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Detection of the covalently closed circular DNA of duck hepatitis B virus by Taq-Man fluorescent quantitative PCR assay
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作者 MEI LI FU QING LIN +3 位作者 XIAO PENG LIU SHUI LAN SHI DONG LIANG LI ZI RONG CHEN 《Journal of Microbiology and Immunology》 2007年第1期35-39,共5页
To develop a fluorescent quantitative PCR assay based on Taq-Man chemistry to detect the covalenfly closed circular DNA (eccDNA) of duck hepatitis B virus (DHBV), a pair of primers was designed from both sides of ... To develop a fluorescent quantitative PCR assay based on Taq-Man chemistry to detect the covalenfly closed circular DNA (eccDNA) of duck hepatitis B virus (DHBV), a pair of primers was designed from both sides of the nick in the minus strand of DHBV and a Taq-Man probes between the primers, modified with 6-Fam at 5' end and Tamra at its 3' end was designed to detect the PCR products during PCR cycles. The DHBV DNA fragment was cloned into vector PUCm-T, and the recombinant plasmid was purified and subsequently qualified as the HBV DNA standard. The experimental conditions and reagents used in PCR assay for amplification were sophisticatedly optimized in order to yield a perfect amplification efficacy and reduce the possibility to produce non-specific amplification. It was demonstrated that the detect limit of assay was 10^3 copies/ml, and a linear standard curve was obtained between 10^5 -10^9 copies/ml [ C1 =-2.8361 ln(x) + 41.45, r =-0.9985]. The coefficient of variation was 0.2%-3.14% and 2.22%-4.43% for intra- and inter-assay respectively. After a dynamic survey on the contents of DHBV DNA in serum of ducks, it was found that its peak value appeared at the second week of birth in ducks. It is evident that this method of Taq-Man fluorescent quantitative PCR assay appears to be simple, sensitive and specific. 展开更多
关键词 DUCK Hepatitis B virus covalently closed circular dna(cccdna Fluorescence quantitative PCR
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Effects of antiviral agents and HBV genotypes on intrahepaticcovalently closed circular DNA in HBeAg-positive chronichepatitis B patients 被引量:6
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作者 Hai-Ying Lu Li-Wei Zhuang +7 位作者 Yan-Yan Yu Chong-Wen Si Jun Li Jian-Jun Zhang Zheng Zeng Xin-Yue Chen Zhong-Hou Han Yong Chen 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2008年第8期1268-1273,共6页
AIM: To evaluate the effects of antiviral agents and HBV genotypes on intrahepatic covalently closed circular DNA (ccc DNA) in HBeAg-positive chronic hepatitis B patients.METHODS: Seventy-one patients received lam... AIM: To evaluate the effects of antiviral agents and HBV genotypes on intrahepatic covalently closed circular DNA (ccc DNA) in HBeAg-positive chronic hepatitis B patients.METHODS: Seventy-one patients received lamivudine (n = 35), or sequential therapy with lamivudine- interferon alpha 2b (IFN-α 2b, n = 24) for 48 wk, or IFN-α 2b (n = 12) for 24 wk. All subjects were followed up for 24 wk. Intrahepatic ccc DNA was measured quantitatively by PCR. HBV genotypes were analyzed by PCR-RFLP.RESULTS: Sequential lamivudine- INF-α therapy, lamivudine and INF-α monotherapy reduced ccc DNA of 1.7 log, 1.4 log and 0.8 log, respectively (P 〈 0.05). Seventeen out of the 71 patieots developed HBeAg seroconversion, the reduction of ccc DNA in the HBeAg seroconversion patients was more significant