手足口病患儿EV71、CoxA16及EBV和CMV的检测与临床意义

手足口病（handfootandmouthdisease，HFMD）是一种全球性的急性传染病，病原体以肠道病毒71型（enterovirus71，EV71）和柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus，CoxA16）为主。轻者预后良好，重症多合并神经系统疾病。

EV71和COXa16感染手足口病患儿血清IL-6及IL-37水平检测的临床意义

目的检测EV71和COXa16感染手足口病(HFMD)患儿血清白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-37(IL-37)水平并分析其意义。方法选取2012年1月1日~2017年12月31日我院儿科收治175例HFMD患儿作为研究对象,其中确诊的单纯EV71感染患儿100例,单纯CoxA16感染患儿65例,EV71和CoxA16合并感染患儿10例,另选取同期50例健康体检儿童作为对照组,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清IL-6和IL-37水平并分析其关系。结果EV71组、CoxA16组及EV71合并CoxA16组的IL-6、IL-37水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);EV71组的IL-6、IL-37水平均显著高于CoxA16组、EV71合并CoxA16组,差异有统计学意义(P<0.05)。EV71组重症患儿的IL-6、IL-37水平均显著高于轻症患儿,差异有统计学意义(P<0.05)。EV71组IL-6与IL-37水平成正相关(P<0.05);EV71组IL-6与外周血单核细胞绝对值成正相关(P<0.05);EV71组IL-37水平与外周血中性粒细胞绝对值成正相关(P<0.05)。结论IL-6和IL-37参与了EV71和COXa16感染所致HFMD发病的病理生理过程,并与疾病的严重程度有关。

CoxA16感染不同病情手足口病患者NK细胞表达变化及临床意义

目的：分析探讨NK细胞在Cox A16感染的不同病情手足口病（hand-foot-mouth disease,HFMD）患者中的表达差异及临床意义。方法：收集2015年4-8月本院感染科确诊的Cox A16感染HFMD病例外周血标本54例,按临床表现分为普通型组（16例）、重型组（18例）和危重型组（20例）;同时,收集EV71感染重型HFMD病例18例作为对照组。患者年龄均为15~24个月。采用流式细胞术对上述外周血标本中NK细胞进行检测。结果：与正常健康儿童NK细胞参考值比较,普通型患者中NK细胞在淋巴细胞亚群中的相对百分比明显增高,而在重症病例中,重型患者NK细胞相对百分比降低,危重型病例NK细胞却显著升高。普通型组与重症组（包括重型组及危重型组）及重型组与危重型组组间NK细胞百分比比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。此外,EV71感染重症病例中NK细胞百分比高于正常值,与Cox A16感染重症病例的NK细胞低于正常值相反,两组间NK细胞表达差异比较有统计学意义（P〈0.05）。结论：Cox A16感染HFMD患者外周血中NK细胞的表达与其病情进展程度具有很大的相关性;而且在重症HFMD病患者中NK细胞的表达高低还与患者感染的不同病毒类型有关。推测NK细胞在不同病情HFMD中的活化效应不仅受到感染病毒致病性高低的影响,而且在病情危重时,在很大程度上主要受到危重型临床症状的影响。

四季抗病毒合剂联用利巴韦林对CoxA16病毒增殖和感染作用的影响

目的探讨四季抗病毒合剂（Sijikangbingdu mixture，SJM）、利巴韦林注射液（Ribavirin injection，RBV）和SJM＋RBV对A16型柯萨奇病毒（CoxAl6）增殖和感染作用的影响。方法分别使用75TCID5、50TCID50CoxAl6感染Vero细胞模型和5日龄BALB／c乳鼠腹腔内注射1×10^6TCID50CoxAl6建立感染动物模型，采用SJM、RBV和SJM＋RBV给药后，检测CoxAl6感染Veto细胞损伤程度等指标，计算各用药方式对病毒感染乳鼠的死亡率、生存时间、体质量、临床症状评分等参数。结果SJM、RBV和SJM＋RBV对CoxAl6细胞的增殖具有剂量依赖性显著抑制作用，即随其剂量增大抑制作用显著增强（P〈0．01）。SJM、RBV和SJM＋RBV对CoxAl6病毒均具有显著抑制作用（P〈0．01），但SJM＋RBV组的抑制作用最强（P〈0．01或P〈0．05）。SJM、RBV和SJM＋RBV均能显著改善CoxAl6病毒感染乳鼠的临床症状，尤其SJM＋RBV组的乳鼠生存率和临床评分等指标均显著好于SJM和RBV组。结论SJM＋RBV抑制CoxAl6细胞增殖作用、提高感染CoxAl6病毒BALB／c乳鼠的存活率、延长其存活时间等保护效应均显著优于SJM、RBV单用组，并显著下移了抗CoxAl6病毒的有效剂量（相对SJM、RBV单用有效剂量而言），为临床治疗手足口病提供了用药新策略。

