汉防己甲素对TGF-β1诱导的MRC-5细胞中Col-I及FN表达的影响

目的:探讨汉防己甲素(Tet)对人转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的人胚肺成纤维细胞MRC-5的影响。方法:不同质量浓度的TGF-β1(0,2.5,5,10,20,40μg·L^-1)作用于MRC-5细胞,应用细胞增殖与毒性检测法(CCK-8)检测TGF-β1对MRC-5细胞的增殖毒性,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测MRC-5细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及波形蛋白(Vimentin)表达水平的变化,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测MRC-5细胞上清液中I型胶原(Col-I)及纤维黏连蛋白(FN)表达水平的变化,以筛选出TGF-β1活化MRC-5细胞的适宜浓度。结合筛选出的TGF-β1的浓度条件,与不同浓度的Tet(0,2.5,5,10,20,40μmol·L^-1)共同作用于MRC-5细胞,再次应用CCK-8法筛选TGF-β1及Tet共培养对MRC-5细胞的安全浓度,Western blot检测MRC-5细胞中α-SMA及Vimentin表达水平的变化,ELISA检测MRC-5细胞上清液中Col-I及FN表达水平的变化。结果:与空白组比较,给药24 h时,20μg·L^-1及40μg·L^-1的TGF-β1对MRC-5细胞有毒性作用(P<0.05),给药48 h时,10,20,40μg·L^-1的TGF-β1对MRC-5细胞有毒性作用(P<0.05);加入Tet培养24 h时,对MRC-5细胞的半数抑制浓度(IC50)值为14.07μmol·L^-1,培养48 h时,IC50值为7.51μmol·L^-1;与空白组比较,5μg·L^-1的TGF-β1刺激MRC-5细胞时,细胞中α-SMA,FN及Col-I的相对含量明显升高(P<0.05),Vimentin相对含量显著升高(P<0.01),10μg·L^-1组细胞中α-SMA,Vimentin,FN及Col-I的相对含量显著升高(P<0.01);10μg·L^-1的TGF-β1与不同浓度的Tet共培养,与TGF-β1组比较,Tet 5μmol·L^-1组,细胞中α-SMA,Vimentin及FN相对含量显著降低(P<0.01),Col-I相对含量明显降低(P<0.05),Tet 10μmol·L^-1组,细胞中α-SMA,Vimentin,FN及Col-I的相对含量均显著降低(P<0.01)。结论:TGF-β1能够升高MRC-5细胞中Col-I,FN等细胞外基质的水平,而Tet可以有效抑制这种变化的发生,提示Tet可能对肺纤维化的形成中,成纤维细胞大量分泌细胞外基质的过程有抑制作用。

针刀干预对膝骨关节炎兔滑膜纤维化的影响

目的:探讨针刀干预对膝骨关节炎(KOA)兔滑膜纤维化的影响。方法:新西兰兔随机分为空白组、模型组、针刀组和电针组,各8只。采用改良Videman左后肢伸直位固定法制动4周,制备模型。空白、模型组不干预,针刀、电针组各干预3周。测量被动活动范围(PROM);天狼猩红染色观察滑膜胶原沉积的情况;Western Blot法检测膝关节滑膜组织TGF-β1、α-SMA与COL-Ⅰ蛋白表达情况。结果:与模型组比较,针刀、电针组PROM明显增大,差异具有统计学意义(P<0.01),针刀组大于电针组,差异具有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,针刀、电针组滑膜组织胶原沉积减轻。模型组TGF-β1、α-SMA与COL-Ⅰ蛋白表达显著高于正常组,差异具有统计学意义(P<0.01);针刀、电针组可明显抑制TGF-β1、α-SMA与COL-Ⅰ的表达,差异具有统计学意义(P<0.01);与电针组比较,针刀组TGF-β1、α-SMA与COL-Ⅰ蛋白表达明显较低,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:针刀通过调控TGF-β1的表达,从而下调α-SMA和COL-Ⅰ的表达,减轻滑膜纤维化达到治疗KOA的目的。

