古尼虫草Cordyceps gunnii无性型菌丝体中天然VE提取工艺研究

首次报道了从古尼虫草Cordyceps gunnii(Berk.)Berk.无性型,古尼拟青霉P.gunnii菌菌丝体中提取VE的条件。研究结果表明,VE提取的最佳方案是,用无水乙醇作为提取剂,提取时间90分;石油醚为萃取剂,萃取时间为60分.在提取过程中加入VC和通入氮气进行保护十分重要.

冬虫夏草(Cordyceps sinensis)的随机扩增多态DNA及其遗传分化

本文对来自青藏高原3个区域5个具有代表性地方的13个冬虫夏草(Cordyceps sinensis[Berk.] Sacc.)样本进行随机扩增多态DNA(RAPD)分析。19个随机引物获得的RAPD谱带清晰并呈现多态,单个引物获得的RAPD片段数在3～10个之间。该19个引物在每个样本中扩增的RAPD片段总数平均约为65个。基于遗传距离分析,受试的13个冬虫夏草样本中,来自同一地方的样本间遗传差异甚微,同一区域不同地方的样本间遗传差异较大,不同区域的样本间遗传差异最大。这说明冬虫夏草地理群体间存在着遗传分化。应用UPGMA和NJ方法构建的分子系统树显示,来自5个地方的冬虫夏草实际上可以归并为显著不同的3个组,对应于样本来源的3个区域,提示RAPD标记在冬虫夏草群体中有显著的地区特异性。我们的结果还表明,冬虫夏草地理群体间的遗传差异度与地理距离呈正相关。因此,RAPD作为有效的遗传标记,可用于研究冬虫夏草的遗传多样性、起源以及系统演化等。

冬虫夏草及其近缘品中铅、镉、砷污染评价及人体健康累积风险评估方法探索

目的:对冬虫夏草及其近缘品中铅(Pb)、镉(Cd)、砷(As)的残留量进行测定,探索符合冬虫夏草及相关产品使用特点的污染评价及人体健康风险评估方法。方法:基于冬虫夏草及其近缘品中Pb、Cd、As的残留量监测数据,综合运用单因子污染指数法、尼梅罗综合指数法、金属污染指数法对冬虫夏草及其近缘品进行重金属污染评价,计算重金属日暴露量,分别采用危害指数法和更加精确的靶器官毒性剂量法对Pb、Cd、As联合暴露产生的健康风险进行累积风险评估。结果:污染评价结果说明,冬虫夏草及其近缘品中As的污染应引起关注,不同品种污染程度为冬虫夏草(繁育品)=蛹虫草<冬虫夏草(野生品)<香棒虫草<亚香棒虫草;人体健康风险评估结果表明,对于心血管和神经系统,1批冬虫夏草(野生品)全草中Pb、Cd、As联合暴露产生的累积健康风险需被进一步关注。结论:冬虫夏草及其近缘品重金属污染评价,以及人体健康风险评估方法,可为中药安全性评价及相关限量标准的制修订提供参考。

基于高通量测序的人工培殖冬虫夏草僵虫颜色变化转录组分析

目的:探索人工培殖冬虫夏草Cordyceps sinensis(BerK.)Sacc.外观品质形成的分子基础。方法:以重庆和康定人工培殖冬虫夏草僵虫为材料,利用Illumina Hiseq 2500高通量测序技术进行转录组测序分析,基于差异倍数(FC)和错误发现率(FDR)筛选差异表达基因,具体筛选条件为|log2FC|>1、FDR<0.05。结果:共获得21942个转录本,利用DEGSeq筛选获得1575个差异表达基因,其中上调表达基因626个、下调表达基因949个;基因本体(GO)数据库和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析结果显示,这些差异表达基因主要集中于氨基酸代谢、折叠-分选-降解、糖代谢、转运和分解代谢、辅酶因子和微生物代谢等途径;筛选到66个颜色变化差异表达基因,包含46个氧化还原酶活性相关基因、12个过氧化物酶体相关基因、3个单加氧酶活性调节相关基因、3个黑化反应相关基因、2个活性氧代谢相关基因,其中tyr1、TYR基因可能是冬虫夏草僵虫颜色变化的关键功能基因。结论:利用高通量测序技术和生物信息分析获得了人工培殖冬虫夏草僵虫转录组信息特征,为阐明人工培殖冬虫夏草僵虫颜色变化的调控机制研究提供参考。

