Detection of canine echinococcosis by coproantigen ELISA

Objective:To study the canine echinococcosis by coproantigen ELISA method.Methods:During the present investigation experimental infection was established using evaginated worms of Echinococcus granulosus(E.granulosus).To check cross reactivity two pups were infected with Taenia hydatigena(T.hydatigena).In order to detect the presence of antigen,hyperimmune sera were raised against excretory-secretory products of adult worms E.chinococcus granulosus. Faecal sample collected either from experimentally infected pups or from other sources were heated at 70℃to detect heat stable soluble antigen.Results:Pups harbouring less than 104 worms showed negative results.Samples collected from 14 days onwards from experimentally infected animals harbouring more than 104 worms showed positive value.The maximum positive samples were detected in samples collected from in and around slaughter house and the least number of samples were detected positive maintained by dog squad.Conclusions:The affinity purified IgG exhibited promising results for detection of canine echinococcosis by indirect ELISA.

四川省藏族牧区家犬棘球绦虫病流行病学调查研究(英文)

目的对四川省甘孜县达通玛藏族牧区家犬感染细粒棘球棘球绦虫和多房棘球棘球绦虫进行流行病学调查和评价感染风险因素。方法分别对甘孜县达通玛藏族牧区查龙、卡龙、大德和查扎等4乡的犬主进行问卷调查,了解家犬感染棘球绦虫的相关因素。剖检流浪犬,检测棘球绦虫感染率,并用此结果评价粪抗原-ELISA方法。用该方法检测家犬感染棘球绦虫的阳性率, 评价犬驱虫效果。用χ2 检验和方差分析对结果进行统计。结果 2000 年流浪犬棘球绦虫感染率为 60.9% (14/23) ,其中细粒棘球绦虫感染率为 26.1%(6/23),多房棘球绦虫感染率为 34.8% (8/23) 。粪抗原-ELISA 特异性为 80.0%, 敏感性为 92.3%。家犬粪抗原-ELISA 阳性率平均为 50% (290/580) 。从 2003 年起, 经每半年 1 次吡喹酮犬驱虫 (5 mg/kg) ,2005 年同一犬群粪抗原阳性率降为 17.0% (99/580) 。犬感染风险因素调查发现敞放犬粪抗原阳性率 [40.4% (65/161)] 明显高于半栓养犬 [白天拴养夜晚放养的犬 32.3% (109/337); 夜晚拴养白天放养的犬 29.2% (21/72)]及一直栓养的犬[20%(2/10)] (P<0.01) ; 主人缺乏防治相关知识的犬[38.1% (121/318)]和不进行驱虫的犬[47.7%(92/193)], 阳性率明显高于主人具有相关知识[28.6% ( 75/262)]和驱虫犬[20.4%(79/387)](P<0.05 和 P<0.01)。粪抗原-ELISA 阳性率与犬的年龄、性别和饲养家畜的种类无关。结论四川省甘孜县达通玛藏族牧区是家犬两种棘球绦虫病流行区。粪抗原-ELISA 法可用于检测犬棘球蚴病。犬敞放和不对犬驱虫, 以及牧民缺乏相关知识是造成家犬棘球蚴病传播、流行的重要原因。

犬细粒棘球绦虫粪抗原夹心ELISA检测方法的建立

为建立特异性和敏感性高的检验犬细粒棘球绦虫感染的方法。用细粒棘球绦虫(简称,Eg)成虫抗原分别免疫兔和绵羊,收集高免血清,纯化的高免抗体。依据抗体夹心ELISA工作原理,以兔抗体包被,检测感染Eg、不同犬带科绦虫的实验犬和空白犬粪样,绵羊抗体扑捉抗原,HRP标记兔抗绵羊IgG(1∶8 000)催化显色,用酶标仪测定OD 405nm吸光度,用以确定其特异性和敏感性。试验结果表明,敏感性为82.69%(43/52),特异性为85.88%(140/163);粪抗原在感染细粒棘球绦虫16d后可检出,最低抗原浓度为9.7ng/mL即犬感染5条成虫时可检测出阳性。该检测方法具有较好的特异性和灵敏性,为进一步研制检测细粒棘球绦虫虫体抗原ELISA检测试剂盒奠定了基础。

现场应用粪抗原检测法诊断犬细粒棘球绦虫感染的效果评价

目的 评价粪抗原检测法在包虫病流行病学监测中的实际应用价值。 方法 家犬在采集粪便后 ,进行槟榔碱导泻 ,应用粪抗原检测法检测粪样中的细粒棘球绦虫抗原 ,并与槟榔碱导泻法的驱虫结果比较 ,同时分析犬肠道中寄生的其它蠕虫对粪抗原检测结果的影响。 结果 在 2 94只槟榔碱导泻成功的家犬中 ,4 5只检出细粒棘球绦虫 ,粪抗原阳性犬共 4 6只。二者的符合率为 97.8%。在 2 4 9只未检出细粒棘球绦虫的家犬中 ,粪抗原阳性者 1只。 结论 粪抗原检测法诊断犬细粒棘球绦虫感染具有较高的敏感性和特异性。可作为包虫病常规监测方法推广应用。