大鼠成骨细胞膜片的体外构建及成骨潜力评估

目的体外构建大鼠成骨细胞膜片,并评估其成骨潜力。方法原代培养大鼠成骨细胞鉴定后,高密度连续培养,在维生素C诱导下形成细胞膜片。用扫描电镜观察膜片形貌特征及细胞形态;行碱性磷酸酶(ALP)活性检测;实时荧光定量PCR检测其成骨相关基因I型胶原(COLⅠ)、骨钙素(OC)的表达情况。结果维生素C诱导高密度连续培养成骨细胞5d能获得可机械刮起的成骨细胞膜片。电镜下,由多层细胞组成膜片,细胞层之间有间隙。ALP含量实验组高于对照组,第2周低于第1周。实验组I型胶原mRNA表达情况,第1周与对照组无差异,第2周与第3周高于对照组;实验组内,第1周与第2周无差异,第3周下调。骨钙素mRNA表达,实验组高于对照组;实验组内,表达量随培养时间延长而上调。结论维生素C促进连续培养的成骨细胞形成膜片,机械刮取法能够完整获得。形成的细胞膜片2周内可能生存力较强,可能具备一定成骨潜能。

大黄素对TGF-β1诱导的NRK-49F细胞增殖的影响

目的:研究大黄素对TGF-β1诱导的肾成纤维细胞株(NRK-49F)增殖以及降低FN(纤连蛋白),Col-I(I型胶原蛋白),Smad2/3蛋白及基因表达的机制。方法:采用CCK8法检测不同浓度大黄素对NRK-49F细胞增殖情况的影响;终浓度为20、40、80μmol/L的大黄素处理NRK-49F细胞30min后,模型组和观察组均以TGF-β1以5ng/mL的终浓度刺激24h,并收集细胞,蛋白质免疫印迹技术(Westernblot)检测FN,Col-I,Smad2/3蛋白表达水平,实时荧光定量PCR(Real-timePCR)检测FN,Col-I,Smad2/3mRNA表达。结果:模型组FN,Col-I,Smad2/3蛋白和基因的表达明显增加,大黄素含药血清组能抑制NRK-49F细胞增殖,且抑制FN,Col-I,Smad2/3蛋白和的表达(P<0.05)。大黄素浓度越高,抑制作用越明显,成一定的量效关系。结论:大黄素干预后,可改善肾纤维化程度,保护NRK-49F细胞模型损伤。

白藜芦醇通过TGF-β1/ADAMTS-1信号通路抑制肺纤维化

目的观察白藜芦醇(Res)对博莱霉素所致大鼠肺纤维化的影响,并探讨其是否通过转化生长因子-β1(TGF-β1)/含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS-1)信号通路起作用。方法 90只SD大鼠随机分为对照组(n=10)、模型组(n=40)和Res组(n=40),后两组经气管内注入博莱霉素建立大鼠肺纤维化模型,d 2起Res组大鼠予100 mg.kg-1Res灌胃,其余两组相同条件下给予生理盐水,模型组和Res组分别于d 7、d 14、d 28、d 56随机处死10只大鼠,而对照组于d 56全部处死作为总体对照,取出肺组织行HE染色和Masson染色,用荧光实时定量PCR和Western blot分别检测肺组织中TGF-β1、ADAMTS-1、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)mRNA及蛋白表达,分离血清,并采用酶联免疫吸附法检测血清I型前胶原羧基端前肽(PICP)和Ⅲ型前胶原氨基端前肽(PⅢNP)浓度。结果 Res组大鼠肺泡炎症和肺纤维化程度明显轻于模型组(P<0.05)。与对照组比较,模型组肺组织ADAMTS-1 mRNA和蛋白表达量降低(P<0.05),而TGF-β1、ColⅠ、ColⅢmR-NA和蛋白表达量及血清PICP、PⅢNP浓度增加(P<0.05或0.01);相比于模型组同期,Res组各时间点ADAMTS-1mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05),而TGF-β1、ColⅠ、ColⅢmRNA和蛋白表达量及血清PICP、PⅢNP浓度则降低(P<0.05或0.01)。结论 Res通过TGF-β1/ADAMTS-1信号通路降解肺组织ColⅠ、ColⅢ发挥抗肺纤维化的作用。

