腹壁脂肪组织、唇腺及骨髓3部位活检联合质谱分析技术诊断轻链型淀粉样变性的价值

目的:分析腹壁脂肪组织、唇腺及骨髓3部位联合活检在诊断轻链型淀粉样变性中的应用,探讨3种微创活检方法在不同器官累及患者中的应用价值及3部位联合活检对提高诊断阳性率的意义。方法:回顾性分析我院2017年01月至2022年09月期间诊断的61例具有梅奥分期数据的轻链型淀粉样变患者的临床资料,分析3部位微创活检的阳性率,器官累及情况与不同部位活检的结果,2018年01月后我中心对于任1部位刚果红阳性的病例加做激光显微切割联合质谱(LMD/MS)分析。结果:联合应用腹壁脂肪活检、唇腺活检及骨髓活检的40例患者,至少1个部位阳性的为36例(90%),对刚果红阳性部位加做LMD/MS阳性率为100%。结论:3部位微创活检可以明显提高轻链型淀粉样变性的确诊率,LMD/MS技术最终对淀粉样变性的类型起定性作用;建议临床对怀疑轻链型淀粉样变性的患者常规进行腹壁皮下脂肪组织、唇腺、骨髓3部位活检并通过LMD/MS进一步印证。

神经冰冻切片刚果红染色技术在周围神经病病理诊断中的应用效果探讨

目的探讨神经冰冻切片刚果红染色技术在周围神经病病理诊断中的应用效果,摸索实验操作的最佳条件。方法选择2022年8月于首都医科大学宣武医院神经内科收治的1例淀粉样周围神经病患者,取腓肠神经的活检组织标本。制作6μm和8μm厚度的冰冻切片,Highman刚果红染液染色时间分别设置为5 min、10 min、15 min、20 min,在普通光、偏振光及荧光下观察冰冻切片刚果红染色结果。结果当染色时间为10 min、15 min、20 min时,两种厚度切片均可观察到特异物质沉积,且随着切片厚度增加,颜色强度增加。6μm切片在染色5 min时效果不佳;8μm切片在染色15 min时效果最好,光镜及荧光显微镜下观察到的染色结果更利于观察者进行诊断。结论神经冰冻切片厚度为8μm、染色时间15 min是合适的刚果红染色条件,在淀粉样周围神经病病理诊断中有较好的应用价值。

淀粉样变性肾病31例临床病理学分析

目的：探讨淀粉样变性肾病（ amyloid nephropathy, ANP）的临床病理学特征。方法回顾性分析31例ANP的临床病理资料,并复习相关文献。结果31例ANP占同期全部肾脏穿刺活检的1．19%（31/2603）,其中女性15例,男性16例。年龄36-77岁,平均（61．28±10．95）岁。临床分期：单纯蛋白尿期4例（12．90%）,肾病综合征期21例（67．74%）,肾功能衰竭期6例（19．35%）。镜下见淀粉样物质主要沉积于肾小球系膜区、毛细血管基膜和小动脉壁,严重时可沉积于肾小管基膜和肾间质。高锰酸钾氧化刚果红染色示：AL型27例,AA型4例。免疫荧光检测部分病例可见免疫球蛋白及补体程度较弱的沉积,部分为阴性。 AL型ANP免疫组化标记示免疫球蛋白轻链κ和λ不同程度表达,其中以λ轻链多见。电镜下在系膜区及毛细血管壁上皮下可见淀粉样纤维。结论 ANP好发于中老年肾病患者,临床表现有时缺乏特异性,肾组织穿刺活检病理学检查是确诊的唯一方法。对疑似病例应尽早行肾脏穿刺活检,以便早期诊断及治疗。

5月龄APP/PS1双转基因小鼠行为学及老年斑病理改变

目的评价5月龄APP/PS1双转基因小鼠学习记忆功能及脑部病理改变。方法 5月龄APP/PS1(+/-)小鼠,采用Morris水迷宫实验评价空间学习记忆功能,免疫组织化学和刚果红染色观察淀粉样斑块沉积情况。结果 Morris水迷宫实验显示APP/PS1(+)小鼠逃避潜伏期明显长于APP/PS1(-)小鼠,表明5月龄APP/PS1(+)小鼠已经出现了空间学习记忆功能的损害。新物体识别实验中5月龄APP/PS1(+)小鼠对新物体的分辨指数无显著降低,免疫组化、刚果红染色显示5月龄APP/PS1(+)小鼠海马及皮质均出现斑块沉积。结论 5月龄APP/PS1双转基因小鼠出现空间学习记忆功能损害,小鼠脑内已经出现相应的病理改变。

