椎间盘突出退变髓核细胞中ColⅡ、Aggrecan mRNA的表达。(P<0.05)结论:益气逐瘀利水方可能通过影响破裂型腰椎间盘突出髓核细胞中ColⅡ、Aggrecan含量,进而发挥防治破裂型腰椎间盘突出髓核细胞的退变作用。

维药买朱尼对犬种植体周围龈沟液中MMP-13及COL-Ⅱ水平影响的实验研究

目的:探讨维药买朱尼对犬种植体周围龈沟液中Ⅱ型胶原酶(typeⅡcollagen,COL-Ⅱ)、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloprotease-13,MMP-13)的表达以及牙周指数变化的影响,为临床治疗种植体周围炎提供新的治疗方法。方法:选择9只健康雄性比格犬建立比格犬种植体周围炎动物模型,建模成功后,随机分为3组:买朱尼组、抗生素组及对照组,每组3只。抗生素组喂服抗生素(阿莫西林胶囊和甲硝唑片),买朱尼组根据动物体质量灌服买朱尼,对照组灌服等量生理盐水,3组犬均给予上述干预措施1个月。并于即刻种植术后、诱导炎症后1个月、药物治疗后1个月监测种植体的改良菌斑指数(modified plaque index,mPLI)、改良龈沟出血指数(modified sulcus bleeding index,mSBI)、探诊深度(probing depth,PD)、种植体龈沟液(peri-implant crevicular fluid,PICF)的量等牙周指标及COL-Ⅱ、MMP-13的变化情况,进一步分析买朱尼对种植体周围炎的疗效。结果:与对照组相比,给予干预治疗后,抗生素组和买朱尼组mSBI、mPLI、PD、PICF、COL-Ⅱ、MMP-13等指标均明显改善(P<0.01),但抗生素组和买朱尼组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:维药买朱尼对犬种植体周围龈沟液中COL-Ⅱ、MMP-13有抑制作用,此药治疗种植体周围炎效果较好。

山羊原代软骨细胞的分离培养与鉴定研究

为探究山羊原代软骨细胞的体外分离培养和鉴定方法,本实验采用胰蛋白酶与Ⅱ型胶原酶相结合的消化方法分离山羊原代软骨细胞。使用倒置显微镜观察并拍摄1、3、5、7 d共4个时期的细胞形态;利用血球计数板对细胞计数并绘制生长曲线;RT-qPCR法检测山羊软骨细胞标志性基因;通过甲苯胺蓝染色法和Ⅱ型胶原免疫荧光染色法对软骨细胞进行鉴定。结果显示:细胞形态由透亮的圆点逐渐变为三角形、短梭形等形态,最终转变为体积较大,形态圆润的多边形;细胞计数结果显示,1~7 d细胞数量逐渐增加,7 d达到峰值,7~11d细胞数量逐渐减少。Acan和Col Ⅱ基因mRNA相对表达量随细胞培养时间的延长而降低,MMP13基因mRNA相对表达量逐渐升高。甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色结果均为阳性。由以上结果可知,本实验成功获得大量活力良好的山羊软骨细胞,并建立山羊软骨细胞体外分离及培养的方法,为进一步研究山羊软骨相关体外试验提供参考。

