吐哈盆地及二连盆地侏罗系煤微类脂组分的共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）研究及油气意义

吐哈盆地产出有比较丰富的侏罗系煤成油气田，本文用共聚焦激光扫描显微镜和热解分析等手段研究了煤中类脂组及微类脂组的类型、含量、分布与煤成烃性能和产出的关系。观察分析结果表明：在一般煤岩组分观测中主要含煤的西山窑组和八道湾组煤层类脂组含量很少超过１０％，但是一些煤样的热解分析中Ｓ＿１可高达５－２３ｍｇ／ｇ，Ｓ＿２可达１５０─２００ｍｇ／ｇ，ＨＩ（烃／有机碳）可高达１５０─３５０ｍｇ／ｇ生烃、含烃性能较好。进一步用共聚焦激光显微镜观测结果表明：本区一些薄层状、条带状煤层的基质镜质体和叶结构镜质体中微类脂组含量比较丰富，微区定量统计含量在３％─１８％左右。这种富含微类脂组的基质镜质体和结构镜质体在煤成油气中有重要意义，而且由于多数微类脂体在煤中常成点线状、似层状、充填状、网络状分布，可能有利于煤成油气的运移和聚集。

应用CLSM对自体表皮移植治疗白癜风的疗效观察

目的应用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察自体表皮移植治疗白癜风后的黑素细胞恢复状况。方法采用CLSM对白癜风皮损进行检测,选择镜下显示黑素细胞完全消失的皮损进行自体表皮移植,移植后1、3、6个月动态观察黑素细胞恢复状况。结果 20例白癜风患者中,28块皮损进行了自体表皮移植,临床总成活率为96.43%,移植后CLSM成像显示黑素细胞完全恢复率为82.14%。结论 CLSM检测可作为白癜风自体表皮移植治疗适应证的选择方法,也可作为移植治疗后连续动态观察黑素细胞恢复状况的可靠手段。

利用CLSM检测GFP基因在家蚕的瞬时表达

将绿色荧光蛋白（GFP）基因导入家蚕蛹（G0）的睾丸，利用激光共聚焦扫描显微镜（CLSM）系统检测，得到GFP基因在家蚕刚孵出未进食的幼虫(蚁蚕)（G1）瞬时表达的荧光图像。

激光共聚焦扫描显微镜载样台改造及使用

激光共聚焦扫描显微镜已经成为了生物科学研究中不可或缺的大型高端光学成像仪器。但由于生物样品来源和类型丰富,而购置的激光共聚焦显微镜单一形式载样台不能满足各类生物学样品的使用。本工作在Leica TCS SP8激光共聚焦显微镜载样台的基础上,设计了一种能够避免原装载样台造成物镜撞击载物台并且能够更好的适应生物科研中各类成像样本的新载样台。改造结果显示更换载样台后,极大的降低了载物台撞显微镜物镜的概率,避免了显微镜物镜的损伤和因载样台的限制而不能进行成像造成样本的浪费,并且更加方便显微镜的日常使用。该次载样台改造的尝试为国内其他科研平台或仪器制造商提供了设计一种更好适应不同样品和物镜友好样品台的思路,具有很大的实用价值和借鉴意义。

粳稻蛋白质与蒸煮食味品质的关系

采用扫描电子显微镜(SEM)和激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)对直链淀粉含量相近而蛋白质含量差异较大的水稻籽粒及米饭粒的显微结构进行观察,研究蛋白质与蒸煮食味品质的关系。结果表明:通过感官评价和测定快速黏度分析(RVA)特征谱,确定越光、m90、m119的食味品质随蛋白含量的升高而逐渐降低;SEM、CLSM观察糙米横断面,高蛋白含量的m119的大量蛋白体以近似于蜂窝状包围在复合淀粉粒的周围;CLSM观察浸水籽粒的掰断面,蛋白含量不同的品种的掰断面粗糙度也有区别,蛋白含量越高,掰断面越粗糙,即吸收水分少,反映了蛋白质对大米吸水性的影响;SEM、CLSM观察米饭的显微结构,发现高蛋白品种m119的大量蛋白体包围在复合淀粉粒周围,限制了淀粉的吸水糊化,导致蒸煮食味品质的降低。