than that in the HBeAg positive patients (3.0 log vs 1.6 log, P = 0.0407). Twenty-four weeks after antiviral therapy withdrawal, 16 patients had a sustained virological response, the baseline intrahepatic ccc DNA in the patients with a sustained virological response was significantly lower than that in the patients with virological rebound (4.6 log vs 5.4 log, P = 0.0472). HBV genotype C accounted for 85.9% (n = 61), and genotype B for 14.1% (n = 10), respectively, in the 71 patients. There was no significant difference in the change of ccc DNA level between HBV genotypes C and B (2.1 log vs 1.9 log).CONCLUSION: Forty-eight week sequential lamivudine- INF-α therapy and lamivudine monotherapy reduce ccc DNA more significantly than 24-wk INF-α monotherapy. Low baseline intrahepatic ccc DNA level may predict the long-term efficacy of antiviral treatment. HBV genotypes C and B have no obvious influence on ccc DNA load. 展开更多
关键词 covalently closed circular dna Hepatitis Bvirus Sequential therapy LAMIVUDINE INTERFERON
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Intracellular interferon signalling pathways as potential regulators of covalently closed circular DNA in the treatment of chronic hepatitis B 被引量:5
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作者 Zhi Yi Goh Ee Chee Ren Hui Ling Ko 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS 2021年第14期1369-1391,共23页
250 million people worldwide continue to be chronically infected with the virus.While patients may be treated with nucleoside/nucleotide analogues,this only suppresses HBV titre to sub-detection levels without elimina... 250 million people worldwide continue to be chronically infected with the virus.While patients may be treated with nucleoside/nucleotide analogues,this only suppresses HBV titre to sub-detection levels without eliminating the persistent HBV covalently closed circular DNA(cccDNA)genome.As a result,HBV infection cannot be cured,and the virus reactivates when conditions are favorable.Interferons(IFNs)are cytokines known to induce powerful antiviral mechanisms that clear viruses from infected cells.They have been shown to induce cccDNA clearance,but their use in the treatment of HBV infection is limited as HBVtargeting immune cells are exhausted and HBV has evolved multiple mechanisms to evade and suppress IFN signalling.Thus,to fully utilize IFN-mediated intracellular mechanisms to effectively eliminate HBV,instead of direct IFN administration,novel strategies to sustain IFN-mediated anti-cccDNA and antiviral mechanisms need to be developed.This review will consolidate what is known about how IFNs act to achieve its intracellular antiviral effects and highlight the critical interferon-stimulated gene targets and effector mechanisms with potent anti-cccDNA functions.These include cccDNA degradation by APOBECs and cccDNA silencing and transcription repression by epigenetic modifications.In addition,the mechanisms that HBV employs to disrupt IFN signalling will be discussed.Drugs that have been developed or are in the pipeline for components of the IFN signalling pathway and HBV targets that detract IFN signalling mechanisms will also be identified and discussed for utility in the treatment of HBV infections.Together,these will provide useful insights into design strategies that specifically target cccDNA for the eradication of HBV. 展开更多
关键词 covalently closed circular dna INTERFERONS APOBECs Epigenetic modification Hepatitis B virus therapeutics
