A new protoberberine alkaloid from Corydalis yanhusuo W.T.Wang

A new protoberberine alkaloid, named 5,6-dihydro- 10-hydroxy-2,3,9-trimethoxy- 13-methyldibenzo[α,g]quinoliziniurn （1） was isolated from the 60% ethanol extract of the tubers of Corydalis yanhusuo W. T. Wang, together with a new natural product, 13methylpalmatrubine （2）. Their structures were established by spectroscopic methods. 2009 Xin Sheng Yao. Published by Elsevier B.V. on behalf of Chinese Chemical Society. All fights reserved.

延胡索化学成分、药理作用及质量控制研究进展

紫堇属植物在世界范围是良好的止痛药,延胡索即是其中典型的代表。延胡索行气止痛,作为一种重要的中药在中国的应用历史已超过数百年。综述了延胡索的化学成分、药理作用以及质量控制的研究进展,以利于对延胡索的进一步研究。

延胡索的化学成分

目的分离并鉴定延胡索的化学成分。方法采用硅胶柱色谱、氧化铝柱色谱和重结晶等多种分离方法对延胡索的体积分数为85%的乙醇溶液提取物进行分离,并通过NMR、ESI-MS和TLC等多种方法对分离得到的化学成分进行结构鉴定。结果分离得到13个化合物,分别鉴定为四氢紫堇萨明(tetrahydrocorysamine,1)、四氢黄连碱(tetrahydrocoptisine,2)、紫堇碱(corydaline,3)、四氢巴马亭(tetrahydropal matine,4)、去氢紫堇碱(dehydrocorydaline,5)、oxoglaucine(6)、降氧化北美黄连次碱(noroxyhydrastinine,7)、四氢小檗碱(tetrahydroberberine,8)、山嵛酸(behenic acid,9)、β谷甾醇(βsitosterol,10)、胡萝卜苷(daucosterol,11)、香草酸(vanillic acid,12)、对羟基苯甲酸(phy-droxybenzoic acid,13)。结论其中化合物9、12、13为首次从该属植物中分离得到,化合物6、7、10、11为首次从该植物中分离得到。

延胡索HPLC指纹图谱研究及9种生物碱含量测定

目的:分别建立延胡索药材及醋延胡索饮片的HPLC指纹图谱,同时对其中9种生物碱成分进行含量测定。方法:以通过三乙胺调节pH值至6.1的乙腈-0.1%磷酸溶液作为流动相,选择ECOSIL 120-5-C18AQ色谱柱(250 mm×4.6 mm,5.0μm)进行梯度洗脱。结果:延胡索药材和醋延胡索饮片各10批分别所得的指纹图谱,相似度值均>0.94,确定共有峰均有15个。原阿片碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、脱氢紫堇碱、海罂粟碱、延胡索乙素、四氢小檗碱、延胡索甲素、脱氢海罂粟碱9种生物碱在相应范围内与其峰面积均呈良好线性关系(r≥0.9999);其平均加样回收率(n=6)分别为99.0%、101.5%、99.0%、102.2%、98.7%、100.3%、101.8%、99.4%、99.8%,RSD≤2.5%。结论:该方法具有较高的灵敏度,良好的重复性,可为延胡索药材和醋延胡索饮片的质量评价和全面控制提供参考依据。

导数FTIR结合统计学法应用于中药延胡索质量控制的研究

提出了用单次反射傅里叶变换红外光谱法直接测定延胡索及其伪品的新方法。采用OMNI采样器直接测定法测定了样品的红外光谱,并经过二阶导数光谱转换后进行峰位一致率检验。结果发现延胡索表皮以内部分和外表皮的二阶导数红外光谱峰位基本无差别,而且不同产地的道地药材具有较好的相关性。表皮以内部分于2050～650cm-1区域在4cm-1波长区域单位范围内进行统计学处理,结果延胡索与其伪品的差异性极其显著。可以采用二阶导数FTIR结合统计学法直接、快速、准确地对延胡索与其伪品的表皮以内部分进行区别鉴定。

响应面法优化延胡索生物碱乙醇提取工艺研究

为了提高中药延胡索的利用率,采用响应面法优化其生物碱的提取工艺。考察了不同反应条件对延胡索生物碱得率以及生物碱纯度的影响。在单因素试验基础上,以生物碱得率为指标,通过响应面法对提取工艺条件进行优化。得到的优化条件为:提取时间116 min,提取温度49℃,乙醇体积分数80%,乙醇用量10 mL/g(以延胡索计)。在此条件下提取3次,生物碱得率为0.598%,其纯度为17.38%。