聚氯乙烯材料表面细菌生物膜结构观察

目的建立聚氯乙烯(PVC)材料表面细菌生物膜(BF)体外模型,并探讨激光共聚焦显微镜(CLSM)和环境扫描电子显微镜(SEM)对研究BF的应用价值。方法用生物膜形成阳性的表皮葡萄球菌(表葡菌)RP62A,在TBS培养基中,进行体外PVC材料表面BF形成实验动态观察,分别于培育6、12、18、24、30、48h后,用CLSM观察BF的厚度、单位面积BF群落数量、断层扫描图像、BF中活和死菌荧光比例及其三维重建图像,用环境SEM观察BF表面精细结构。结果表葡菌BF是具有高度组织化的多细胞群体结构,其中细菌密集,由活菌和死菌组成;PVC材料表面BF的形成是动态的过程,12～18h细菌黏附达到高峰,24h形成成熟BF;成熟BF中,内层、中间层及外层的活、死菌百分率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论表葡菌生物膜结构复杂,CLSM与环境SEM的有机结合是观察PVC材料表面细菌BF的理想方法。

铁调素及铁离子对人成骨细胞(hFOB1．19)内钙离子转运的影响

目的研究铁调素（Hepcidin）及铁离子对人成骨细胞（hFOB1．19）内Ca^2＋转运的影响。方法成骨细胞34℃培养3—4天至细胞密度为90％，胰蛋白酶消化后分种于12孔培养板（每孔内置一圆形盖玻片）。（1）空白组加入双蒸水，实验组加入不同浓度Hepcidin（双蒸水配制），干预24h后用激光共聚焦扫描显微镜（cLSM）检测；（2）空白组加入双蒸水，实验组加入不同浓度的DFO和FAC，分别干预后立即用激光共聚焦扫描显微镜检测。结果经激光共聚焦扫描显微镜（CLSM）检测发现：（1）随着成骨细胞外Hepcidin浓度的升高，成骨细胞内钙离子的绿色荧光强度增强；（2）随着成骨细胞外DFO浓度的升高，成骨细胞内钙离子的绿色荧光强度增强；相反，随着成骨细胞外FAC浓度的升高，成骨细胞内钙离子的绿色荧光强度减弱。结论（1）Hepcidin可促进成骨细胞内Ca^2＋增加。（2）成骨细胞外Fe^3＋浓度的减少可以增加细胞内的Ca^2＋，而胞外Fe^3＋浓度增加则减少细胞内的Ca^2＋。

铁调素对人成骨细胞(hFOB1.19)内钙离子转运的影响

目的研究铁调素对人成骨细胞(hFOB 1.19)内Ca2+转运的影响。方法将成骨细胞34℃下培养3～4 d至细胞密度为90%,用胰蛋白酶消化后分种于12孔培养板。空白组加双蒸水;实验组加不同浓度铁调素(双蒸水配制),包括H1组(终浓度为10 nmol/L)和H2组(终浓度为50 nmol/L)。干预24 h后用激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)检测。结果成骨细胞内钙离子荧光强度空白组为56.38±36.47,H1组为68.01±32.90;H2组为154.06±55.62,3组间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论铁调素可促进成骨细胞内Ca2+浓度增加。

牙体玻璃离子充填材料边缘微渗漏的激光扫描共聚焦显微镜与金相显微镜比较研究

目的:在两种不同显微镜下定量观测人离体牙充填玻璃离子水门汀后边缘微渗漏的情况,并对两种方法进行比较。方法:选取新鲜无龋前磨牙,备洞,充填玻璃离子水门汀,37℃水浴条件下分别置于0.1%罗丹明B荧光染料或1%甲基蓝溶液浸染,激光扫描共聚焦显微镜和金相显微镜下分别测量染液渗入深度,定量评价微渗漏程度,对两种方法的检测结果进行比较。结果:两种方法均能检测到染液渗漏,在分别充填传统型玻璃离子水门汀和树脂改性玻璃离子水门汀的情况下,金相显微镜下测得的渗漏值分别为(33.18±5.59)μm和(32.30±3.76)μm,与激光扫描共聚焦显微镜下所得渗漏深度(22.57±2.59)μm及(21.93±1.51)μm相比,差异有显著统计学意义(P<0.05)。结论:激光扫描共聚焦显微镜和金相显微镜均可用于牙体充填材料边缘微渗漏的观测,但综合效果前者更优。

脂质体混悬液对荧光素钠在大鼠皮肤分布的影响

目的 :研究脂质体混悬液对荧光素钠在大鼠皮肤分布的影响。方法 :以0 125 %荧光素钠溶液为对照,在激光共聚焦显微镜下观察不同时间点0 125 %荧光素钠脂质体混悬液 (试验组 )荧光素钠在皮肤表皮、真皮分布的情况。结果 :试验组表皮及真皮荧光强度峰值与对照组比较均具有统计学差异 (P<0 05) ;试验组表皮及真皮内荧光强度值曲线下面积分别是对照组的2 09倍和2 4倍 ;试验组切片中毛囊周围的荧光强度值大于对照组。结论 :脂质体混悬液能使药物在皮肤组织中保持较高的浓度 ,从而提高其生物利用度 ;毛囊是脂质体制剂中药物扩散的重要途径。

