新型冠状病毒特异性抗体检测对COVID-19的诊断价值

目的分析新型冠状病毒(SARS-CoV-2)血清特异性抗体免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白G(IgG)检测对新型冠状病毒肺炎(COVID-19)诊断的临床价值。方法纳入2020年1月26日至2020年3月6日在武汉市汉口医院隔离治疗的COVID-19患者70例,包括SARS-CoV-2核酸检测阳性患者42例,以及核酸检测阴性但临床症状和CT表现符合《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案(试行第五版)》的患者28例。采集研究对象的鼻咽拭子,采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测病毒核酸;采集研究对象的空腹静脉血,采用胶体金法检测血清SARS-CoV-2 IgM和SARS-CoV-2 IgG。结果≥60岁的患者重症率高于<60岁的患者(78.95%vs.25.00%,χ^2=20.370,P<0.05)。核酸检测阳性患者重症率高于核酸检测阴性患者(69.05%vs.32.14%,χ^2=9.220,P<0.05)。SARS-CoV-2 IgG检测的灵敏度高于SARS-CoV-2 IgM(91.43%vs.71.43%,χ^2=9.258,P<0.05)。SARS-CoV-2 IgM、IgG联合检测的灵敏度高于SARS-CoV-2 IgM(95.71%vs.71.43%,χ^2=15.04,P<0.05)。28例核酸检测阴性的COVID-19患者中SARS-CoV-2 IgM、IgG联合检测阳性者26例。结论血清SARS-CoV-2特异性抗体检测可作为筛查及诊断COVID-19的有效方法,可与SARS-CoV-2核酸检测形成优势互补。

华支睾吸虫PPMPⅠ型抗原重组Cs2蛋白免疫诊断价值的评价

目的应用华支睾吸虫PPMPⅠ型抗原重组Cs2蛋白（rCs2）建立2种华支睾吸虫病免疫学检测方法,并进行初步评价。方法以可溶性rCs2作为诊断抗原,建立间接ELISA检测方法,并研制胶体金免疫层析检测（GICA）动力流体型试条,检测血清中的特异性抗体。采用ELISA法和GICA试条共检测35例华支睾吸虫虫卵粪检阳性患者、15例日本血吸虫病患者、15例卫氏并殖吸虫病患者和13例猪囊尾蚴病患者的血清,以及33份健康人血清。为进一步评价诊断价值,8只新西兰兔各感染600个华支睾吸虫囊蚴,随机均分为感染组和治疗组,感染第56天,治疗组各兔给予吡喹酮治疗[150 mg/（kg.d）×2 d],用ELISA法和GICA法检测两组兔0~44周抗rCs2特异性抗体的消长。结果 ELISA法的敏感性为71.4%（25/35）,特异性为93.4%（71/76）,总符合率为86.5%（96/111）,与日本血吸虫病、卫氏并殖吸虫病和猪囊尾蚴病患者血清的交叉反应阳性率分别为1/15、1/15和1/13。GICA试条检测法的敏感性为85.7%（30/35）,特异性为92.1%（70/76）,总符合率为90.1%（100/111）。经ELISA检测,感染组兔自感染后第4周抗rCs2特异性抗体水平开始上升,于第6周达到高峰,随后快速下降,至第20周已呈较低水平;治疗组的特异性抗体消长趋势同感染组,同一时点的2组实验兔的抗体水平差异无统计学意义（P〉0.05）。GICA试条检测结果表明,2组兔血清均仅在4~16周检出阳性。结论以PPMPⅠ型抗原rCs2建立的间接ELISA方法和GICA动力流体型试条对华支睾吸虫病具有较好的诊断价值。

圆环病毒2型抗体胶体金检测试纸条的初步研制及应用

为快速检测猪群中猪圆环病毒2型抗体,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并标记纯化的猪圆环病毒Cap蛋白和兔IgG,包被至玻璃纤维膜上制备金标垫,将纯化抗原和羊抗兔IgG分别包被至硝酸纤维素膜的检测线与质控线上,建立了检测猪圆环病毒2型抗体的胶体金免疫层析方法并组装检测卡。结果显示,组装的检测卡只与圆环病毒阳性血清发生特异性反应,阳性血清稀释10倍后仍然能够检出。用此检测卡与商品化ELISA试剂盒对100份临床血清进行平行检测,阳性率分别为89%和93%,两种方法符合率在95%以上。该方法操作简便、特异性强,可广泛应用于基层,也为圆环病毒疫苗效果评价提供了良好的试剂选择。

