地黄低聚糖对快速老化模型小鼠造血功能的影响

目的：研究地黄低聚糖（ＲＧＯＳ）对快速老化模型小鼠（ＳＡＭＰ８）造血功能的影响。方法：采用造血祖细胞体外克隆培养等实验血液学方法。结果：ＲＧＯＳ１０，２０ｍｇ·ｋｇ－１可使ＳＡＭＰ８小鼠的ＣＦＵ－Ｓ、ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－Ｅ和ＢＦＵ－Ｅ明显增多，并可使外周血中降低的ＷＢＣ数明显增加。提示ＲＧＯＳ可刺激ＳＡＭＰ８小鼠造血干细胞、祖细胞的增殖分化。集落刺激活性实验显示ＲＧＯＳ可使小鼠体内的集落刺激因子产生明显增多。小鼠骨髓组织学研究结果也进一步证实了ＲＧＯＳ增强ＳＡＭＰ８小鼠造血功能的作用。结论：ＲＧＯＳ可以增强ＳＡＭＰ８小鼠的造血功能。

重型再生障碍性贫血患者免疫抑制治疗后骨髓造血祖细胞水平的变化及其意义

为更好地评价重型再生障碍性贫血(SAA)患者免疫抑制治疗(IST)后骨髓造血功能恢复程度,采用造血祖细胞体外培养技术,动态观察了48例接受IBT的SAA患者及20例正常对照者骨髓晚期红系爆式集落形成单位(mBFU-E)及粒-巨噬系集落形成单位(CFU-GM)的水平变化。结果表明,IST前所有SAA患者骨髓mBFU-E及CFU-GM水平均显著低于正常对照组(P<0.001);IST后1年,29例有效者骨髓mBFU-E及CFU-GM水平显著增高,增高程度与其临床疗效相关;12例mBFU-E及10例CFU-GM水平恢复正常,其中8例患者mBFU-E及CFU-GM水平同时恢复正常。这表明SAA确是一组异质性疾病,其造血功能衰竭与异常免疫关系密切,若去除这种异常,造血功能可获得部分甚至完全重建。

乌贼墨对小鼠造血干细胞、粒-单系祖细胞及外周白细胞的影响

目的探讨乌贼墨对小鼠造血干细胞、粒-单系祖细胞及外周血WBC的影响。方法用不同剂量的乌贼墨灌胃正常小鼠、环磷酰胺(Cy)和辐射骨髓损伤模型小鼠,采用造血祖细胞体外培养方法和实验血液学技术,检测小鼠骨髓造血干细胞生成数(CFU-S)、粒-单系祖细胞集落生成数(CFU-GM)和外周血WBC数量。结果乌贼墨能够显著提高正常小鼠CFU-S,CFU-GM和外周血WBC数量,有效拮抗模型小鼠体内CFU-S,CFU-GM及外周WBC的降低,并显著促进模型小鼠上述各指标的恢复。结论乌贼墨具有显著的促进小鼠骨髓粒系造血作用。其作用机制可能通过调节机体的免疫机能,诱导机体产生粒/单核细胞集落刺激因子和多种细胞因子,促进造血细胞的增殖,并诱导造血细胞向粒单系细胞分化。