异补骨脂素加锌对大鼠成骨细胞相关细胞因子表达影响的实验研究

为探讨异补骨脂素加锌对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞相关基因表达的影响,用改良的组织块培养法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,在成骨细胞体系中加入异补骨脂素与锌,以雌激素为阳性对照,空白组为阴性对照。结果显示:异补骨脂素加锌较单纯应用异补骨脂素或硫酸锌在48 h时促体外大鼠成骨细胞Ⅰ型胶原的表达;异补骨脂素加锌组可以明显上调大鼠成骨细胞TGF-β1的细胞信号转导因子Smad4 mRNA的表达(P<0.01);能促进Runx2/Cbfa1 mRNA的表达(P<0.05)。与空白对照组相比,异补骨脂素组,异补骨脂素加锌组均能增强Osterix mRNA的表达(P<0.05)。与单纯应用异补骨脂素或者锌相比,异补骨脂素与锌联合应用能够协同增效,对促进体外培养的成骨细胞相关转录因子的表达更加明显,探讨了异补骨脂素及其与锌配伍调节骨代谢的分子机制,为提高骨质疏松症的临床疗效以及抗骨质疏松新药的开发提供了实验依据。

平喘颗粒对气道高反应大鼠气道重塑的干预作用研究

目的:研究平喘颗粒对气道高反应大鼠气道重塑过程中肺组织中Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(COL-Ⅲ)、转化生长因子-β1(TGFβ1)蛋白表达的影响。方法:将48只SPF级健康6周龄Wistar大鼠分为空白组、模型组、治疗组,每组16只。空白组用生理盐水代替进行致敏和激发,其余两组在实验开始后1 d、14 d和21 d,给予0.2 mL抗原液皮下注射致敏,同日用含有高温杀死的6×10^(9)/mL百日咳杆菌菌苗1 mL腹腔注射,并于第28~34天将其放入自制玻璃箱中,给予1%OVA的生理盐水溶液持续雾化30 min,1次/d,连续定时激发5 d,后每隔日激发1次,共激发6周,造成气道高反应大鼠模型。治疗组在末次致敏后第4天开始给予中药(平喘颗粒)灌胃,药物灌胃剂量为1 mL/100 g,空白组和模型组用相应剂量生理盐水(1 mL/100 g)灌胃。有激发阶段时,则在激发前1 h完成药物灌胃。各组大鼠于末次激发24 h后处死,取肺组织进行HE和Mallory染色,观察各组大鼠肺组织病理HE染色、Mallory染色及免疫组化和Western blotting检测肺组织中COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、TGFβ1的含量。结果:HE和Mallory染色显示,平喘颗粒能减轻气道高反应大鼠的肺组织形态学改变和胶原沉积。免疫组化法检测结果显示,与空白组相比,治疗组、模型组COL-Ⅰ、CⅠOL-Ⅲ表达均显著升高(均P<0.01);与模型组相比,治疗组COL-Ⅰ、COL-Ⅲ表达均明显降低(均P<0.05)。Western blotting检测结果显示,与空白组相比,治疗组、模型组COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、TGFβ1表达均显著升高(P<0.01);与模型组相比,治疗组COL-、COL-Ⅲ、TGFβ1表达明显降低(均P<0.05)。结论:平喘颗粒可以抑制气道高反应大鼠的气道重塑,抑制肺成纤维细胞激活,使TGFβ1的表达降低,减少了ColⅠ和ColⅢ的表达,减少了基底膜增厚和胶原沉积,发挥了抗纤维化的作用。

木棉花总黄酮对CCl_4致肝纤维大鼠ColⅠ表达的影响

目的研究木棉花总黄酮(TFG)对CCl4致肝纤维大鼠Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)mRNA和ColⅠ蛋白表达的影响。方法采用50%CCl4花生油溶液灌胃诱导Wistar大鼠肝纤维化造模,将病理检查确认肝纤维化形成的Wistar大鼠50只随机分成5组,分别为模型对照组(模型组),秋水仙碱阳性对照组(阳性组),木棉花总黄酮高、中、低剂量组,另外设空白组,空白组和模型组给予等剂量的生理盐水,每日灌胃给药1次,连续4周。末次给药24 h后处死大鼠,RT-PCR检测肝组织中ColⅠmRNA的表达,用免疫组化方法观察肝组织ColⅠ蛋白质的表达,运用实时荧光定量PCR方法对肝组织ColⅠmRNA表达进行相对定量。结果 RT-PCR和实时荧光定量PCR结果均表明TFG能显著下调ColⅠmRNA的表达(P<0.05,P<0.01)。免疫组化结果显示,TFG能显著降低肝组织ColⅠ蛋白质的表达(P<0.05,P<0.01),且表现一定的剂量依赖性。结论 TFG对CCl4诱导的肝纤维大鼠具有一定的保护作用,其机制可能与其下调ColⅠmRNA及蛋白表达有关。

