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cAMP抑制核盘菌菌核形成的差异基因表达分析
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作者 吕蕊花 冯昭 +4 位作者 吕瑞华 李依民 高静 彭亮 张岗 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2024年第7期143-154,共12页
【目的】探究核盘菌响应环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)处理的转录组学特征,挖掘调控核盘菌菌核形成的关键基因,为靶向杀菌剂的研发提供参考。【方法】以接种在PDA培养基上生长至菌核原基形成时期的核盘菌作为CK1,开... 【目的】探究核盘菌响应环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)处理的转录组学特征,挖掘调控核盘菌菌核形成的关键基因,为靶向杀菌剂的研发提供参考。【方法】以接种在PDA培养基上生长至菌核原基形成时期的核盘菌作为CK1,开始形成黑色素时期的核盘菌作为CK2,以接种在PDA+5 mmol/L cAMP培养基上生长相同时间(5,7 d)的核盘菌作为试验组,依次命名为M1和M2,对这4组样品进行转录组测序(RNA-seq)比较,阐释cAMP影响菌核形成的调控途径,挖掘菌核原基及菌核黑色素形成中的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)。【结果】外源添加的cAMP主要在M1前期影响胞内的cAMP含量。差异表达基因分析结果显示,M1和CK1之间共有681个差异表达基因;KEGG富集分析显示,这些基因主要参与各类氨基酸代谢、脂肪酸代谢、MAPK信号通路等,且通路中的大部分基因都呈上调表达模式,而MAPK及其下游作用因子钙调磷酸酶B亚基(calcineurin B subunit,CnB)和热休克蛋白70(heat shock 70 ku protein,HSP70)则明显下调。M2和CK2之间共筛选到4490个差异表达基因,主要参与各类氨基酸代谢、抗原加工提呈以及cAMP、MAPK等信号通路和自噬途径,通路中的大部分基因呈上调表达模式,且自噬相关因子ATG2、ATG20、ATG22、ATG23、ATG27和ATG29也大量上调表达,而与蛋白质和脂类合成相关的磷酸酶B(phosphatase B,PTPB)和酰基辅酶A氧化酶(acyl coenzyme A oxidase,ACO)的表达量则明显下调。在M1和M2时期,相关基因的qRT-PCR与RNA-seq差异表达分析结果趋势相同,说明转录组测序数据准确。【结论】核盘菌可通过吸收胞外高浓度的cAMP抑制菌核形成菌丝,其抑制作用主要通过影响相关蛋白质及脂类物质的合成而对菌丝形态及信号传递造成障碍。 展开更多
关键词 核盘菌 菌核形成 环磷酸腺苷 差异表达基因
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Regulation of Gonadotropin-Releasing Hormone(GnRH)Secretion and mRNA Expression by Dopamine and cAMP Second Messenger Pathway in a GnRH Neuronal Cell Line
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作者 K.L.Yu M.H.Tsang K.W.Dong 《中山大学学报论丛》 1995年第3期197-197,共1页
关键词 GnRH)Secretion and mRNA expression by Dopamine and camp Second Messenger Pathway in a GnRH Neuronal Cell Line Regulation of Gonadotropin-Releasing Hormone
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8-Br-cAMP对人食管癌Eca-109细胞生长相关基因表达的影响 被引量:18
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作者 陈奎生 郑乃刚 +2 位作者 吴景兰 丁一 王一菱 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期227-229,I009,共4页
目的探讨8-Br-cAMP对人Eca-109细胞与生长相关基因表达的影响。方法体外培育的人食管癌Eca-109细胞受8-Br-cAMP处理后,用原位杂交、免疫组织化学及RNA、蛋白质斑点印迹技术研究了与细胞生长相关的... 目的探讨8-Br-cAMP对人Eca-109细胞与生长相关基因表达的影响。方法体外培育的人食管癌Eca-109细胞受8-Br-cAMP处理后,用原位杂交、免疫组织化学及RNA、蛋白质斑点印迹技术研究了与细胞生长相关的几种基因的表达变化。结果8-Br-cAMP可减弱EGFR、H-ras、c-myc、突变型p53等基因的表达,增强野生型p53基因表达和p21WAF1蛋白的表达。结论8-Br-cAMP可通过影响有关信号传递和细胞周期进程基因表达而抑制细胞生长。 展开更多
