先天性耳聋患儿Connexin26基因235delC突变研究

目的 :分析 56例先天性耳聋患儿 Connexin2 6(Cx2 6,GJB2 )基因 2 3 5del C突变。方法 :收集 56例散发的先天性耳聋患儿 ,利用聚合酶链式反应—限制性片段长度多态性 (PCR-RFL P)分析方法 ,筛查患者 Cx2 6基因 2 3 5del C突变。结果 :经 PCR-RFL P分析 ,有 18例患儿 Cx2 6基因存在 2 3 5del C纯合性突变 ,6例患儿存在 2 3 5del C杂合性突变 ,其余患儿及听力正常者无此突变。结论 :Cx2 6基因 2 3 5del

先天性巨细胞病毒感染新生儿连接蛋白Connexin26基因研究

目的调查新生儿巨细胞病毒感染情况及连接蛋白Connexin26基因变异特点、听力随访结果,并分析其相关性。方法筛选温州医科大学附属第二医院及金华永康市第一人民医院60例CMV-DNA阳性新生儿和40例CMV-DNA阴性新生儿,分析其血生化情况,并留取脐血行RT-PCR法检测其Connexin26基因mRNA表达情况,对PCR结果送检进行碱基测序,追踪新生儿听力情况,并对新生儿巨细胞病毒感染类型、Connexin26基因变异情况及听力检测结果进行相关性分析。结果 60例CMVDNA阳性新生儿中,26例血生化指标异常。在所有新生儿中235del C突变41例,脑干诱发电位异常11例。相关分析结果显示巨细胞病毒感染与否和基因突变、听力损害之间均存在相关性。结论巨细胞病毒感染新生儿会导致Connexin26基因突变,并可能进一步导致听力损害,肝功能异常型巨细胞病毒感染新生儿Connexin26基因突变和发生感音性神经性聋的概率更高。

噪声对小鼠耳蜗外侧壁缝隙连接蛋白Connexin26表达的影响

目的观察噪声性聋小鼠耳蜗外侧壁缝隙连接蛋白Connexin26(Cx26)表达的变化。方法成年雄性Balb/c小鼠49只随机分为噪声组(29只)和对照组(20只)。实验前两组小鼠检测听性脑干反应(ABR),随后噪声组小鼠给予高强度噪声(115dB SPL,6小时/天,共2天12小时)暴露,并在噪声暴露后0和7天分别检测ABR。对照组不做任何处理。噪声暴露后4小时,每组取2只小鼠做耳蜗冰冻切片,18只小鼠提取耳蜗外侧壁总RNA。通过免疫组化染色法观察小鼠耳蜗外侧壁Cx26蛋白的表达,共聚焦显微镜下观察缝隙连接蛋白转运相关蛋白———β微管蛋白的表达,荧光实时定量PCR检测小鼠耳蜗外侧壁Cx26编码基因GJB2mRNA的表达。结果正常小鼠耳蜗螺旋韧带可见Cx26棕黄色阳性颗粒,血管纹处未见阳性表达;噪声组小鼠耳蜗外侧壁Cx26免疫组化染色较对照组减弱;Cx26编码基因GJB2mRNA表达量低于对照组,β微管蛋白排列稀疏紊乱,呈条索状排列,但未见明显浓集或断裂。结论噪声可下调小鼠耳蜗外侧壁Cx26的表达,Cx26可能参与了噪声性聋的发病机制。

先天性巨细胞病毒感染致connexin26基因突变新生儿听力随访及干预

目的调查先天性巨细胞病毒感染新生儿connexin26基因突变,分析其与听力损害的关系,并对新生儿进行听力随访及听力干预。方法筛选温州医科大学附属第二医院及金华永康市第一人民医院60例CMV-DNA阳性新生儿,留取脐血行RT-PCR法检测其connexin26基因mRNA表达情况,对PCR结果送检进行碱基测序,追踪新生儿听力情况,对connexin26基因变异情况及听力检测结果进行相关性分析,并对发生感音性神经性聋(sensorineural hearing loss,SNHL)者进行听力干预,1周岁时评估干预效果。结果在入试新生儿中,总计有39例发生235del C突变,突变者中11例发展为SNHL。相关分析结果显示基因突变和SNHL之间均存在相关性。对发生SNHL婴儿进行听力干预后,仍有少数婴儿听力损害加重,但Gesell评估发现,其语言、社交、适应等能力与正常儿童差异无统计学意义。结论巨细胞病毒感染会新生儿导致connexin26基因突变,并可能进一步导致听力损害,在发生SNHL以后,积极进行听力干预可以保证其正常语言、社交等能力的发展。