1727份公共库脐带血的质量分析——附23份库存脐带血干细胞解冻质控分析

目的评估公共库存脐带血造血干细胞的质量及脐血库用于质控的血样是否能够正确反应实际血袋内的脐带血造血干细胞的活性和数量。方法分析2009年1月-2010年12月按照Rubinsten标准分离入库保存的1 727例合格脐带血造血干细胞,通过流式细胞术和集落培养法计算造血干细胞数量,血细胞计数仪计数细胞数量、应用气相液氮系统深低温冷冻造血干细胞。分析入库细胞总数(TNC)的影响因素,以及与CD34+总数、集落形成单位(CFU-C)总数的相关性;对冷冻时间>24个月的23份脐带血造血干细胞解冻后,分析解冻前后血袋、冷冻麦管内和冻存管内的细胞数、CFU-C产率、CD34+百分比、活细胞比率,并推算血袋内TNC、CD34+细胞数、CFU-C总数。结果1 727份脐带血平均血量为(96.62±20.41)m L,入库TNC、CD34+总数、CFU-C总数分别为(9.88±2.54)×108个、(2.76±1.85)×106个、(11.05±7.72)×105个,CD34+总数和CFU-C总数与TNC相系数均为0.49,CD34+百分比与CFC产率相关系数为0.80。23份解冻脐带血冷冻前后血袋、冷冻管和冷冻麦管内WBC(×109/L)分别为28.03±8.01、22.55±6.56、20.43±5.23,TNC(×108)为10.74±3.33、58±2.90、7.78±2.28、7.97±2.73、台盼兰拒染率(%)99.0±0、83.04±6.21、78.9±6.56、80.43±6.01(P<0.01);冷冻前和解冻后血袋、冷冻管,冷冻麦管的CFU-C产率(/105)分别为159.9±45.8、149.2±37.4、91.6±35.8、155.0±41.2,冷冻管内CFU-C产率明显下降(P<0.05);冷冻前和解冻后血袋、冷冻管,冷冻麦管的CFU-C总数(×105)分别为159.9±45.8、149.2±37.4、91.6±35.8、155.0±41.2,解冻后冷冻管内CFU-C总数下降明显(P<0.05);血袋、冷冻管和麦管内的小细胞数量(×108)分别为3.92±1.40、3.95±1.77、3.86±1.46、4.05±1.52,CD34+总数(×106)为3.23±1.84、3.02±1.88、3.12±1.85、3.62±3.07。结论公共库入库的1 727份脐带血符合国际通用标准;解冻后检测分析发现,脐带血冷冻后丢失的细胞以成熟的粒细胞为主,冷冻解冻后的脐带血造血干细胞符合临床应用标准。

EPO单克隆抗体抑制CFU-E研究

目的探讨EPO单克隆抗体是否具有抑制红系集落形成单位(CFU-E)形成的功能。方法对大鼠骨髓进行定向体外CFU-E培养,按以下条件进行分组培养:空白对照组(不加EPO)、常规组(加EPO,不加EPO单克隆抗体)、EPO单克隆抗体干预组(EPO+EPO单克隆抗体)。培养168 h后,观察各组CFU-E数量。结果空白对照组、常规组、EPO单克隆抗体干预组的CFU-E集数落分别为0.0±0.0、151.8±23.3和10.7±3.9。EPO单克隆抗体干预组与常规组比较,CFU-E集落数存在非常显著性差异(P<0.01)。结论该EPO单克隆抗体可明显抑制CFU-E形成,即抑制红细胞系的增殖,是治疗高原红细胞增多症的可能药物。

重组人红细胞生成素在恶性肿瘤贫血中的应用

目的 评价重组人红细胞生成素(rHuEPO)治疗恶性肿瘤贫血的疗效。方法 首先体外应用rHuEPO对5例正常人和5例恶性肿瘤贫血患者骨髓做红系集落形成单位(CFU—E)培养。将45例妇科恶性肿瘤患者分治疗组23例和对照组22例做临床观察。结果 体外实验表明,在大剂量rHuEPO作用下,肿瘤患者骨髓CFU—E数明显增加,接近正常。临床观察治疗组血红蛋白(HGB)从用药第2周开始升高,而对照组HGB逐渐降低。rHuEPO每周应用169.69±38.82 U/kg的有效率为72.2％。结论rHuEPO是治疗恶性肿瘤相关贫血的有效药物。

一种具有刺激红系细胞集落生成的螺旋藻（Spirulina platensis）蛋白

从螺旋藻体中通过ＤＥＡＥ纤维素层析、硫酸铵分部沉淀和葡聚糖Ｇ７５凝胶过滤得到一种具有离体情况下刺激红系细胞集落生成的功能蛋白质．ＳＤＳ—ＰＡＧＥ测分子量为１５０００道尔顿，等电点为４．８，含有藻蓝胆素．该蛋白命名为螺旋藻１５０００蛋白（Ｓｐｉｒｕｌｉａｐｌａｔｅｎｓｉｓ１５０００，ＳＰ—１５０００）．

