神奇“魔法条”之新冠病毒的快速检测

胶体金作为商业化的即时检验POCT(point-of-care test)免疫层析技术中最广泛的标记物之一,具有显著的颜色特征,后期无需可视化改造,且形态稳定、环境友好。本文试纸条制作过程简单,不需要大型贵重仪器。采用柠檬酸三钠还原氯金酸制备胶体金,将胶体金标记在新冠病毒的核衣壳N蛋白抗体上,通过在免疫层析试纸条可视区形成类似三明治结构的抗体-抗原-抗体夹心复合物,并以此复合物的红色检测线作为新冠病毒的定性分析依据。该检测方法裸眼可测、操作简单、且快速(10 min)、灵敏(检测限为0.5 ng∙mL^(−1))、低成本(每条不超过5元)。实验过程可以引导学生体验生命体系中抗原抗体相互作用引发的特异性生命化学反应,激发学生对化学、生物、生命科学和纳米材料等学科相互融合的可视化快检技术的浓厚研究兴趣。

华支睾吸虫PPMPⅠ型抗原重组Cs2蛋白免疫诊断价值的评价

目的应用华支睾吸虫PPMPⅠ型抗原重组Cs2蛋白（rCs2）建立2种华支睾吸虫病免疫学检测方法,并进行初步评价。方法以可溶性rCs2作为诊断抗原,建立间接ELISA检测方法,并研制胶体金免疫层析检测（GICA）动力流体型试条,检测血清中的特异性抗体。采用ELISA法和GICA试条共检测35例华支睾吸虫虫卵粪检阳性患者、15例日本血吸虫病患者、15例卫氏并殖吸虫病患者和13例猪囊尾蚴病患者的血清,以及33份健康人血清。为进一步评价诊断价值,8只新西兰兔各感染600个华支睾吸虫囊蚴,随机均分为感染组和治疗组,感染第56天,治疗组各兔给予吡喹酮治疗[150 mg/（kg.d）×2 d],用ELISA法和GICA法检测两组兔0~44周抗rCs2特异性抗体的消长。结果 ELISA法的敏感性为71.4%（25/35）,特异性为93.4%（71/76）,总符合率为86.5%（96/111）,与日本血吸虫病、卫氏并殖吸虫病和猪囊尾蚴病患者血清的交叉反应阳性率分别为1/15、1/15和1/13。GICA试条检测法的敏感性为85.7%（30/35）,特异性为92.1%（70/76）,总符合率为90.1%（100/111）。经ELISA检测,感染组兔自感染后第4周抗rCs2特异性抗体水平开始上升,于第6周达到高峰,随后快速下降,至第20周已呈较低水平;治疗组的特异性抗体消长趋势同感染组,同一时点的2组实验兔的抗体水平差异无统计学意义（P〉0.05）。GICA试条检测结果表明,2组兔血清均仅在4~16周检出阳性。结论以PPMPⅠ型抗原rCs2建立的间接ELISA方法和GICA动力流体型试条对华支睾吸虫病具有较好的诊断价值。

检测抗白色念珠菌烯醇化酶IgG抗体免疫胶体金层析试纸的制备

目的建立一种快速检测抗白色念珠菌烯醇化酶IgG抗体的免疫胶体金层析试纸法。方法以重组烯醇化酶包被于硝酸纤维素膜上,与金标垫上包被的金标小鼠抗人IgG单克隆抗体配对,优化试纸制备条件并制备试纸条,检测人血清中的抗念珠菌烯醇化酶IgG抗体。用该方法对38例确证念珠菌血流感染者和50例健康体检者血清进行检测,分析其检测效能。结果用直径30 nm金颗粒制备的烯醇化酶IgG抗体检测试纸条,最适烯醇化酶包被浓度为1. 0 mg/ml。该试纸用于检测多种念珠菌引起的血流感染中的抗烯醇化酶IgG抗体,检测灵敏度、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为71. 1%,96. 0%,93. 1%和83. 4%。结论用重组白色念珠菌烯醇化酶制备的免疫胶体金层析试纸条有较好的检测效能,具有准确、快速、方便的优点,可用于人血清抗念珠菌IgG抗体的检测。

犬细小病毒单克隆抗体的制备及其在胶体金免疫层析试纸研发中的应用

为制备犬细小病毒胶体金免疫层析试纸,将F81细胞中分离的CPV免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,建立间接ELISA方法筛选分泌CPV单克隆抗体的杂交瘤细胞,获得1株能稳定分泌CPV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为3E2。3E2的亚类为IgG1型,腹水抗体效价为1.8×105,交叉试验表明,3E2可与CPV特异性结合,与其他犬常见病毒无交叉反应。用3E2单克隆抗体制备的检测CPV的胶体金免疫层析试纸条特异性良好,为诊断和研究CPV奠定了基础。