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Novel therapeutic approaches for hepatitis B virus covalently closed circular DNA 被引量:5
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作者 Motoko Ohno Motoyuki Otsuka +3 位作者 Takahiro Kishikawa Takeshi Yoshikawa Akemi Takata Kazuhiko Koike 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS 2015年第23期7084-7088,共5页
Hepatitis B virus(HBV) infection is a major global health problem. Although current therapies, such as the use of nucleos(t)ide analogs, inhibit HBV replication efficiently, they do not eliminate covalently closed cir... Hepatitis B virus(HBV) infection is a major global health problem. Although current therapies, such as the use of nucleos(t)ide analogs, inhibit HBV replication efficiently, they do not eliminate covalently closed circular DNA(ccc DNA), which persists in hepatocyte nuclei. As HBV ccc DNA is a viral transcription template, novel therapeutic approaches to directly target HBV ccc DNA are necessary to completely eradicate persistent HBV infections. HBV ccc DNA levels in HBV-infected human liver cells are extremely low; thus, more reliable and simple measurement methods are needed to correctly monitor their levels during therapeutic treatment. Although reverse transcription-polymerase chain reaction or Southern blot procedures are currently used in research studies, these methods are not completely reliable and are also time-consuming and labor-intensive. Genome editing technologies, such as zinc finger nucleases, transcription activator-like effector nucleases, and the clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas9(CRISPR/Cas9) system, which are designed to target specific DNA sequences, represent highly promising potential therapeutic tools. In particular, the CRISPR/Cas9 system is an easily customizable sequencespecific nuclease with high flexibility and may be the most feasible approach to target HBV ccc DNA. Further research to develop easier, safer, and more effective protocols should be pursued. 展开更多
关键词 HEPATITIS B VIRUS covalently closed circularHBV dna GENOME EDITING
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Role of hepatitis B virus in development of hepatocellular carcinoma:Focus on covalently closed circular DNA 被引量:1
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作者 Claryssa Bianca Elizabeth Sidhartha +2 位作者 Claudio Tiribelli Korri Elvanita El-Khobar Caecilia H C Sukowati 《World Journal of Hepatology》 2022年第5期866-884,共19页
Chronic infection with hepatitis B virus(HBV)remains a major global health problem,especially in developing countries.It may lead to prolonged liver damage,fibrosis,cirrhosis,and hepatocellular carcinoma.Persistent ch... Chronic infection with hepatitis B virus(HBV)remains a major global health problem,especially in developing countries.It may lead to prolonged liver damage,fibrosis,cirrhosis,and hepatocellular carcinoma.Persistent chronic HBV infection is related to host immune response and the stability of the covalently closed circular DNA(cccDNA)in human hepatocytes.In addition to being essential for viral transcription and replication,cccDNA is also suspected to play a role in persistent HBV infections or hepatitis relapses since cccDNA is very stable in non-dividing human hepatocytes.Understanding the pathogenicity and oncogenicity of HBV components would be essential in the development of new diagnostic tools and treatment strategies.This review summarizes the role and molecular mechanisms of HBV cccDNA in hepatocyte transformation and hepatocarcinogenesis and current efforts to its detection and targeting. 展开更多