补肾活血方对人胚肺成纤维细胞IL-17A、LC3-Ⅱ影响的实验研究

目的 探讨补肾活血方对人胚肺成纤维细胞的作用机制。方法 首先,观察不同浓度的含药血清对人胚肺成纤维细胞的抑制情况及细胞内的胶原蛋白的含量,确定出实验用含药血清的最佳血药浓度;其次,应用TGF-β1诱导人胚肺成纤维细胞,将实验细胞分为空白对照组,TGF-β1处理组,TGF-β1处理+最佳浓度含药血清干预1 h组(含药血清组),TGF-β1处理+基因敲除阴性对照组(sh-NC组),TGF-β1处理+IL-7A基因敲减组(sh-IL-17A组),TGF-β1处理+最佳浓度含药血清干预1 h+过表达质粒阴性对照组(Vector组),TGF-β1处理+最佳浓度含药血清干预1 h+IL-17A过表达质粒组(IL-17AOE组),进行相应药物培养后,检测各组细胞的增值率、胶原蛋白及IL-17A表达量的变化。结果 TGF-β1处理组中人胚肺成纤维细胞的增值率、胶原蛋白、IL-17A蛋白含量及IL-17A mRNA表达量较空白对照组明显增多(P<0.05);含药血清组细胞的增值率、胶原蛋白、IL-17A蛋白含量及IL-17A mRNA表达量较TGF-β1处理组明显较少,而自噬小体的数量较TGF-β1处理组明显增多;sh-IL-17A组细胞的增值率、胶原蛋白、IL-17A蛋白含量及IL-17A mRNA表达量较sh-NC组明显较少,而自噬小体的数量较sh-NC组明显增多;IL-17AOE组细胞的增值率、胶原蛋白及IL-17A mRNA等各项指标较Vector组明显增多,而自噬小体的数量较Vector组明显减少。结论 补肾活血方可以对MRC-5细胞中的胶原显著降解。这一作用与抑制IL-17A介导的通路,激活细胞自噬,进一步降解胶原蛋白有关。

正常与退变髓核细胞形态学及Ⅱ型胶原蛋白的定量分析

背景:椎间盘退变导致椎间隙狭窄的主要变化是髓核细胞表达软骨特异性基因产物蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的减少。目的:对成人的正常与退变椎间盘髓核细胞Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光染色及番红O染色进行定量观察比较。方法:取成人脊柱侧弯患者与椎间盘突出症患者自愿者术中取出的废弃髓核组织各3例,经培养后每个患者各测量26个细胞,正常组和退变组分别测量78个细胞。对正常与退变椎间盘髓核细胞进行番红"O"染色并行灰度及测定细胞内Ⅱ型胶原蛋白行免疫荧光染色定量测定。结果与结论:免疫荧光染色显示:退变椎间盘髓核细胞仅轻度染色,染色模糊,其呈类圆形,纺锤形,梭形及不规则形,其内仅有极少量荧光颗粒;Ⅱ型胶原表达较正常髓核细胞降低显著(P<0.05)。番红O染色显示:退变的髓核细胞肿胀,细胞核肿胀染色略淡,细胞突起延长,胞浆染色不匀伴有空泡,部分细胞崩解,细胞分布零散,混乱,可见成片坏死区。与正常髓核细胞图像灰度值相比差异无显著性意义(P>0.05)。结果表明退变的椎间盘髓核细胞减少、部分凋亡,其细胞内Ⅱ型胶原蛋白含量较正常髓核细胞显著减少。

Ⅱ型胶原微图案化对猪关节软骨细胞行为的影响

【目的】明确调控生物材料表面拓扑结构对猪关节软骨细胞基础生长行为和功能的影响,为关节软骨组织缺损修复提供理论依据。【方法】利用食人鱼溶液(Piranha,H_2O_2∶H_2SO_4)对普通玻片进行氧化,以紫外光刻法制备具有不同尺度条带微图案的Si印模,经氧气等离子体处理和Ⅱ型胶原(COLⅡ)浸润后,通过微接触印刷(μCP技术)将COLⅡ固定在氧化玻片材料表面,将猪关节腔软骨细胞接种于微图案化的支架材料上,经37℃、5%CO_2培养箱培养后采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法和二乙酸荧光素(FDA)荧光染色法分别观察软骨细胞的增殖生长情况。【结果】经食人鱼溶液处理后玻片表面羟基化程度提高,亲水性明显增强。通过μCP技术能成功将COLⅡ印刷在羟基化玻片表面上,且条带均匀、整齐。将猪软骨细胞接种到构建的取向性COLⅡ微图案材料上进行培养,发现COLⅡ能为猪软骨细胞提供黏附位点,且取向性COLⅡ微图案对软骨细胞的增殖生长有促进作用,但不同尺度(100、200和300μm)线宽对软骨细胞的增殖生长存在明显差异,表现为线宽越宽,软骨细胞的增殖生长能力越弱。猪软骨细胞在COLⅡ微图案材料上生长状况良好,随着培养时间的延长,软骨细胞多呈多边形;其软骨细胞培养效果优于无规则的涂覆COLⅡ微图案材料。【结论】利用μCP技术成功构建的规整COLⅡ微米级拓扑结构对猪关节软骨细胞的黏附铺展、增殖行为有促进作用,且线宽尺度与软骨细胞增殖生长能力呈反比趋势。即通过人为调控生物材料的表面活性拓扑结构,在一定程度上能有效调控或影响关节软骨细胞的生长行为。