姜黄素对人循环纤维细胞增殖及COLⅠ表达影响的研究

目的从外周血中分离并鉴定人循环纤维细胞,初步探讨姜黄素对人循环纤维细胞的药理作用。方法密度梯度离心法分离纯化细胞,流式细胞术和免疫化学法对细胞进行鉴定;CCK-8法及流式细胞技术分别检测姜黄素对人循环纤维细胞增殖和COLⅠ表达的影响。结果在体外成功分离培养了人循环纤维细胞,细胞呈CD34、CD45和COLⅠ阳性,其中79.7%的细胞为COLⅠ和CD45双阳性,可证明为人循环纤维细胞。姜黄素对循环纤维细胞的增殖起调控作用,不同浓度姜黄素的短时间(24 h)作用可促进人循环纤维细胞的增殖;而作用较长时间(72 h)后不仅能明显抑制细胞的增殖,而且能下调COLⅠ的表达,以高浓度效果最为明显(20μmol·L-1)。结论 20μmol·L-1的姜黄素作用72 h可明显抑制人循环纤维细胞的增殖和COLⅠ的表达。

I型胶原和热休克蛋白90在肉鸡胫骨软骨发育不良不同阶段的变化

应用免疫组织化学方法,研究了I型胶原(Col I)和热休克蛋白90(Hsp90)在肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)不同阶段的变化。将80羽1日龄健康AA肉鸡预饲1周后分为2组。对照组饲以基础日粮;试验组在基础日粮中添加福美双100 mg.kg-1,4 d后继续饲以基础日粮。试验历时23 d。应用抗Col I和Hsp90多克隆抗体对试验第4、9、16、23天的肉鸡胫骨生长板进行免疫组织化学研究。结果表明,在饲喂福美双后第4、第9天,Col I和Hsp90的合成在生长板前肥大区和肥大区软骨细胞都明显增加,而第16、第23天时在TD损伤周边的前肥大区软骨细胞出现。由此推测,Col I蛋白合成增加,可能是由于不能正常钙化的反馈调节所致;而上调表达的Hsp90可能在调节软骨细胞发育周期中发挥重要作用,为进一步认识TD提供了新的思路。

菟丝子水提物对肾间质纤维化大鼠肾组织保护作用的研究

目的探讨菟丝子水提物对大鼠单侧输尿管结扎诱导的肾间质纤维化的疗效。方法 SPF级SD大鼠随机分为3组:假手术组、模型组、菟丝子组。通过复制肾间质纤维化大鼠模型,检测模型大鼠血清肌酐和尿素氮水平,观察肾组织病理变化,并采用免疫组化技术检测大鼠肾组织α-平滑肌动蛋白(α-SMA)、结缔组织生长因子(CTGF)、I型胶原(Col I)等表达情况。结果相比于模型组,菟丝子给药组大鼠血清肌酐和尿素氮水平显著降低,减少肾间质胶原沉积和肾组织α-SMA、CTGF、Col I表达。结论菟丝子水提物对肾间质纤维化大鼠肾组织有缓解保护作用。