青海省冬虫夏草蕴藏量及产地适宜性区划分析系统的设计与实现

目的:预测青海省冬虫夏草产区资源蕴藏量和产地适宜性区划分析,设计“青海省冬虫夏草蕴藏量及产地适宜性区划分析系统”。方法:基于地理信息技术的组件式开发方式,以最大信息熵模型和青海省冬虫夏草蕴藏量的核心算法搭建C/S架构分析系统。结果:形成了以冬虫夏草采样点的空间分布和密度数据为依据,以生态环境因子库为基础,能够对冬虫夏草进行多维度、定量化、空间化分析的“青海省冬虫夏草蕴藏量及产地适宜性区划分析系统”。结论:建立的分析系统可预测青海省冬虫夏草的资源蕴藏量,并对青海省冬虫夏草进行产地适宜性区划分析。

冬虫夏草与虫草菌丝体的研究进展与前景

冬虫夏草属麦角菌科虫草属真菌类,是冬虫夏草菌寄生于蝙蝠蛾幼虫体内而产生的子座及其寄主幼虫尸体的复合物。天然冬虫夏草味甘性平,甘平质润,作用平和,补益肾肺,其功效缓和、滋而不腻,具有很好的益补作用。本文就冬虫夏草生长特性、产生过程、其寄主蝙蝠蛾、冬虫夏草无性型、冬虫夏草的主要化学成分及药理作用、人工培育与发酵等进行阐述,探讨用低成本高药效性的虫草菌丝发酵产物替代昂贵的天然冬虫夏草的可行性,以期为研发工作提供参考。

古尼虫草多糖提取分离及初步分析

本文用30%乙醇溶液作提取剂,从古尼虫草菌丝体中提取多糖,提取液经去脂、去蛋白、醇析后得两种粗多糖CPS-50,CPS-70。利用DEAE-Sephadex A-25柱色谱对两种粗多糖进行分离纯化,得纯多糖CPS-1,CPS-2。苯酚-硫酸法测定糖含量,紫外光谱分析证明其纯度,红外光谱显示其具有多糖类的特征吸收峰。多糖降解后经薄层分析表明,降解的虫草多糖由葡萄糖或(和)甘露糖组成。

古尼拟青霉的毒理及药用价值研究概况

对古尼拟青霉的毒性、致畸、致突变和药用价值的研究进行了概述。研究表明,古尼拟青霉无致畸、致突变作用,属无毒性类物质,并具有多种药用功能:镇静、镇痛、调节机体免疫力、抗衰老、抗癌、增强记忆、预防和治疗高脂血症、抗心律失常、降低心肌耗氧、耐急性缺氧等。古尼拟青霉的药用价值及开发前景值得关注,有待深入研究。

古尼虫草生理活性物质的检测与分析

测定了处于各个不同生长期的古尼虫草中虫草多糖、虫草氨基酸、虫草素三种活性物质的含量 .结果表明 :虫草多糖含量最高可达 2 8.2 mg/ g,氨基酸含量达 2 8.62 m g/ 10 0 mg干菌丝 ,虫草素含量达 13 5 0μg/ g.