miR-153-3p对于腰退行性病变调节机制的初步探讨

目的 初步探讨H_(2)O_(2)对于腰椎髓核细胞的影响及miR-153-3p对于腰退行性病变的调节机制。腰椎间盘退变(Lumbar disc degeneration,LDD)是导致下腰痛的主要因素。髓核(nucleus pulposus,NP)细胞异常增殖或过度凋亡是LDD中最明显的细胞和生化变化之一。方法 分别采用CCK8检测对照组及H_(2)O_(2)组细胞活力,流式检测两组细胞活性氧及线粒体膜电位,另采用qPCR检测上述两组的基质金属蛋白酶3(MMP3)、Nrf2、miR-153-3p、Ⅱ型胶原(COL-Ⅱ)表达含量。结果 经H_(2)O_(2)处理的腰椎髓核细胞活力下降、线粒体膜电位下降比例较对照组减少;qPCR检测对照组、H_(2)O_(2)组的miR-153-3p、COL-Ⅱ、MMP3、Nrf2表达含量,结果提示对照组、H_(2)O_(2)组Nrf2表达量差异无统计学意义(P> 0.05),H_(2)O_(2)组的miR-153-3p、MMP3表达量较对照组减少,而其COL-Ⅱ表达量较对照组降低且差异有统计学意义(P <0.05)。Westernblot检测对照组、inhibitor-NC组及nhibitor组的Nrf2表达含量,inhibitor组胞质及胞核中的Nrf2表达量升高,分别与对照组、inhibitor-NC组相比,有统计学差异(P <0.05);inhibitor-NC组胞质及胞核中的Nrf2表达量与对照组相比,差异无统计学意义。结论 抑制miR-153-3p表达,可上调腰椎髓核细胞Nrf2表达水平,提示miR-153-3p参与存进LDD进程的过程可能与其调控Nrf2表达、调节线粒体自噬过程有关。

益气化瘀补肾方对脊髓型颈椎病患者退变椎间盘细胞ColⅠ与ColⅡ mRNA表达的影响

目的:观察益气化瘀补肾方含药血清对脊髓型颈椎病患者退变椎间盘细胞ColⅠ、ColⅡmRNA表达的影响。方法:选择脊髓型颈椎病患者经手术摘除的椎间盘组织,采用组织块法培养原代细胞;以SPF级雄性SD大鼠制备药物血清。将传代第1代的退变椎间盘细胞接种于96孔酶标板中,分为6组,分别予低(5%)、中(10%)、高(20%)浓度的益气化瘀补肾方含药血清及相应浓度生理盐水血清DMEM培养液培养。通过实时荧光定量PCR检测ColⅠ、ColⅡmRNA的表达。结果:不同浓度的益气化瘀补肾方血清对椎间盘细胞增殖有明显的促进作用;与生理盐水组比较,益气化瘀补肾方不同浓度含药血清干预后椎间盘细胞ColⅡmRNA表达水平上调、ColⅠmRNA表达水平下调,尤以中浓度更为明显(P<0.01)。结论:益气化瘀补肾方可能通过影响椎间盘组织胶原的变化而发挥防治脊髓型颈椎病椎间盘退变的作用。

血清软骨代谢标志物水平与膝关节骨性关节炎患者病情严重程度的关系

目的探讨血清Ⅱ型胶原(COL-Ⅱ)与Ⅹ型胶原α1链(COL10A1)水平与膝关节骨性关节炎(KOA)严重程度的关系。方法选取我院收治的96例KOA患者为KOA组,并按照双膝关节负重位X线平片KL分级分组,另选取同期健康体检者25例作为对照组。比较KOA各亚组患者入院时的关节炎状况;比较KOA各亚组患者及对照组的血清COL-Ⅱ、COL10A1水平。结果WOMAC骨关节炎指数评分随KL等级升高而升高(P<0.05);KOA组患者的血清COL-Ⅱ、COL10A1水平高于对照组(P<0.05);KL-2、KL-3级组血清COL-Ⅱ、COL10A1水平高于KL-1、KL-4级组及对照组,KL-4级组明显高于对照组(P<0.05)。结论血清COL-Ⅱ和COL10A1水平作为软骨代谢标志物,在KOA的早期检测中具有一定的诊断意义,结合影像学KL分级能对疾病进展作出更精准的预测。