青少年儿童特发性耳聋与Connexin26突变的相关性

目的:对无耳聋家族史及无噪声暴露史,排除病毒感染后致聋的青少年及儿童是否存在connexin26突变。方法:2004年7月至2007年1月就诊的30岁以下的不明原因的神经性耳聋患者,共44例,行听力学检查包括电测听、声阻抗、脑干诱发电位及保留外周血2ml做是否有connexin26突变的pcr扩增及扩增目的片段直接测序分子生物学实验室检测。采用正常标准对照及阳性对照,阳性对照组系一近亲婚配后耳聋家族。结果:对于connexin26突变的结果,在26例患者中未发现有该基因突变,在18例语前聋患者中有5例该基因突变,突变均位于第二编码基因的235号位置缺失c的突变。在正常对照组和阳性对照组的耳聋患者中未发现该基因突变(fisher’s精确概率P=0.01)。结论:connexin26突变主要累及语前耳聋患者。

与Connexin26基因突变相关的综合征耳聋和非综合征耳聋

Connexin26基因其编码的产物为一种缝隙连接蛋白,组成的质膜通道蛋白,在细胞间的连接和递质的传递中起着重要的作用。近年来的研究发现此基因的突变与遗传性综合征耳聋和非综合征耳聋密切相关,对这一基因的研究可使我们对耳聋的致病机理有更加深入的了解。

缝隙连接蛋白connexin26与遗传性非综合征性耳聋

内耳结构和功能异常是遗传性非综合征性耳聋的病理学基础。近年来的研究证明，大约有１００多个基因参与听觉功能，目前已发现３３个耳聋基因定位于常染色体，６个基因定位于Ｘ染色体。其中编码缝隙连接蛋白β的ｃｏｎｎｅｘｉｎ２６基因与非综合征性感音神经性耳聋ＤＦＮＡ３／ＤＦＮＢ１关系密切，８０％的ＤＦＮＢ１患者携带突变的ｃｏｎｎｅｘｉｎ２６基因。有关ｃｏｎｎｅｘｉｎ２６基因突变及其产生异常缝隙连接蛋白在听觉功能中的作用尚不清楚，本文综合目前对ｃｏｎｎｅｘｉｎ２６基因的突变及缝隙连接蛋白在遗传性耳聋发病机制中的研究资料做一简要论述。

Connexin26基因与常染色体隐性非综合征性耳聋

已知所有的常染色体隐性非综合征性耳聋 (ARNSHL)基因可致重度或极重度学语前耳聋 ,目前已有 32个 ARN-SHL 基因 ,通过对单一的有血缘关系的家系分析而定位。其中编码缝隙连接蛋白 2 6的 Connexin2 6 (Cx2 6 )基因突变与 ARN-SHL 关系最为密切。同时 Cx2 6基因突变也是 DFNA3/ DFNB1的遗传基础。有关 Cx2 6基因突变及其产生异常缝隙连接蛋白在听觉功能中的作用尚不清楚 ,本文综合目前对 Cx2

恢复connexin26表达联合载酵母菌胞嘧啶脱氨酶自杀基因纳泡杀灭膀胱癌细胞

目的分析载双基因的阳离子纳泡联合超声靶向微泡破坏技术进行基因转染的有效性,探索恢复或上调膀胱癌细胞的缝隙连接蛋白connexin26(Cx26)表达,能否增强自杀基因系统(yeast cytosine deaminase/5-fluorocytosine,YCD/5-FC)的旁观者效应,提高杀灭肿瘤细胞的效率。方法阳离子纳泡结合超声辐照(US)转染人膀胱癌T24细胞,荧光显微镜及流式细胞仪观测转染效率;qRT-PCR和Western blot检测质粒转染后的mRNA或蛋白相对表达量。将实验分为无处理空白对照、载pc DNA3.1-EGFP纳泡组、载Cx26纳泡组、载YCD纳泡组、载YCD+Cx26纳泡组;通过流式细胞术观察恢复Cx26表达后对膀胱癌细胞凋亡的影响。结果 qRT-PCR、Western blot显示纳泡结合超声辐照成功将目的基因转染并有效表达。恢复Cx26表达后,载YCD+Cx26纳泡组的细胞凋亡率为(60.68±2.61)%,明显高于单载YCD纳泡组的(46.42±2.13)%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论恢复缝隙连接蛋白Cx26表达,可改善细胞间通讯连接,加强自杀基因系统YCD/5-FC的旁观者效应,促进肿瘤细胞凋亡,提高杀灭膀胱癌细胞的效率。

