塞来昔布固体脂质纳米粒对兔角膜重度热烧伤行穿透性角膜移植术后CNV、MMP-2的影响

目的观察塞来昔布(celecoxib,CXB)固体脂质纳米粒(solid lipid nanoparticles,SLN)对兔角膜重度热烧伤(severe corneal thermal burn,SCTB)行穿透性角膜移植术(penetrating keratoplasty,PKP)后角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)及基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)浓度的影响,探讨CXB-SLN对兔SCTB的作用机制。方法取36只新西兰白兔,恒温烧灼器制作兔SCTB模型(左眼),随机分为对照组、PKP组、CXB-PKP组,每组12只。对照组、PKP组球结膜下注射9 g/L的生理盐水0.1 ml,CXB-PKP组球结膜下注射1 g/L的CXB-SLN 0.1 ml。PKP组、CXB-PKP组于造模后第3天行PKP治疗。观察3组白兔术后角膜一般情况并记录术后10、20、40天CNV面积。在术后20、40天各组随机选择6只兔处死。采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测角膜上清液中MMP-2浓度,并分析CNV面积与MMP-2的相关性。结果术前3组白兔角膜均可见角膜缘充血明显,角膜烧伤区水肿,混浊,伴角膜上皮层坏死、剥脱。术后对照组可见角膜混浊逐渐加重呈瓷白色混浊,PKP组与CXB-PKP组可见角膜植片均成活,角膜透明度尚可。术后10、20、40天,CXB-PKP组CNV面积小于PKP组(P均<0.05),PKP组CNV面积小于对照组(P均<0.05)。术后20和40天角膜上清液MMP-2的浓度,CXB-PKP组低于PKP组,PKP组低于对照组(P均<0.05)。术后20、40天,CNV面积与MMP-2浓度呈正相关(r=0.742,P<0.001;r=0.827,P<0.001)。结论CXB-SLN对兔SCTB后的CNV具有明显抑制作用,可减轻角膜混浊,其机理可能与MMP-2的下调有关,能够为SCTB后行PKP创造有利条件。

带环形巩膜瓣全角膜板层移植术治疗角膜表面衰竭

目的观察带环形巩膜瓣的全角膜板层移植术治疗角膜表面衰竭的临床效果。方法移植带宽6 mm 球结膜和4 mm 板层巩膜的全角膜板层植片,治疗7例(7眼)陈旧性化学伤及热烧伤造成的角膜表面衰竭。结果 7例角膜表面衰竭患者均Ⅰ期愈合,视力提高;5例发生结膜排斥反应,3例发生角膜排斥反应,均痊愈;全角膜板层植片1 wk 后逐渐透明,2个月左右层间长入新生血管;随访6个月～5年,平均24.5月,无角膜结膜化及假性翼状胬肉发生;眼表结构稳定,视力0.1～0.5者6例,0.6者1例。结论带环形巩膜瓣的全角膜板层移植术是治疗角膜表面衰竭的重要手段。

可控恒温烧灼制作兔角膜热烧伤模型的研究

目的探讨可控恒温烧灼制作不同程度兔角膜热烧伤模型的最佳参数。方法成年新西兰大白兔36只,随机分为A、B、C 3组,每组12只(12眼),应用温度可控的电烙铁烧灼角膜制作兔角膜热烧伤模型。烧灼温度:300℃。A、B、C组设定不同的烧灼时间:3 s,7 s,10 s,观察各组制模后角膜烧伤程度及角膜形态学变化,并记录制模后3 d各组角膜溶解情况和制模后14 d角膜烧伤区混浊程度,评估应用可控恒温烧灼不同时间制作的角膜热烧伤模型在角膜烧伤程度、角膜溶解程度、角膜混浊程度等方面是否存在差异。结果制模后各组角膜烧伤程度差异明显(P<0.01),制模后3 d各组角膜溶解情况差异明显(P<0.01),制模后14 d各组角膜混浊程度差异明显(P<0.01)。结论可控恒温烧灼制作兔角膜热烧伤模型效果良好,通过控制烧灼时间可制作不同烧伤程度的模型,所制作的模型具有良好的一致性。