人脐带间充质干细胞对小鼠衰老进程中骨髓细胞集落生成的影响

目的:探讨人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)对小鼠衰老进程中骨髓造血干祖细胞增殖能力的影响。方法:由足月新生儿脐带分离间充质细胞(MSC)作供体,6月龄Balb/c小鼠为受体,将小鼠随机分为实验组和对照组,实验组输注MSC(5×105/只),每月1次,共4次;对照组输注生理盐水。干预开始后第3个月和第6个月分别比较两组的单侧股骨骨髓有核细胞计数(BMNC)、造血祖细胞集落培养(CFU-GM、CFU-E、CFU-MK)和外源性脾集落形成单位计数(CFU-S)。结果:干预后第3个月时,实验组BMNC、CFU-GM和CFU-MK高于对照组,而CFU-E和CFU-S无明显差别;干预后第6个月时,实验组的上述指标均明显高于对照组,且随着衰老出现下降的速度明显慢于对照组,差异有显著性(P<0.05)。结论:定期输注hUC-MSC可以相对增加宿主自身造血干祖细胞的生物学活性,从而延缓小鼠造血组织的自然衰老进程。

人正常骨髓CD34^+造血细胞体外扩增形成红系及混合系造血祖细胞的能力

根据阳性选择策略，采用ＣＩＭＳ－１００免疫磁性无菌分离系统富集人正常骨髓ＣＤ３４＋造血细胞，然后将其在含Ｅｐｏ＋ＧＭ－ＣＳＦ＋ＩＬ－３＋ＩＬ－６＋ＳＣＦ（简ＥＧＩＳ）组合造血生长因子的无基质液培体系中扩增４周，定期进行单个核细胞计数、ＢＦＵ－Ｅ及ＣＦＵ－Ｍｉｘ的培养。经ＦＡＣＳ鉴定所富集的ＣＤ３４＋造血细胞纯度平均＞９０％。人正常骨髓ＣＤ３４＋造血细胞在该条件下均可持续产生大量单个核细胞，最高可扩增１７７０倍。与ＨＰＰ－ＣＦＣ和ＣＦＵ－ＧＭ相反，ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－Ｍｉｘ扩增量较低，最高仅为２．３６和２．４倍，且仅在第１周出现，随后迅速减少至停止。

不同部位的巨噬细胞培养上清液对小鼠红系血细胞发生的影响

目的:探讨腹腔、肺泡和肝脏的巨噬细胞培养上清液对小鼠早期红系造血祖细胞[用红系爆式集落形成单位(BFU-E)表示]和晚期红系造血祖细胞[用晚期红系集落形成单位(CFU-E)表示]发生的影响。方法:采用造血祖细胞体外培养技术观察3种不同部位的巨噬细胞培养上清液对BFU-E和CFU-E集落数的影响。结果与结论:3种培养上清液均能促进BFU-E和CFU-E的分化与增殖,而肺泡巨噬细胞培养上清液的上述作用更明显。

影响脐血造血细胞体外培养与检测的因素

考察了分离方法、血浆（血清）、渗透压、细胞因子的保存等因素对脐血造血细胞体外培养和检测的影响。结果表明，用明胶沉降加密度梯度离心分离两步法分离比传统方法能分离到更多的单个核细胞；混合脐血血浆比胎牛血清更能支持造血细胞的生长；高渗透压对集落形成有一定影响，而低渗透压对集落形成更为有害；在３７°Ｃ下保存细胞因子，其生物活性下降最快，－３０°Ｃ冷冻保藏较好地保持其活性，解冻次数对生物活性影响不显著。