呼和浩特市乳制品三聚氰胺残留情况调查

目的了解呼和浩特市乳制品中三聚氰胺残留情况。方法从超市采集69份奶粉制备的休闲乳制品及奶酪和奶皮等传统乳制品,另外采集4个品牌128份液态奶。采用高效薄层色谱法和免疫胶体金检测卡进行三聚氰胺残留检验。结果 197份样品中除了7份奶粉制备的休闲乳制品和2个工厂制作奶酪免疫胶体金法检验结果可疑外,其他样品检验结果均为阴性。结论 高效薄层色谱法虽不如免疫胶体金法灵敏,但检测成本较低,适合进行日常大规模筛查性检验。

胶体金免疫层析法检测水产品中孔雀石绿前处理方法的优化

为了提高胶体金检测孔雀石绿方法的精密性、准确度、检测限等指标,并尽可能缩短样品处理时间,对样品用量、提取剂用量、离心时间、吹干温度、空气出量等检测条件进行优化,建立一种简便、快速检测水产品中孔雀石绿及其代谢物残留量的胶体金免疫层析方法。优化后,在满足检测限、假阳率和假阴率不变的条件下,样品处理过程更加简单,省去了传统方法需要过柱的步骤;单个样本处理,除去空气吹干的时间,只要最少7min即可完成样品的前处理,大大低于市场上样品前处理的时间;出带速度快,检测时间短,单个样本的检测时间在10~15min;对组织(鱼)中孔雀石绿的检出限可提高到2μg/kg;减少样品处理过程中耗材和试剂的用量,节约检测成本。该方法节省了大量的人力和物力,适用于日常的大批量样品检测,为胶体金免疫层析法检测孔雀石绿及其代谢物,提供了一种新的样品处理方法。

牛黄镇惊丸中黄曲霉毒素残留检测方法研究

目的对中药复方制剂牛黄镇惊丸中黄曲霉毒素残留检测方法进行研究。方法采用免疫胶体金(GICA)方法和免疫亲和柱-高效液相色谱(IAC-HPLC)方法对牛黄镇惊丸中黄曲霉毒素残留量进行检测,并对两种方法进行方法学研究,对8批次市售牛黄镇惊丸进行检测。结果采用推荐的免疫亲和柱-高效液相色谱方法检测牛黄镇惊丸样品时,回收率仅为46.6%~67.7%,不满足试验要求。试验采用倍比稀释的方法,发现5倍稀释待测样品后,样品加样回收率为80.7%~94.0%,符合试验要求。免疫亲和柱-高效液相色谱方法线性回归方程:Y=0.656 X-0.436,R 2=0.9981;表明黄曲霉毒素B 1(AFB 1)在4~20 ng·mL-1之间线性关系良好。试验精密度RSD为0.98%~1.55%之间,重复性为0.20%。采用免疫胶体金方法进行检测,未发现高于黄曲霉毒素检测方法定量限的样品。免疫胶体金方法和免疫亲和柱-高效液相色谱方法检测结果基本一致。结论建立了牛黄镇惊丸中黄曲霉毒素残留免疫胶体金和免疫亲和柱-高效液相色谱的检测方法。牛黄镇惊丸成分复杂,对免疫亲和柱-高效液相色谱的方法检测干扰较大,可采用稀释的方法优化样品前处理过程,提高方法的回收率,保证了检测方法的准确可靠。

胶体金技术在鼠疫监测中的应用

目的选择快速、敏感的鼠疫检测方法,为鼠疫防治提供科学依据。方法胶体金免疫层析法(GICA)与鼠疫间接血凝(IHA)和反向血凝(RIHA)同步检测鼠疫抗体/抗原。结果在四川省191份动物肝脾标本中,GICA检出阳性10份,RIHA阳性6份;检测动物血清标本417份,GICA与IHA均检出阳性13份。结论GICA简便快速,适合现场鼠疫监测。

胶体金免疫层析定量检测仪的研究

目前,胶体金免疫层析试纸检测在生物医学、农牧业、食品安全等方面已成为一种常规的检测方法,并得到广泛应用,但多数试纸检测结果的读取还处于依赖人眼目测的定性水平,较难实现准确的定量测量。通过介绍一种基于光学比色原理对胶体免疫层析金试纸条进行快速、准确的定量检测分析方法的检测分析仪,结合"互联网+医疗"概念,深度融合自动化技术、互联网通信技术,从而实现高效、准确、便捷的胶体金免疫层析试纸检测,同时增强了对检测数据的管理、统计、分析功能。