关键词 Hepatitis B virus covalently closed circular dna Hepatocellular carcinoma HEPATOCARCINOGENESIS
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HBV pgRNA联合cccDNA对慢性乙型肝炎患者抗病毒疗效的预测价值 被引量:1
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作者 王学英 《罕少疾病杂志》 2024年第4期54-56,共3页
目的探究乙型肝炎(HBV)前基因组RNA(pgRNA)联合共价闭合环状DNA(cccDNA)对慢性乙型肝炎(CHB)患者抗病毒疗效的预测价值。方法收集2019年8月至2022年8月期间于本院进行抗病毒治疗的96例CHB患者的临床资料,根据患者治疗48周后是否获得完... 目的探究乙型肝炎(HBV)前基因组RNA(pgRNA)联合共价闭合环状DNA(cccDNA)对慢性乙型肝炎(CHB)患者抗病毒疗效的预测价值。方法收集2019年8月至2022年8月期间于本院进行抗病毒治疗的96例CHB患者的临床资料,根据患者治疗48周后是否获得完全应答分为完全应答组(78例)及非完全应答组(15例)。检测患者不同时间HBV cccDNA和HBV pgRNA水平,Logistic回归分析影响CHB患者获得完全应答的因素,并应用受试者工作特征(ROC)曲线分析pgRNA与cccDNA联合检测在抗病毒疗效的预测价值。结果96例患者中78例抗病毒治疗后获得非完全应答;完全应答组治疗24、48周HBV pgRNA、HBV cccDNA水平均低于非完全应答组(P<0.05);Logistic回归分析显示,治疗24周HBV pgRNA、HBV cccDNA高水平及治疗前ALT低水平是影响CHB患者抗病毒治疗无效的独立危险因素(P<0.05);经ROC分析显示,HBV pgRNA预测CHB患者抗病毒疗效的AUC值为0.618,95%CI为0.513~0.716,HBV cccDNA预测的AUC值为0.667,95%CI为0.561~0.760,二者联合预测的AUC值为0.881,95%CI为0.799~0.938。结论HBV pgRNA与cccDNA在CHB患者抗病毒治疗中下调,且治疗24周HBV pgRNA联合cccDNA检测对CHB抗病毒疗效具有更高的预测价值。 展开更多
关键词 乙型肝炎 前基因组RNA 共价闭合环状dna 抗病毒治疗
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NS5ATP9与HBx相互作用促进HBV cccDNA的形成与转录
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作者 袁晓雪 耿雯倩 +1 位作者 王钧 王阳 《中国肝脏病杂志(电子版)》 CAS 2024年第1期29-37,共9页
目的探讨丙型肝炎病毒NS5A反式调节蛋白9(hepatitis C virus NS5Atransactivated protein 9,NS5ATP9)在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)形成与转录中的作用机制。方法利用... 目的探讨丙型肝炎病毒NS5A反式调节蛋白9(hepatitis C virus NS5Atransactivated protein 9,NS5ATP9)在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)形成与转录中的作用机制。方法利用1.3拷贝HBV表达质粒转染Huh7和HepG2细胞、整合有4拷贝HBV基因组的HepG2.2.15细胞、在诱导型四环素启动子控制下表达HBV的HepAD38细胞构建NS5ATP9过表达或干扰的HBV细胞模型,收集样品和细胞上清液,提取RNA、HBV核心DNA(coreDNA)、cccDNA和蛋白,利用酶联免疫吸附试验、实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)、Southern blot和Western blot技术检测HBV总RNA、前基因组RNA(pregenomic RNA,pgRNA)、乙型肝炎病毒s抗原(hepatitis B virus s antigene,HBsAg)、乙型肝炎病毒e抗原(hepatitis B virus e antigene,HBeAg)、松弛环状DNA(relax circular DNA,rcDNA)以及cccDNA水平。在HepG2细胞中转染乙型肝炎病毒x蛋白(hepatitis B virus x protein,HBx),通过免疫荧光成像及免疫共沉淀方法检测NS5ATP9与HBx的结合情况。双荧光素酶报告基因实验检测NS5ATP9对HBx启动子活性的影响。利用Huh7细胞转染HBV1.3及HBV稳定表达细胞株HepG2.2.15和HepAD38转染NS5ATP9过表达/干扰质粒,通过Western blot技术检测DDB1和SMC6的蛋白水平。结果在HBV病毒活跃的细胞中,NS5ATP9 mRNA水平[HepG2.2.15细胞:1.891±0.567比1.00±0.034,t=2.87,P=0.0351;HepAD38 tet+细胞:1.978±0.399比1.00±0.034,t=4.131,P=0.0091;HepAD38 tet-细胞:2.642±0.672比1.00±0.034,t=4.127,P=0.0091]和蛋白水平均显著增加。过表达NS5ATP9后可显著增加HBeAg[(5.402±0.327)S/COV比(2.68±0.552)S/COV,t=7.35,P=0.0018]、HBsAg[(2.846±0.185)S/COV比(1.512±0.221)S/COV,t=8.02,P=0.0013]、HBV pgRNA及rcDNA的表达水平,而干扰NS5ATP9后此增加作用消失[HBeAg:(2.029±0.09)S/COV比(3.733±0.445)S/COV,t=6.501,P=0.0029;HBsAg:(1.501±0.105)S/COV比(1.878±0.174)S/COV,t=3.216,P=0.0324)]。机制研究显示,NS5ATP9和HBx蛋白主要位于细胞核核仁内,并具有共定位信号,且NS5ATP9可显著提高HBx启动子(1071.06±79.44比488.47±40.12,t=13.09,P=0.00012)的转录活性。另外,过表达NS5ATP9可显著降低DDB1和SMC6的蛋白水平,而沉默NS5ATP9则可显著提高DDB1和SMC6的蛋白水平。结论HBV上调NS5ATP9的表达,形成HBV-NS5ATP9-HBV cccDNA-HBV的正反馈环路,NS5ATP9通过与HBx相互作用上调肝细胞中HBV cccDNA的形成与转录,进而促进慢性乙型肝炎的发生发展。 展开更多
关键词 NS5ATP9 肝炎病毒 乙型 乙型肝炎病毒共价闭合环状dna 乙型肝炎病毒X蛋白 转录调控
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无锡地区HBsAg-/HBV DNA+献血人群HBcrAg检出特点分析 被引量:1
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作者 王嫣 金建怀 +2 位作者 许友山 郝庆钦 夏卫 《中国输血杂志》 2024年第1期32-36,共5页