8周游泳运动对2型糖尿病大鼠心肌间质纤维化的影响

目的:观察8周游泳运动对2型糖尿病大鼠心肌间质纤维化的影响。方法:健康雄性8周龄SPF级Wistar大鼠45只,随机抽取32只在高糖高脂饲料喂养7周的基础上腹腔注射小剂量STZ缓冲液,建立2型糖尿病大鼠模型。将正常大鼠和造模成功的大鼠分为4组:空白对照组(C组)、单纯运动组(CE组)、糖尿病对照组(DM组)、糖尿病运动组(DME组)。运动组采用改进的Ploug训练方案,60min/d,每周训练6d,共训练8周。运动8周末尾静脉取血测定空腹血糖(FBG),眶后取血测定空腹血清胰岛素(FINS),并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),HE染色和Masson染色观察心肌形态学变化,ELISA法测定心肌组织COLⅠ和COLⅢ含量。结果:(1)8周运动干预后,DM组和DME组FBG非常显著高于C组和CE组,FINS水平显著低于C组和CE组,HOMA-IR指数DM组非常显著高于C组和CE组、DME组显著高于C组和CE组;DME组与DM组相比,FBG和HOMA-IR指数显著降低,FINS水平显著升高;DM组和DME组心脏相对重量(HW/BW)显著高于C组;DME组与DM组、CE组与C组HW/BW值无显著性差异。(2)DM组大鼠心肌病理改变可见心肌纤维断裂、坏死、严重增生,心肌细胞排列紊乱,水肿明显,变性严重,间质充血;DME组心肌结构改变有所减轻,C组和CE组呈现正常的心肌细胞形态。(3)心肌组织COLⅠ含量DM组显著高于DME组、C组和CE组;DME组、C组和CE组之间无显著性差异;心肌组织COLⅢ含量各组差异均无显著性。结论:8周游泳运动明显改善2型糖尿病大鼠心肌间质纤维化程度,对大鼠心肌损伤具有保护作用。

白芍木瓜汤对碘乙酸所致大鼠骨性关节炎药效作用的实验研究

目的:观察白芍木瓜汤对碘乙酸诱导的大鼠骨性关节炎的药效作用,并初步探讨其可能机制。方法:取雄性SD大鼠50只,按体质量随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组、白芍木瓜汤高、低剂量组,每组10只。除正常对照组外,其余各组大鼠双侧膝关节腔注射碘乙酸建立骨性关节炎模型。术后第2 d各组大鼠开始给予药物干预,连续6周,每周称量大鼠体质量,检测大鼠抓力。第6周末,各组大鼠麻醉,进行X-ray活体成像观察;心脏取血,分离血清,酶联免疫法检测各组大鼠血清中基质金属蛋白酶13(MMP-13)、软骨蛋白聚糖(Aggrecan)、II型胶原(Col II)的含量;截取膝关节,剔除皮肤与肌肉,EDTA脱钙后分别进行HE染色与SO染色,光镜下观察各组大鼠膝关节病理变化。结果:造模后6周,相比于正常对照组,模型组大鼠体质量、血清MMP-13、Col-II、Aggrean含量均出现显著性差异(P<0.01),膝关节影像学上表现出明显损伤,光镜下观察到明显的病理改变;给药6周后,高、低剂量的白芍木瓜汤对OA大鼠体质量、抓力的影响不明显,但相比于模型对照组,白芍木瓜高、低剂量组大鼠血清MMP-13含量均显著降低(P<0.01),Col-II、Aggrean含量均显著升高(P<0.01),膝关节影像学损伤与光镜下病理改变均得到明显改善。结论:白芍木瓜汤对碘乙酸诱导的大鼠骨性关节炎有良好的药效作用,其作用机制可能与抑制MMP-13产生,促进Aggrecan、Col-II合成有关,从而达到修复软骨有关。