20例肾淀粉样变的临床与病理特点分析

目的:分析肾淀粉样变的临床与病理特点,以减少误诊和漏诊,提高临床诊治水平。方法:回顾性分析2005年1月至2009年8月在中南大学湘雅二医院肾内科经活检诊断为肾淀粉样变的20例患者的临床和病理资料。结果:20例中95%的患者年龄在40岁以上,55%的患者有2个以上系统损害,80%表现为典型的肾病综合征。肾活检HE染色下肾小球系膜及毛细血管袢周边可见均一的淀粉样物质呈块状沉积,亦可见于间质、血管及肾小管壁。高锰酸钾氧化刚果红染色示AL型18例,AA型2例。AL型与AA型病理改变类似,但前者可见免疫球蛋白轻链κ和λ沉积。结论:肾淀粉样变在中老年蛋白尿患者中并非少见,临床表现有时缺乏特异性,肾活检光镜下的典型病理学改变结合刚果红染色可确诊。对于疑似患者应尽快行肾活检及刚果红染色,以免误诊与漏诊。

结肠淀粉样变性的临床及内镜表现:3例报道并文献复习

探讨结肠淀粉样变性的内镜表现及临床特征。分析3例典型结肠淀粉样变性患者的结肠镜及临床表现,并总结国内外已发表的病例特点。结肠淀粉样变性可以分为两型。1型为非血管受累型,为最常见表现。其中黏膜下淤血、血泡、血肿和淤血吸收消散后溃疡形成为其特征性表现。2型累及黏膜下血管,其表现与缺血性肠病相似。便血和黏膜下血肿可能是结肠淀粉样变性的临床及特征性内镜表现,对于不明原因便血的患者,进行刚果红染色活检可以帮助早期诊断。

米曲霉(Aspergillus oryzae)沪酿3.042内切型纤维素酶的分离纯化与鉴定

为了解米曲霉纤维素酶在物料分解过程中的作用,从米曲霉沪酿3.042成曲中提取粗酶液,利用DNS法分析了粗酶液中外切酶、内切酶及β-葡萄糖苷酶的活力.用刚果红染色法确定了沪酿3.042成曲粗酶液中含有4种内切型纤维素酶,分别称为Cx酶Ⅰ,Cx酶Ⅱ,Cx酶Ⅲ和Cx酶Ⅳ.经DEAE-Cellulose-52离子交换层析,0.15,0.20,0.25,0.30mol/L NaCl洗脱峰均测得内切型纤维素酶活性,制备电泳纯化得到4个内切型纤维素酶组分,SDS-PAGE结果显示,Cx酶Ⅰ,Cx酶Ⅱ,Cx酶Ⅲ为单体酶,分子质量分别为31 800,34 000,26 000u,Cx酶Ⅳ含有4个亚基,分子质量分别为14 000,23 600,26 000,33 500u.粗酶液中内切型纤维素酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH值为4.0.

免疫组化方法在检测肾淀粉样变中的应用

【目的】探讨应用甲基紫染色、刚果红染色和免疫组化3种方法检测38例不同类型的肾淀粉样变的效果。【方法】将38例肾标本常规处理后,分别用甲基紫、刚果红染色和免疫组化3种方法进行检测,统计检测结果并分析。【结果】甲基紫染色能够准确检测肾淀粉样变,但不能进行分型,且需及时观察;刚果红染色能够准确检测肾淀粉样变,联合氧化后的刚果红染色能够区分AA型与AL型淀粉样变;免疫组化检测能够准确检测肾淀粉样变,并对其进行分型,AA型SAA蛋白阳性,AL型kappa和lambda蛋白阳性。【结论】3种方法均能准确检测肾淀粉样变,而刚果红染色和免疫组化能够进一步分型,建议临床上将刚果红染色和免疫组化联合应用,以利于淀粉样变的诊断及确定分型,同时避免试剂和人为操作等造成的误诊和漏诊。

