β-细辛醚对肠癌细胞HT-29生物行为学的影响及机制

目的观察β-细辛醚对肠癌细胞株体外增殖抑制作用及其机制。方法①MTT法观察β-细辛醚对多种肿瘤细胞株的增殖的影响。②Transwell小室法,观察β-细辛醚对肠癌细胞株HT-29侵袭的影响;③粘附实验观察β-细辛醚对HT-29粘附能力的影响;④AnnexinV/PI双染法研究β-细辛醚对肠癌细胞株HT-29凋亡的诱导作用;⑤流式细胞仪检测β-细辛醚对肠癌细胞株HT-29细胞周期的影响;⑥JC-1荧光探针法检测线粒体膜电位水平的改变;⑦流式细胞仪检测β-细辛醚对肠癌细胞株HT-29活性氧水平的改变。结果①β-细辛醚对多种肿瘤细胞株有不同程度的抑制作用(P<0.05)。②β-细辛醚作用肠癌细胞HT-29后,细胞的侵袭和粘附能力明显降低(P<0.05)。③β-细辛醚作用肠癌细胞株HT-29后出现明显的早期凋亡及细胞周期明显改变。④β-细辛醚作用肠癌细胞株HT-29后线粒体膜电位降低及内活性氧水平升高。结论①β-细辛醚对肠癌细胞有明显的增殖抑制作用,能降低肠癌细胞HT-29的粘附和侵袭能力。②β-细辛醚可诱导肠癌细胞凋亡,改变细胞周期,其机制可能与线粒体凋亡途径有关。

地塞米松诱导结肠癌细胞凋亡的实验研究

目的:研究糖皮质激素受体(GR)在结肠癌细胞株Lovo、HCT-116、HT-29和SW-480中的表达,观察地塞米松(Dex)在体外对结肠癌细胞株的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法:采用免疫组化、RT-PCR检测糖皮质激素受体(GR)在结肠癌细胞株中的表达;MTT、DNALadder和流式细胞仪等方法进行增殖抑制和细胞凋亡检测。结果:在4种结肠癌细胞株中只有Lovo和HCT-116表达GR。地塞米松在体外作用后,对4种细胞的增殖均有抑制作用,其中对Lovo和HCT-116细胞作用最显著。在Lovo细胞可检测到特征性的凋亡细胞DNA梯带。在流式细胞仪检测显示经1×10-4mol/LDex诱导72h后,在Lovo和HCT-116细胞检测到细胞凋亡,分别为(34.8±1.9)%和(33.6±1.4)%,明显高于未加Dex对照组的Lovo(2.9±0.4)%和HCT-116(6.4±1.3)%,差异有统计学意义(t值分别为28.934和22.980,P值均为0.000)。结论:结肠癌细胞株Lovo和HCT-116表达GR,地塞米松体外抑制Lovo和HCT-116细胞增殖,并诱导其发生凋亡,可能与GR相关。

气虚血瘀证与Balb/c小鼠结肠癌血行转移相关性的机理研究

目的:通过建立气虚血瘀证Balb/c小鼠结肠癌人工血行转移的复合模型,研究气虚血瘀证对Balb/c小鼠结肠癌人工血行转移的影响及其相关机制。方法:将36只8周龄雌性Balb/c小鼠随机分为6组,即空白对照组、血瘀组、肿瘤A组、肿瘤B组、瘀加瘤A组和瘀加瘤B组。第28天处死空白对照组、血瘀组、肿瘤A组和瘀加瘤A组,检测血黏度、ERK1/2、VEGF。对肿瘤B组和瘀加瘤B组,进行生存期观察。结果:血瘀组及瘀加瘤组全血黏度均明显升高,与空白对照组比较差异极显著(P<0.01)。瘀加瘤组右肺转移灶计数明显高于肿瘤组,差异有显著性(P<0.05)。生存期短于肿瘤组,差异有统计学意义(P<0.05)。ERK1/2、VEGF按血瘀组、肿瘤组、瘀加瘤组顺序梯度递增,与空白对照组比较差异显著(P<0.05)。结论:气虚血瘀证能促进结肠癌转移,缩短其生存期。气虚血瘀证可能是通过上调ERK1/2、VEGF的表达,从而促进结肠癌细胞的增殖和转移。

Zebularine联合丁酸钠对结肠癌细胞系LOVO增殖、凋亡以及P16基因表达的影响

目的探讨Zebularine和丁酸钠对结肠癌LOVO细胞增殖、凋亡及P16基因表达的影响。方法培养人结肠癌细胞系LOVO,分为4组:阴性对照组、Zebularine组、丁酸钠组、Zebularine+丁酸钠组。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞处理24 h、48 h、72 h后的增殖状况,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测P16基因的表达。结果 Zebula-rine组和丁酸钠组LOVO细胞的抑制率和凋亡率与对照组相比显著增高,Zebularine+丁酸钠组细胞抑制率和凋亡率均显著高于单独用药组(P<0.05);Zebularine组和丁酸钠组P16 mRNA相对表达量显著高于对照组(P<0.05),Zebularine+丁酸钠组P16 mRNA相对表达量显著高于各单独用药组和对照组(P<0.05)。结论与单独用药相比,Zebularine联合丁酸钠可以明显促进P16 mRNA的表达,抑制结肠癌细胞生长。