条件性敲除软骨组织中FGF9基因小鼠模型的建立

目的:利用Cre-LoxP系统建立可调控的软骨组织条件性敲除成纤维细胞生长因子9(fibroblast growth factor,FGF9)小鼠模型。方法:构建针对小鼠Fgf9基因2号外显子的重组载体,电穿孔转染胚胎干细胞(ES细胞)。选择药物G418和Ganc,筛选阳性ES细胞并进行PCR鉴定。利用显微注射将ES细胞注入C57BL/6J小鼠囊胚,移入假孕小鼠子宫,获得含Neo的flox杂合小鼠。该小鼠去Neo后,与ColⅡ-Cre转基因小鼠杂交,并以他莫昔芬诱导,其后代软骨细胞内flox纯合、Cre阳性小鼠的flox区域被敲除。结果:Fgf9基因flox杂合子小鼠无明显异常,可稳定繁殖。该flox小鼠与ColⅡ-Cre转基因小鼠交配后,成功建立条件性敲除软骨组织中Fgf9基因小鼠模型。结论:利用Cre-LoxP系统,可成功建立Fgf9基因条件性敲除小鼠模型,为后续研究FGF9在骨软骨发育及骨关节稳态维持中的功能奠定了基础。

髁突软骨诱导外源性骨髓间充质干细胞成软骨分化的实验研究

目的:研究正常和骨关节炎髁突软骨诱导外源性骨髓间充质干细胞(BMSCs)成软骨分化能力的差别及调节机制。方法:采用单侧前牙反[牙合](UAC)诱导的颞下颌关节骨关节炎动物模型。BMSCs分别与正常髁突软骨(对照组)和UAC髁突软骨(实验组)在transwell系统中共培养48 h,用realtime-PCR检测BMSCs中Col2a1基因表达情况,用甲苯胺蓝染色及免疫荧光染色观察BMSCs软骨基质表达情况和c-myc和ERK1/2表达情况。结果:BMSCs与对照组和UAC组细胞培养后,甲苯胺蓝染色均为阳性,Col2a1的mRNA表达水平均升高,UAC组BMSCs比对照组共培养的BMSCs表达低。共培养的BMSCs的c-myc和ERK1/2均为阳性,但与UAC组共培养的BMSCs的c-myc和ERK1/2表达水平较对照组共培养的低。结论:骨关节炎软骨较正常软骨诱导BMSCs成软骨分化能力弱,c-myc和ERK1/2可能参与了髁突软骨诱导的BMSCs成软骨分化。

获得性大疱性表皮松解症

获得性大疱性表皮松解症(Epidermolysis Bullosa Acquisita,EBA)是一种罕见的获得性的自身免疫性表皮下大疱病,血中存在抗VⅡ型胶原(COL7)的自身抗体,其临床表现多样,类似于遗传性营养不良性大疱性表皮松解症(Dystrophic Epidermolysis Bullosa,IDEB)或类天疱疮(Bullous Pemphigoid,BP),并可累及粘膜、指甲以及毛发,而且病程慢性,迁延不愈,目前诊断及治疗均较棘手。