关键词 8-BR-camp 基因表达 Eca-109细胞系 食管肿瘤
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db-cAMP对转化细胞钙调素基因表达与细胞骨架的影响 被引量:5
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作者 柳惠图 王端顺 +4 位作者 张鸿卿 薛绍白 游劲松 杜春英 王晓良 《实验生物学报》 CSCD 1990年第3期273-283,共11页
转化的C_3H_(10)T_(1/2)细胞表现增殖速度加快、表面微绒毛增加,细胞变圆,叠层生长,ConA受体呈帽状分布,微管、微丝、纤粘蛋白分布明显减少。与增殖有关的癌基因c-fos表达增强,同时发现与细胞增殖、转化和细胞骨架调节有关的钙调素(CaM... 转化的C_3H_(10)T_(1/2)细胞表现增殖速度加快、表面微绒毛增加,细胞变圆,叠层生长,ConA受体呈帽状分布,微管、微丝、纤粘蛋白分布明显减少。与增殖有关的癌基因c-fos表达增强,同时发现与细胞增殖、转化和细胞骨架调节有关的钙调素(CaM)基因表达加强。用1mmo/Ldb-cAMP处理转化细胞,观察到CaM基因和原癌基因c-fos的表达分别在处理后1小时和2小时急剧下降。处理后4—5天,转化细胞表型趋正常化,大部分细胞恢复单层生长。细胞表面微绒毛和泡状物减少,ConA受体帽状分布消失,恢复分散分布在细胞膜上的特点。细胞生长明显被抑制,用优先在G_1期表达的4F_1 cDNA为探针进行分子杂交,证实了经db-cAMP处理后的细胞被阻抑在G_1期。经db-cAMP处理6天的转化细胞中微管、微丝、纤粘蛋白基本恢复正常分布。实验表明CaM的表达增强与转化细胞表型变化和细胞骨架组装减弱密切相关,db-cAMP作用后CaM表达下降是抑制转化细胞增殖并使细胞表型和细胞骨架分布趋于正常的关键事件之一。 展开更多
关键词 db-camp 细胞骨架 CaM基因表达
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8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞DNApolβ基因及相关基因表达的影响 被引量:8
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作者 李士坤 郑乃刚 +2 位作者 吴景兰 白经修 董子明 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2003年第5期663-666,共4页
目的 :探讨 8 Br cAMP及槲皮素等分化诱导剂对Eca 10 9细胞DNApolβ基因及相关基因表达的影响。 方法 :将培养的Eca 10 9细胞分为 3组 :①加 8 Br cAMP组 (Br组 ) ;②加槲皮素组 (Q组 ) ;③不加任何药物对照组 (C组 )。同时培养 4 8h ,... 目的 :探讨 8 Br cAMP及槲皮素等分化诱导剂对Eca 10 9细胞DNApolβ基因及相关基因表达的影响。 方法 :将培养的Eca 10 9细胞分为 3组 :①加 8 Br cAMP组 (Br组 ) ;②加槲皮素组 (Q组 ) ;③不加任何药物对照组 (C组 )。同时培养 4 8h ,将野生型DNApolβ的cDNA ,EGFRcDNA ,野生型 (wt)p5 3cDNA及c myccDNA分别制备了生物素 /地高辛标记的探针进行原位杂交和RNA斑点印迹阵列。另进行POLB ,XRCC1,VEGF及PCNA的免疫组化染色及免疫斑点印迹阵列。结果 :Br组和Q组的DNApolβ ,EGFR ,c myc基因表达下调而wtp5 3基因表达上调。POLB ,XRCC1,PCNA及VEGF免疫斑点印迹减弱。 8 Br cAMP及槲皮素显著下调Eca 10 9细胞的DNApolβ基因表达及相关癌基因表达 ,同时上调抑癌基因的表达。作为POLB的异二聚体XRCC1及恶性细胞生物标志的PCNA及VEGF表达下调。结论 :分化诱导剂下调Eca 10 9细胞DNApolβ基因表达 ,提示Eca 10 9细胞的polβ基因是高表达的 ;功能调整后的polβ通过相关基因表达的改变尤其是wtp5 展开更多
关键词 DNA聚合酶Β 基因表达 ECA-109细胞 8-BR-camp 槲皮素 食管鳞状上皮癌
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鸭疫里氏杆菌吉林分离株camp基因的克隆、表达及间接ELISA检测方法的建立 被引量:2