SPA胶体金免疫层析方法检测PCV2抗体的初步建立及应用

采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并将其标记SPA,将金标SPA包被至玻璃纤维膜上制备金标垫,将纯化的Cap蛋白、兔抗SPA抗体分别包被至硝酸纤维素膜的检测线与质控线上,建立了一种检测猪圆环病毒2型抗体的胶体金免疫层析方法。检测结果显示,组装的检测卡只与圆环病毒阳性血清发生特异性反应,检测的灵敏度可以稀释到100倍。用此检测卡与商品化ELISA试剂盒对86份临床血清进行平行检测,两者的检测阳性率分别为65.12%和70.93%。该方法检测速度快,15min内可出结果,特异性强,操作简便,可广泛应用于基层。

用于青枯劳尔氏菌快速检测的靶标内切葡聚糖酶抗体制备与检测试验

桑青枯病是一种土传性细菌病害,其病原为青枯劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum)。内切葡聚糖酶(EGL)是青枯劳尔氏菌在胞内合成后分泌、吸附于细胞壁周围的一个重要毒力因子,研究以其为靶标的桑青枯病快速检测诊断技术,可以为病害防控提供技术支持。从青枯劳尔氏菌G12-50菌株中克隆了egl基因,将青枯劳尔氏菌与土壤常见的4种细菌以及植物常见的4种病原细菌的内切葡聚糖酶进行氨基酸序列多重比对,其同源性较低。构建重组质粒p ET32a-EGL转化大肠杆菌BL21融合表达EGL蛋白,制备的抗EGL多克隆抗体经ELISA检测其效价达1∶20 000,Western blot分析亦呈现单一的特异性条带。用制备的抗体对培养的青枯劳尔氏菌G12-50菌液和感染桑青枯病的桑茎汁液进行Western blot检测,结果出现明显的特异性条带,而对照大肠杆菌则没有出现条带。研究结果表明,青枯劳尔氏菌的内切葡聚糖酶可以作为桑青枯病早期检测诊断的病原靶标,直接应用于对桑园土壤和桑树样品的快速检测。

人血清淀粉样蛋白A1原核表达及胶体金检测方法的建立

通过胶体金免疫层析技术建立一种特异、便捷、快速的SAA1定量检测新方法。利用大肠杆菌BL21（DE3）原核表达人血清淀粉样蛋白A1（SAA1）,根据BL21（DE3）表达偏好性设计并合成SAA1蛋白基因片段,构建表达载体p ET-28a-SAA1,采用Ca Cl2法制备BL21（DE3）感受态,热激转化法将p ET-28a-SAA1转入到BL21（DE3）。经表达条件优化,获得重组蛋白最佳诱导表达条件：温度30℃,时间6h,转速180rpm/min,培养基p H 7.0,IPTG浓度0.4m M,诱导表达后目的蛋白经SDS-PAGE电泳鉴定,Ni柱纯化、透析、浓缩从而获得浓度为8.09mg/ml,纯度为85%的SAA1。同时,结合胶体金标记技术,建立了SAA1胶体金免疫层析试纸检测方法,线性范围0.16~500μg/ml,最低检测限0.16μg/ml,该研究为临床体外诊断SAA1快速检测提供技术基础。

氟喹诺酮类药物免疫分析方法研究进展

氟喹诺酮类药物是一种广谱高效的抗菌类药物,现已广泛应用于畜牧业生产中,但由于养殖户对该类药物的长期不合理使用,造成了动物组织中的药物残留问题日益严重。因此,建立高灵敏、低成本和高通量的氟喹诺酮类药物检测方法,对于保障动物性食品安全具有重要意义。文章综述了检测氟喹诺酮类药物的各种免疫分析方法,包括酶联免疫分析法、胶体金免疫层析法、荧光免疫分析法、荧光偏振免疫分析法和时间分辨荧光免疫分析法,同时也比较了各种免疫方法的优缺点,并对氟喹诺酮类药物免疫分析方法的发展方向进行了展望,以期为动物性食品中氟喹诺酮类药物的残留检测提供理论依据。

胶体金免疫层析法检测心肌标志物对急性心肌梗死的诊断价值分析

目的探讨胶体金免疫层析法检测心肌标志物在急性心肌梗死诊断中的应用价值。方法选取我院收治的60例急性心肌梗死患者,均采用胶体金免疫层析法对肌钙蛋白T(c Tn T)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌红蛋白(MYO)3种标志物进行检测。结果本组患者c Tn T、CK-MB、MYO在胸痛发作6 h内检测敏感率分别为81.7%、61.7%、96.7%,8h内检测3者敏感性分别为91.0%、70.0%、99.0%,特异性分别为100%、91.0%、79.0%,漏诊率分别为9.0%、30.0%、1.0%,误诊率分别为0/9.0%、21.0%。结论采用胶体金免疫层析法检测心肌标志物诊断心肌梗死价值显著。

