Design,synthesis and biological activity of some novel benzimidazole derivatives against Coxsackie virus B_3

A series of novel benzimidazole derivatives was synthesized and their anti-Coxsackie virus B3 （CVB3） activity was evaluated in VERO ceils. Compounds 9 and 10 exhibited better inhibitory activity than those of ribavirin （RBV） with IC50 values of 5.30 and 1.06 μg/mL, respectively. ？2009 Xian Jin Luo. Published by Elsevier B.V. on behalf of Chinese Chemical Society. All rights reserved.

牛磺酸对培养大鼠心肌细胞感染 Coxsackie B_3 病毒的影响

目的：观察牛磺酸对病毒性心肌炎模型的保护作用。方法：取新生ＳＤ大鼠心室肌制备培养搏动心肌细胞，１８ｈ后接种１００ＴＣＩＤ５０的ＣｏｘｓａｃｋｉｅＢ３病毒（ＣＶＢ３）做为实验性病毒性心肌炎模型。结果：牛磺酸能剂量依赖性地减少感染ＣＶＢ３后心肌细胞乳酸脱氢酶、天冬氨酸氨基转移酶的释放，降低上清液的病毒滴度，对搏动停止、细胞病变及超微结构均有保护作用，并发现感染ＣＶＢ３后心肌细胞内牛磺酸含量下降。结论：临床应用牛磺酸治疗病毒性心肌炎有实验依据。

应用嗜鼠心肌Coxsackie B_3病毒反复感染致BALB/c小鼠心肌损伤

应用嗜鼠心肌ＣｏｘｓａｃｋｉｅＢ３病毒（ＣＶＢ３ｍ）给ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠重复腹腔注射，连续３次，间隔３０天，末次注射后１０天处死小鼠。光学显微镜检查发现，小鼠心肌可见不同时期的病灶（坏死灶、瘢痕），心肌损伤检出率达１００％。应用ＴＵＮＥＬ法检测发现，８２．５０％感染组鼠心肌中可见散在心肌细胞凋亡，与对照组（２３．０８％）比较，Ｐ＜０．０１，有极显著性差异。提示ＣＶＢ３ｍ重复感染可致ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠慢性心肌损伤，心肌细胞凋亡参与心肌损伤的发生与发展。

Coxsackie B-3病毒对BALB/C小鼠心肌超微结构的影响

ＢＡＬＢＣ小鼠腹腔注射柯萨奇Ｂ—３病毒后，第三天心肌呈现轻度弥散性病变，大多数细胞结构正常，少数细胞发生病变，心肌闰盘局部扩张，部分线粒体的嵴分解，基质内有少量细小的絮状物质，Ｚ线扭曲．第五天病灶增大，少数心肌细胞结构正常，大部分心肌细胞发生病变．闰盘双膜间隙加宽区域增多，线粒体中絮状高电子密度物质增加，肌原纤维出现肌节病变．至第七天，病灶进一步扩大，整个线粒体遍布钙化的絮状物，肌丝大面积溶解，且细胞间质明显增加．

槐果碱对感染CVB_3小鼠干扰素和肿瘤坏死因子水平的影响

目的 :研究槐果碱对感染 CVB3小鼠干扰素和肿瘤坏死因子活性的影响。方法 :制备 CVB3病毒性心肌炎小鼠模型 ,用 MTT比色分析法检测小鼠脾细胞 IFN-α与 TNF的诱生量以及血清中 型干扰素 (IFN- )和TNF水平。结果 :槐果碱 5 0 mg· (kg· d) - 1 皮下注射可提高正常小鼠血清 TNF含量。与正常对照组比较 ,病毒对照组 TNF活性明显升高 ,IFN无明显变化。槐果碱 5 0 m g· (kg· d) - 1 和 2 5 mg· (kg· d) - 1 两个剂量灌胃均明显升高 CVB3感染小鼠血清和脾细胞诱生的 IFN-α活性。槐果碱两种途径、四个剂量给药均明显降低感染小鼠血清中TNF活性 ,其中槐果碱 2 5 mg· (kg· d) - 1灌胃和槐果碱 30 m g· (kg· d) - 1皮下注射还明显降低脾细胞中的 TNF诱生量。结论 :槐果碱升高 CVB3感染小鼠的 IFN活性 ,降低 TNF的活性 ,可能是其体内抗