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作者 么乃全 高云航 +3 位作者 于丹 张敏 耿磊 王全凯 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期54-57,共4页
为建立鸭疫里氏杆菌(RA)的血清学快速检测方法,本研究根据GenBank中登录的camp基因序列设计引物,以吉林RA分离株JL-1的基因组DNA为模板,通过PCR扩增camp基因,并构建pET-camp重组表达质粒,转化至E.coli BL21(DE3)中诱导表达出分子量约为3... 为建立鸭疫里氏杆菌(RA)的血清学快速检测方法,本研究根据GenBank中登录的camp基因序列设计引物,以吉林RA分离株JL-1的基因组DNA为模板,通过PCR扩增camp基因,并构建pET-camp重组表达质粒,转化至E.coli BL21(DE3)中诱导表达出分子量约为37 ku重组蛋白,western blot分析结果表明该蛋白能够与血清1、2、10、11和17型RA全菌体阳性血清发生特异性反应。以纯化的重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA方法,结果显示其具有良好的特异性和重复性,与RA超声裂解抗原ELISA方法的符合率达到77.5%。研究结果进一步验证了Camp蛋白具有良好免疫原性,并且为RA多种血清型共同抗原,在RA的检测及亚单位疫苗开发中具有良好的应用价值。 展开更多
关键词 鸭疫里氏杆菌 camp基因 克隆与表达 ELISA
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cAMP、cGMP及基因表达谱在心气虚型家兔心衰模型中的变化 被引量:5
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作者 王萧 许庆文 +2 位作者 董浩然 陈嘉 陈苑 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期386-390,共5页
目的通过观察cAMP、cGMP的含量和比值,以及对基因表达谱芯片的分析,从微观角度揭示家兔心气虚证心衰模型的发病机制。方法导管术造成家兔充血性心力衰竭,于15 d、30 d取血检测cAMP、cGMP含量并剪取心肌组织进行HE染色及病理观测损伤程度... 目的通过观察cAMP、cGMP的含量和比值,以及对基因表达谱芯片的分析,从微观角度揭示家兔心气虚证心衰模型的发病机制。方法导管术造成家兔充血性心力衰竭,于15 d、30 d取血检测cAMP、cGMP含量并剪取心肌组织进行HE染色及病理观测损伤程度,并利用全基因表达谱芯片分析心气虚型心衰模型家兔的基因表达差异。结果①正常家兔的心肌细胞无损伤,造模15 d、30 d家兔均出现心肌细胞损伤,且30 d的损伤更加广泛和严重;②与正常对照组比较,造模15 d和30 d组cGMP含量增加(P<0.05),cAMP含量和cAMP/cGMP比值下降(P<0.05),且30 d组与15 d组比较cGMP含量增加(P<0.05),cAMP含量和cAMP/cGMP比值下降(P<0.05);③15 d、30 d模型组与正常对照组间差异基因的交集基因有665个,对NCBI中功能注释明确的家兔基因,应用序列比对来注释功能,得到16个功能明确的基因,它们主要与离子通道、肌收缩和信号转导等功能有关。结论血清cAMP、cGMP含量、cAMP/cGMP比值可较好地反映心气虚证家兔心衰的病变程度,可用于对该模型进行评价;交集的665个基因包含模型稳定影响的基因,对该部分基因进行分析挖掘有望找到受模型影响的特异基因。 展开更多
关键词 心衰模型 心气虚证 camp CGMP 基因芯片表达谱 家兔
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cAMP类似物对人恶性胶质瘤TJ_(899)细胞EGFR基因表达的影响 被引量:1
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作者 雷冬梅 王锦华 +2 位作者 陈奎生 王雪岩 尹先印 《河南实用神经疾病杂志》 2002年第3期7-8,共2页
目的 :探讨cAMP类似物 8-Br-AMP对人恶性胶质瘤TJ899细胞EGFR基因表达的影响。方法 :体外分组培养TJ899细胞 ,采用斑点印迹技术对观察实验组与对照组TJ899细胞EGFR基因表达情况。结果 :加 8-Br -cAMP处理的实验组较不加 8-Br-cAMP处理... 目的 :探讨cAMP类似物 8-Br-AMP对人恶性胶质瘤TJ899细胞EGFR基因表达的影响。方法 :体外分组培养TJ899细胞 ,采用斑点印迹技术对观察实验组与对照组TJ899细胞EGFR基因表达情况。结果 :加 8-Br -cAMP处理的实验组较不加 8-Br-cAMP处理的对照组TJ899细胞EGFR基因表达降低。结论 :8-Br-cAMP可下调TJ899细胞EGFR基因表达。 展开更多
关键词 基因表达 斑点印迹 camp类似物 恶性胶质瘤 TJ899细胞 EGFR基因 影响