无血清培养体系原代培养脐带间充质干细胞

背景: 以含血清培养基培养的脐带间充质干细胞,存在着进一步应用的障碍。目的: 建立无血清培养体系原代培养脐带间充质干细胞。方法: 取脐带华通氏胶(Wharton’sJelly),采用机械法将组织胶切碎,1-3mm3大小,分别培养到含胎牛血清完全培养液中以及无血清培养液中。培养第11,14,17天收获细胞并进行相关检测。在符合2006年制定的干细胞最低评估标准的基础上,以集落形成单元指标评估何种培养体系能获得较多高质量的原代细胞。结果与结论: 无血清培养体系相对于经典的含血清的培养体系而言,细胞生长速度更快。另外,培养第11天,集落形成实验表明无血清培养体系下能获得更多的集落。因此,无血清培养体系可以保持间充质干细胞的特性,为替代含血清培养体系进行脐带间充质干细胞原代培养提供了可能。

高原红细胞增多症骨髓前红系祖细胞体外培养动态观察

目的:对高原红细胞增多症（HAPC）骨髓前红系祖细胞（BFU—E）进行动态观察,以探讨其发病机理。方法:应用造血干细胞体外培养技术,取其体系内含单个核细胞2×105/ml置于培养液中,在5％CO2、37℃及饱和湿度条件下培养,以观察其细胞生长情况。结果:红系祖细胞接种及增殖延滞时间为24h后,可见双细胞及少数4～6个细胞组成的细胞团。第4天可见10个左右细胞的细胞团,第6～7天可见较多CFU—E集落,第9天CFU—E集落数量明显减少,第10天可见较大或多中心的集落。呈桔黄色或颜色逐渐加深,以50～100个细胞的爆式集落为多见,联苯胺染色阳性,呈棕褐色,第14天可见较多较大的爆式集落含100～1000个左右细胞,培养至21d,BFU—E集落多数退化或消失。结论:观察中发现HAPC骨髓BFU—E集落产率与正常对照比较有显著差异（P【0.01）,集落类型以多中心型,分散型为主。提示,HAPC骨髓BFU—E具有很强的增殖、分化能力,其机理需要进一步探讨。

低能量激光与集落刺激因子对人脐带血造血细胞的增殖作用

本研究用铜蒸气激光照射人脐带血造血细胞，观察低能量激光与集落刺激因子（ＣＳＦ）对造血细胞的增殖作用。结果显示激光加ＣＳＦ对造血细胞ＧＭＣＦＵｃ有协同增殖作用，与单用激光照射组、ＣＳＦ刺激组及对照组相比，有非常显著性差异（Ｐ＜０．０１）。将经激光照射与未照射脐血造血细胞在液体培养基中培养２周，前者活细胞数较前增加５５—１１０倍，后者增加１１—２７倍，再次软琼脂接种培养，仍有集落形成，生长的集落绝对数较液体培养前显著增加，而且激光照射组比未照射组更明显。提示低能量激光照射脐血细胞是体外扩增造血细胞的一种有效方法。

外周血多潜能间充质基质细胞在骨组织工程中的应用进展

外周血来源的多潜能间充质基质细胞数量较少,它们表达骨髓来源的多潜能间充质基质细胞的大部分表面标记物,具有多样复杂的基因表达特征。虽然它们的起源和生理病理机制不清,但成人外周血间充质基质细胞的存在使其在组织工程领域备受争议和关注。本文就外周血来源的多潜能间充质基质细胞在骨组织工程中的应用作一综述。

活(破)血逐瘀法治疗真性红细胞增多症疗效观察及其机理探讨

目的：为寻找治疗真性红细胞增多症（ｐｏｌｙｃｙｔｈｅｍｉａｖｅｒａ，ＰＶ）的有效方法。方法：应用活（破）血逐瘀法治疗２８例ＰＶ患者。结果：其中４例临床缓解，１１例好转，总有效率达５３．６％。活（破）血逐瘀法治疗有效者骨髓中红细胞生成素依赖性红系祖细胞（ＥＰＯ＋ＣＦＵ－Ｅ）及红细胞生成素非依赖性红系祖细胞（ＥＰＯ－ＣＦＵ－Ｅ）均明显减少，尤以后者更为显著。结论：本疗法主要通过作用于ＥＰＯ－ＣＦＵ－Ｅ而发挥疗效；此外，活（破）血逐瘀治疗有效者骨髓成纤维样祖细胞（ＣＦＵ－Ｆ）数量亦有明显变化。