目的分析新型血清标志物乙型肝炎核心相关抗原(HBcrAg)在无锡地区HBsAg-/HBV DNA+献血人群中的检出特点。方法通过电话追踪随访了37名既往HBsAg-/HBV DNA+献血者并获得其血清,采用电化学发光法和实时荧光定量PCR核酸筛检出22例HBsAg-/HB... 目的分析新型血清标志物乙型肝炎核心相关抗原(HBcrAg)在无锡地区HBsAg-/HBV DNA+献血人群中的检出特点。方法通过电话追踪随访了37名既往HBsAg-/HBV DNA+献血者并获得其血清,采用电化学发光法和实时荧光定量PCR核酸筛检出22例HBsAg-/HBV DNA+献血者血清作为OBI组进行HBcrAg酶联免疫吸附法检测。挑选出20名经2遍酶免和1遍核酸筛检的健康献血者的血清作为健康对照组,20例经无锡第五人民医院临床诊断为慢性乙型肝炎患者血清作为实验的CHB组,分别进行HBcrAg酶联免疫吸附法检测;并对OBI组进行HBcrAg与HBeAb、HBcAb、ALT、HBV DNA的相关性分析。结果37份献血者标本经化学发光法检测HBsAg和核酸筛查,检出22份HBsAg-/HBV DNA+标本即OBI组,检出率59.46%。OBI组与健康对照组、CHB组血清的HBcrAg表达含量分别是(0.92±0.13)ng/mL、(0.47±0.09)ng/mL、(1.14±0.23)ng/mL(P<0.05),OBI组与CHB组的HBcrAg表达均高于健康对照组(P<0.05)。OBI组的HBcrAg与HBeAb、HBcAb、ALT、HBV DNA指标均无相关性(P>0.05)。结论OBI组与CHB组的HBcrAg表达均高于健康对照组,其血清HBcrAg在一定程度上与HBeAb、HBcAb、ALT、HBV DNA无相关性,HBcrAg在筛查HBsAg-/HBV DNA+献血者中具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 乙型肝炎核心相关抗原 HBsAg-/HBV dna+ 献血者 共价闭合环状dna
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乙型肝炎病毒感染相关性肝癌中HBV cccDNA水平与突变关系的研究 被引量:14
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作者 罗璇 黄瑶 +2 位作者 陈彦猛 黄爱龙 胡源 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期552-556,共5页
目的:研究乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染相关性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中HBV共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,ccc DNA)水平与突变关系。方法:运用特异性荧光定量PCR定量分析了12例肝癌组织和癌... 目的:研究乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染相关性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中HBV共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,ccc DNA)水平与突变关系。方法:运用特异性荧光定量PCR定量分析了12例肝癌组织和癌旁组织中乙肝病毒复制水平的表征因子HBV ccc DNA,HBV total DNA及前基因组RNA(pregenome RNA,pg RNA)的表达水平,再用滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)特异性扩增癌组织中HBV ccc DNA,测序分析了病毒基因组4个编码调控区域pre C/C、RT、X、pre S中ccc DNA序列的突变。最后检测了肿瘤组织ccc DNA的AP位点。结果:HBV ccc DNA在癌组织的表达水平明显低于癌旁组织(3.32 copies/cell vs.9.64 copies/cell,P=0.029),但是HBV总DNA和pg RNA的表达没有明显差异(16.94 copies/cell vs.12.18 copies/cell,P=0.325,75.54 copies/cell vs.22.46 copies/cell,P=0.128);在肝癌组织中,HBV ccc DNA pre C/C和X区间,G-A突变是主要的突变类型;其次,pre C/C和X区域发生G-A突变的位置上,均更倾向于GA二联核苷酸组合方式,在肝癌中所占比例为37.1%和40%。最后,肿瘤组织中APE1酶处理后,HBV ccc DNA水平明显下降(1 011 copies/μl vs.501.8 copies/μl,P=0.058)。结论:HBV ccc DNA水平在癌组织中明显低于癌旁组织,可能与癌组织中HBV ccc DNA发生大量GA突变及形成的AP位点有关。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 肝癌 HBV共价闭合环状dna 序列突变
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HBV感染者血清中HBVcccDNA、HBeAg及HBV DNA的关系 被引量:11
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作者 吕其军 魏秀桂 +3 位作者 聂伟 李毅 田永刚 黄黎 《临床肝胆病杂志》 CAS 2005年第4期202-203,共2页
探讨HBV感染者血清HBVcccDNA与血清HBV DNA及HBeAg的关系。分别以PCR分子信标技术和ELISA方法对非HBV相关肝炎、HBV健康携带者、急性乙型肝炎(AHB)、慢性乙型肝炎(CHB)、乙肝肝硬化、乙肝患者血清中HBVcccDNA HBV DNA含量及HBeAg进行了... 探讨HBV感染者血清HBVcccDNA与血清HBV DNA及HBeAg的关系。分别以PCR分子信标技术和ELISA方法对非HBV相关肝炎、HBV健康携带者、急性乙型肝炎(AHB)、慢性乙型肝炎(CHB)、乙肝肝硬化、乙肝患者血清中HBVcccDNA HBV DNA含量及HBeAg进行了检测。HBVcccDNA仅见于HBVDNA阳性血清中;HBeAg阳性组的HBVcccDNA阳性率显著高于HBeAg阴性组(P<0.05):145例HBVDNA阳性患者中,HBVcccDNA阳性组HBVD- NA水平显著高于HBVcccDNA阴性组(P<0.01)。血清HBVcccDNA可能是乙肝病毒在患者体内大量复制的血清标志。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 共价闭合环状dna 血清学
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滚环扩增在乙型肝炎病毒cccDNA检测中的应用 被引量:15
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作者 任晓强 苏何玲 +6 位作者 邹正升 高峰 刘立明 刘妍 李保森 徐东平 钟彦伟 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期675-678,共4页