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cAMP依赖的蛋白激酶PKAR_(Iα)亚基在胃癌细胞中的表达及8-溴-环核苷酸对其表达及细胞增殖的影响 被引量:4
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作者 唐杰 曹传平 +1 位作者 简一平 毛高平 《空军总医院学报》 2001年第4期203-205,208,共4页
目的 观察经位点选择性 8-溴 -环核苷酸 (8- Br- c AMP)诱导前后 ,两株胃癌细胞 SGC790 1 和 MGC80 3 PKA RIα亚基m RNA的表达状况及癌细胞增殖动力学的变化。 方法 应用分子杂交技术测定 8- Br- c AMP诱导前后两株胃癌细胞 PKARI... 目的 观察经位点选择性 8-溴 -环核苷酸 (8- Br- c AMP)诱导前后 ,两株胃癌细胞 SGC790 1 和 MGC80 3 PKA RIα亚基m RNA的表达状况及癌细胞增殖动力学的变化。 方法 应用分子杂交技术测定 8- Br- c AMP诱导前后两株胃癌细胞 PKARIα亚基不同的表达状态 ;用 MTT法和流式细胞仪 FCM观察 8- Br- c AMP诱导前后 ,细胞增殖动力学的变化。 结果 两株胃癌细胞均有 PKA RIα亚基的高表达状态 ,而且经 8- Br- c AMP诱导后 ,PKA RIα的表达水平明显减弱 ;此外 ,8- Br- c AMP对两株胃癌细胞系 SGC790 1 和 MGC80 3 细胞有明显的抗增殖作用 ,其 IC50 值分别为 40μmol/ L和 15μmol/ L ;流式细胞仪分析结果显示 ,经 8- Br- c AMP诱导后 ,在正常的细胞倍体峰前出现一群凋亡的细胞峰型 ,可能和诱导后肿瘤细胞发生凋亡有关。 结论 胃癌细胞株存在 PKA RIα亚基的过表达状态 ,通过 8- Br- c AMP作用 ,可抑制 RIα亚基的过表达并可抑制癌细胞的恶性增殖。 展开更多
关键词 胃肿瘤 肿瘤细胞 培养的 基因表达 蛋白激酶类 环核苷酸
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重组人糖蛋白激素β5/α2融合蛋白在CHO-S细胞中的表达纯化及功能活性分析 被引量:1
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作者 千爱君 萧耿苗 +4 位作者 李壮 梁志成 穆云萍 赵子建 李芳红 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期390-396,共7页
目的在悬浮中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO-S)中分泌表达、纯化重组hCGH-CTP融合蛋白,验证其对3T3-L1成熟脂肪细胞脂质积累的影响。方法构建CTP连接肽融合人糖蛋白激素β5/α2重组蛋白表达载体pcDNA3.1-rhCGH-CTP,... 目的在悬浮中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO-S)中分泌表达、纯化重组hCGH-CTP融合蛋白,验证其对3T3-L1成熟脂肪细胞脂质积累的影响。方法构建CTP连接肽融合人糖蛋白激素β5/α2重组蛋白表达载体pcDNA3.1-rhCGH-CTP,将其瞬时转染CHO-S悬浮细胞中,大量表达纯化并验证rhCGH-CTP蛋白生物学活性;通过干预3T3-L1成熟脂肪细胞24 h,观察细胞内甘油三酯(TG)水平的变化。结果Western blot结果显示,rhCGH-CTP蛋白在CHO-S细胞中成功表达,表达量可达715.4 mg·L^(-1);用AKTA pure蛋白纯化系统纯化蛋白,SDS-PAGE方法鉴定纯化出的蛋白纯度较高可达90%。此外,在高表达TSHR基因的成熟脂肪细胞3T3-L1中,利用ELISA试剂盒测定不同浓度rhCGH-CTP蛋白干预后胞内cAMP含量明显升高,说明rhCGH-CTP蛋白具有生物活性;油红O染色结果发现,与对照组相比,不同浓度rhCGH-CTP蛋白干预组的成熟脂肪细胞中TG含量明显降低(P<0.05)。结论成功表达并纯化了rhCGH-CTP融合蛋白,其具有良好的生物学活性并能有效降低TG,该研究为后续深入揭示CGH蛋白的生理作用及在临床实践中的潜在应用提供了重要基础。 展开更多
关键词 重组人糖蛋白激素β5/α2融合蛋白 真核表达 悬浮CHO-S细胞 camp活性 基因工程 脂代谢
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小鼠cAMP依赖的蛋白激酶催化亚基α的重组表达研究 被引量:1
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作者 陈长征 范均 +3 位作者 许正平 夏其昌 李伯良 王应睐 《生物化学杂志》 CSCD 1996年第6期641-647,共7页