脐带血T淋巴细胞集落培养和亚群的关系

应用细胞培养和间接免疫荧光法测定脐带血、成人外周血、成人骨髓的Ｔ淋巴细胞集落形成情况及培养前后淋巴细胞亚群的变化。结果表明：脐带血的ＣＦＵ－ＴＬ显著低于成人外周血（Ｐ＜０．０１），略低于成人骨髓（Ｐ＜０．０５）；培养前脐带血的ＣＯ＋３、ＣＯ＋４细胞含量均显著低于成人外周血（Ｐ＜０．０１），与成人骨髓相近似。脐带血的ＣＤ＋８细胞含量与成人外周血和成人骨髓相似（Ｐ＜０．０５）；培养后的ＣＦＵ－ＴＬ中ＣＤ＋３细胞含量脐带血与成人外周血、成人骨髓几乎相同（Ｐ＞０．０５），但其中ＣＤ＋４细胞含量脐带血明显低于成人外周血及成人骨髓（Ｐ＜０．０１），而脐带血的ＣＤ＋８则明显高于成人外周血（Ｐ＜０．０１）和成人骨髓（Ｐ＜０．０５），致使培养后ＣＦＵ－ＴＬ中脐血ＣＤ＋４／ＣＤ＋８显著低于成人外周血和成人骨髓。另培养前的脐带血，成人骨髓中ＣＤ＋４、ＣＤ＋８细胞阳性百分率之和超过ＣＤ＋３百分率，出现ＣＤ＋４。

胰蛋白酶酶切EPO之多肽片段抑制EPO促CFU-E形成的研究

目的:观察胰蛋白酶酶切EPO之多肽片段能否抑制EPO促红系形成。方法:对大鼠骨髓进行红系定向体外培养,加入胰蛋白酶酶切EPO之多肽片段干预,观察红系集落形成单位(CFU-E)之数量,判定胰蛋白酶酶切EPO之多肽片段对红系增殖活性的影响。结果:胰蛋白酶酶切EPO之多肽片段加入干预培养后,CFU-E数量明显减少(P<0.01)。结论:胰蛋白酶酶切EPO之多肽产物体外能对抗EPO,抑制红系增殖。其可作为治疗高原红细胞增多症的可能药物进一步研究。

rhIL-2对人骨髓CFU-GM与CFU-E和BFU-E的影响

目的:为了探索rhIL-2对人骨髓造血干祖细胞体外增殖的影响。方法:本文采用甲基纤维素体外半固体培养法。结果:证明了50～1000U/ml rhIL-2单用时对人骨髓造血祖细胞的CFU-GM、CFU-E及BFU-E无直接刺激增生作用,当与GM-CSF联合应用时,100～400U/ml rhIL-2其CFU-GM集落形成率明显高于单用GM-CSF(100U/ml)的对照组(P<0.05),当与EPO(2U/mi)联合应用时其CFU-E,及BFU-E集落形成率也明显高于单用EPO对照组(P<0.05),而1000U/ml rhIL-2其三种集落形成数目呈下降趋势,可能有抑制作用。结论:以上结果说明100～400U/ml rhIL-2可应用于协同GM-CSF及EPO体外扩增骨髓干/祖细胞来进行骨髓移植。

复方补益中药对L_(7212)小鼠白血病祖细胞的影响

通过细胞培养探讨了益气养阴方和补气养血方对 L_(7212)白血病小鼠白血病祖细胞(CFU-L)的影响,结果各组 CFU-L 集落数分别为:益气养阴方组59.69±17.40个,补气养血方组77.05±21.19个,生理盐水对照组80.30±20.05个,其中益气养阴方组与对照组比较有显著性差异(P<0.05),补气养血方组与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。提示以益气养阴为主组成的益气养阴方体内可直接抑杀自血病细胞,而以补气养血为主组成的补气养血方体内无抑杀白血病细胞的作用。