8周游泳运动对2型糖尿病大鼠心肌间质纤维化的影响

目的:观察8周游泳运动对2型糖尿病大鼠心肌间质纤维化的影响。方法:健康雄性8周龄SPF级Wistar大鼠45只,随机抽取32只在高糖高脂饲料喂养7周的基础上腹腔注射小剂量STZ缓冲液,建立2型糖尿病大鼠模型。将正常大鼠和造模成功的大鼠分为4组:空白对照组(C组)、单纯运动组(CE组)、糖尿病对照组(DM组)、糖尿病运动组(DME组)。运动组采用改进的Ploug训练方案,60min/d,每周训练6d,共训练8周。运动8周末尾静脉取血测定空腹血糖(FBG),眶后取血测定空腹血清胰岛素(FINS),并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),HE染色和Masson染色观察心肌形态学变化,ELISA法测定心肌组织COLⅠ和COLⅢ含量。结果:(1)8周运动干预后,DM组和DME组FBG非常显著高于C组和CE组,FINS水平显著低于C组和CE组,HOMA-IR指数DM组非常显著高于C组和CE组、DME组显著高于C组和CE组;DME组与DM组相比,FBG和HOMA-IR指数显著降低,FINS水平显著升高;DM组和DME组心脏相对重量(HW/BW)显著高于C组;DME组与DM组、CE组与C组HW/BW值无显著性差异。(2)DM组大鼠心肌病理改变可见心肌纤维断裂、坏死、严重增生,心肌细胞排列紊乱,水肿明显,变性严重,间质充血;DME组心肌结构改变有所减轻,C组和CE组呈现正常的心肌细胞形态。(3)心肌组织COLⅠ含量DM组显著高于DME组、C组和CE组;DME组、C组和CE组之间无显著性差异;心肌组织COLⅢ含量各组差异均无显著性。结论:8周游泳运动明显改善2型糖尿病大鼠心肌间质纤维化程度,对大鼠心肌损伤具有保护作用。

结缔组织生长因子在晶状体上皮细胞转分化和细胞外基质合成中的作用

目的探讨结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在人晶状体上皮细胞(human lens epithelium cells,HLECs)转分化和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)合成中的作用。方法采用不同质量浓度CTGF(0、5、15、30、60μg/L)对体外培养的人晶状体上皮细胞诱导24h,倒置显微镜下观察细胞形态的变化,免疫荧光法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在细胞中的表达,Real-time PCR和Western blot方法检测α-SMA、Ⅰ型胶原纤维(COL-I)和纤维连接蛋白(Fn)的表达。结果正常人晶状体上皮细胞为多角形贴壁细胞,不同浓度CTGF诱导24h后,晶状体上皮细胞由单层多角形变为长梭形,细胞间隙变大,呈纤维细胞样改变。CTGF可诱导α-SMA在HLECs胞质表达。CTGF能促进HLECsα-SMA、Fn、COL-I蛋白和mRNA的表达,且这种作用随CTGF浓度的增加而增强(P<0.05)。结论 CTGF能促进人晶状体上皮细胞转分化及CEM的合成。

肠出血性大肠杆菌O157毒力及黏附相关基因的PCR检测和PCR-RFLP分析

为了了解大肠杆菌O157分离菌株携带毒力及黏附相关基因的情况及菌株的多态性。用聚合酶链式反应扩增stx1、stx2、eaeA、ehxA、EspA和Tccp基因。选用限制性内切酶HincⅡ和EcoRⅡ对分离的O157∶H7菌株eaeA基因进行酶切,选用限制性内切酶HaeⅢ、HinfⅠ、EcoRⅡ和RsaⅠ对分离的O157∶H7菌株ehxA基因进行酶切,最后对这两个基因进行PCR-RFLP分析。结果,所有O157∶H7菌株扩增出eaeA、ehxA、EspA和Tccp基因,但没有扩增出stx1和stx2基因;4株O157∶H?菌株,均没有扩增出stx2、eaeA、ehxA、EspA和Tccp基因,且只有1株扩增出stx1基因。所有分离菌株的eaeA基因和ehxA基因选用限制性内切酶酶切之后所得酶切片段数目和大小与标准菌株的eaeA基因和ehxA基因选用限制性内切酶酶切之后所得酶切片段数目和大小相同。结果表明,由于所有菌株缺失stx2基因,其致病力相对较低,且在基因水平较为保守,多态性较为单一。

复方861含药血清对HSC-T6细胞Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶组织抑制因子1mRNA表达的影响

目的:观察复方861含药血清对HSC-T6细胞I型胶原(CoL-I)、基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP1)mRAN表达的影响。方法:不同剂量复方861灌胃大鼠制备的含药血清,作用于HSC-T6细胞48h,以逆转录定量PCR方法测定其对HSC-T6细胞CoL-I、TIMP1 mRNA表达的影响。结果:复方861 0.5g/kg、1.0g/kg、2.0g/kg、6.0g/kg等不同剂量的含药血清HSC-T6细胞Col-I、TIMP1 mRAN表达水平分别为0.28±0.09、0.29±0.13、0.31±0.18、0.40±0.08,1.28±0.46、1.33±0.40、1.14±0.10、1.22±0.31,与空白对照组(0.58±0.04,2.29±0.67)比较,具有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论:复方861降低HSC-T6细胞CoL-I、TIMP1mRAN表达水平,是其抗肝纤维化的作用机理之一。