将小鼠cAMP依赖的蛋白激酶(cAPK)催化亚基α(mCα)分别以成熟、麦芽糖结合蛋白(MBP)融合以及N端连续六个组氨酸(His_6)融合的形式在大肠杆菌中得到了高效表达,且成熟及融合的重组mCα均有明显的蛋白激酶... 将小鼠cAMP依赖的蛋白激酶(cAPK)催化亚基α(mCα)分别以成熟、麦芽糖结合蛋白(MBP)融合以及N端连续六个组氨酸(His_6)融合的形式在大肠杆菌中得到了高效表达,且成熟及融合的重组mCα均有明显的蛋白激酶活性,表明蛋白激酶催化核心结构具有相对的独立性。其中His_6-mCα可利用金属离子(Ni ̄(2+))配体亲和层析(Ⅰ-MAC)一步纯化,所得融合蛋白可通过His_6亲合手臂(Tag)固相化于金属离子(Ni ̄(2+))配体亲和树脂上,为进一步利用PhageDisplay多肽库筛选cAPK识别的底物序列和专一性抑制剂打下了基础。 展开更多
关键词 蛋白激酶 重组表达 亚基α 环腺苷酸
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基于Express的违章查询REST Web Service设计与实现 被引量:1
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作者 戴鹏程 聂云峰 +2 位作者 王兴 徐飞飞 李杰 《软件导刊》 2017年第4期67-69,共3页
违章查询是交通管理部门提供的一项便民服务,方便驾驶人对违章信息进行在线查询及处理。移动互联网发展快速、移动设备种类繁多且设备资源有限,为解决移动互联网背景下异构客户端的违章查询服务接入和高并发服务性能问题,提出一种基于Ex... 违章查询是交通管理部门提供的一项便民服务,方便驾驶人对违章信息进行在线查询及处理。移动互联网发展快速、移动设备种类繁多且设备资源有限,为解决移动互联网背景下异构客户端的违章查询服务接入和高并发服务性能问题,提出一种基于Express的违章查询REST Web Service解决方案,为交通管理部门和用户提供便捷高效的违章查询服务。通过Apache JMeter进行压力测试,实验结果表明,该方法实现简单,有效地提高了违章查询服务的扩展性和系统性能。 展开更多
关键词 违章查询 Node.js express REST 移动互联网
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8-Cl-cAMP对人食管癌细胞EGFR表达的影响
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作者 陈奎生 王锦华 +1 位作者 雷冬梅 张云汉 《河南大学学报(医学科学版)》 CAS 2002年第1期4-5,共2页
目的 :探讨 8-Cl-cAMP对人食管癌细胞生长相关基因EGFR表达的影响。方法 :原代分组培养食管癌细胞后 ,采用完整细胞原位RNA斑点印迹技术对滴膜进行斑点印迹。结果 :经 8-Cl -cAMP处理的实验组EGFR的阳性信号较不加 8-Cl-cAMP处理的对照... 目的 :探讨 8-Cl-cAMP对人食管癌细胞生长相关基因EGFR表达的影响。方法 :原代分组培养食管癌细胞后 ,采用完整细胞原位RNA斑点印迹技术对滴膜进行斑点印迹。结果 :经 8-Cl -cAMP处理的实验组EGFR的阳性信号较不加 8-Cl-cAMP处理的对照组EGFR的阳性信号弱 (P <0 .0 5 )。结论 :8-Cl-cAMP可下调与食管癌细胞生长相关的EGFR基因表达。 展开更多
关键词 食管癌 8-Cl-camp EGFR 斑点印迹 基因表达 细胞信号传递系统
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8-Cl-cAMP对人恶性胶质瘤TJ_(899)细胞c-myc基因表达的影响
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作者 陈奎生 尹先印 +1 位作者 殷智榕 姜国忠 《河南实用神经疾病杂志》 2000年第5期2-3,共2页
目的:观察8-Cl-cAMP对人恶性胶质瘤TJ_899XLEQ c-myc基因表达的影响。方法:体外分组培养TJ_899细胞,采用原位杂交方法观察实验组和对照组TJ_(899)细胞c-myc基因表达情况。结果:加8-Cl-cAMP... 目的:观察8-Cl-cAMP对人恶性胶质瘤TJ_899XLEQ c-myc基因表达的影响。方法:体外分组培养TJ_899细胞,采用原位杂交方法观察实验组和对照组TJ_(899)细胞c-myc基因表达情况。结果:加8-Cl-cAMP的实验组较不加8-Cl-cAMP的对照组TJ_(899)细胞c-myc基因表达降低。结论:8-Cl-cAMP可下调TJ_(899)细胞 c-myc基因表达。 展开更多
关键词 8-Cl-camp TJ899 原位杂交 恶性胶质瘤 C-MYC
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鸭疫里默氏杆菌CAMP基因的克隆、原核表达及生物信息学分析 被引量:4