用抗虫体表膜抗原抗体测定犬细粒棘球绦虫粪抗原

利用Echinococcus granulosus(Eg)成虫表膜抗原抗体夹心ELISA方法检测犬细粒棘球绦虫感染的粪抗原。首先提取E g成虫表膜抗原,制备抗E g成虫表膜抗原的血清,然后用间接ELISA和Western blotting方法检测其抗原抗体反应及免疫原性,用间接免疫组化方法对E g成虫表膜蛋白进行组织定位。利用双抗体夹心ELISA方法检测感染E g的犬粪抗原。ELISA结果表明E g成虫表膜抗原具有良好的抗原性并能产生高效价抗体,抗体不与多头绦虫和泡状带绦虫抗原反应;Western blotting结果表明E g成虫表膜抗原与原头蚴、不成熟E g有共同蛋白成分。免疫组化结果证实虫体表膜蛋白分布在虫体表皮。该抗原抗体系统能检测到感染后13d的犬细粒棘球绦虫。结果表明该E g成虫表膜抗原抗体系统可用于诊断犬细粒棘球绦虫感染。

犬粪便棘球绦虫抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测法建立与应用

目的研究双抗体夹心酶联免疫吸附检测犬粪便棘球绦虫虫体抗原的方法并评价其在实际工作中的应用价值。方法实验犬12只，分实验组和对照组，实验组用活化绵羊源原头蚴（G1型）作人工感染；感染后0～8周内收集粪便，56d宰杀实验犬，收集成虫；制备成虫抗原和虫体代谢／分泌抗原，蛋白酶K处理抗原并分别免疫成年绵羊和新西兰白兔；绵羊抗血清用80％饱和硫酸铵沉淀、透析，兔抗血清过IgG亲和层析柱，分别获得纯化抗体；观察犬粪便在PBS液中-80℃冷冻3d或在含1％Formalin的PBS液中70℃～80℃加热8h的处理方法对检出结果的影响。运用该方法对四川省甘孜县达通玛区4个乡的580只家犬吡喹酮每6月一次驱虫前后的粪抗原进行监测。结果试验系统的敏感性为92．3％，特异性为80％；粪抗原从感染后的第2～3周可检出；两种样品处理方法都可以灭活虫卵但不影响检出效果；检测方法可同时用于对细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫感染的诊断；达通玛区家犬粪抗原阳性率从2000年的50％下降到2005年的17％。结论检测方法具有较高的特异性和敏感性；推荐粪便用加热的方法处理可以灭活虫卵以防止生物污染；该方法可以在基层推广应用。

粪抗原检测法诊断犬细粒棘球绦虫感染的研究 Ⅰ.用细粒棘球绦虫成虫虫体抗原—抗体系统检测粪抗原方法的建立

用细粒棘球绦虫成虫虫体抗原及其免疫家兔血清ＩｇＧ建立了用于检测家犬粪抗原诊断细粒棘球绦虫成虫感染的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ方法。对用离子交换层析、ＳＰＡ亲和层析、抗兔ＩｇＧ抗体亲和层析和细粒棘球绦虫成虫虫体抗原亲和层析等四种方法纯化的抗体进行了比较，以抗原亲和层析法纯化的抗体免疫活性最高，用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ检测抗原的终点在标本缓冲液中为２．５ｎｇ／ｍｌ，在健康家犬粪便悬液的上清中为５ｎｇ／ｍｌ。检测１１只人工感染细粒棘球绦虫成虫的家犬粪便标本，粪抗原阳性率达１００％。

ELISA检测粪抗原诊断寄生虫感染的研究进展

双抗体夹心法ELISA检测寄生虫粪抗原,用于诊断寄生虫病或确定寄生虫感染,特别是肠道寄生虫感染,具有敏感、特异、快速,可区分现症感染与既往感染,且具有早期诊断和疗效考核价值等特点,是临床或现场个体检查及群体流行病学调查与监测的重要工具和手段。

细粒棘球蚴原头节虫体和排泄分泌抗原抗体系统检测犬粪抗原的比较研究

用细粒棘球蚴原头节虫体及排泄分泌抗原—抗体系统进行交叉酶联免疫吸附试验的实验结果显示 :成虫虫体抗原和原头节虫体抗原呈现交叉反应 ,表明这两个发育阶段的虫体抗原具有主要的共同抗原组分 ;原头节排泄分泌抗原的免疫血清 Ig G与成虫虫体抗原之间交叉滴度很低 ,但与原头节虫体抗原之间存在完全的交叉反应 ,因而提示原头节排泄分泌抗原是原头节的期特异性抗原 ,与其相应抗体具有较高的亲合力。检测犬粪标本的结果提示感染细粒棘球绦虫的犬粪抗原是一种广谱抗原。两种抗原

