Sialyl Lewis-X抗原在大肠癌LoVo、HT29细胞系及大肠癌肝转移组织中表达的临床意义

目的探讨具有高低转移潜能的大肠癌LoVo细胞、HT29细胞和大肠癌肝转移组织Sialyl Lewis-X(SLeX)抗原表达的临床意义。方法采用免疫组化方法检测LoVo细胞、HT29细胞和原发性大肠癌、大肠癌肝转移组织SLeX抗原表达情况。结果具有高转移潜能的LoVo细胞SLeX抗原表达强于HT29细胞(P<0.05)。原发性大肠癌高、中分化腺癌之间,高、低分化腺癌之间,中、低分化腺癌之间SLeX抗原表达均有显著性差异(P<0.05)。转移灶中SLeX抗原表达强于原发灶SLeX抗原表达(P<0.01)。结论检测SLeX抗原对判断大肠癌肝转移及评估预后有重要意义。

NF-κB p65基因沉默条件下HT29细胞中Survivin表达活性的研究

目的:以特异性siRNA转染结肠癌细胞HT29,沉默NF-κB p65基因的表达,研究肿瘤细胞中NF-κB p65调节Survivin基因的表达。方法:以噻唑蓝(MTT)法观察对细胞增殖活性的影响,明确最佳的作用浓度。通过Western Blot检测结肠癌细胞内NF-κB p65及Survivin蛋白表达水平的变化。将设计合成好的特异性针对NF-κB p65基因的片段,体外转染结肠癌细胞株HT29,Western Blot检测NF-κB p65基因沉默效应,进而观察对结肠癌细胞内Survivin蛋白表达水平的影响,明确NF-κB p65是否有Survivin表达的调节作用。结果:siRNA干扰后细胞内NF-κB p65蛋白表达水平降低,较对照细胞组差异有统计学意义(P<0.01)。同时NF-κB p65基因沉默后,取消了先前缺氧条件下细胞内Survivin的表达增高,与对照细胞组相比无统计学意义差异(P>0.05)。结论:采用特异性siRNA片段对结肠癌进行靶向NF-κB p65基因沉默,能有效降低Survivin基因的表达,抑制Survivin可能通过多种信号转导通路参与肿瘤的发生发展过程。

沉默GTPBP4基因对结肠癌细胞生物学行为的影响及机制

目的探讨沉默GTPBP4基因对结肠癌细胞(HT29)生物学行为的影响及机制。方法将培养好的HT29细胞随机分为转染组与阴性对照组,转染组加入适量GTPBP4-RNAi慢病毒,阴性对照组转染含有非特异性干扰序列的阴性病毒。采用CCK8法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞周期,AnnexinⅤ-APC单染法检测细胞凋亡率,细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成情况,Western blotting检测细胞内p53、Survivin蛋白表达,细胞免疫荧光法检测细胞内蛋白p53、Survivin定位。结果与阴性对照组比较,转染组细胞增殖能力低(P <0. 05),迁移距离短(P <0. 05),穿膜细胞数少(P <0. 05),G1期细胞比例高(P均<0. 05)、S期细胞比例低(P <0. 05),凋亡率高(P <0. 05),细胞克隆形成的细胞集落数目少(P <0. 05),p53蛋白相对表达量高(P <0. 05),Survivin蛋白相对表达量低(P <0. 05)。两组p53、Survivin蛋白均主要表达于细胞核,未发生表达位置改变。结论沉默GTPBP4基因可抑制结肠癌细胞HT29的恶性生物学行为,该作用可能与调节p53、Survivin蛋白表达有关。