古尼虫草抗肿瘤活性成分的提取分离及活性测定

虫草是一类珍贵的生物资源,本实验对古尼虫草菌丝体甲醇提取物的抗肿瘤活性成分进行了研究。通过甲醇浸提、正己烷、乙酸乙酯萃取得到古尼虫草甲醇粗提物0.6194g,其得率为2.06%。将得到的甲醇粗提物用乙醚:正己烷:甲醇=5:5:1的溶液为洗脱剂进行硅胶柱层析分离纯化,获得3个组分(FB1、FB2、FB3)。通过红外光谱和核磁共振H谱对分离组分FB3进行了初步检测,结果显示为甾体类化合物。采用MTT比色法检测分离组分FB3的抗肿瘤活性,发现其对MCF-7和HL-7702细胞株有抑制作用,最强抑制率达84.54%。

古尼虫草多糖改善小鼠学习记忆作用的研究

目的:评价古尼虫草多糖改善小鼠学习记忆的作用,通过脑组织中相关物质检测(CPG)与组织学观察探讨其作用机制。方法:将昆明小鼠随机分成,空白(C)、模型(MC)、脑复康(P)和虫草多糖(CP)组。空白组与模型组用0.9%的生理盐水灌胃1/d,P组、CP组分别用、脑复康、古尼虫草多糖灌胃1/d,连续30d,采用亚硝酸钠和乙醇建立记忆巩固障碍和记忆再现障碍模型,再分别用跳台仪和避暗仪测量小鼠的记忆能力,同时检测小鼠大脑中蛋白质、SOD、MDA含量。HE及尼氏染色光镜观察皮层、海马病理形态及神经元数目改变。结果:CP组与其他组比较错误率显著降低(P<0.05),潜伏期明显缩短(P<0.05)。与MC组比较,CP组的大脑MDA含量下降,蛋白质含量和SOD活力升高。CP组神经元数目明显多于MC组,MC组大脑皮层及海马神经细胞出现退化、衰退或坏死等病理现象。结论:CP改善小鼠学习记忆的功能与脑复康比作用更为显著,这可能与其减缓海马神经细胞凋亡、改善脑供血量及抗氧化作用有关。

古尼虫草多糖对衰老模型小鼠的影响

研究古尼虫草多糖的抗衰老作用。将健康小鼠随机分为空白组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,将模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组用D-半乳糖造亚急性衰老小鼠模型;低剂量组、中剂量组和高剂量组的小鼠建模11d后每天灌胃50%古尼虫草多糖溶液,剂量分别为100mg/kg、200mg/kg和400mg/kg;45d后观察脑组织中以及血清中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,丙二醛(MDA)含量。结果表明,古尼虫草多糖可提高小鼠脑组织和血清中SOD(P<0.01)和GSH-Px(P<0.01)活力,明显抑制小鼠脑组织和血清中MDA(P<0.01)的形成。因此,古尼虫草多糖有很好的抗衰老作用。

人工发酵古尼虫草中甘露醇的测定

利用比色法简便、准确和快速地测定发酵生产的古尼虫草菌丝中甘露醇含量。结果表明 ,甘露醇的最大特征吸收峰在 41 2nm处 ,质量浓度在 1 0～ 5 0mg/L范围内线性较好 ,其回归方程 ρ=-0 842 +97 3 2 9A,r=0 9992 ;平均回收率 1 0 0 2 4% ,RSD =0 5 4% (n=5 )。样品中甘露醇采用水提取法 ,提取时间 2h。甘露醇显色后 2 0min内测定对结果影响不大 ,在测定时要注意排除果糖对测定结果的影响。用此法测得发酵古尼虫草菌丝体中甘露醇的含量为 7.4% ,RSD =0 .2 4% (n =6)。

毛细管区带电泳法测定冬虫夏草中的腺苷、腺嘌呤和尿嘧啶

建立了毛细管区带电泳法测定天然和人工冬虫夏草中腺苷、腺嘌呤和尿嘧啶含量的分析方法。采用15mmol L硼砂 +14mmol L磷酸二氢钠 +5 %(V V)甲醇 (pH =9.5 )作为缓冲体系 ,在电压为 18kV和检测波长为 2 5 4nm的条件下 ,冬虫夏草提取液中的腺苷、腺嘌呤和尿嘧啶实现了基线分离。定量分析表明 ,3种成分的校正峰面积与质量浓度呈较好的线性关系 (r≥ 0 .9991)。考察了缓冲溶液的pH值、浓度及有机改性剂对腺苷、腺嘌呤和尿嘧啶迁移行为的影响。