CoxA16感染手足口病患儿T细胞亚群及细胞因子的表达

目的检测Cox A16感染手足口病患儿T细胞亚群及细胞因子的表达,探讨其临床意义及患儿免疫功能变化。方法采用实时荧光PCR检测2013年4月至2014年9月咽拭子标本为Cox A16阳性重症手足口病患儿61例,分别在疾病急性期和恢复期采集患儿外周抗凝全血及空腹静脉血,另选40例健康体检儿童为健康对照组。采用流式细胞仪测定T细胞亚群;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清IL-4、IL-6,对检测结果进行统计学比较。结果急性期同恢复期和健康对照组比较,T细胞亚群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比例降低,CD8+比例升高,差异有统计学意义(tCD3+=4.217,4.978;tCD4+=4.196,5.103;tCD4+/CD8+=3.326,3.894;tCD8+=4.018,4.325,P<0.05);与恢复期和健康对照组比较,患儿急性期血清IL-4减低,而IL-6增高,差异有统计学意义(tIL-4=5.824,6.213;tIL-6=6.352,7.195,P<0.05)。结论 Cox A16感染手足口病患儿机体存在细胞免疫功能紊乱,可能与其致病机制有关。

感染CoxA16与EV71型手足口病的临床特点及流行特征对比

目的:探讨感染肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒16型(CoxA16)手足口病的临床特点及流行特征,为手足口病治疗提供依据。方法:选取2015年4月-2017年11月本院收治的手足口病患者80例。根据粪便样本结果分为CoxA16组(n=56)和EV71组(n=24)。比较两组临床特点(发热天数、最高体温、心率、流涎、咳嗽、呕吐、腹泻、嗜睡、肌震颤、易惊、出疹部位、脑膜脑炎)、生化指标水平(WBC、IgA、IgG、IgM)、流行特征(发病年龄、地区分布及时间分布)。结果:两组发热天数、最高体温、心率、流涎、咳嗽、呕吐、足底部及臀部出疹发生率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);CoxA16组腹泻、肌震颤、易惊发生率均高于EV71组,嗜睡、手掌心出疹、脑膜脑炎发生率均低于EV71组,比较差异均有统计学意义(P<0.05);两组WBC、IgA、IgG和IgM水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05);两组发病年龄段与发病地区分布比较,差异均无统计学意义(P>0.05);EV71组发病多发生在4～9月份,且发病率高于CoxA16组(P<0.05)。结论:感染CoxA16与EV71手足口病的年龄段及地区分布特征基本相同,但是临床特点及发病时间分布存在明显差异,而WBC、IgA、IgG、IgM对于感染肠道病毒CoxA16与EV71手足口病的区分、鉴别无明显意义。

手足口病肠道病毒EV71和CoxA16感染的检测分析

手足口病（Hand-foot-mouth disease,HFMD）是由多种肠道病毒引起的常见传染病,以婴幼儿发病为主。大多数患者症状轻微,以发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹为主要特征。引起手足口病的病原体主要为肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A组16型（CoxA16）,其中EV71不仅引起HFMD,

在园儿童携带EV71和CoxA16的调查研究

目的了解手足口病的流行期和非流行期在园儿童肠道病毒EV71与柯萨奇病毒CoxA16携带水平。方法采用随机整体抽样方法,对3家幼儿园5岁以下儿童采集咽拭子,进行实时荧光PCR检测。结果非流行期176名在园儿童有4名CoxA16阳性,阳性率为2.3%,2名EV71阳性,阳性率为1.1%。流行期216名在园儿童有7名CoxA16阳性,阳性率为3.2%,5名EV71阳性,阳性率为2.3%。结论深圳某地手足口病在流行期和非流行期,在园儿童病原体携带无显著差异;应采取措施加强对手足口病的预防和控制工作。