沙丁胺醇单克隆抗体的研制及初步应用

用沙丁胺醇和牛血清白蛋白的人工偶联物SAL-BSA免疫BALB/c小鼠,应用细胞融合技术建立3株分泌抗沙丁胺醇抗体的杂交瘤细胞株,并对抗体进行鉴定.结果表明,3株单克隆抗体对沙丁胺醇的半抑制率分别为1.41、5.53、9.62 ng/m L;单克隆抗体2F7与盐酸克伦特罗、马布特罗、特布他林的交叉率分别为217%、128%、70.5%,与莱克多巴胺、西马特罗、肾上腺素和去甲肾上腺素无交叉反应;3株单克隆抗体均为小鼠Ig G1亚类.用单克隆抗体2F7建立的胶体金免疫层析检测试纸条,对沙丁胺醇标准品的最低检出值达到3 ng/m L.制备的抗沙丁胺醇单克隆抗体有可能应用于沙丁胺醇残留快速检测试剂的研制.

谷物真菌毒素溯源系统初探

主要探讨了谷物制品中真菌毒素类溯源系统构建的基本原理以及模式,包括构建分级溯源点的方式,设计各溯源点的主要功能以及具体详尽的实现流程。在部分关键环节,将胶体金免疫层析检测技术运用于其中,建立以快速检测为技术核心的食品溯源系统,对于控制食品质量安全、促进食品国际贸易具有重大的现实意义。

药物溶血实验检测方法研究进展

对现阶段多种药物溶血实验方法进行了对比研究,并依据红细胞破坏量、红细胞内容物释放等进行分类,发现干化学法替代氰化高铁法、4-氨基安替比林法替代甲联苯胺法等进行溶血试验可提高结果的精确度,更加便利和高效。由此,为药物生物安全性评价提供参考方法和依据。

D-二聚体胶体金免疫层析定量检测方法的初步建立

目的建立一种检测D-二聚体的胶体金免疫层析定量检测方法,为临床检测D-二聚体提供一种简便、快速、准确的检测方法。方法根据免疫学中双抗体夹心和免疫层析的原理,研制定量检测样本中D-二聚体的胶体金试纸条,在金标定量仪上建立标准曲线,从灵敏度、特异性、线性、精密性、稳定性和方法学对比等方面对该方法进行评价。结果本试纸条的线性范围为0.156 25~10μg/ml,回归方程Y=92.907 X+307.88,R2=0.982 68;批内变异系数(CV)为3.78%和2.81%,批间变异系数(CV)为4.95%和4.07%;与纤维蛋白原无交叉反应性;在37℃条件下保存1周;与IL公司ACL-TOP700检测系统免疫比浊法的相关性良好,回归方程Y=0.959 64 X+0.026 45,相关系数R2=0.985 93。结论本研究初步建立了检测D-二聚体的胶体金免疫层析定量检测方法,为临床检测D-二聚体提供了一种新的技术和方法。

免疫层析技术在食品违禁成分检测中的应用

胶体金技术是一种新型的免疫标记技术,在食品安全检测领域得到广泛应用和快速发展。简述胶体金免疫层析技术在瘦肉精、蛋白精、非食用色素、抗生素等食品违禁成分领域的研究和应用,并对该技术的发展前景作了展望。

快速检测生鲜乳中玉米赤霉醇试纸条的研制及其应用

[目的]采用免疫胶体金技术,建立了一种快速检测玉米赤霉醇的试纸条方法。[方法]利用有机合成方法,研制了一种玉米赤霉醇半抗原,将其载体蛋白偶联得到免疫抗原,并通过人工免疫的方法获得单克隆抗体。通过酶联免疫法对制备的单克隆抗体的性能进行了验证。玉米赤霉醇层析试纸条是利用单克隆抗体标记胶体金,其原理是玉米赤霉醇抗原和羊抗鼠Ig G分别喷到自制的膜(硝酸纤维)上,然后将样品垫、吸水垫分别放置在PVC板上,再制成试纸条。[结果]试纸条检测限可达0.5~1.0μg/kg,具有速度快、简单等优点。此外,该试纸条与大部分的玉米赤霉醇没有明显的交叉反应。[结论]利用该试纸条可实现对生鲜乳中玉米赤霉醇添加试验的准确判定。该试纸条有望实现对生鲜乳中玉米赤霉醇残留的快速筛查。

