补肾益气行血法对人软骨细胞基质金属蛋白酶13表达的影响

目的:观察补肾益气行血中药复方含药血清对MMP-13、Ⅱ型胶原表达的调控作用及相关意义。方法:将体外培养的人软骨细胞随机分为5组:对照组(正常血清)、低剂量IL-1组(10μg/ml IL-1β)、高剂量IL-1组(100μg/ml IL-1β)、低剂量IL-1加中药组(10μg/ml IL-1β加含药血清)、高剂量IL-1加中药组(100μg/ml IL-1β加含药血清),应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及实时荧光定量PCR,比较补肾益气行血中药复方含药血清在不同剂量IL-1β作用下对MMP-13、Ⅱ型胶原表达的调控作用。结果:中药含药血清组均有抑制MMP-13的表达作用,对照组表达阳性强度高于中药组,中药组Ⅱ型胶原表达阳性强度高于对照组,统计学均有明显差异。不同剂量IL-1组均能促进MMP-13的表达,对照组阳性强度低于IL-1组,IL-1组Ⅱ型胶原表达低于对照组,统计学均有明显差异。结论:体外条件下,补肾益气行血中药含药血清能够抑制炎性因子IL-1诱导的MMP-13表达;能对抗MMP-13抑制软骨细胞Ⅱ型胶原合成,具有保护软骨细胞的作用。

热敏灸对膝骨性关节炎兔模型MMP-13、iNOS及Ⅱ型胶原的影响

目的:观察热敏灸对膝骨性关节炎(KOA)兔模型基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、Ⅱ型胶原的影响,探讨热敏灸治疗KOA的作用机制。方法:42只雄性日本长耳兔按随机数字表随机分为空白组(6只)、模型组(6只)、艾灸组(24只)、假手术组(6只)。空白组正常饲养,模型组与艾灸组采用木瓜蛋白酶注射膝关节建立KOA模型,假手术组采用腔内注射0.9%氯化钠溶液造模,每日强迫活动30min,造模15d。造模结束后,艾灸组艾灸"犊鼻"穴,每日1次,每次40min,共14d,根据家兔艾灸过程中温度变化分为热敏灸组和非热敏灸组,两组各随机抽取6只;空白组、模型组、假手术组正常饲养,不予任何干刺激。观察各组家兔行为学改变。治疗结束后,采用放射免疫法检测关节液MMP-13含量,Real-time PCR检测法检测软骨iNOS、Ⅱ型胶原含量。结果:与空白组比较,其余各组MMP-13、iNOS表达均升高(P<0.05,P<0.01),Ⅱ型胶原表达均下降(P<0.01);与模型组比较,热敏灸组、非热敏灸组、假手术组MMP-13、iNOS表达均显著降低(P<0.05,P<0.01),Ⅱ型胶原蛋白显著升高(P<0.01);与非热敏灸组比较,热敏灸组MMP-13、iNOS表达显著降低(P<0.05),Ⅱ型胶原表达明显升高(P<0.05)。结论:热敏灸可以有效降低KOA家兔MMP-13、iNOS的水平,减少炎性反应,保护软骨细胞,从而达到治疗KOA的目的。

兔实验性骨关节炎六种血清学生物标志物的变化

目的定量检测新西兰大白兔血清中白细胞介素1β(IL-1β)、基质金属蛋白酶13(MMP-13)、白细胞介素6(IL-6)、2型胶原C端肽(CTX2)、环氧合酶2(COX2)和前列腺素E2(PGE2)随时间变化的关系(时效性),探讨联合6种血清学生物标志物对骨关节炎早期诊断的价值和意义。方法 40只新西兰大白兔,随机均分为实验组和对照组。实验组兔用关节腔注射胶原酶的方法制备实验性兔骨关节炎模型,对照组兔关节腔不注射胶原酶。用膝关节病理切片和X线检查及HE染色来检测造模是否成功。造模成功后每隔2周对两组兔血清中IL-1β、MMP-13、IL-6、CTX2、COX2和PGE2的水平进行检测。结果实验组各个时间点6种生物标志物的水平均高于对照组,尤其在第4周变化最为明显。结论联合检测血清中IL-1β、MMP-13、IL-6、CTX2、COX2、PGE2有助于骨关节炎的早期诊断。

强力霉素对制动兔骨关节炎模型对侧膝关节早期退变的影响

目的:研究口服强力霉素对制动兔骨关节炎模型对侧膝关节早期退变的影响及作用机制。方法:36只新西兰大白兔随机分为空白对照组,模型对照4、8、12周组,给药8、12周组。模型组与给药组均给予石膏固定左下肢。石膏固定4周后,给药组给予强力霉素。分别在8周、12周处死动物,观察指标包括:软骨大体形态、软骨mankin评分、软骨Ⅱ型胶原、uPA、MMP-13。结果:与模型对照组比较,给药组软骨面光滑,mankin评分较低,Ⅱ型胶原含量较高,uPA、MMP-13活性较低(P<0.01)。结论:强力霉素对制动兔骨关节炎模型对侧膝关节软骨早期退变有缓解作用,作用机制与抑制MMP-13、uPA的表达有关。

短刺加电针对膝骨关节炎模型兔软骨细胞外基质的修复作用研究

目的:观察短刺加电针对膝骨关节炎模型兔软骨Ⅱ型胶原(collagen typeⅡ)—盘状结构域受体(discoidin domain receptor,DDR)-2—基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-13信号通路的影响,探讨该治疗方法修复膝关节软骨细胞外基质的可能作用机制。方法:将40只新西兰大白兔按比例随机分为正常组(10只)和造模组(30只),造模组动物采用HulthTelhag法手术复制膝骨关节炎模型,X线评估造模结果。将造模成功的动物随机分为3组,即模型组、短刺组、普通针刺组,每组10只。短刺组采用短刺加电针法,普通针刺组采用常规针刺加电针法治疗,均选取"内膝眼""犊鼻""阴陵泉""足三里"和"梁丘"进行针刺。正常组和模型组正常抓取、固定,不予以干预。每次20min,每日1次,5d为一疗程,每个疗程间间隔2d,共治疗4个疗程。疗程结束后,采用蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)检测软骨DDR2、Ⅱ型胶原的蛋白表达;免疫组化法检测软骨DDR2、Ⅱ型胶原、MMP13的活性;逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测DDR2和MMP13的mRNA表达。结果:与正常组相比,其他各组动物的Ⅱ型胶原蛋白及活性表达均明显减少(均P<0.01),DDR2、MMP13活性及mRNA表达均明显增多(均P<0.01);与模型组相比,短刺组和普通针刺组中Ⅱ型胶原蛋白及活性表达显著增多(均P<0.01),DDR2、MMP13活性及mRNA表达显著减少(均P<0.01);与普通针刺组相比,短刺组中MMP13、DDR2活性及mRNA表达下降(均P<0.01),Ⅱ型胶原蛋白及活性表达明显上升(P<0.01)。结论:短刺加电针法与普通电针法均可促进膝关节软骨的修复,且短刺加电针法具有一定的优势,其作用机制可能与阻断Ⅱ型胶原/DDR2/MMP13通路的恶性循环、抑制软骨细胞外基质的持续降解有关。