深圳市非流行期在园儿童携带EV71和CoxA16的调查研究

目的了解非流行期在园儿童肠道病毒EV71和柯萨奇病毒CoxA16携带水平。方法采用随机整体抽样对三家幼儿园176名5岁以下儿童采集咽拭子样,进行实时荧光PCR法检测。结果 176名在园儿童有4人CoxA16阳性,阳性率为2.3%,2人EV71阳性,阳性率为1.1%。结论深圳某地非流行期在园儿童柯萨奇病毒CoxA16和肠道病毒EV71携带率分别是2.3%和1.1%,且年龄、性别、户籍、幼儿园等级、病原体差异不明显。

基于全基因组序列和E距离信息的CoxA16病毒亲缘关系分析

柯萨奇病毒A组16型(CoxsackievirusA16,CoxA16)病毒是引起手足口病(Hand,footandmouthdisease,HFMD)的主要病原体。为了解不同地区CoxA16病毒株的系统进化关系,收集了NCBI数据库中注释有具体地区分布的23条CoxA16全基因组序列,分别采用Kimura2-parameter法和E距离法对病毒株进行亲缘关系分析。结果表明,基于E距离的系统进化树最大程度地吻合了Kimura 2-parameter遗传距离法构建的系统进化树,且E距离法普适性较强,颇具应用潜力,为更精确地判断病毒株之间的进化关系提供了一条新途径。

手足口患儿EV71、CoxA16和其他肠道病毒感染情况及基因型分析

目的探究2018—2020年平顶山市新华区手足口患儿EV71、CoxA16和其他肠道病毒感染情况及基因型状况。方法选择平顶山市新华区疾病预防控制中心2018年7月至2020年12月收治的104例手足口病患儿作为研究对象,通过患儿粪便及肛拭子标本对患儿病毒核酸进行检测,观察患儿肠道病毒病原学构成情况及分析患儿EV71病毒及CoxA16病毒VP1基因中各基因型同源性,并记录手足口病患儿临床症状表现及外周血白细胞水平。结果104例手足口病阳性样本中,EV71病毒感染54例(51.92%),CoxA16病毒感染7例(6.73%),其他肠道病毒感染43例(41.35%),EV71病毒感染比例高于CoxA16病毒感染比例,差异有统计学意义(P<0.05);CoxA16 VP1基因序列与A、B、C基因型代表株核苷酸同源性为82.6%~82.9%,与D基因型代表株核苷酸同源性为92.7%~99.2%;EV71 VP1基因序列与C4基因型代表株核酸同源性为92.4%~96.8%,与C4a基因型代表株核苷酸同源性为94.3%~96.8%,与C4b基因型代表株核苷酸同源性为92.4%~93.7%;EV71病毒、CoxA16病毒及其他肠道病毒感染组之间发热、皮疹等临床症状所占比例及外周血白细胞水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论手足口病患儿中EV71病毒感染比例相比于CoxA16病毒感染比例更高;且CoxA16及EV71 VP1基因序列均存在高同源性的病毒株;但各病毒株感染后临床症状表现几乎一致。

不同标本EV71和CoxA16检测对于手足口病重症患者的临床意义分析

目的:了解泉州市2008年儿童手足口病重症病例不同标本中肠道病毒EV71和CoxA16的感染情况,为我市手足口病的治疗和防控提供依据。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及实时荧光RT-PCR方法,对泉州市36例重症病例的咽拭子、疱疹液及脑脊液标本共104份(咽拭子35份,疱疹液32份,脑脊液36份)进行EV7I和CoxA16的检测,并对部分标本进行基因分型。结果:36例重症病例均只检出肠道病毒EV71,阳性率为100%,咽拭子、疱疹液、脑脊液的检出率分别为97.2%、100%、2.8%,基因分型为C4基因亚型,与国内其他省检出的基因型相同。结论:RT-PCR和实时荧光RT-PCR是手足口病快速、敏感、特异的检测方法。咽拭子和疱疹液的检出率无显著差异,所有重症病例均为C4基因亚型的EV7I感染,只有1例脑脊液检出EV7I,并且预后较差。