铁离子对Caco-2细胞内钙离子转运的影响及钙离子浓度变化与细胞凋亡关系的研究

目的 研究细胞外铁离子(Fe3+)浓度变化对钙离子(Caco 2)细胞内Ca2+转运的影响及细胞内钙离子 浓度升高与Caco 2细胞凋亡的关系。 方法 采用激光共聚焦扫描显微镜和流式细胞技术进行观察与检测。 结果 (1)利用激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察发现,随着Caco 2细胞外Fe3+浓度的减少(DFO终浓度为100～ 300μmol L),Ca2+向细胞内的转运量增加;而随着细胞外Fe3+浓度的增加(FAC终浓度为10～100μmol L),Ca2+向细 胞内的转运呈降低趋势;(2)经A23187和Fluo 3 AM处理后Caco 2细胞的存活率较高,达90%以上(用荧光素二醋酸 酯检测);(3)A23187升高Caco 2细胞的胞内Ca2+浓度,呈剂量依赖性;经流式细胞技术(FCM)检测发现胞内Ca2+浓度 增加具有诱导Caco 2细胞凋亡的作用。 结论 Caco 2细胞外Fe3+浓度的减少有促进Ca2+向细胞内转运的作用, 但胞外Fe3+浓度增加时有抑制Ca2+向胞内转运的作用;胞内Ca2+浓度增加对Caco 2细胞凋亡具有诱导作用。

双相不锈钢高温组织相含量的测定

采用共聚焦激光扫描显微镜原位分析和淬火热处理试验两种方法并结合Mivnt显微图像分析系统对双相不锈钢高温组织中的奥氏体相含量(体积分数,下同)进行了测定。两种方法所测定的奥氏体相含量随温度的变化趋势基本一致。与热处理试验方法相比,共聚焦激光扫描显微镜原位分析方法的效率较高、测量结果较精确。根据两种分析方法测定的结果,得出了奥氏体相含量与温度的线性回归关系式。

激光扫描共聚焦技术分析中药8892对U_（14）癌细胞的作用

我们证明中药８８９２对小鼠生存率和抑瘤率有明显效果的同时，并应用激光扫描共聚焦显微镜观察了中药８８９２对纯小鼠Ｕ１４癌细胞的作用，实验结果证明中药８８９２能直接破坏癌细胞ＤＮＡ、ＲＮＡ，抑制癌细胞增殖，这为中药抗癌作用的临床应用提供有力的依据。本文还讨论了激光共聚焦显微镜（ＣＬＳＭ）的功能，细胞断层抄描光切片（细胞ＣＴ），三维重建，立体旋转等等，这在普通显微镜下是见不到的。因此应用这种新技术会促进中医药研究的发展。

激光扫描共聚焦显微镜研究APOBEC3G蛋白的亚细胞定位

采用RT-PCR技术,从HIV的非允许性H9细胞中获得载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(APOBEC3G)的全长cDNA。APOBEC3G cDNA全长1 155nt,编码384个氨基酸。将APOBEC3G克隆到真核表达载体pEGFP-C3上,转染CD4+HeLa细胞,激光扫描共聚焦显微镜下可观察到表达的GFP-APOBEC3G融合蛋白定位于细胞质。

共聚焦激光扫描显微镜在诊断色素痣、脂溢性角化症及色素型基底细胞癌的临床应用

目的:对临床疑诊色素痣、脂溢性角化症及色素型基底细胞癌的患者行共聚焦激光扫描显微镜检查,分析其灵敏度与特异度,探讨其在上述3种疾病诊断中的应用价值。方法:对临床疑诊为50例色素痣、42例脂溢性角化症及34例色素型基底细胞癌的患者,行临床初步诊断、共聚焦激光扫描显微镜及病理组织学检查,比较临床诊断与共聚焦激光扫描显微镜诊断灵敏度与特异度。结果:共聚焦激光扫描显微镜在色素痣、脂溢性角化症及色素性基底细胞癌的灵敏度及特异度均高于临床诊断。结论:共聚焦激光扫描显微镜实时、无创及高分辨率,对色素痣、脂溢性角化症及色素型基底细胞癌临床辅助诊断有一定价值,有助于其鉴别诊断。