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作者 梅世慧 陈国权 +5 位作者 阎朝华 王娜 周碧君 程振涛 王开功 文明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第12期4348-4360,共13页
试验旨在克隆鸭疫里默氏杆菌协同溶血素蛋白(cooperative hemolysin protein,CAMP)基因,并对其进行原核表达和生物信息学分析。以RA贵州血清2型分离株RA-SS-8基因组为模板扩增并克隆鸭疫里默氏杆菌CAMP基因,构建pET-28a-CAMP重组原核表... 试验旨在克隆鸭疫里默氏杆菌协同溶血素蛋白(cooperative hemolysin protein,CAMP)基因,并对其进行原核表达和生物信息学分析。以RA贵州血清2型分离株RA-SS-8基因组为模板扩增并克隆鸭疫里默氏杆菌CAMP基因,构建pET-28a-CAMP重组原核表达质粒,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,重组菌用IPTG进行诱导表达及纯化,利用SDS-PAGE和Western blotting分析表达蛋白的特征,并运用相关生物信息学分析软件对CAMP基因进行分析。结果显示,鸭疫里默氏杆菌CAMP基因大小为1026 bp,该基因序列与GenBank中公布的10株RA参考菌株(如RA-LZ01(CP045564.1))CAMP基因的相似性达99.7%。经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定后,获得大小约5369和1026 bp的基因片段,表明pET-28a-CAMP重组表达质粒构建成功。SDS-PAGE和Western blotting分析显示,表达的重组蛋白大小约为37 ku,以可溶形式进行表达,且能与His-tag单克隆抗体在37 ku处产生特异性反应,与预期结果相符。生物信息学分析表明,CAMP蛋白分子式为C_(1670)H_(2659)N_(437)O_(500)S_(12),含341个氨基酸,理论等电点(pI)为5.62,不稳定系数为40.71,表明其为不稳定的弱酸性蛋白。疏水性预测结果显示,该蛋白属于亲水性蛋白。CAMP蛋白无跨膜结构域,无信号肽,有3个O-糖基化位点,无N-糖基化位点,存在34个磷酸化位点,共有17个抗原表位。二级结构和三级结构预测结果显示,CAMP蛋白以α-螺旋和无规则卷曲为主。本试验结果为进一步研究鸭疫里默氏杆菌CAMP蛋白的功能及鸭疫里默氏杆菌病疫苗的研发提供了参考。 展开更多
关键词 鸭疫里默氏杆菌 camp基因 原核表达 生物信息学分析
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牛源无乳链球菌CAMP因子(cfb)的克隆及原核表达 被引量:1
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作者 王向柳 王长法 +3 位作者 杨宏军 阿合买提·买买提 高运东 仲跻峰 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期54-58,共5页
提取能产生CAMP反应的牛源无乳链球菌山东分离株的基因组DNA,PCR扩增CAMP因子基因,重组到pMD18-T载体中。测序结果表明,扩增片断含有768 bp的ORF,可编码含255个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的无乳链球菌CAMP因子蛋白的氨基酸组成相比,第8... 提取能产生CAMP反应的牛源无乳链球菌山东分离株的基因组DNA,PCR扩增CAMP因子基因,重组到pMD18-T载体中。测序结果表明,扩增片断含有768 bp的ORF,可编码含255个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的无乳链球菌CAMP因子蛋白的氨基酸组成相比,第8位Tyr→Cys,第95位Pro→Ser,第126位Thr→Ala的3个氨基酸发生了点突变,同源性为98.4%。成功构建原核表达载体pET32a+/cfb,SDS-PAGE分析蛋白质表达水平,IPTG诱导后表达的融合蛋白分子量为48 kD,表达量占菌体总蛋白的52.7%。这为进一步研究其致病与免疫机理、疫苗设计提供了条件。 展开更多
关键词 无乳链球菌 camp因子 克隆 表达
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无乳链球菌CAMP因子(cfb)的克隆及原核表达质粒的构建 被引量:1
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作者 王向柳 王长法 +4 位作者 杨少华 杨宏军 阿合买提.买买提 高运东 仲跻峰 《西南农业学报》 CSCD 2008年第4期1136-1139,共4页