2008年湖州市肠道病毒71型和COXA16型的监测分析

目的:了解湖州市肠道病毒的感染情况,为制定预防和控制肠道病毒感染提供依据。方法:采用荧光定量RT-PCR和RT-PCR方法,对湖州市101例疑似肠道病毒感染者的疱疹液、咽拭子及粪便标本进行肠道病毒通用核酸、肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16的核酸检测。结果:肠道病毒通用核酸阳性87例,阳性率为86.14%(87/101)。其中EV71阳性20例,阳性率为19.80%(20/101);Cox A16阳性1例,阳性率为0.99%(1/101),二者均阴性14例。男女发病率分别为18.46%(12/65)和25.0%(9/36)。疱疹液中EV71检出率24.32%(9/37),Cox A l6检出率2.70%(1/37);咽拭子中EV71检出率18.96%(11/58),Cox A l6未检出;粪便标本中EV71和Cox A l6均未检出。结论:EV71是引起湖州市儿童手足口病的主要病原体,Ev71和Cox A16的发病率无性别差异,疱疹液、咽拭子标本中EV71及Cox A16的检出率明显高于粪便标本,要加强对Ev71和Cox A16的鉴别诊断,有利于提出更好的预防和控制措施。

EV71和CoxA16病毒的区别与联系

手足口病（hand，foot and mouth disease，HFMD）是婴幼儿常见传染病，主要表现为发热，手、足和口腔部的疱疹，由非脊髓灰质炎肠道病毒属的柯萨奇病毒（Coxsackievirus）A（CoxA）和B组，埃可病毒（ECHO viruses）4、6、7型等感染引起，CoxA16和人肠道病毒71型（enterovirus 71，EV71）感染尤其常见。1958年，加拿大首次分离出CoxA16[1]，1969年，加利福尼亚首次报道了EV71[2]，至1972年美国纽约、孟加拉国、澳大利亚陆续出现中枢神经系统感染流行时才真正分离出EV71病毒[1]。早期发现的手足口病病原体主要为CoxA16，20世纪70年代后，EV71与CoxA16感染交替出现，成为手足口病的主要病原体[3]。二者均在世界范围内引起多次暴发。CoxA16：美国（1968年）[4]、日本（1970年）[5]、澳大利亚（1991年）[6]、台湾（2006至2008年）[7]、西班牙（2009年）[8]；EV71：马来西亚（2000至2003年）[9]、新加坡（2000年）[10]、泰国（2008至2009）[11]、韩国（2008至2009年）[12]、中国阜阳（2008年）[13]。显然，手足口病已成为一种世界性疾病，已引起了全世界人民的重视。本文拟从病原学、临床表现、病毒基因型和核苷酸序列与临床表现的关系以及发病机制方面，对手足口病的两种主要病原体，即EV71和CoxA16的区别和联系进行综述。

PE、EV71及CoxA16基因探针的制备

目的制备地高辛标记基因探针,利用分子杂交试验同时检测手足口病患者粪便标本中的肠道病毒(Pan-enterovirus,PE)、肠道病毒71型(Enterovirs 71EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Coxsachie virus,CoxA16)。方法根据GenBank已发表的基因序列,分别在PE、EV71、CoxA16保守区设计3对特异性寡核苷酸引物,进行实时荧光定量PCR检测。从PE、EV71、CoxA16阳性标本中分离病毒,提取RNA,以RT-PCR扩增产物作为基因探针的目的基因,采用随机引物法进行Digxigenin-11-dUTP标记,采用分子杂交试验检测3种基因探针的灵敏性和特异性。结果 RTPCR分别扩增出116、226、208bp目的基因片段,经标记后作为检测PE、EV71、CoxA16的3种高纯度的基因探针,对相应病毒RNA的最低检出限均为1pg,可分别与PE(+)、EV71(+)、CoxA16(+)标本提取的RNA发生特异性杂交,与乙型脑炎病毒、诺如病毒、轮状病毒、H3N2、甲型H1N1流感病毒的核酸无杂交反应。结论制备的PE、EV71及CoxA16基因探针灵敏、特异,操作简单,适用于手足口病病原的实验室检测。

CoxA16感染手足口病患儿免疫球蛋白、T细胞亚群变化的研究

目的检测Cox A16感染手足口病患儿血清免疫球蛋白、外周血T细胞亚群的变化,探讨Cox A16引起手足口病的致病机制。方法采用实时荧光PCR检测2013年5月-2014年5月咽拭子标本为Cox A16阳性患儿78例。按疾病严重程度分为重症病例组和普通病例组,另选40例健康体检儿童为健康对照组。采用免疫比浊法检测血清Ig M、Ig A、Ig G;流式细胞仪测定T细胞亚群,对检测结果进行比较。结果重症病例组患儿血清Ig M、Ig A较普通病例组和健康对照组减少,差异有统计学意义(tIg M=3.614、4.127;tIg A=3.152、3.873,P<0.05),普通病例组Ig G含量高于重症病例组和健康对照组,差异有统计学意义(tIg G=2.951、3.236,P<0.05);与普通病例组和健康正常对照组比较,重症病例组T细胞亚群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比例降低,CD8+比例升高,差异有统计学意义(tCD3+=3.314、4.247;tCD4+=3.124、4.043;tCD4+/CD8+=3.251、3.867;tCD8+=3.326、3.915,P<0.05)。结论 Cox A16病毒感染后,患儿机体体液免疫受抑制,细胞免疫功能降低,可能与其致病机制有关。