目的建立慢性乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)的滚环扩增(RCA)方法。方法以27例慢性乙型肝炎患者的肝组织cccDNA和血清松弛环状DNA(rcDNA)为研究对象。根据中国患者HBV基因序列特点设计4对引物,分别可与HBVcccDNA的正、负链... 目的建立慢性乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)的滚环扩增(RCA)方法。方法以27例慢性乙型肝炎患者的肝组织cccDNA和血清松弛环状DNA(rcDNA)为研究对象。根据中国患者HBV基因序列特点设计4对引物,分别可与HBVcccDNA的正、负链结合。在Phi29DNA聚合酶的作用下,获得线性多拷贝cccDNA扩增产物,以该产物为模板获得cccDNA全序列;通过对模板的系列稀释鉴定RCA方法的灵敏度;以RCA产物为模板扩增肝组织cccDNA的反转录酶区基因,并与同时扩增的同时间采集的同一患者血清中的rcDNA序列进行比较。结果成功建立了HBVcccDNA全序列的RCA方法,最低可检测到10个拷贝的cccDNA分子,并获得了所有扩增cccDNA的全基因序列。27例患者中,18例患者的肝组织cccDNA和血清rcDNA反转录酶区的序列完全一致,9例患者中共检出84个不同的核苷酸位点,平均每个患者9.3个,84个不同核苷酸中只有5个引起了氨基酸的改变。结论滚环扩增方法对肝组织HBVcccDNA的检测具有较好的灵敏度。该方法的建立对深入了解cccDNA在HBV致病机制中的作用以及评价抗病毒疗效有重要意义。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 滚环扩增 共价闭合环状dna
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乙型肝炎患者血清中HBV cccDNA与HBV DNA、HBsAg和HBeAg定量关系的分析 被引量:14
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作者 任伟宏 赵素玲 +4 位作者 李延卿 赵志娟 孙蕾 熊慧 陶慧卿 《检验医学》 CAS 北大核心 2010年第6期438-441,共4页
目的定量检测乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)、HBV DNA、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)并分析其相互关系,探讨定量检测血清中HBV cccDNA的临床应用价值。方法随机选取HBV感染者83例,采... 目的定量检测乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)、HBV DNA、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)并分析其相互关系,探讨定量检测血清中HBV cccDNA的临床应用价值。方法随机选取HBV感染者83例,采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测血清中HBVcccDNA及HBV DNA,同时采用化学发光法定量检测血清中HBsAg和HBeAg。结果 83例患者中HBV DNA阳性62例,其中HBV DNA载量≥105拷贝/mL者40例,血清HBV cccDNA阳性28例(70.00%);HBV DNA载量<105拷贝/mL者22例,血清HBV cccDNA阳性2例(9.09%),不同DNA载量组HBV cccDNA差异有统计学意义(P<0.01)。HBeAg阳性组和阴性组HBV cccDNA阳性率分别为70.00%(28/40)和4.65%(2/43),两组差异有统计学意义(P<0.01)。HBV cccDNA定量值与HBV DNA、HBsAg呈正相关(P<0.01)。结论血清中HBV cccDNA水平可同时反应血清HBV DNA和HBsAg水平,血清HBV cccDNA含量可作为观察HBV复制情况和评价抗病毒疗效的相关血清指标。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒dna 共价闭合环状dna 乙型肝炎表面抗原 乙型肝炎E抗原
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慢性乙肝患者血清HBV cccDNA检测的临床意义 被引量:4
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作者 杨彩娥 黄丽琴 +2 位作者 孙彬 何菊芳 韩冰 《解放军医学院学报》 CAS 2013年第2期121-123,共3页
目的探讨慢性乙肝患者血清HBV cccDNA与现有血清学指标(AST、ALT、TBIL、HBeAg、HBV DNA)的相关性。方法选取解放军第309医院2009年5月-2012年5月就诊的慢性乙肝患者58例,采用Roche C6000电化学发光法检测HBeAg;日立Hi7600全自动生化分... 目的探讨慢性乙肝患者血清HBV cccDNA与现有血清学指标(AST、ALT、TBIL、HBeAg、HBV DNA)的相关性。方法选取解放军第309医院2009年5月-2012年5月就诊的慢性乙肝患者58例,采用Roche C6000电化学发光法检测HBeAg;日立Hi7600全自动生化分析仪检测ALT、AST、TBIL;采用实时荧光定量PCR检测血清HBV DNA、HBVcccDNA载量。结果血清HBV cccDNA与HBV DNA有很好的相关性(r=0.880,P=0.000)。HBeAg阳性组HBV cccDNA阳性的比例为67.6%,显著高于HBeAg阴性组的37.5%(χ2=5.170,P=0.023)。血清HBV cccDNA与肝组织炎症的严重程度呈正相关(χ2=4.819,P=0.028)。结论血清HBV cccDNA定量检测是评价HBV复制情况和肝细胞损伤程度较为可靠的指标。 展开更多
关键词 慢性乙型肝炎 共价闭合环状dna HBVdna 乙肝E抗原 谷丙转氨酶
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干扰素和核苷(酸)类似物治疗对HBV cccDNA的影响与慢性乙型肝炎的功能性治愈 被引量:15
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作者 陈捷亮 袁正宏 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2019年第6期1181-1187,共7页
目前临床治疗慢性乙型肝炎的药物主要包括干扰素和核苷(酸)类似物两大类,但均无法有效清除病毒和治愈乙型肝炎。HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)作为HBV转录复制的模板,以微小染色体形式持续存在于细胞核内,被认为是HBV慢性感染和难以治愈... 目前临床治疗慢性乙型肝炎的药物主要包括干扰素和核苷(酸)类似物两大类,但均无法有效清除病毒和治愈乙型肝炎。HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)作为HBV转录复制的模板,以微小染色体形式持续存在于细胞核内,被认为是HBV慢性感染和难以治愈的关键核心。鉴于cccDNA很难被彻底清除,近年来以cccDNA持续沉默为基础的慢性乙型肝炎功能性治愈已成为临床和基础研究的主要目标。从现有治疗手段对cccDNA的影响切入,介绍当前对cccDNA含量和活性受控因素的认知,探讨cccDNA池难以清除的关键特性环节,在此基础上展望功能性治愈慢性乙型肝炎目标下研究cccDNA的重点。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 抗病毒药 共价闭合环状dna
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乙型肝炎病毒cccDNA与HBx蛋白在肝细胞性肝癌中表达的关系及意义 被引量:8
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作者 潘爱萍 黄古叶 +1 位作者 陈晶 何燕玲 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2009年第7期712-715,共4页