银杏叶注射液对神经性耳聋患者血清NO、Connexin26、Connexin30及临床疗效研究

目的:探讨银杏叶注射液对神经性耳聋患者血清一氧化氮(NO)、连接蛋白26(Connexin26)、连接蛋白30(Connexin30)及临床疗效。方法:选取我院耳鼻咽喉科收治的突发性感音神经性耳聋患者92例,采用随机数字表方法将所有患者平均分为两组,各组46例,对照组予以营养神经、高压氧等常规治疗,治疗组在对照组常规治疗的基础上加用银杏叶注射液10 m L加入5%葡萄糖注射液500 m L中,日1次静滴。分别检测两组患者治疗前后血清中NO、Connexin26、Connexin30水平,采用纯音测听检测两组患者治疗前后听力功能情况。结果:1两组患者治疗后NO、Connexin26、Connexin30水平较治疗前明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);2治疗后,治疗组NO、Connexin26、Connexin30较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);3治疗组治疗后临床总有效率(91.30%)明显高于对照组临床总有效率(71.74%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:银杏叶注射液能够提高突发性感音神经耳聋患者血清中NO、Connexin26、Connexin30,恢复患者听力水平,提高临床治疗疗效,对临床具有重要的临床应用价值。

人连接蛋白Connexin26基因的克隆、表达及初步鉴定(英文)

目的研究含人连接蛋白Connexin26(Cx26)基因的真核表达载体构建及其在非洲猴肾细胞(COS-7)中获得稳定、高效表达的方法。方法提取人外周血淋巴细胞RNA,经逆转录制备成cDNA,设计特异性引物,用PCR方法从cDNA中扩增Cx26基因,将其定向插入真核表达载体pCI-neo中获得pCI-Cx26重组子,采用酶切法和测序法鉴定。用脂质体将pCI-Cx26转染COS-7细胞,经G418筛选,获得阳性克隆。用RT-PCR和SDS-PAGE检测对表达产物进行检测。结果从人外周血RNA制备而成的cDNA中可扩增出预期大小的Cx26基因片段,pCI-Cx26经双酶切测序证实构建成功。RT-PCR和SDS-PAGE检测到pCI-Cx26在COS-7细胞中获得稳定、高效表达。结论本研究成功构建了人连接蛋白Cx26基因重组真核表达载体pCI-Cx26;pCI-Cx26脂质体转染COS-7细胞,可见Cx26基因在COS-7细胞中获得稳定、高效的表达。该结果为今后进行pCI-Cx26基因治疗Cx26基因突变引起的遗传性耳聋的研究奠定了实验基础。

Connexin26在乳腺癌中的表达及意义

目的通过检测Connexin26蛋白在乳腺癌中的表达,探讨Connexin26在乳腺癌发生、发展中的意义。方法应用免疫组织化学法检测64例正常乳腺组织、56例乳腺导管非典型增生病变及136例乳腺癌中Connexin26蛋白的表达水平。结果正常乳腺标本中Connexin26蛋白全部呈阳性表达,乳腺导管非典型增生病变中Connexin26蛋白阳性率71.4%,乳腺癌中Connex-in26蛋白阳性率38.2%。Connexin26蛋白表达的缺失与乳腺癌的发生密切相关。结论Connex-in26蛋白表达缺失对判断乳腺癌的发生有重要的指导意义。