甘露消毒丹对CoxA16小鼠模型的影响

目的:探讨甘露消毒丹对柯萨奇病毒A16型(CoxA16)小鼠模型的影响。方法:7日龄ICR小鼠150只,随机分为正常组、模型组、阿昔洛韦组、甘露消毒丹组,每组25只;除正常组外,其余各组每只小鼠腹腔内注射20ul 107TCID50的CoxA16标准株原液进行造模,造模后的第5天,除正常组和模型组外,其余4组使用相应的药物干预治疗。观察小鼠临床表现;在光镜下观察肌肉组织形态学变化;用细胞增殖与毒性检测试剂盒(CCK-8)检测肌肉匀浆液对Hela细胞存活率的变化;电镜观察肌肉组织病毒颗粒的变化,采用ELISA法检测肌肉组织IL-6、IL-10、INF-γ的浓度。结果:与模型组比较,发现阿昔洛韦及甘露消毒丹(24.4g/kg、12.2g/kg、6.1g/kg)均可提高小鼠的生存率并使体重恢复到正常情况。HE染色和电镜结构表明甘露消毒丹(24.4g/kg、12.2g/kg、6.1g/kg)和阿昔洛韦均可减轻CoxA16病毒对肌肉的损伤,并减少肌肉内病毒的颗粒。通过肌肉组织匀浆液对Hela细胞存活率的变化表明甘露消毒丹能抑制病毒在肌肉内的生长。ELISA检测结果发现阿昔洛韦与甘露消毒丹均能减少IL-6的浓度,并提高IL-10、INF-γ的表达。结论:甘露消毒丹对CoxA16感染的小鼠有保护作用,能够抑制并杀死体内的CoxA16病毒。

手足口病病原体EV71和CoxA16的研究进展

手足口病（hand，foot and mouth disease，HFMD）是一种以手足皮肤和口腔黏膜疱疹为主要症状的小儿急性传染病。自1957年新西兰的Seddon首此对该病进行报道以后，在美国、荷兰、瑞典等欧美国家和日本、马来西亚、新加坡等亚太地区都有不同程度的暴发流行。2006年，世界卫生组织公布该病在法定传染病中的发病率位居第四位，我国在2008年将其列为丙类传染病。

2014年-2015年龙岩市非EV71、非CoxA16手足口病肠道病毒病原谱分析

目的了解2014年-2015年龙岩市判定为其他EV的HFMD患者病原构成情况,为龙岩市的HFMD防控提供科学依据。方法对580例其他EV HFMD患者的标本用RT-PCR方法检测Cox A6、Cox A10和Echo30,仍无法分型的样本,经RD细胞分离培养后,再次对培养物进行特异性核酸检测。结果 580份样本中检出EV阳性580份,阳性率为100.00%。Cox A6检出率最高,达61.38%,2015年高达71.55%。HFMD其他EV样本分布均以Cox A6为主,阳性检出率高峰均在10月。阳性检出人群主要集中在3岁及以下儿童,占检测总样本数的91.03%,其中2岁~组所占比例最高,为39.48%,不同年龄组阳性检出率差异有统计学意义(χ~2=416.88,P<0.05)。结论 2014年-2015年引起龙岩市HFMD的其他EV中,病原型别众多,尤其是Cox A6已成为本市HFMD的主要病原体,因此建议将其纳入HFMD的日常监测,并在其多发季节加大防控力度。

小儿手足口病中EV71与CoxA16两种肠道病毒同血清检验指标的相关性检测分析

手足口病由肠道病毒感染引起,夏秋季为高发期,是丙类传染病,患者与病毒携带者多为传染源,病毒主要通过消化道及呼吸道传播,具有危害大、流行性广、途径多、易传染等特点,近年来发病率不断攀升。为探究小儿手足口病中EV71与CoxA16两种肠道病毒同血清检验指标检测的相关性,现进行如下报道。