热烧伤后的人角膜组织中基质金属蛋白酶-2、-9表达的研究

目的:研究热烧伤后人角膜组织中的基质金属蛋白酶-2、-9(MMP-2、MMP-9)的表达与分布,探讨其含量的变化与角膜病变的相关性。方法:收集铁水烫伤后行角膜移植患者病变角膜19例,正常角膜组织10例。应用免疫组化染色方法检测MMP-2、MMP-9在角膜各层次中的分布与表达,应用图像分析系统进行半定量分析。结果:MMP-2、MMP-9在正常角膜组织中均未见阳性表达,平均灰度值分别为117.8188±3.7967,119.1902±0.9679。热烧伤后角膜组织中,MMP-2的阳性表达主要分布于角膜基质层,平均灰度值为94.4197±5.8327;MMP-9的阳性表达主要分布于角膜上皮层和基底膜附近,平均灰度值为115.0188±0.7149。将正常角膜组织中和病变角膜组织中两种酶的平均灰度值分别进行统计学分析,P值均<0.05。随着病程的发展,在病变角膜组织中MMP-2的阳性表达先呈现逐渐增高趋势14d后逐渐下降,角膜基质层溶解达高峰时阳性表达的量最高;MMP-9在患病初期角膜基底膜病变明显时表达较高,后期逐渐下降。结论:MMP-2、MMP-9对热烧伤后的人角膜组织病变的发展起重要的作用。MMP-2主要参与角膜基质层的损害,MMP-9主要参与角膜上皮层和基底膜的损害。

塞来昔布与羊膜匀浆提取液对兔角膜热烧伤后角膜新生血管面积及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响

目的比较塞来昔布与羊膜匀浆提取液对兔角膜热烧伤后角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)面积及基质金属蛋白酶-2(matrix metallo-proteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)表达的影响,为临床上塞来昔布治疗CNV提供理论依据。方法建立36只兔角膜热烧伤动物模型,随机分为3组:阴性对照组、羊膜匀浆提取液组、塞来昔布组,每组12只,8只用于观察,4只用于取材。各组兔均于造模后第1天开始球结膜下注射,至造模后第14天;阴性对照组注入90 g·L^(-1)生理盐水0.1 mL,羊膜匀浆提取液组注入羊膜匀浆提取液0.1 mL,塞来昔布组注入8 mg·mL^(-1)塞来昔布溶液0.1 mL。对比热烧伤后4 d、7 d、14 d在裂隙灯显微镜下所观察到的各组角膜的组织形态及新生血管的生长状况,并测算CNV面积;各组均于热烧伤后第7天随机取4只兔完整角膜,行免疫组织化学染色并用计算机图像分析系统检测MMP-2、MMP-9的表达。结果角膜热烧伤后第4天,阴性对照组、羊膜匀浆提取液组、塞来昔布组都可见不同程度的角膜水肿,角膜缘血管充血扩张,新生的小血管芽呈毛刷状,垂直角膜缘切线向内生长。热烧伤后4 d、7 d、14 d,CNV面积阴性对照组为(11.32±1.11)mm^2、(38.49±4.64)mm^2、(43.30±4.39)mm^2;羊膜匀浆提取液组为(9.69±1.30)mm^2、(31.15±4.85)mm^2、(37.19±5.27)mm^2;塞来昔布组为(8.47±1.20)mm^2、(30.31±4.93)mm^2、(36.69±3.54)mm^2。热烧伤后4 d、7 d、14 d,阴性对照组的CNV面积均明显大于羊膜匀浆提取液组和塞来昔布组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);羊膜匀浆提取液组的CNV面积与塞来昔布组相比,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。热烧伤后第7天MMP-2和MMP-9表达阴性对照组大于羊膜匀浆提取液组和塞来昔布组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);羊膜匀浆提取液组与塞来昔布组相比,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论塞来昔布与羊膜匀浆提取液均能有效抑制角膜热烧伤后新生血管的生长,可能与其抑制MMP-2、MMP-9在热烧伤后角膜中的表达有关。