目的:探讨肝细胞性肝癌中乙型肝炎病毒(HBV)cccDNA与HBx蛋白表达的关系及其意义.方法:取42例肝细胞性肝癌患者的癌和癌旁组织,采用SABC法检测组织中的HBx蛋白;采用RT-PCR法检测组织中的HBV cccDNA水平.结果:HBx蛋白在癌及癌旁组织中的... 目的:探讨肝细胞性肝癌中乙型肝炎病毒(HBV)cccDNA与HBx蛋白表达的关系及其意义.方法:取42例肝细胞性肝癌患者的癌和癌旁组织,采用SABC法检测组织中的HBx蛋白;采用RT-PCR法检测组织中的HBV cccDNA水平.结果:HBx蛋白在癌及癌旁组织中的阳性例数分别为31例(73.8%)和35例(83.3%),无显著性差异;癌旁组织中cccDNA水平较癌组织中的高,但是统计学检验无显著性差异;癌组织和癌旁组织中HBx蛋白(+)者的cccDNA水平均明显高于HBx蛋白(-)者(P<0.05).HBx蛋白表达与cccDNA水平呈正相关(r=0.778,P<0.01).结论:HBx蛋白的表达与cccDNA水平明显相关,他们相互作用、相互影响并在肝癌的发生发展中起重要作用. 展开更多
关键词 共价闭合环状dna 乙型肝炎病毒X蛋白 肝细胞性肝癌 适时聚合酶链反应
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乙型肝炎病毒相关性肾小球肾炎患儿血清中HBV-cccDNA水平检测及其临床意义 被引量:3
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作者 雷晓燕 孙永红 +5 位作者 陈星星 高霞 宋元春 赛依帕 刘璟 袁宏 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期1256-1262,共7页
目的:分析血清中乙肝病毒共价闭合环状双链DNA (HBV-cccDNA)水平对乙型肝炎病毒相关性肾小球肾炎(HBV-GN)患儿肝肾功能、肾组织中HBV抗原的检出、肝组织病理分级和分期的影响,评价HBVcccDNA水平检测对HBV-GN患儿诊断的临床应用价值。方... 目的:分析血清中乙肝病毒共价闭合环状双链DNA (HBV-cccDNA)水平对乙型肝炎病毒相关性肾小球肾炎(HBV-GN)患儿肝肾功能、肾组织中HBV抗原的检出、肝组织病理分级和分期的影响,评价HBVcccDNA水平检测对HBV-GN患儿诊断的临床应用价值。方法:选取39例HBV-GN初治患儿作为研究对象(观察组),所有患儿均接受肝脏和肾脏穿刺;选取肝功能正常HBV携带患儿40例作为对照组。检测2组患儿丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,采用PCR荧光分子信标技术检测患儿血清中HBV-cccDNA水平,HE染色检测患儿肝脏和肾脏组织的形态表现,免疫荧光法检测患儿肾组织中HBsAg、HBeAg和HBcAg检出率,采用受试者工作特征(ROC)曲线及曲线下面积(AUC)评价HBV-cccDNA水平检测在HBV-GN诊断中的价值。以HBV-cccDNA的Ax荧光值>21判定为阳性,反之判定为阴性,将HBV-GN患儿分为HBV-cccDNA阳性组(n=24)和HBV-cccDNA阴性组(n=15)。在抗病毒治疗后第2、4、8和12周时检测患儿血清中HBV DNA及HBV-cccDNA水平。结果:HBV-cccDNA阳性组患儿ALT和AST水平异常率、HBeAg和尿蛋白阳性率均高于HBV-cccDNA阴性组(χ~2=4.454,P=0.035;χ~2=5.912,P=0.022;χ~2=8.770,P=0.007)。HBV-cccDNA阳性和阴性组HBV-GN患儿肝组织炎症和纤维化程度比较差异无统计学意义(P>0.05),HBV-GN患儿肾脏活检病理类型以膜性肾病(MN)为主,HBV抗原成分以HBeAg及HBcAg为主,HBV-cccDNA阳性组患儿HBeAg及HBcAg检出率明显高于HBV-cccDNA阴性组(χ~2=5.652,P=0.027;χ~2=12.523,P=0.001)。ROC曲线评价,HBV-cccDNA水平检测能有效鉴别观察组HBV-GN患儿和对照组患儿,AUC=0.804 (95%CI:0.709~0.883)。10例规范治疗且有完整追踪治疗资料的HBV-GN患儿在治疗第2周时其HBV-cccDNA水平明显降低,治疗至第12周时其中7例患儿HBeAg转阴,无蛋白尿、血尿症状,ALT和AST水平均正常;治疗无效的3例患儿血清中HBV-cccDNA水平均高于其余7例标本。结论:HBV-cccDNA高表达与HBV-GN患儿肝功能、蛋白尿及肾脏HBV抗原检出有密切关联,检测HBVcccDNA水平对儿童HBV-GN患儿的辅助诊断及疗效评估具有潜在的临床应用价值。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒相关性肾小球肾炎 乙肝病毒共价闭合环状双链dna 儿童 乙型肝炎病毒
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慢性乙型肝炎患者肝组织HBV cccDNA、总HBV DNA与血清HBV DNA的相关性及其与临床的关系 被引量:8
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作者 饶敏 陆伟 +2 位作者 张占卿 张小楠 曹婕 《肝脏》 2012年第6期381-384,共4页
目的探讨慢性乙型肝炎患者肝组织HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)、肝组织总HBV DNA(HBV tDNA)与血清HBV DNA之间的相关性及其与临床的关系。方法78例慢性乙型肝炎患者入选本研究。肝组织β—globin DNA、HBV cccDNA和HBV tDNA采用实时... 目的探讨慢性乙型肝炎患者肝组织HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)、肝组织总HBV DNA(HBV tDNA)与血清HBV DNA之间的相关性及其与临床的关系。方法78例慢性乙型肝炎患者入选本研究。肝组织β—globin DNA、HBV cccDNA和HBV tDNA采用实时荧光定量PCR方法检测,平均每个肝细胞HBV cccDNA和HBV tDNA含量(拷贝/cell)=HBV cccDNA(实测值)/β-globin DNA(实测值)和HBV tDNA(实测值)/β-globin DNA(实测值),肝组织HBV cccDNA和HBV tDNA含量的计算单位定义为log10拷贝/10^6 cell;采用实时荧光定量PCR、ELISA法检测血清HBV DNA和HBV标志物;采用免疫组织化学方法检测肝细胞中HBsAg和HBcAg的表达。统计分析采用pearson相关分析及t检验。结果(1)肝组织HBV cccDNA与HBV tDNA定量呈正相关(r=0.696,P〈0.001);肝组织HBV cccDNA与血清HBV DNA定量呈正相关(r=0.304,P%0.01);肝组织HBV tDNA与血清HBV DNA定量呈正相关(r=0.341,P〈0.01);(2)肝细胞内HBcAg定性检测阳性患者的血清HBV DNA定量明显高于阴性患者,且差异有统计学意义(P〈0.05);肝细胞内HBcAg定性检测阳性患者与阴性患者的肝组织HBV cccDNA和HBV tDNA定量差异均无统计学意义和(P均〉0.05);(3)肝细胞内HBsAg定性检测阳性患者的血清HBV DNA定量明显高于阴性患者,且差异有统计学意义(P〈0.05);肝细胞内HBsAg定性检测阳性患者与阴性患者的肝组织HBV cccDNA和HBV tDNA定量差异均无统计学意义(P〉0.05);(4)HBeAg(+)/抗HBe(-)患者血清HBV DNA定量明显高于HBeAg(-)/抗-HBe(+)患者,且差异有统计学意义(P〈0.05);HBeAg(+)/抗-HBe(-)患者肝组织HBV cccDNA和HBV tDNA定量与HBeAg(-)/抗-HBe(+)患者比较差异均无统计学意义(均P〉0.05);(5)肝组织HBV cccDNA、HBV tDNA以及血清HBV DNA三者与肝脏炎症活动度及纤维化程度均无显著相关性(P〉0.05)。