骨髓间充质干细胞条件培养液对瘢痕成纤维细胞生物活性的影响

背景:间充质干细胞移植可通过多种调节机制促进皮肤创伤修复,抑制瘢痕形成,目前多数学者认为间充质干细胞分泌的生物活性因子起主要作用。目的:观察骨髓间充质干细胞条件培养液对增生性瘢痕成纤维细胞增殖能力及胶原合成的影响。方法:分离培养人骨髓间充质干细胞和增生性瘢痕成纤维细胞,制备骨髓间充质干细胞条件培养液。将12,24,48 h收集的条件培养液孵育体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞24 h,并与空白对照组比较,采用CCK-8实验检测增生性瘢痕成纤维细胞的增殖活性,Real-time PCR检测增生性瘢痕成纤维细胞中Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达。结果与结论:与空白对照组相比较,在24 h和48 h收集的骨髓间充质干细胞条件培养液对增生性瘢痕成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用(P<0.01),对其胶原的合成也具有显著的抑制作用(P<0.01)。结果表明骨髓间充质干细胞条件培养液可通过分泌抗纤维化的生物活性因子抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖和胶原产生,为细胞疗法策略减轻瘢痕提供了新的理论支持。

转化生长因子β_1中和抗体对转化生长因子β诱导肌腱胶原和术后粘连的影响(英文)

背景： 研究表明，转化生长因子β1在肌腱损伤愈合过程中增加了肌腱细胞胶原的合成和术后粘连的形成。目的：观察转化生长因子β1抗体对转化生长因子β诱导的肌腱细胞胶原产生及术后粘连形成的影响。 设计、时间及地点：随机分组观察实验，于2005-09/2006-06在同济医学院实验动物中心完成。材料：选择2~5月龄新西兰大白兔，体质量3.5~4.5 kg。转化生长因子由美国Santa Cruz B iotechnology公司提供。方法：取兔屈指肌腱分离肌腱成纤维细胞、腱外膜细胞和腱内膜细胞，将细胞随机分成2组，实验组加入1 μg/L 转化生长因子β后，再加入0.1，0.5，1.0 mg/L转化生长因子β1中和抗体，对照组不添加任何试剂，酶联免疫吸附实验测定Ⅰ型胶原。取84只兔行中趾屈指肌腱切断吻合术，将其中36只兔随机分成3组，腱鞘内分别注入生理盐水、1.0，2.0 mg/L转化生长因子β1中和抗体，4，8周后取出肌腱行肌腱粘连检测、生物力学测定、组织学观察和扫描电镜观察；余48只兔随机分成2组，腱鞘内分别注入生理盐水和1.0 mg/L转化生长因子β1中和抗体，1，2，4，8周后取出肌腱，原位杂交方法测定肌腱转化生长因子β1和Ⅰ型胶原mRNA的表达。 主要观察指标：各组兔肌腱细胞胶原产生及术后粘连情况。结果：酶联免疫吸附实验显示，转化生长因子β1能明显提高肌腱细胞Ⅰ型胶原的产生；转化生长因子β1抗体能降低3种细胞Ⅰ型胶原的产生，随抗体质量浓度增加，Ⅰ型胶原水平逐渐降低，且呈剂量依赖性；术后4，8周，与1.0，2.0 mg/L 转化生长因子β1组比较，生理盐水组屈趾肌腱滑动距离较短，模拟主动屈曲度明显受限（P 〈 0.05），最大抗断裂载荷各组间比较差异无显著性意义（P 〉 0.05）。扫描电镜和组织学观察结果显示，术后4，8 周生理盐水组胶原纤维排列紊乱，1.0，2.0 mg/L 转化生长因子β1组胶原纤维排列整齐。原位杂交结果显示，术后各时间点1.0 mg/L 转化生长因子β1组转化生长因子β1 和Ⅰ型胶原mRNA表达均低于生理盐水组（P 〈 0.05）。 结论：转化生长因子β1抗体能有效抑制转化生长因子β1在肌腱损伤修复中的作用，减少粘连形成。