庆大霉素对CIH子代大鼠听力及内耳Connexin26蛋白表达水平影响的研究

目的研究官内缺氧和庆大霉素（GM）双重影响对仔鼠内耳听力损伤影响的关系。方法建立宫内慢性缺氧（Intrauterine chronic hypoxia，CIH）孕鼠模型，24只SD孕大鼠分为正常组和缺氧组，每组12只。分娩后得正常仔鼠和缺氧仔鼠各12窝（每窝12-13只仔鼠）。仔鼠生后8周，随机选取正常仔鼠24只，分正常仔鼠组、正常＋GM仔鼠组；缺氧仔鼠24只，分缺氧仔鼠组、缺氧＋GM仔鼠组（各12只）。4组仔鼠做听性脑干反应（auditory brainstem response，ABR）检测听功能后，麻醉处死动物，取出内耳分别做Westernblot、实时定量PCR、亚硫酸氢盐测序法（BSP）甲基化检测等。结果孕鼠动脉血气分析：缺氧组孕鼠动脉血氧分压（PaO2）、动脉血氧饱和度（SaO2）水平和正常组比较，均显著下降，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01），缺氧组孕鼠与正常组间PaCO2及pH值差异均无统计学意义（P〉0．05）。ABR检测结果：缺氧＋GM仔鼠组的ABR阈值明显高于其他3组，差异有统计学意义（P〈0．01）。正常＋GM仔鼠组、缺氧仔鼠组之间ABR阈值差异无统计学意义（P〉0．05），但正常仔鼠组ABR阈值均低于正常＋GM仔鼠组、缺氧仔鼠组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。实时定量PCR检测仔鼠内耳组织GJB2mRNA水平：缺氧＋GM仔鼠组GJB2mRNA水平明显低于其他3组，差异有统计学意义（P〈0．01）。正常＋GM仔鼠组、缺氧仔鼠组之间的GJB2 mRNA水平差异无统计学意义（P〉0．05），但正常仔鼠组的GJB2mRNA水平均高于正常＋GM仔鼠组、缺氧仔鼠组，差异均有统计学意义（P〈0．05）。Westernblot检测仔鼠内耳Connexin26蛋白表达的结果和GJB2mRNA表达水平一致。甲基化测序：GJB2基因启动子岛1、岛2区域甲基化分析，缺氧＋GM仔鼠组内耳组织中的GJB2基因启动子区域岛1、岛2位点甲基化率百分比明显高于其他3组，差异有统计学意义（P〈0．01）。正常＋GM仔鼠组和缺氧仔鼠组的GJB2基因启动子区域岛1、岛2位点甲基化率百分比水平差异无统计学意义（P〉0．05），但和正常仔鼠组比较明显升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论妊娠期缺氧及GM可导致仔鼠听力损伤，并且有协同效应。主要是致聋基因GJB2基因启动子岛1、岛2区域甲基化水平上升，GJB2mRNA水平下降，Connexin26蛋白表达下降。

语前非综合征性耳聋与Connexin26基因突变的研究进展

学语前非综合征性耳聋致病基因的研究近年来取得了一些进展。编码缝隙连接蛋白 2 6的Connexin2 6 (Cx2 6 )基因突变是学语前非综合征耳聋的分子遗传基础。有关Cx2 6基因突变及其产生异常缝隙连接蛋白在听觉功能中的作用尚不十分清楚。Cx2 6基因突变致聋具有种族特异性。国人的Cx2 6基因突变热点尚处于探索阶段。应用单链核甘酸多态性分析 (SS CP)及基因测序寻找具有致病意义的基因突变 ,探讨其可能的发病机制为基因诊断 ,预防及治疗提供了新的理论依据。

更昔洛韦治疗对Connexin26基因突变巨细胞病毒感染婴儿听力的影响

目的研究更昔洛韦治疗对Connexin26基因突变的巨细胞病毒感染婴儿听力的影响,并了解是否可以逆转此类婴儿的听力损害情况。方法从温州医科大学附属第二医院及金华永康市第一人民医院筛选血和尿液CMV-DNA阳性婴儿,根据人Connexin26基因编码区核苷酸全序列,进行RT-PCR检测,获得产物继续碱基测序,存在基因突变的巨细胞病毒感染婴儿70例作为研究对象。根据血生化结果,将肝功能损害的婴儿列为Ⅰ组(22例,进行更昔洛韦治疗),将无肝功能损害的婴儿随机分为更昔洛韦治疗组(Ⅱ组,24例)和非更昔洛韦治疗组(Ⅲ组,24例),更昔洛韦的治疗为诱导期剂量为每次5 mg/kg,每12 h一次,持续14 d,此后改为1次/d维持治疗,剂量同前,持续7 d,复查肝功能及CMV-DNA拷贝数,检测并追踪患儿治疗前后脑干听觉诱发电位变化,比较各组肝功能指标、CMV-DNA拷贝数及脑干诱发电位结果。结果经过更昔洛韦治疗,Ⅰ组婴儿肝功能异常情况明显好转(ALT:t=8.610 9,P<0.000 1;AST:t=15.007 7,P<0.000 1;TBil:t=10.993 3,P<0.0001),Ⅰ组和Ⅱ组CMV-DNA拷贝数明显下降(t=5.460 4,P<0.000 1),但BAEP检测异常的婴儿听力损害情况没有好转,部分患儿呈恶化趋势,而Ⅲ组婴儿听力损害情况无明显变化。结论更昔洛韦治疗对巨细胞病毒感染所致肝炎等炎症性疾病有效,但对感音性神经性聋,特别是有Connexin26基因突变的听力损害无效。