胶体金免疫层析法快速检测水产品中四环素类药物残留

为建立用于快速检测水产样品中四环素类药物残留含量的胶体金免疫层析检测试剂,采用免疫竞争法,将抗四环素单克隆抗体-胶体金复合物包被在胶体金结合垫上,并将人工合成的四环素抗原包被在硝酸纤维素薄膜表面作为检测线（T线）,其残留药物与待测样品中四环素竞争结合胶体金标记的四环素单克隆抗体,最终能以颜色直观显示检测结果。检测水产品试样时,试剂灵敏度最低值可达100 ng/mL,仅需5~10min,与金霉素、土霉素、强力霉素等四环素族抗生素有很强的交叉反应,故可同时检测四环素族中几种主要抗生素,而与沙丁胺醇、莱克多巴胺等其他兽药无交叉反应。试验证明检测试剂具有较高的灵敏度及特异性,操作便捷,稳定可靠,可作为四环素残留现场监控的有效筛检手段。

B群链球菌免疫层析法的建立及其临床应用

目的建立一种B群链球菌(GBS)的胶体金免疫层析检测方法,并进行临床应用评价。方法收集202例阴道分泌物标本,采用细菌分离培养法作为金标准对标本的GBS进行检测,同时采用以双抗体夹心法为基础研制出B群链球菌胶体金免疫层析试纸条检测作为对照,分析其灵敏度、特异度,计算Kappa值分析两种方法的一致性。结果免疫层析法检测GBS的敏感度为97.50%,特异度为97.54%;与细菌分离培养法的总符合率为97.52%,Kappa值为0.948。结论免疫层析法检测GBS具有较高的敏感度和特异度,且简便准确,对GBS的筛查和快速诊断具有重要的临床应用价值。

胶体金法定性检测牛奶中林可霉素的应用

对胶体金免疫层析法检测牛奶中林可霉素进行了检出限、重复性、干扰实验、批量检测等的测试,在保证检验结果准确性的前提下,将此方法与高效液相色谱技术、高效液相色谱串联质谱、液相色谱-质谱联用技术(LC-MS/MS)、氮磷气相色谱检测法、薄层色谱、气相色谱等其他检测林可霉素方法相比,此方法样本前处理简单、仪器设备投资少,检测成本低,可作为牛奶中林可霉素药物残留快速筛选的首选方法。

消化道幽门螺旋杆菌首选检测方法及临床根除方案探讨

【目的】探讨13C尿素呼气试验(13C-urea breath test,13CUBT)作为消化道幽门螺旋杆菌检测的首选方法,以及有效根除幽门螺旋杆菌的治疗方案。【方法】在我中心门诊11个月共收集321例消化道疾病的患者,每例患者均采用13CUBT(研究组)和胶体金免疫层析法(gold colloid immunochromatographic method,GICA,对照组)检测幽门螺旋杆菌(helicobacter pylori,Hp)的感染,然后比较2种检测方法的结果。对13CUBT阳性患者使用改良(早晚空腹服药,2周疗程)的三联法(质子泵抑制剂+抗菌素)与四联法(质子泵抑制剂+抗菌素+枸橼酸铋剂)治疗与跟踪方案。【结果】13CUBT组和GICA组检测阳性率为经配对χ2检验后,差异有统计学意义(χ2=130.7,P<0.05)。三联法的Hp根除率达84%,四联法Hp累计根除率达95%以上。【结论】13CUBT的敏感性显著高于胶体金免疫层析法,是理想的检测Hp感染的首选方法。改良的治疗方案对Hp的根治有非常满意的效果。

不同检验方法对慢性肝病的检验结果影响探讨

目的：探究分析不同的检验方法对于慢性肝病检查结果的影响。方法以我院在2013年1月～2014年1月间收治的108例慢性肝病的患者为观察对象，分别采用胶体金层析法、PCR检测法以及免疫电子发光实验法检测患者血清，统计并分析三种方法的肝病阳性检出率。结果胶体金层析法对于慢性肝病的阳性检出率为73.15%，PCR检测法的检出率为94.44%，免疫电子发光实验法的检出率为84.26%。对比可知，PCR检测法对于慢性肝病的检出率叫其他两种方法高，且差异显著（P＜0.05）。结论 PCR检测法对于慢性肝病的检出率高，且特异性强，敏感性高，对于临床上对慢性肝病的早期具有重要的诊断价值。