响应曲面法优化延胡索中延胡索乙素的提取工艺

目的以延胡索乙素为指标成分对中药延胡索的提取工艺进行优化,以利于工业化生产。方法采用响应曲面法对提取工艺进行优化,通过考察乙醇体积分数、提取时间、溶媒用量及其交互作用对中药延胡索中延胡索乙素提取率的影响。模拟得出了延胡索乙素的提取回归方程,确定了延胡索乙素的最佳提取条件。结果优化得到的最佳工艺参数:乙醇体积分数为87.16%,提取时间为105.13 min,液料比为1∶7.13。在该工艺条件下,提取物中延胡索乙素的含量质量分数为0.183%。结论该提取工艺对延胡索提取物中的延胡索乙素提取优化效果显著,方法稳定、可行。

微波辅助提取与常规提取延胡索的比较研究

目的:比较微波辅助提取与常规提取延胡索的提取率及经济学指标。方法:应用正交设计分别优化了微波提取和常规提取延胡索的提取工艺,分别采用HPLC和紫外分光光度法测定延胡索乙素和总生物碱的含量,并测定提取过程中的耗电量。结果:微波辅助提取的延胡索乙素提取率和总生物碱都高于常规提取,且微波辅助提取时间短、经济成本低。结论:微波辅助提取法提取延胡索具有高效率、低成本的特点。

中药延胡索化学成分研究

本文采用多种分离层析手段,从中药延胡索(Corydalis yanhusuoW.T.Wang)干燥块茎的乙醇提取物中分离化合物.经波谱分析,及与标准品或文献数据对照的方法,分离并鉴定了6个化合物:延胡索甲素(d-Corydaline)、延胡索乙素(Tetrahydropalmatine)、Pontevedrine、四氢黄连碱(Tetrahydroberberine)、去氢紫堇碱(Dehydrocorydaline)、原普托品(Protopine).研究表明生物碱是中药延胡索的主要成分,其中Pontevedrine为首次从该药材中分离得到的生物碱.

均匀设计法优化延胡索生物碱的超临界流体萃取工艺

目的:用二氧化碳超临界流体萃取延胡索中的生物碱。方法:采用均匀设计法考察萃取压力、萃取温度、萃取时间及药材粒度对延胡索乙素得率的影响并用高效液相色谱法测定萃取物中延胡索乙素的含量。结果:以无水乙醇作为夹带剂,在萃取压力45MPa、萃取温度60℃、药材粒度40目、萃取时间1.4h时延胡索乙素得率最高。结论:二氧化碳超临界流体萃取技术可用于延胡索中生物碱类成份的提取。

HPLC同步测定秦艽中龙胆苦苷和元胡中延胡索乙素的含量

目的:建立同时测定秦艽和元胡中的龙胆苦苷和延胡索素乙素含量的 RP-HPLC 分析方法。方法:采用 RP-C^(18)色谱柱,流动相:V(甲醇):V(0.1%醋酸缓冲液 pH=5.11)=30:70,等度10min,3min 梯度变成68:32,流速为1.0mL·min^(-1);紫外检测波长为230nm 和270nm。结果:龙胆苦苷和延胡索素乙素的标准曲线范围分别是4.5～449.5μg·mL^(-1)(r=0.9999,n=7)和4.9～493.5μg·mL^(-1)(r=0.9998,n=7);检测限分别是0.2245μg·mL^(-1)和0.0987μg·mL^(-1);加样回收率分别为98.9%-105.9%和97.1%～103.7%,RSD 均小于3.1%。结论:运用该方法测定龙胆苦苷和延胡索素乙素的含量稳定可靠,重现性好。

超临界CO_2流体萃取法和醇回流法提取元胡有效成分的比较

目的比较CO2超临界流体萃取法(CO2-SFE)和醇回流法提取元胡有效成分的优劣。方法通过TLC图谱、HPLC图谱、固体物量及延胡索乙素(THP)的含量4个指标评价两种方法。结果CO2-SFE法与醇回流法提得的目标化合物成分生物碱一致,CO2-SFE提取物较纯净,且THP的含量是醇回流法的2.3倍,而其固体物量仅为后者的1/4。结论用CO2-SFE提取元胡药材优于醇回流法。

延胡索药材HPLC指纹图谱研究

目的应用RP-HPLC建立延胡索的指纹图谱。方法 Thermo hypersil GOLD C18(250.0mm×4.6mm,粒径5.0μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液(pH5.0)梯度洗脱,流速1.0ml/min,检测波长为280nm,柱温30℃,记录时间:108min。结果获得了该药材的HPLC指纹图谱,含有共有峰23个。结论本方法样品处理简便,重复性好,可用于延胡索药材的质量控制。

延胡索中延胡索乙素含量分析方法的研究

采用高压液相色谱法测定了延胡索中延胡索乙素的含量.色谱柱为φ4.6×250 mm Hypersil BDS C18柱,UV检测器,检测波长为230 nm,流动相为甲醇∶水=65∶35(pH=8.2),1.0 mL/min,方法的精密度为RSD=2%,方法的回收率为98%～100%.方法的线性范围为0.29～3.48 μg之间.该方法简便、可靠、适合于延胡索的质量控制.