刚果红染色在临床病理诊断中的应用价值

目的探讨刚果红染色在临床病理诊断中的应用价值。方法对30例HE染色下呈现均质粉染区域的声带息肉、甲状腺髓样癌、淀粉样变肾小球肾炎的标本进行刚果红染色,从而判定其变性的性质是淀粉样变性还是玻璃样变性,进而辅助诊断疾病。结果其中21例有淀粉样变性的区域经刚果红染色颜色呈现为红色或砖红色,而9例具有玻璃样变的病例无此颜色变化。结论刚果红染色可用于鉴别淀粉样变性与玻璃样变性,为某些疾病的诊断提供线索,从而有助于疾病的诊断与鉴别诊断。

系统性淀粉样变患者诊断性活检部位的选择

目的探讨不同的组织器官活检诊断系统性淀粉样变的阳性率。方法回顾性分析2009年1月至2015年6月北京协和医院确诊的194例系统性淀粉样变患者的临床资料和活检结果。结果受累器官活检是阳性率最高的活检部位,其中肾脏、心脏和肝脏的阳性率分别为97.4%、95.0%和87.5%。而在微创性活检部位中,阳性率由高到低分别为舌体75%、齿龈57%、腹壁脂肪57%、直肠16%和骨髓8%。联合舌体与腹壁脂肪活检可使阳性率提高到93.1%。结论受累器官活检仍然是阳性率最高的活检方式,联合多部位的微创活检可能达到与受累器官活检相近的阳性率,且更为方便安全。

不同刚果红染色及观察方法对肾脏淀粉样变病诊断的研究

目的:探讨诊断肾脏淀粉样变病的敏感、可靠检查法。方法:选取14例肾脏淀粉样变病肾穿刺组织标本,用7种不同的刚果红染色法进行染色,然后分别用3种显微镜进行观察。结果:7种刚果红染色法均能着染淀粉样蛋白,但是染色效果有区别,以Stokes等改良的染色法效果最佳。普通光学显微镜检查淀粉样蛋白沉积部位呈砖红色;偏振光显微镜检查仅在淀粉样蛋白沉积较多的部位见到绿色双折光,敏感性较差;荧光显微镜检查淀粉样蛋白沉积部位呈红色强荧光,敏感性远较普通光镜高。结论:采用刚果红染色法诊断肾脏淀粉样变病时,宜首选Stokes等的改良染色法。刚果红染色可用普通光学显微镜、偏振光显微镜及荧光显微镜进行观察,荧光显微镜观察的敏感性最高,值得推广。

冰冻切片刚果红染色方法在肾活检病理诊断中的应用

目的建立肾活检组织冰冻切片刚果红染色方法,并探讨其在病理诊断中的应用价值。方法选取肾活检诊断为淀粉样变性肾病的肾组织109例,制作冰冻切片,分别置于4%甲醛溶液、无水乙醇、Bouin液固定后,行刚果红和氧化刚果红染色,光镜观察并拍照,再与相应的石蜡切片染色结果相比较。结果不论是石蜡切片还是冰冻切片,刚果红染色均能显示组织中沉积的淀粉样物。石蜡切片组织结构清晰,肾小球、肾小管结构易辨认;冰冻切片组织结构松散,肾小球、肾小管结构较难辨认,但淀粉样物色彩较艳丽,耗时少。冰冻切片经无水乙醇、Bouin液固定后,刚果红染色效果更佳。结论冰冻切片刚果红染色可以作为病理诊断淀粉样变性肾病的备选方案,值得推广。

免疫荧光和几种特殊染色在肾活检病理诊断中的应用

目的:分析免疫荧光染色及其他几种特殊染色法在肾活检病理诊断中的应用效果。方法:临床纳入58例我院2014年9月至2016年9月期间收治的慢性肾脏疾病患者作为研究对象,所有患者均进行肾穿刺活检,穿刺取得组织采用石蜡制片,分别采用免疫荧光法、六胺银染色法、甲醇刚果红染色法、黏蛋白染色法(PAS)以及Masson三色染色,对比不同方法染色的结果。结果:不同类型肾病患者中,免疫荧光染色中狼疮性肾病中IgA、IgM、IgG、C3以及Clq诊断阳性率明显高于IgA肾病和膜性肾病患者,P<0.05。在不同染色方法的对比中发现,免疫荧光染色法在肾病检测IgA、IgM、IgG、C3以及Clq诊断阳性率明显低于其他染色方法的诊断率,P<0.05。其他染色方法诊断率均无差异,P>0.05。结论:免疫荧光染色相对于其他染色方式对肾活检病理诊断率稍低,临床上推荐采用其他特殊染色方法对肾组织进行病理诊断。