TFⅢB亚单位Bdp1在甲基硫代腺苷对结肠癌RKO细胞增殖抑制过程中作用的研究

目的探讨TFⅢB亚单位Bdp1在5-甲基硫代腺苷(methylthioadenosine,MTA)对结肠癌RKO细胞增殖的抑制过程中的作用。方法采用Realtime PCR方法分析TFⅢB亚单位Bdp1基因mRNA水平的变化的转录水平;采用Western Blot方法分析TFⅢB亚单位Bdp1蛋白水平的变化;采用转染及荧光素酶报告基因的检测方法检测Bdp1基因荧光素酶活性。结果 MTA对结肠癌RKO细胞增殖抑制过程中,TFⅢB亚单位Bdp1在mRNA水平(0.441±0.03,P=0.001)和蛋白水平出现了明显的下调,同时报告基因Bdp1基因荧光素酶活性也出现了明显的下调(0.460±0.08,P=0.001)。结论 MTA对结肠癌RKO细胞增殖抑制过程中,TFⅢB亚单位Bdp1蛋白的下调可能起到重要作用。

Zebularine联合丁酸钠对结肠癌LOVO细胞及Runx3、P21的影响

目的探讨Zebularine[1-(β-D-呋喃核糖苷)-1,2-二氢嘧啶-2-酮]和丁酸钠(sodium butyrate)对人结肠癌LOVO细胞Runx3及P21的影响。方法人结肠癌细胞系LOVO按常规培养于含100g/L胎牛血清的PRMI 1640培养液中,分为4组:对照组、Zebularine组、丁酸钠组以及联合用药组,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞处理24、48、72h后的细胞抑制率,Annexin V-FITC∕PI双染法检测细胞凋亡,RT-PCR检测Runx3 mRNA、P21mRNA的表达。结果单独应用Zebularine及丁酸钠72h后,细胞生长抑制率及凋亡率与对照组相比增高,联合用药较单独用药抑制率及凋亡率明显增高(P<0.05),生长抑制率呈时间及浓度依赖性,单独用药组Runx3、P21mRNA的表达相对增加,联合用药组其表达明显增加,与单用药组相比,差异有统计学意义(P<0.05);结论与单用Zebularine及丁酸钠相比,联合用药更显著增加Runx3 mRNA、P21 mRNA的表达,抑制细胞增殖及促进凋亡。

腹腔镜直肠全系膜切除结肠J袋肛管吻合术治疗低位直肠癌的分析

目的评价腹腔镜直肠全系膜切除结肠J型贮袋肛管吻合术治疗低位直肠癌的可行性及对排便功能的改善作用.方法按TME原则,在腹腔镜下对10例低位直肠癌患者实施结肠J型贮袋肛管吻合术.结果腹腔镜下直肠全系膜切除结肠J袋肛管吻合术均获成功.手术时间120～180min,平均135min,术中平均出血20ml.术后无吻合口漏的发生,术后排便次数明显减少,能从容控制排便.结论腹腔镜下行直肠全系膜切除结肠J型贮袋肛管吻合术不仅能达到根治目的,具有创伤小,出血少,恢复快的优点,又具有明显改善排便功能的作用.

5-甲基硫代腺苷对结肠癌Hct116细胞增殖的影响

目的研究5-甲基硫代腺苷(MTA)对结肠癌Hct116细胞增殖的影响及其相关机制。方法采用MTT比色法及软琼脂克隆形成试验分析MTA对结肠癌Hct116细胞增殖的影响,采用Realtime PCR的方法分析RNA聚合酶Ⅲ依赖基因(tRNAs、5S rRNA)及TFⅢB亚单位TBP、Bdp1和Brf1基因mRNA水平的变化,并采用Western Blot的方法分析了TFⅢB亚单位Bdp1蛋白水平的变化。结果 MTA对结肠癌Hct116细胞具有明显的增殖抑制作用,在这一过程中,RNA聚合酶Ⅲ依赖基因(tRNAs、5S rRNA)的mRNA水平明显下调;同时TFⅢB亚单位Bdp1在mRNA水平和蛋白水平也出现了明显下调。结论 MTA对结肠癌Hct116细胞具有明显增殖抑制作用;RNA聚合酶Ⅲ依赖基因转录的下调、TFⅢB亚单位Bdp1蛋白的下调可能在这一抗肿瘤过程中起到重要作用。