阿仑膦酸钠体外对软骨细胞的影响及对兔前交叉韧带切断后关节软骨和软骨下骨的作用

目的探讨阿仑膦酸钠(alendronate,ALN)对受IL-1β干预后软骨细胞的影响,以及对前交叉韧带切断术(anterior cruciate ligament transection,ACLT)后兔骨性关节炎模型关节软骨和软骨下骨的保护作用。方法取3月龄雄性日本大耳白兔关节软骨采用酶消化法分离软骨细胞,并进行体外培养。取第3代软骨细胞随机分为3组:ALN组(A1组)及IL-1β组(B1组),采用含10ng/mL人重组IL-1β的DMEM完全培养液培养2d后,分别更换含或不含1×10-6mol/L ALN的DMEM完全培养液培养3d;空白组(C1组)细胞以DMEM完全培养液培养5d。取各组细胞行ColⅡ及MMP-13免疫细胞化学染色观察及实时RT-PCR检测。另取24只3月龄雄性日本大耳白兔,随机分为3组(n=8)。ACLT+ALN组(A2组)及ACLT组(B2组)制备ACLT模型,假手术组(C2组)以同法显露前交叉韧带后缝合切口。术后4d A2组以10μg/(kg·d)皮下注射浓度为25μg/mL的ALN,B2组和C2组予等量生理盐水。8周后处死动物行膝关节大体观察,取股骨内侧髁行组织学观察及ColⅡ及MMP-13免疫组织化学染色观察,对胫骨进行软骨下骨组织形态学分析。结果C1组软骨细胞胞浆中见ColⅡ免疫细胞化学染色表达呈强阳性,A1组呈阳性表达,B1组少见阳性显色。A1组积分吸光度(IA)值高于B1组(P<0.05),与C1组差异无统计学(P>0.05)。C1组软骨细胞胞浆中未见MMP-13免疫细胞化学染色阳性表达,A1组呈阳性表达,B1组呈强阳性表达。A1组IA值低于B1组(P<0.05),但高于C1组(P<0.05)。实时RT-PCR检测示A1组ColⅡmRNA表达高于B1组(P<0.05),与C1组差异无统计学意义(P>0.05);MMP-13mRNA表达低于B1组(P<0.05),但高于C1组(P<0.05)。体内实验8周后C2组膝关节面无溃疡,A2组膝关节面有少量溃疡,B2组关节面溃疡较多并有全层溃疡。A2组Mankin评分低于B2组(P<0.05),但高于C2组(P<0.05)。免疫组织化学染色见C2组关节软骨中ColⅡ蛋白表达呈强阳性,A2组呈阳性表达,B2组少见阳性显色;A2组IA值高于B2组(P<0.05),与C2组差异无统计学意义(P>0.05)。C2组关节软骨中未见MMP-13阳性表达,A2组呈弱阳性表达,B2组呈强阳性表达;A2组IA值低于B2组(P<0.05),但高于C2组(P<0.05)。骨形态计量学结果示:B2组软骨下骨骨小梁体积比、骨小梁厚度低于A2、C2组(P<0.05),骨小梁分离度、荧光百分率和骨形成率高于A2、C2组(P<0.05)。以上指数A2组与C2组差异均无统计学意义(P>0.05)。各组间骨小梁数目、矿化沉积率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论ALN能抑制ACLT兔关节软骨降解,保护软骨下骨骨量和微观结构。在体内、体外ALN均能抑制MMP-13在软骨细胞中的表达,具有一定的软骨细胞保护功能。

步行速度对大学男生步态的影响

利用H/P/Cosmos GaitwayⅡ步态分析跑台,探讨不同步速条件下步态的变化.8名健康大学男生以4,5,6km·h-13种速度在跑步机上行走,采集10 s的连续步态,测力板采样率为100Hz.结果表明:随着步行速度增加,步频、步长、步幅呈显著性的递增;而单步时间、步态周期时间、支撑时间、单足支撑时间及双足支撑时间均出现显著性递减.第一峰值力、质量承受率及蹬地率随步行速度的增加而增加;支撑力却随步行速度增加呈显著性降低;而第二峰值力仅在速度4km·h-1和5km·h-1之间的增加有意义.步态模式随着步行速度的变化而变化.体质量大的人快步走时需要适当控制步行速度,以免地面反作用力过大,对足部造成损伤.

益气养血方抗兔膝骨关节炎模型软骨退变的作用及机制研究

目的探讨益气养血方对兔膝骨关节炎(KOA)模型软骨细胞凋亡及血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、Ⅱ型胶原蛋白(COL-Ⅱ)、人基质金属蛋白酶-13(MMP13)表达的影响,揭示其抗骨关节炎软骨退变的作用及机制。方法 40只日本大耳白兔随机分为4组,即假手术组、KOA模型组、阳性药(双醋瑞因)组、益气养血方组各10只。石蜡切片HE染色观察软骨退变情况,TUNEL法检测软骨细胞凋亡,免疫组化检测COL-Ⅱ、MMP13的表达。结果益气养血方对KOA模型兔膝关节软骨退变具有一定抑制作用,能下调血清促炎细胞因子TNF-α产生水平(P<0.05),抑制软骨细胞凋亡;能下调软骨组织MMP-13蛋白的表达(P<0.01),上调软骨组织COL-Ⅱ胶原的表达(P<0.05),抑制软骨基质降解。结论益气养血方通过下调TNF-α、MMP-13蛋白表达,同时上调COL-Ⅱ胶原表达,抑制软骨细胞凋亡及细胞外基质降解,可能是益气养血方治疗骨关节炎的作用机制之一。