古尼虫草的生物活性物质I.含肽镇痛组分的分离及性质

用理化分离分析和生物检测方法相结合 ,从古尼虫草 (Cordycepsgunnii(Berk .)Berk .)无性型 ,古尼拟青霉 (PaecilomycesgunniiLiang)菌丝体中初步分离纯化得到镇痛物质 ,该物质经氨基酸组成分析表明是一种酸性氨基酸残基高的肽类物质。经不同温度、pH及蛋白酶的稳定性试验分析观察到这种肽类物质对酸稳定、在酸性条件下抗热 ,对胃蛋白酶、胰蛋白酶部分敏感 ,对蛋白酶K不敏感。经小鼠竖尾法和大鼠攻击法测定 。

冬虫夏草抗肿瘤作用研究进展

综述冬虫夏草抗肿瘤作用及化学成分的研究进展 ,分析了冬虫夏草抗肿瘤活性成分及其作用机制。

现代技术与传统方法萃取古尼虫草总黄酮的比较

利用现代技术微波、超声波及传统技术萃取古尼虫草总黄酮,采用正交试验设计筛选出提取古尼虫草总黄酮的最佳方法与条件。铝盐比色法测定总黄酮含量结果表明三种提取方法的最佳条件分别为:(1)微波萃取:90%乙醇,料液比1:25,功率160W,提取1.5min;(2)超声波萃取:85%乙醇,料液比1:30,80℃水浴,10min,提取1次;(3)传统萃取:85%乙醇,料液比1:20,65℃水浴中,提取2次,每次120min。不同方法总黄酮的最高提取率具有显著性差异(P<0.05)分别是:微波萃取率2.99%;超声波萃取率:6.56%;传统萃取率3.94%。结果证明:超声波萃取法具有高效、快速的特点,其提取率与银杏根中总黄酮含量相近,说明古尼虫草也是黄酮的重要来源之一。

冬虫夏草人工培殖的研究概况

概述了冬虫夏草菌种的繁殖、虫种的繁育、菌和虫的结合以及冬虫夏草代用品的研究现状;探讨了人工培殖冬虫夏草2种模式的优、缺点;提出了目前冬虫夏草人工培殖存在的问题和未来的发展方向,以期为研究冬虫夏草的人工培殖提供理论参考。

古尼虫草多糖及其解聚物的免疫活性

目的 比较研究古尼虫草纯多糖组分FP及其解聚物的免疫活性。方法 采用超声波解聚多糖 ,并用葡聚糖凝胶分离获得解聚级分 ,通过MTT法和中性红比色法测定其对小鼠脾淋巴细胞增殖、腹腔巨噬细胞吞噬功能和细胞毒T淋巴细胞杀伤功能的影响。结果 FP的解聚级分FP 1、FP 2和FP 3有更强的免疫活性 ,在中、低剂量 (1和 10 μg mL)与对照相比有显著差异 ,而其中以FP 2的活性最明显。结论 古尼虫草多糖解聚后能明显提高免疫活性 。

比色法测定冬虫夏草中甘露醇的含量

比较了测定冬虫夏草中甘露醇含量的两种方法。发现天然虫草和不同品种人工虫草制成品（胶囊剂）用容量法（Ａ）测得的甘露醇含量比用比色法（Ｂ）测得的甘露醇含量要高，但天然虫草Ａ／Ｂ比值较为接近，而不同品种人工虫草制成品（胶囊剂）的 Ａ／Ｂ比值波动较大。认为用比色法测定虫草中甘露醇含量较容量法更具特异性且快速简便。