GSTM1多态性及Bleomycin综合敏感性与大肠癌的易感性研究

本文旨在研究广东人中ＧＳＴＭ１的遗传多态性与大肠癌的关系，同时选用能间接反映ＤＮＡ修复能力的Ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ诱变剂敏感性试验，进行大肠癌的病例—对照研究。用ＰＣＲ方法检测ＧＳＴＭ１－的基因型，病例组为３６．８％（Ｎ＝１９）、对照组为２６．１％（Ｎ＝２３），差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）；ｂｌｅｏｍｙｃｉｎ诱导的染色体平均断裂数（ｂｒｅａｋｓ／ｃｅｌ），病例组为０．７５±０．２９，对照组为０．４２±０．２４，差异有显著意义（Ｐ＜０．０５，且ｂ／ｃ＞０．８，在病例组的比例（６８％）高于对照组３倍，ＯＲ比为８．６７，ｂ／ｃ＞１．０，在病例组的比例（４７％）高于对照组４倍，ＯＲ比为６．６０。

整合素连接激酶在结肠癌中的表达情况

目的:探讨整合素连接激酶(ILK)在结肠癌的发生发展中的作用。方法:采用免疫组织化学方法对84例结肠肿瘤中ILK的表达进行检测。结果:ILK在正常结肠黏膜阴性表达;在结肠腺瘤中75%表达;结肠原位癌中83.3%;在浸润性结肠癌中100%表达。ILK在结肠浸润性癌与原位癌表达差异有统计学意义,在不同分级、分期、浸润深度、淋巴结转移比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:ILK在结肠肿瘤的进展、侵袭、转移上都有着重要的意义,可以作为结肠癌的预后指标。

气虚血瘀状态下BALB/c小鼠结肠癌血行转移的机制研究

目的:研究气虚血瘀证对BALB/c小鼠结肠癌人工血行转移的影响及相关机制。方法:将BALB/c小鼠随机分为4组,即空白对照组、血瘀组、肿瘤组和瘀加瘤组。于利血平血瘀造模的第15天经尾静脉接种肿瘤,第28天处死小鼠检测全血黏度、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及基质金属蛋白酶12(MMP-12)。结果:血瘀组及瘀加瘤组全血黏度均明显升高,与空白对照组比较差异极显著(P<0.01)。瘀加瘤组右肺转移灶计数明显高于肿瘤组,差异有显著性(P<0.05)。ERK1/2、MMP-2按血瘀组、肿瘤组、瘀加瘤组顺序梯度递增,与空白对照组比较差异显著(P<0.05)。MMP-12的表达在血瘀组减弱,瘀加瘤组增强,组间差异有显著性(P<0.05)。结论:气虚血瘀证能促进结肠癌转移,其作用机制可能是通过上调ERK1/2和MMP-2的表达,同时抑制MMP-12的表达来完成。

大蒜素诱导结肠癌HT-29细胞凋亡

本实验的目的是观察大蒜素(allicin)对人结肠癌HT-29细胞凋亡和增殖的影响,并对其作用机制做初步的探讨。通过利用倒置显微镜、荧光显微镜、透射电镜、流式细胞术以及Real time PCR等方法,对大蒜素处理后的HT-29细胞的形态、存活率、细胞周期分布、细胞凋亡率、线粒体膜电位(驻追m)以及Bax/Bcl-2基因表达比例的变化进行了研究。结果显示,大蒜素可抑制HT-29细胞增殖,且呈剂量依赖性关系。大蒜素作用于HT-29细胞48 h的最佳药物浓度是6滋g/m L。在此条件下,细胞出现明显的凋亡现象。早期和晚期细胞凋亡率分别为(7.48依0.38)%和(10.07依0.78)%,驻追m显著下降(p<0.01),细胞被阻滞于S期和G2期,Bax/Bcl-2的比值显著升高(p<0.01)。因此,我们推测大蒜素可能通过调节Bax和Bcl-2两个基因的表达比例,诱导人结肠癌HT-29细胞的凋亡,进而抑制癌细胞的增殖。

气虚血瘀证与Balb/c小鼠结肠癌血行转移相关性实验研究

目的:通过建立气虚血瘀证Balb/c小鼠结肠癌人工血行转移的复合模型,研究气虚血瘀证与Balb/c小鼠结肠癌血行转移的相关性。方法:将36只8周龄雌性Balb/c小鼠随机分6组,即空白对照组、血瘀组、肿瘤A组、肿瘤B组、瘀加瘤A组和瘀加瘤B组。肿瘤B组和瘀加瘤B组,进行生存期观察。其余各组第28d处死,检测血黏度及转移灶计数。结果:气虚血瘀造模后小鼠体质量增加缓慢,与空白对照组比较差异有显著性(P<0.01)。血瘀组及瘀加瘤组全血黏度均明显升高,与空白对照组比较差异显著(P<0.01)。瘀加瘤组右肺转移灶计数明显高于肿瘤组,生存期短于肿瘤组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:气虚血瘀证与Balb/c小鼠结肠癌血行转移呈正相关,能促进结肠癌转移,加重肿瘤负荷,缩短生存期。