骨康方含药血清对骨髓基质细胞成骨分化过程中Ⅰ型胶原基因表达的影响

目的观察骨康方含药血清对体外培养骨髓源性骨髓基质细胞(Bone Marrow Stromal Cells,BMSCs)中Ⅰ型胶原的影响。方法采用梯度离心法获取大鼠骨髓源性MSCs,随机将实验用大白兔分为骨康方高、中、低3个剂量组,对实验用大白兔给药干预7 d后,通过血清药理学的方法使用各组大白兔血清联合诱导剂培养传6代BMSCs2周后,RT-PCR方法检测Ⅰ型胶原mRNA表达。结果高、中浓度骨康方含药血清加诱导剂作用于体外培养的BMSCs2周后,能使BMSCs中Ⅰ型胶原mRNA的表达升高。结论具有补肾填精壮骨作用的骨康方可以升高大鼠体外BMSCs向成骨细胞分化过程中Ⅰ型胶原mRNA的表达,这可能是防治骨质疏松症的机理之一。

雄芍汤含药血清对人肝星状细胞增殖和活化的影响

目的:观察雄芍汤对肝星状细胞增殖和活化的影响。方法:实验设4组:空白组、空白血清组、扶正化瘀胶囊血清组、雄芍汤血清组。采用MTT比色法测定雄芍汤含药血清对体外培养的人肝星状细胞LX-2增殖的影响;免疫组织化学染色法检测LX-2中α-SMA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的含量。结果:20%和10%扶正组和雄芍组对LX-2抑制率均高于相应浓度的空白血清组(P<0.01),5%扶正组、雄芍组和空白血清组差异不显著;雄芍各个浓度组对LX-2抑制率显著高于相应浓度的扶正组(P<0.05或P<0.01)。雄芍各组中,20%组和10%组对LX-2的抑制率差异不显著,但均显著高于5%组(P<0.01)。雄芍组和扶正组LX-2中α-SMA的含量显著低于空白血清组(P<0.01),扶正组α-SMA含量显著低于雄芍组(P<0.05)。雄芍血清组和扶正血清组LX-2中I型胶原、Ⅲ型胶原含量显著低于空白血清组(P<0.01),雄芍血清组和扶正血清组I型胶原差别不显著,扶正血清组Ⅲ型胶原含量显著低于雄芍血清组(P<0.05)。结论:雄芍汤能够抑制HSC的增殖和活化以及HSC中I型胶原和Ⅲ型胶原的分泌。

丹皮酚对肝星状细胞胶原合成的抑制作用

目的探究丹皮酚对肝星状细胞(HSC)Ⅰ和Ⅲ型胶原(Col-Ⅰ和Col-Ⅲ)合成的影响。方法分别采用Western-blot法和实时荧光定量PCR法检测丹皮酚HSC的Col-Ⅰ和Col-Ⅲ胶原蛋白的表达、m RNA表达,比较阳性对照组、不同剂量(即低、中、高剂量)丹皮酚HSC的Col-Ⅰ和Col-Ⅲ胶原蛋白表达,以及阳性对照组、不同剂量丹皮酚HSC的Col-Ⅰ和Col-Ⅲm RNA表达,同时比较不同剂量的丹皮酚与Col-Ⅰ和Col-Ⅲm RNA相对表达量的相关性。结果低、中、高剂量的丹皮酚HSC的Col-Ⅰ和Col-Ⅲ胶原蛋白表达分别为(119.35±11.35)和(116.35±11.35)、(131.22±10.89)和(128.22±10.89)、(153.36±11.88)和(150.36±11.88),明显弱于阳性对照组的(112.56±10.56)和(109.56±10.53),差异均有统计学意义(P<0.05);低、中、高剂量的丹皮酚HSC的Col-Ⅰ和Col-Ⅲm RNA表达分别为(1.66±0.10)和(1.73±0.11)、(1.17±0.17)和(1.25±0.12)、(0.62±0.14)和(0.68±0.18),明显弱于阳性对照组的(0.86±0.12)和(1.13±0.14),差异均有统计学意义(P<0.05),但只有高剂量组的抑制效果强于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);不同剂量组的丹皮酚与Col-Ⅰ和Col-Ⅲm RNA相对表达量均呈负相关(P<0.05)。结论丹皮酚对TGF-β激活的HSC的Col-Ⅰ和Col-Ⅲ胶原蛋白及其m RNA表达具有抑制作用,一定剂量内,剂量越大抑制作用越强。