提取无乳链球菌的基因组DNA,PCR扩增CAMP因子基因,重组到PMD18-T载体中。测序结果表明,扩增片断含有768bp的ORF,可编码含256个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的无乳链球菌CAMP因子蛋白的氨基酸组成同源性为98.4%。挑选阳性菌落经PCR鉴定和... 提取无乳链球菌的基因组DNA,PCR扩增CAMP因子基因,重组到PMD18-T载体中。测序结果表明,扩增片断含有768bp的ORF,可编码含256个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的无乳链球菌CAMP因子蛋白的氨基酸组成同源性为98.4%。挑选阳性菌落经PCR鉴定和酶切鉴定后表明成功构建原核表达载体pET32 a+/cfb。这为进一步研究其致病与免疫机理、疫苗设计提供了条件。 展开更多
关键词 无乳链球菌 camp因子 克隆 表达
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Dual effects of 8-Br-cAMP on differentiation and apoptosis of human esophageal cancer cell line Eca-109 被引量:3
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作者 Hong-Mei Wang Nai-Gang Zheng +2 位作者 Jing-Lan Wu Cui-Cui Gong Yi-Ling Wang 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2005年第41期6538-6542,共5页
AIM: To investigate the effects of 8-Br-cAMP on differentiation and apoptosis of human esophageal cancer cell line Eca-109, and the related gene expression.METHODS: The cultured Eca-109 cells were divided into four gr... AIM: To investigate the effects of 8-Br-cAMP on differentiation and apoptosis of human esophageal cancer cell line Eca-109, and the related gene expression.METHODS: The cultured Eca-109 cells were divided into four groups: E1 group (co-cultured with 8-Br-cAMP for 24 h); E2 group (co-cultured with 8-Br-cAMP for 48 h); C1 group (treated without 8-Br-cAMP for 24 h); and C2 group (treated without 8-Br-cAMP for 48 h). The same concentration of cell suspension of each group was dropped separately onto the slides and nitrocellulose membranes (NCM). The biotin-labeled cDNA probes for c-myc, wild-type (wt) p53, bcl-2 and iNOS were prepared for in situ hybridization. The expressions of epidermal growth factor receptor (EGFR), p38 kinase, FAS, FasL and caspase-3 were detected using immunocytochemistry, and the NOS activity and the ratio of differentiated cells/proliferating cells were examined by cytochemistry. Immunocytochemistry, cytochemistry,and in situ hybridization were separately carried out on both slides and NCM specimens for each group. In addition, TUNEL was used to detect the cell apoptosis rate in each group.RESULTS: The apoptotic rate of E2 group was significantly higher compared to E1 group, while there was no difference in the ratio of differentiated cells/ proliferating