结论(1)血清HBV DNA定量结果并不一定能完全反映患者肝组织中HBV cccDNA和HBV tDNA含量,尤其在血清HBV DNA%500拷贝/mL时,肝组织中仍存在HBV cccDNA和HBV tDNA,且含量大小不等。(2)肝细胞内HBcAg定性检测阳性或者HBsAg定性检测阳性患者的血清HBV DNA定量均明显高于阴性患者;而两者的肝组织HBV cccDNA和HBV tDNA定量均没有显著差异;(3)HBeAg(+)/抗-HBe(-)患者血清HBV DNA定量明显高于HBeAg(-)/抗-HBe(+)患者,而两者的肝组织HBV cccDNA和HBV tDNA均没有显著差异;(4)肝组织HBV cccDNA、HBV tDNA及血清HBV DNA与肝脏炎症活动度和纤维化程度均无显著相关性。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 共价闭合环状dna 肝组织 实时定量PCR
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稳定表达HBVC蛋白羧基端siRNA抑制HBV cccDNA的实验研究 被引量:7
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作者 唐世刚 杨兵厂 刘莉 《中国感染控制杂志》 CAS 2005年第3期198-201,共4页
目的 研究乙型肝炎病毒(HBV)C蛋白羧基端短小的干扰RNA(siRNA)对HBV超螺旋双链闭环DNA(cccDNA)水平的影响。方法 设计合成1对能稳定表达针对HBVC基因羧基端(2 389nt - 2 4 10nt)序列的2 2 -mersiRNA寡核苷酸,其两端带有限制性酶切位点... 目的 研究乙型肝炎病毒(HBV)C蛋白羧基端短小的干扰RNA(siRNA)对HBV超螺旋双链闭环DNA(cccDNA)水平的影响。方法 设计合成1对能稳定表达针对HBVC基因羧基端(2 389nt - 2 4 10nt)序列的2 2 -mersiRNA寡核苷酸,其两端带有限制性酶切位点,表达后可形成发夹结构,退火后形成双链;然后将这一双链寡核苷酸与重组腺相关病毒载体(rAAV)连接,构建重组体rAAV siRNA。将重组体rAAV siRNA加入培养增殖良好的2 2 .1.5细胞中孵育,72h后用实时聚合酶链反应(RealtimePCR)法检测经处理过的2 2 .1.5细胞和培养上清中HBVcccDNA的表达水平和HBVDNA的复制水平。结果 重组体rAAV siRNA实验组HBVcccDNA水平较空白对照组显著降低(P <0 .0 1) ,HBVDNA的复制水平在实验组亦明显下降;在无关序列对照组未发现对HBVcccD NA水平影响和HBVDNA复制的抑制作用。结论 HBV羧基端siRNA能显著降低HBVcccDNA的水平和HBVDNA的复制。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 短小干扰RNA 超螺旋双链闭环dna
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乙型肝炎患者外周血单个核细胞中HBV DNA和HBVcccDNA定量检测 被引量:3
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作者 钟艳丹 谭德明 +3 位作者 李涛 刘国珍 徐旭雯 刘菲 《中国感染控制杂志》 CAS 2007年第5期292-296,共5页
目的通过对外周血单个核细胞(PBMCs)中乙型肝炎病毒(HBV)DNA和HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)的检测,证实不同临床类型乙型肝炎患者PBMCs被HBV感染的事实。方法提取PGM-HBV质粒,用双蒸水连续10倍梯度稀释,建立浓度为3×10^2~... 目的通过对外周血单个核细胞(PBMCs)中乙型肝炎病毒(HBV)DNA和HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)的检测,证实不同临床类型乙型肝炎患者PBMCs被HBV感染的事实。方法提取PGM-HBV质粒,用双蒸水连续10倍梯度稀释,建立浓度为3×10^2~3×10^5拷贝/mL PGM-HBV标准系列;常规分离全血中的PB-MCs,提取DNA,应用实时荧光定量聚合酶链反应法检测PBMCs中HBV DNA和HBVcccDNA。结果78例慢性乙型肝炎患者,PBMCs中HBVcccDNA阳性31例(39.74%)。HBVcccDNA与血清和PBMCs中HBV DNA阳性率和滴度有良好的一致性。但在不同临床类型的乙型肝炎患者之间,PBMCs中HBVcccDNA的检出率无差别(P〉0.05)。结论根据HBVcccDNA检测结果阳性,进一步证实HBV能感染PBMCs,并在其中复制;PBMCs中HBVcccDNA阳性与疾病的炎症活动和疾病的严重性无关。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 共价闭合环状dna 外周血单个核细胞 肝炎 乙型 慢性
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环介导等温扩增(LAMP)试剂盒检测石蜡包埋肝组织中乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA) 被引量:1
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作者 周冬青 刘成永 +7 位作者 王骥 王春颖 张克球 刘加彬 黄海滨 候远沛 成松 王鑫 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期245-249,共5页
目的建立一种检测石蜡包埋的肝组织中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)的新方法,并探讨其应用价值和临床意义。方法提取30例慢性HBV感染患者的石蜡包埋肝组织中的DNA,采用... 目的建立一种检测石蜡包埋的肝组织中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA)的新方法,并探讨其应用价值和临床意义。方法提取30例慢性HBV感染患者的石蜡包埋肝组织中的DNA,采用质粒安全ATP依赖性DNA酶(plasmid-safe ATP-dependent DNase,PSAD)消化,去除非cccDNA后,加入引物及Bst DNA酶进行环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),将检测结果与临床实验室资料结合并进行分析,以判断其临床应用价值。结果 30例HBV感染患者中,有17例HBV cccDNA阳性,阳性检测率56.67%。其中肝癌5例、肝硬化4例、重型乙型肝炎5例、慢性乙型肝炎(轻-中度)3例。提示肝组织HBV cccDNA阳性可能与疾病进展密切相关,与血清HBV cccDNA阳性有一定的相关性,与乙型肝炎病毒血清免疫标志物以及肝功能状况无明显相关。结论 LAMP法能检测到石蜡包埋肝组织中的HBV cccDNA,结合临床实验室资料,对判断抗病毒药物疗效及研究乙型肝炎致病机制具有一定的意义。 展开更多
关键词 环介导等温扩增(LAMP) 乙型肝炎病毒(HBV) 共价闭合环状dna(cccdna)
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