定志益聪颗粒对血管性痴呆大鼠学习记忆能力及Aβ1-42表达的影响

目的:探讨定志益聪颗粒对血管性痴呆(Va D)大鼠学习记忆能力及海马β淀粉样肽1-42(Aβ1-42)表达的影响。方法:SPF级雄性SD大鼠,随机分为正常组、假手术组、模型组、多奈哌齐组、定志益聪颗粒组。运用双侧颈总动脉闭塞(BCCAO)法制备Va D模型,于造模后56 d开始给药,正常组、假手术组、模型组予0.9%氯化钠注射液,多奈哌齐组(2.6×10-4g/kg)、定志益聪颗粒组(5 g/kg)均按10 mL/kg灌胃给药,1次/d,连续给药30 d。Morris水迷宫(MWM)考察大鼠空间学习、记忆能力。刚果红(CR)染色观察大鼠海马CA1区淀粉样变性;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测大鼠海马组织Aβ1-42的表达;免疫组化法(IHC)检测大鼠海马CA1区Aβ1-42的阳性表达。结果:与模型组比较,定志益聪颗粒组大鼠在定位航行试验中逃避潜伏期缩短(P<0.05),空间探索试验中经过平台次数、第Ⅰ象限停留时间、第Ⅰ象限路程增加(P<0.05),海马组织及海马CA1区Aβ1-42的表达减少(P<0.05)。结论:定志益聪颗粒可能通过下调海马Aβ1-42的表达,从而改善VaD大鼠的学习记忆能力。

纤维样肾小球病一例报道及文献复习

目的通过对一例纤维样。肾小球病（fibrillary glomerulopathy，FGP）患者的临床和病理资料进行分析，探讨其发病机制、临床表现、诊断、治疗及预后。方法回顾性分析一例纤维样肾小球病患者的临床表现，并将患者肾穿刺组织进行光镜、免疫荧光、电镜检查，通过以上数据，并结合相关文献系统复习纤维样肾小球病的临床特征。结果通过其临床表现，肾组织病理学检查，特别是电镜诊断本例为纤维样肾小球病。临床表现多为大量蛋白尿、镜下血尿和高血压等。电镜的检查结果是诊断纤维样肾小球病的主要依据。其主要特点是纤维样物质呈弥漫性或团块状分布于肾小球系膜区和（或）肾小球基底膜，排列紊乱，无规律，纤维僵直，一般无分支。该病预后差，大约50％的患者2～4年内进展为终末期。肾脏疾病。结论电镜结合刚果红染色是诊断纤维样肾小球病的重要方法，该病发病率较低，病理生理机制仍不清楚，预后不佳，目前缺乏较为有效的治疗措施。

区分肾淀粉样变类型的病理染色方法比较

目的分析3种特殊染色及免疫染色方法对区分肾淀粉样变类型的准确性、灵敏度和着色强度的影响,以提高临床的诊治水平。方法选择30例肾淀粉样变患者的病理切片,采用3种酸化刚果红染色和5种抗原修复法,对轻链蛋白(κ、λ)、淀粉样蛋白A等指标进行冰冻组织及石蜡组织的免疫荧光、免疫组化染色。使用IPP图像分析系统进行半定量分析及荧光着色半定量分析,观察比较阳性部位着色的准确性、灵敏度和着色强度效果。结果酸化甲醇刚果红染色法优于酸化Bennhold's刚果红染色法、酸化Alkaland's刚果红染色法,IPP半定量分析冰冻组织的免疫荧光、免疫组化优于石蜡组织(P=0.02)。荧光半定量分析着色强度相差一个+左右;石蜡组织暴露抗原的方法中蛋白酶K消化优于抗原热修复、胰酶或胃酶消化(P=0.01)。结论酸化甲醇刚果红染色法在肾组织淀粉样变部位的阳性着色准确性、灵敏度、着色强度和重复率均优于Bennhold's刚果红染色法、酸化Alkaland's刚果红染色法。起到初步分型及辅助验证免疫荧光染色结果的作用;进行冰冻组织轻链蛋白(κ、λ)及淀粉样蛋白A免疫荧光染色,更有利于肾淀粉样变的准确分型,如果无冰冻组织也可选用蛋白酶K消化石蜡组织免疫荧光染色。