基于SSR分子标记的延胡索遗传多样性研究

采用SSR分子标记分析延胡索的遗传多样性,筛选出多态性高、稳定性好的12对引物,对19个居群360份延胡索样品进行了群体遗传分析。结果表明:(1)12对SSR引物共扩增出多态性位点227个,检测到4~9个等位基因,平均等位基因数目为5.25个,表现出丰富的多态性;延胡索居群具有较高的遗传多样性(Na=5.25,I=1.192 6,H=0.387 9),物种间遗传分化程度高(Fst=0.388 3),基因流较弱(Nm=0.393 8)。(2)UPGMA聚类分析和贝叶斯距离分析结果表明,19个居群明显聚为4大支;Mantle Test结果(r=0.326,P=0.01)表明,地理位置相近的种群亲缘关系更近。研究认为,延胡索的遗传结构是该物种自交为主的繁育系统、克隆生长、地理隔离以及居群间有限的基因流共同作用的结果,故对该物种的保护应以就地保护为主。

酸性染料比色法测定延胡索总生物碱的含量

目的探讨延胡索中总生物碱含量测定的方法。方法采用酸性染料比色法测定延胡索中总生物碱含量。结果酸性染料比色法的显色条件为pH 4.4缓冲液12.0 mL,溴甲酚绿液3.0 mL,氯仿9mL萃取一次,振摇2 min,静置40 min。生物碱在1.33μg/mL～11.56μg/mL范围内呈线性关系,回收率平均值100.4%,,RSD=1.01%(n=6)。结论本含量测定方法操作简单,灵敏度高,准确度好,重现性好,可用于测定延胡索总生物碱的含量。

中药材元胡的传粉生物学研究

对人工栽培元胡种群的开花习性、杂交指数、花粉/胚珠比、花粉活力、柱头可授性、传粉试验及访花昆虫进行观察。结果表明,按照Daffni的方法,元胡杂交指数OCI为3,由此判断元胡繁育系统为自交亲和,有时需要传粉者;且元胡P/O值在31.9～396.0之间,依照Cruden(1977)的标准,元胡的繁育系统属兼性自交;元胡栽培种群开花高峰期在3月底,花期短,15 d左右;元胡为兼性自交繁育系统;花粉活力随时间逐渐升高,到第5天达到最高之后又逐渐下降;在整个花期柱头都具有一定的可授性,且在开花第6天最强,随后降低;每天观察元胡的访花昆虫,偶有蜜蜂或蝴蝶一两只,访花时停留5～16 s,其他昆虫几乎未见。表明野生状态下,元胡访花昆虫的访花频率很低。

元胡中生物碱的醇回流提取

提取分离元胡中的生物碱,通过预处理,以工业酒精热回流提取获得元胡粗提物300g,得率为7.06%。比传统的水提取收率高,该方法属于一种较理想的提取方法。

两种类型元胡的同功酶分析

应用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对两种类型的元胡的块茎进行过氧化物同工酶、可溶性蛋白分析比较，结果表明：两者都能分离出清晰的酶带，但酶带的强弱和位置却不相同。

高效液相色谱法测定延胡索药材中7种异喹啉类生物碱的含量

本文建立了同时测定延胡索中巴马汀、小檗碱、去氢紫堇碱、四氢巴马汀、异紫堇球碱、紫堇碱和四氢黄连碱7种主要异喹啉生物碱含量的高效液相色谱方法,并考察了不同来源延胡索中异喹啉生物碱的含量。采用Agilent SB C18柱色谱柱（4.6×250 mm,5μm）,流动相为乙腈-0.1%的醋酸水溶液（三乙胺调pH至5.0）,梯度洗脱,流速为1.0 m L/min,检测波长为280 nm。巴马汀、小檗碱、去氢紫堇碱、四氢巴马汀、异紫堇球碱、紫堇碱和四氢黄连碱在2.0~40.1、2.0~39.5、5.1~101.3、5.0~99.8、2.1~41.2、5.0~100.1μg/m L和2.0~39.7μg/m L浓度范围内线性良好,平均加样回收率分别为95.6%、96.1%、96.5%、101.4%、101.9%、97.3%和102.3%,RSD分别为2.77%、2.50%、3.33%、4.18%、2.93%、2.86%和2.60%。不同来源延胡索样品中7种异喹啉类生物碱含量差异较大,研究表明该方法准确、可靠,可用于延胡索原药材质量控制。