两种方法检测癌胚抗原对比分析

目的:比较化学发光免疫分析法与胶体金免疫层析两种方法的检测性能。方法:用化学发光定量与胶体金免疫层析两种方法对127例血清标本的癌胚抗原进行检测,然后对结果进行比较分析。结果:两种方法检测结果差异性显著(P<0.05),其相关性良好,但在线性实验中,化学发光免疫分析法优于胶体金免疫层析法。结论:化学发光免疫分析法检测患者结果稳定、可靠、灵敏度高、精密度好。

A型肉毒毒素胶体金免疫层析法检测试纸条的研制

目的 :研制一种敏感、特异、快速并适用于非专业人员的胶体金免疫层析法 (immuno_chromatographicassay ,ICA)试纸技术 ,用于检测食物、患者呕吐物或粪便以及血清和土壤中的肉毒毒素 (botulinumtoxin)。方法 :采用柠檬酸盐还原法制备胶体金颗粒、标记A型肉毒毒素的多克隆抗体 ,制成免疫层析检测试纸条。待测样中的A型肉毒毒素与试纸条上金标记抗体结合后沿着硝酸纤维膜移动 ,并与膜上的抗体结合形成肉眼可视红色带。结果 :肉毒毒素ICA试纸条可以特异性检测A、B和E型肉毒毒素。检测中国兰州生物制品研究所注射用A型肉毒毒素标准品 ,灵敏度可达 2U ml。与金黄色葡萄球菌肠毒素等抗原无交叉反应。结论 :A型肉毒毒素ICA试纸条具有特异性强、灵敏度高、简便快速的特点 ,适用于专业和非专业人士 ,实用性较强。

检测嗜肺军团菌胶体金免疫层析法的建立

目的:建立基于胶体金免疫层析法(immuno-chromatographic assay,ICA)的敏感、特异且使用方便的嗜肺军团菌抗原检测技术。方法:采用柠檬酸盐还原法制备胶体金颗粒、标记抗嗜肺军团菌血清1型抗原的多克隆抗体,制成免疫层析检测试剂。结果:应用嗜肺军团菌ICA检测试剂可特异性地检测出嗜肺军团菌血清1型抗原,最低检出量为10 ng/ml,与其他血清型抗原不发生交叉反应,与美国Binax NOW ICT试剂盒的检测结果一致。结论:嗜肺军团菌ICA检测试剂具有特异性强、敏感性高、简便快速的特点,适合基层单位和现场使用。

金标免疫层析法检测抗环瓜氨酸肽抗体的诊断价值评价

目的:评价金标免疫层析法检测抗环瓜氨酸肽抗体(anti-cyclic citrullinated peptide antibody,抗CCP抗体)的诊断价值,比较与其它三种试剂检测结果的一致性。方法:检测140例类风湿性关节炎(RA)患者和146例对照血清的抗CCP抗体,比较4种不同试剂检测结果间的一致程度。结果:金标免疫层析试剂检测的敏感性为83.6%,特异性为93.2%,与其余3种试剂检测结果一致性极强。结论:金标免疫层析试剂诊断类风湿性关节炎的敏感性和特异性满足临床要求,与其他试剂的检测结果一致性极强,值得临床推广应用。

三种免疫学检测方法对呋喃唑酮代谢物的检测

为了对动物源性食品中的呋喃唑酮进行快速、有效的检测,试验对检测呋喃唑酮残留的三种免疫学快速检测方法,即化学发光免疫分析法（CLEIA法）、酶联免疫分析法（ELISA法）、胶体金免疫层析法（ICA法）在检测限、检测时间等方面进行综合比较。结果表明：CLEIA法、ELISA法、ICA法对呋喃唑酮代谢物（AOZ）的检测限分别为0.01μg/L、0.02μg/L、50 ng/L,CLEIA法和ELISA法添加回收试验的变异系数范围分别为小于15.0%和小于8.0%。说明三种免疫学检测方法在不同的应用环境各具优势,CLEIA法检测灵敏度高,适用于实验室痕量残留检测;ELISA法灵敏度满足限量残留检测,适用于实验室一般项目的快速检测;ICA法所用胶体金试纸条价格低廉,操作简便,无需任何仪器,适用于野外大批量样本的阳性筛选。