刮片细胞块技术在甲状腺髓样癌术前诊断中的应用

目的 探讨刮片细胞块技术(SCBT)在甲状腺髓样癌(MTC)术前诊断中的应用价值。方法 在超声引导针吸细胞学(US-FNAC)检查中,通过采用常规离心沉降细胞块技术(CSCBT)、SCBT或涂片褪色技术(SFT)结合免疫细胞化学(ICC)和刚果红染色协助MTC的术前诊断;再对比分析CSCBT和SCBT制备细胞块的成功率,以及它们对MTC术前确诊率的影响。结果 结合细胞学形态,病史及血清降钙素水平,MTC的术前确诊率为21.7%(5/23);依次选择CSCBT、SCBT、SFT结合ICC及刚果红染色,确诊率逐步升高为39.1%(9/23)、82.6%(19/23)及91.3%(21/23);其中采用CSCBT和SCBT制备细胞块的成功率分别为44.4%(4/9)和92.3%(12/13),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 同CSCBT比较,SCBT操作简单,制备细胞块的成功率更高,结合ICC及刚果红染色能更有效提高MTC的术前确诊率,具有推广价值。

原发性肝淀粉样变性一例

淀粉样变性是以不溶性淀粉样蛋白在血管壁及器官、组织细胞外沉积为特征的一种进行性、预后不良性疾病,可累及心、肝、肾、脾、胃肠、肌肉及皮肤等组织,可分为原发性及继发性。该病早期临床症状隐匿,患者常在发生多脏器损害后就诊,临床上易误诊,诊断主要依赖于病理学检查。原发性淀粉样变性目前无根治方法,主要行对症及支持治疗,常规的治疗方案为MP方案(马法兰联合泼尼松)。该文报道1例原发性肝淀粉样变性患者,其有腹胀、食欲差的症状,肝、脾肿大明显,血碱性磷酸酶及谷胺酰转肽酶升高,有高脂血症、低蛋白血症,蛋白尿明显,蛋白电泳Ig A、γ轻链均阳性,Ig G、Ig M、κ轻链阴性,肝病理学活组织检查及刚果红染色均提示为肝淀粉样变性,因患者无其它基础疾病,故诊断为原发性肝淀粉样变性。确诊后予护肝、调节胃肠功能等处理,患者乏力、食欲差症状较前稍改善,其后患者拒绝接受化学治疗而出院,最终死亡。

呼吸系统原发性淀粉样变9例临床病理分析

目的探讨呼吸系统原发性淀粉样变的临床特点及病理特征,为临床诊治提供依据。方法回顾性分析该院2014-01~2019-12收治的9例原发性淀粉样变患者的临床资料,总结其临床特点、病理特征及其与症状表现、预后的关联情况。结果9例患者中,男3例,女6例,中位年龄65岁。6例呼吸道病变呈局灶性,3例病变呈弥漫性分布。苏木精-伊红(HE)染色结果显示粉样沉积物呈粉红色、无定形结构,有特征性裂纹。刚果红染色显示淀粉样物呈砖红色,偏振光显微镜下显示特征性“苹果绿”双折光。免疫组化染色提示,沉积物周围浆细胞限制性表达免疫球蛋白轻链。结论呼吸系统原发性淀粉样变临床表现和辅助检查缺乏特异性,预后与病变类型有关。病理活检是确诊该病的可靠方法。

龈下菌斑涂片两种染色分类方法的比较

目的 :用革兰染色和刚果红负染两种不同的染色方法对同一龈下菌斑样本进行分类计数 ,比较两种分类方法的优缺点 ,提出应用中的问题以及解决方法。方法 :随机抽样采集 4 0例牙周病患者的 80个位点龈下菌斑 ,同一标本进行生理盐水涂片革兰染色和刚果红负染。光学显微镜油镜 (15× 10 0 )镜检共计数 2 0 0个细菌 ,包括 5种不同形状细菌。采用SPSS 10 0 1统计软件 ,对数据进行分析。结果 :两种染色分类方法计数统计结果为螺旋体、弯曲菌、梭形菌 3种菌数值P >0 0 5无统计学意义 ,而球菌、杆菌 2种菌数值经统计P <0 0 1有高度统计学意义。结论 :刚果红负染简便易行 ,但龈下菌斑球菌、杆菌进行百分计数时 ,不适宜用刚果红负染法 ,应根据实验目的选择恰当的方法。