复聪汤对神经性耳聋患者血清NO、Connexin26、Connexin30水平表达的影响

目的:探讨复聪汤对神经性耳聋患者血清一氧化氮(nitric oxide,NO)、连接蛋白26(Connexin26)、连接蛋白30(Connexin30)水平表达的影响。方法:将90例患者按随机数字表法分为对照组和治疗组,每组45例。对照组采用常规治疗,观察组采用复聪汤治疗,记录两组患者血清NO、Connexin26及Connexin30水平及生存质量、血液流变学指标,同时比较临床疗效和不良反应发生情况。结果:观察组有效率为88.89%,对照组有效率为71.11%,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,观察组治疗后血清NO、Connexin26及Connexin30水平升高,治疗后简易精神状态量表(minimum mental state examination,MMSE)、日常生活活动能力Barthel指数(modijied Barthele index,MBI)评分升高,焦虑自评量表(self-rating anxiety scale,SAS)、抑郁自评量表(self-rating depression scale,SDS)评分降低,治疗后血液黏度指标及红细胞压积显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);观察组不良反应率(8.89%)与对照组(6.67%)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:复聪汤能降低神经性耳聋患者血清NO、Connexin26、Connexin30表达水平,提高生活质量,临床疗效显著。

缝隙连接蛋白26突变导致遗传性耳聋的研究进展

缝隙连接蛋白26(Cx26)是耳蜗中最丰富的缝隙连接蛋白之一,由GJB2基因编码,对耳蜗的发育与听力形成至关重要,Cx26突变患者可表现出不同程度的听力损失。学界曾普遍认为钾离子循环障碍是引起耳聋的主要机制,但近年的研究发现GJB2基因突变相关听力损失中的钾离子循环障碍与耳蜗的病理表型并不直接相关,而耳蜗的发育障碍与氧化应激系统在其中起着关键作用。文章总结了Cx26突变引起相关听力损失的病理生理机制,包括钾离子循环障碍、内耳发育障碍、氧化应激系统失衡等。阐明Cx26突变导致听力损失的病理机制有助于开发针对遗传性耳聋的预防和治疗策略。

维甲酸对新生大鼠高氧肺损伤的干预作用

目的探讨高氧暴露新生大鼠肺组织结构的变化和连接蛋白Connexin26(Cx26)的表达情况及维甲酸对其影响。方法24只3日龄SD大鼠随机分为3组:高氧暴露维甲酸组(维甲酸组)、高氧暴露安慰组(高氧组)、空气暴露对照组(对照组);采用950mL/L氧体积分数条件下制作新生大鼠高氧肺损伤模型;观察大鼠一般情况,用HE染色法观察肺组织结构变化及辐射状肺泡计数(RAC),免疫组织化学检测Cx26的表达。结果体质量、RAC等方面与空气组相比,高氧组、维甲酸组均有显著差异[(13.53±1.27)、(13.38±1.29)、(17.37±0.89)g,F=30.19P=0;(11.15±1.33)、(12.49±1.47)、(13.94±0.98),F=9.59P=0];Cx26蛋白在空气组表达比较局限,高氧组弥散表达,而维甲酸组更多表达;阳性细胞分别为(13.68±1.28)%、(17.82±1.72)%、(19.69±1.77)%,F=29.36P=0。结论维甲酸对新生大鼠高氧肺损伤具有保护作用,可能与间隙连接蛋白Cx26表达的改变有密切的关系。

慢病毒介导shRNA靶向下调Cx26表达对人高侵袭性肝癌细胞上皮间质转化及侵袭的影响

目的探讨慢病毒介导shRNA靶向下调缝隙连接蛋白26(Cx26)表达对人高侵袭性肝癌细胞上皮间质转化(EMT)及侵袭的影响。方法用慢病毒介导Cx26-shRNA感染SK-Hep-1细胞并用嘌呤霉素筛选稳转细胞。荧光定量PCR和Western blot检测干扰效率。光镜观察细胞形态改变。Western blot检测EMT上皮标志物E-cadherin、间质标志物vimentin的蛋白表达水平。Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力变化。结果成功建立稳定下调Cx26表达的SK-Hep-1细胞(shRNA-Cx26组),与感染EGFP空载体(shRNA-control组)及未感染的SK-Hep-1细胞(blank-control组)比较,其Cx26 mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.01),间质细胞形态转变为上皮细胞形态,E-cadherin蛋白表达明显增多、vimentin蛋白表达明显减少(P<0.01),体外侵袭能力也显著降低(P<0.01)。结论靶向下调Cx26表达能抑制人高侵袭性肝癌SK-Hep-1细胞的EMT和体外侵袭。