应用激光共聚焦显微镜观察光动力技术对单增李斯特菌菌膜的灭活作用

以亚甲基蓝(methylene blue,MB)为光敏剂,采用光催化专用氙灯光源(光功率密度为200mW/cm2),通过激光共聚焦扫描显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)观察法探讨了光动力杀菌技术(anti-microbial photodynamic technology,APDT)对单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)菌膜(biofiLM,BF)的灭活作用。结果表明,MB-APDT处理的LM BF经过SYTO9/PI染色后在CLSM下观察,灭活效果区分明显。这一效果由平板菌落计数法得到进一步证实。光照20min,当MB的浓度低至0.1μg/mL时,APDT对于生长8h的BF失活率达到99.7%;当MB浓度为50μg/mL时,几乎全部LM BF失活。当MB浓度为1μg/mL时,光照5min即可使约99.6%生长8h的LM BF失活,也可使约78.7%生长36h的BF失活;当光照时间为30min时,生长8h LM-BF失活率达到99.97%,而生长36h BF失活率也达到99.94%。MB-APDT对LM BF的灭活效果主要取决于MB浓度和光照时间,且杀伤作用非常显著。

利用激光扫描共聚焦显微镜研究植物细胞发育形态学变化

通过激光扫描共聚焦显微镜,利用不同种类(波长)的激光研究植物细胞发育形态学变化。结果表明,利用紫外激光(351 nm)扫描可以清楚地观察到拟南芥叶片表皮细胞的形态及其变化,在已分化的叶片表皮上可观察到包括“铺垫”表皮细胞(epidermal pavement cells)、气孔保卫细胞(guard cell)、气孔伴胞(subsidiarycells)、表皮毛细胞(trichomes)和表皮毛的足细胞(socket cells)等多种形态不同的细胞种类;利用蓝光激光(488nm)辅助曙红浅染,可清晰地显示出拟南芥根生长区内部的各种原始细胞,包括静止区(quiescent center)细胞、皮层/内皮层原始细胞(cortex/endodermal initial cell)、表皮/根冠原始细胞(epidermal/root cap initial cell)和中柱/根冠原始细胞(columella/root cap initial cell)等。利用双光子激光(800 nm)连续扫描30 s可以诱发叶绿体产生自发荧光,并可观察到叶绿体在叶肉细胞中的运动轨迹。结果说明激光扫描共聚焦显微镜在植物细胞形态及发育研究上具有独特的功能。

利用荧光探针和激光共聚焦显微镜显示玉米根冠细胞微丝分布与变化

利用罗丹明标记的鬼笔环肽为荧光探针,通过激光共聚焦荧光显微镜,观察了玉米根冠细胞中微丝的分布与变化。结果显示:脱落的玉米根冠细胞中存在微丝网络,纤细的微丝相互交织,并与荧光颗粒交叉相连,其中在细胞核、质体等细胞器周围较密集,可见放射状微丝束,暗示微丝的功能与细胞核、细胞器的活动相关。细胞松弛素B可破坏微丝分布;来自玉米小斑病菌C小种的致病毒素对微丝网络也有专化破坏作用,并且它们对微丝的破坏作用随着浓度的增大而加强。

共聚焦激光扫描对呼吸窘迫综合症大鼠肺组织的观察

目的:为了更直观地观察和显示呼吸窘迫综合症(acuterespiratorydistresssyndrom,ARDS)典型的病理变化(肺泡内形成一层蛋白质透明膜)。方法:利用百草枯(Paraqual)染毒SD大鼠复制ARDS实验动物模型,取肺病理组织,切片,试剂Goat-Anti-Rat-FITCIgM+IgG染色,共聚焦激光扫描显微镜(confocallaserscarm-ingmicroscope,CLSM)观察。结果:CLSM能清晰到样品内不同层面的病理变化。结论:共聚焦激光扫描显微镜能清晰观察样品内不同层面的结构,相比于传统的光学显微镜,其观察到的图像更直观、更具立体感,能更好表达ARDS的病理变化特征。

ICAM-1/LFA-1在早期自然流产患者蜕膜组织中的表达

目的通过观察细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)在早期自然流产患者蜕膜组织中的表达,探讨ICAM-1/LFA-1与早期自然流产的关系。方法采用免疫组化方法检测33例早期自然流产患者和同期妊娠的30例健康妇女蜕膜组织中ICAM-1、LFA-1的表达,用激光共聚焦显微镜(CLSM)双标检测二者关系并加以分析。结果流产组患者蜕膜组织基质细胞ICAM-1和LFA-1蛋白表达强度高于对照组(t=-3.632,P=0.001;t=-3.839,P=0.001);流产组蜕膜腺体细胞ICAM-1和LFA-1蛋白表达强度明显低于对照组(t=-2.613,P=0.013;t=-2.266,P=0.027);共聚焦显微镜下ICAM-1和LFA-1在流产组和对照组的蜕膜组织均有大部分重叠表达,在蜕膜腺体细胞流产组比对照组重合表达明显。结论 ICAM-1和LFA-1在早期自然流产患者蜕膜组织基质细胞的高表达和腺体细胞的低表达可能与早期自然流产的发生有关。