酶联免疫法在犬细粒棘球绦虫抗原检测中的应用

2011~2015年,对甘肃省18个犬细粒棘球蚴流行县区进行犬包虫病感染情况调查,采集犬粪样品16 200份,应用酶联免疫法进行包虫抗原检测。结果显示,犬包虫病阳性率由2011年的35.0%下降为2015年的3.0%。通过综合防控,有效控制了甘肃省犬细粒棘球绦虫病流行与传播。

粪抗原检测法诊断犬细粒棘球绦虫感染的研究Ⅲ.双抗体夹心ELISA法检测粪抗原诊断家犬细粒棘球绦虫感染的现场评价

本文报道用槟榔碱驱虫法对检测粪抗原诊断家犬细粒棘球绦虫感染的应用价值进行现场比较评价的结果。７３只受试犬中有１６只对槟榔碱无反应。在导泻成功的５７ 只犬中粪抗原阳性者１１只阳性率１９．２％ 。其中驱虫阴性的３８只犬中粪抗原阳性者仅２只（５．３％ ）。在１０只驱出细粒棘球绦虫的家犬中８只粪抗原阳性。５ 只驱出泡状带绦虫的犬中粪抗原阳性者１ 只，但反应强度低。粪抗原的反应强度与细粒棘球绦虫的感染强度呈正相关（ｒ＝ ０．９４）。证明本法可用于家犬细粒棘球绦虫感染的调查。

人体带绦虫病诊断方法的研究进展

就目前用于人体带绦虫感染或寄生的常用临床诊断方法,如虫体形态学观察、粪便或肛门拭子涂片显微镜检查、循环抗体ELISA检测、粪抗原ELISA和粪DNA-PCR检测等及其优缺点进行了综述。指出,敏感性高且特异性强的粪抗原ELISA和粪DNA分子生物学检测是今后的发展方向和应重点研究的领域。

四川省包虫病流行区犬感染棘球绦虫规律性研究

目的了解棘球蚴病传染源犬驱虫后再感染棘球绦虫的规律,探索犬驱虫的最佳时机,促进棘球蚴病防治工作的可持续开展。方法采用简单随机抽样的方法在石渠县随机抽取4个乡(镇),其中3个乡(镇)作为试验组在2015-03、2015-06、2015-08、2015-11以及2016-03进行家犬粪便收集并用吡喹酮驱虫,另外1个乡(镇)作为对照组按照试验组收集家犬粪便的时间收集粪便,并进行月月驱虫。同时在这4个乡(镇)收集野犬粪便。对收集的犬粪便用ELISA粪抗原检测法测定犬棘球绦虫感染状况。结果经Fisher确切概率检验法分析,家犬吡喹酮驱虫后每隔2月或3月家犬棘球绦虫感染率无上升趋势(P>0.05),月月驱虫与隔2月或3月驱虫家犬棘球绦虫感染率比较差异无统计学意义(P>0.05),野犬棘球绦虫感染率相邻2次比较差异无统计学意义(P>0.05),2016年3月家犬与野犬棘球绦虫感染率比较差异有统计学意义(P=0.001),其他月份比较家犬与野犬棘球绦虫感染率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论经过多年防治措施的实施,针对传染源犬采取的"犬犬投药、月月驱虫"的驱虫模式已取得突出成效,已将犬棘球绦虫感染率降低到较低水平,且可将"犬犬投药、月月驱虫"模式调整为"每隔2月或3月驱虫"模式,同时应加强对野犬的驱虫与管理。

2015年甘肃省棘球蚴病流行现状调查

目的了解2015年甘肃省棘球蚴病流行现状、评估防治效果,为进一步制定该地区的防治策略和措施提供依据。方法甘肃省56个棘球蚴病流行县中,每县随机抽取2个乡、每乡随机抽取2个村,开展6～12岁儿童血清阳性率和犬粪抗原阳性率调查,于屠宰季节开展流行县家畜感染率调查;用SPSS 20.0软件统计分析调查数据。结果儿童棘球蚴血清阳性率为1.06(103/9 743),以县为单位儿童血清阳性率0.00～7.00%;儿童血清阳性率女性(1.29%,57/4 434)高于男性(0.87%,46/5 309),差异有统计学意义(χ~2=4.057,P<0.05);血清阳性率6岁儿童最低(0.51%),12岁儿童最高(1.52%),不同年龄差异无统计学意义(χ~2=9.509,P>0.05);棘球绦虫犬粪抗原阳性率为2.03%(115/5 654),以县为单位犬粪抗原阳性率0.00～14.00%;牛感染率0.43%(5/1 153),羊感染率0.68%(68/10 023),差异无统计学意义(χ~2=0.955,P>0.05);家畜总感染率为0.65%,以县为单位家畜患病率0.00～5.50%,最高为环县和敦煌市(均为5.50%)。结论甘肃省棘球蚴病流行程度明显减轻,但各县(区)间差异明显,部分县(区)疫情仍然较重;今后应根据不同的流行情况采取因地制宜、分类指导的防治策略。