榛子主要过敏原Cor h 1单克隆抗体识别抗原表位区域的确定

目的确定已获得的四株榛子主要过敏原Cor h1单克隆抗体识别的抗原表位区域。方法构建谷胱甘肽疏基转移酶(GST)与Cor h1不同截短体的表达载体并表达GST-Cor h1融合蛋白,采用ELISA和Western blot检测单抗与不同融合蛋白的反应,并结合DNAstar表位分析软件推知不同单抗的抗原识别表位区域。结果确定了四株Cor h1单抗的抗原识别表位区域,分别是4G7和2H3抗体的抗原表位位于Cor h1第120～126位氨基酸,5F2和1G4抗体的抗原表位位于Cor h1第43～52位氨基酸。结论四株Cor h1单抗的抗原识别表位区域的确定,为Cor h1的进一步研究和食品安全检测奠定了基础。

平榛主要过敏原Cor h 1的克隆表达、纯化及免疫学鉴定

目的克隆、表达榛(平榛)主要变应原基因Cor h1,检测其免疫学活性。方法提取平榛的总RNA,设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT-PCR方法扩增目的基因,将其克隆入T载体中进行测序和分析。采用RT-PCR获得整个短的开放阅读框并将目的基因克隆到大肠杆菌表达载体pET28a中进行表达。通过Ni2+亲和层析,对重组蛋白进行纯化,采用免疫印迹(Western-blot)方法检测其IgE结合活性。结果克隆获得了平榛的主要过敏原Cor h1的基因,该基因被GenBank收录,登陆号为EU195058。基因开放阅读框为486个碱基(包括终止密码子),编码161个氨基酸。该序列编码的蛋白等电点为6.16,相对分子质量约为17600。结论成功地克隆和表达了平榛主要变应原Cor h1,蛋白具有良好的免疫原性。

平榛主要过敏原Corh1单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备和鉴定鼠抗平榛主要变应原Cor h 1的单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb)。方法用重组Cor h 1蛋白为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞融合。通过间接ELISA法筛选分泌特异性McAb的杂交瘤细胞。用杂交瘤细胞株诱导小鼠产生腹水,再用蛋白A亲和层析法纯化抗体。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过间接ELISA、Western Blotting鉴定该McAbs的特性和交叉性。结果获得4株可稳定分泌鼠抗平榛主要变应原Cor h 1的McAbs,其Ig亚型均为IgG1,均具有良好的效价;ELISA和Western Blotting分析表明该4株单抗均能识别重组Cor h 1蛋白,其中3株单抗能够识别天然平榛提取物。结论成功制备了4株鼠抗平榛主要变应原Cor h 1的单克隆抗体,为建立平榛主要变应原Cor h 1检测及纯化方法奠定了基础。