cells between E1 and E2 groups. The signals of wt p53 and iNOS were markedly stronger, while the signals of c-myc and EGFR were obviously weaker in E1 group than those in C1 group (P<0.05). Moreover, the signals of wt p53, iNOS, p38 kinase, caspase-3 and NOS activity were significantly stronger, whereas, the signals of bcl-2, c-myc and Fas/FasL were markedly weaker in E2 group than those in C2 group (P<0.05). CONCLUSION: The differentiation and apoptosis of human esophageal cancer cell Eca-109 can be induced after 24- and 48-h treatment with 8-BrcAMP, respectively. Upregulation of wt p53, iNOS and downregulation of c-myc may be associated with differentiation and apoptosis of Eca-109 cells.Furthermore, upregulation of FasL, p38 kinase and caspase-3 as well as downregulation of bcl-2, and Fas may be involved in the apoptosis of Eca-109 cells. 展开更多
关键词 8-BR-camp 细胞凋亡 食管癌 ECA-109 治疗
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8-Br-cAMP对人白血病HL-60细胞生长、分化及有关基因表达的影响 被引量:1
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作者 张鑫 吴景兰 +2 位作者 王淑钗 郭东欣 黄鹂 《洛阳医专学报》 2000年第1期1-3,共3页
目的 观察 8 Br cAMP对HL 6 0细胞生长、分化及其相关基因的调节。方法 组织化学、原位杂交和完整细胞RNA斑点印迹。结果  8 Br cAMP作用 2 4h ,HL 6 0细胞c fos癌基因和p2 1waf1抑癌基因表达明显升高 ,c myc癌基因表达明显降低 ;8 B... 目的 观察 8 Br cAMP对HL 6 0细胞生长、分化及其相关基因的调节。方法 组织化学、原位杂交和完整细胞RNA斑点印迹。结果  8 Br cAMP作用 2 4h ,HL 6 0细胞c fos癌基因和p2 1waf1抑癌基因表达明显升高 ,c myc癌基因表达明显降低 ;8 Br cAMP作用 48h ,HL 6 0细胞生长、增殖明显受抑制 ,并向中性粒细胞方向分化。结论  8 Br cAMP可调整HL 6 0细胞生长、分化及相关癌基因和抑癌基因的表达 ,抑制HL 6 0细胞的生长 ,促进HL 6 展开更多
关键词 8-BR-camp HL-60细胞 基因表达 白血病
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GLP—1受体基因表达cAMP-PKA途径调控的研究 被引量:1
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作者 姜吉文 秦臻 +2 位作者 吕学诜 HCFchmann B.goke 《佳木斯医学院学报》 1996年第3期1-4,共4页
本文利用蛋白激酶A(PKA)的激活剂Forsolin对大白鼠胰岛素瘤细胞(RINm5F)上GLP一1受体的基因表达进行了研究。在forskolin的作用下,使类胰高血糖素肽I(GLP—1)受体的转水平明显下降,即GLP一1受体mRNA的量明显减少,出现了GLP一1受体基因... 本文利用蛋白激酶A(PKA)的激活剂Forsolin对大白鼠胰岛素瘤细胞(RINm5F)上GLP一1受体的基因表达进行了研究。在forskolin的作用下,使类胰高血糖素肽I(GLP—1)受体的转水平明显下降,即GLP一1受体mRNA的量明显减少,出现了GLP一1受体基因表达的负调控,但forskoln可以使GLP—1受体的mRNA的稳定性增加结果表明,GLP—1受体的转录是通过cAMP—蛋白激酶A途径进行调控的,因此,影响此途径的物质对类胰高血糖素肽—1的生理功能以及在临床应用方面起着重要作用。 展开更多
关键词 GLP-1 基因表达 FORSKOLIN 蛋白激酶A
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