益心康对体外感染CVB_3病毒心肌细胞凋亡相关因子caspase-3 mRNA和颗粒酶B、穿孔素表达的影响

目的研究中药益心康对感染柯萨奇B_3病毒(Coxsackie virus B,CVB_3)新生乳鼠体外心肌细胞凋亡相关基因caspase-3 mRNA和颗粒酶B、穿孔素(PFP)表达的影响,探讨中药益心康治疗病毒性心肌炎的作用机制。方法原代培养SD大鼠乳鼠心肌细胞,建立体外感染CVB_3的心肌细胞模型,将心肌细胞分为4组:正常对照组、病毒组、中药益心康组及利巴韦林组。用RT-PCR法检测凋亡相关因子caspase-3 mRNA的表达,ELISA法检测颗粒酶B、PFP的表达。结果中药益心康组caspase-3 mRNA、PFP、颗粒酶B的相对表达量明显低于病毒组(P<0.01)和利巴韦林组(P<0.05)。结论中药益心康能降低大鼠心肌细胞caspase-3 mRNA、颗粒酶B、PFP表达,从而抑制CVB_3感染大鼠心肌细胞凋亡。

虎杖蒽醌化合物抗CVB_3病毒的实验研究

目的：为了解虎杖蒽醌化合物晶Ⅰ、晶Ⅳ抗ＣＶＢ３病毒的药效，从而明确虎杖的抗病毒性能并开发利用。方法：以病毒唑为阳性对照，利用空斑减数实验进行研究。结果：在ＨＥＰ２细胞系统中，晶Ⅰ对ＣＶＢ３直接杀灭、增殖抑制、感染阻断的ＥＤ５０分别为１．５４μｇ／ｍＬ、８．３４μｇ／ｍＬ、３．０６μｇ／ｍＬ，晶Ⅳ的相应系数分别为１．７９μｇ／ｍＬ、７．０５μｇ／ｍＬ、３．１７μｇ／ｍＬ，而病毒唑的相应系数分别为６．２６μｇ／ｍＬ、７．５５μｇ／ｍＬ、７．５０μｇ／ｍＬ。结论：晶Ⅰ对ＣＶＢ３的治疗指数（ＴＩ）为病毒唑对ＣＶＢ３的ＴＩ的４．７、１．０、２．９倍；晶Ⅳ对ＣＶＢ３的治疗指数（ＴＩ）为病毒唑对ＣＶＢ３的ＴＩ的２７．５、８．４、１８．８倍，提示晶Ⅰ、晶Ⅳ的抗ＣＶＢ３方面有一定优势。

桑寄生乙醇提取物抗柯萨奇病毒B_3的实验研究

目的 :为研制抗柯萨奇病毒B3 (CVB3 )新药 ,观察了桑寄生乙醇提取物不同部分抗CVB3 药效。方法 :以病毒唑为阳性对照 ,用空斑减数实验检测了抗CVB3 药效。结果 :在HEp 2细胞系统中 ,乙酸乙酯萃取部分 (B)对CVB3 直接杀灭、感染阻断、增殖抑制的ED50 为 2 .32 ,0 .2 4,1.91μg·ml-1。正丁醇萃取部分 (C)的相应数值分别为 1.44 ,2 .0 6 ,3.70 μg·ml-1。病毒唑对CVB3 增殖抑制的ED50 为 7.5 5 μg·ml-1。结论 :桑寄生B部分对CVB3 直接杀灭、感染阻断、增殖抑制的治疗指数 (TI)为 2 2 .6 ,2 19,2 7.5 ,C部分的相应TI为 115 ,16 5 ,2 1.6。病毒唑对CVB3 增殖抑制的TI为 38,数值相近。桑寄生B ,C部分抗CVB3 作用值得开发。

小柴胡汤及其分解剂对柯萨奇B_3m病毒感染乳鼠心肌保护及细胞免疫调节作用的研究

目的 :观察小柴胡汤及其分解剂Ⅰ号和分解剂Ⅱ号对心肌细胞的保护和对机体的免疫调节作用。方法 :以柯萨奇病毒B3亲心肌株 (CVB3m)腹腔注射诱导Balb/c乳鼠心肌炎模型 ,分别予以小柴胡汤、分解剂Ⅰ号及分解剂Ⅱ号 ,经灌胃后 ,于不同时间进行各组的NK细胞活性、T细胞亚群及心肌病理组织学检查。结果 :(1)小柴胡汤和分解剂Ⅱ号在病毒性心肌炎急性期均能明显提高NK细胞活性 ,有调节T细胞亚群功能 ,与病毒对照组比较有显著性差异 (P <0 0 5)。而分解剂Ⅰ号此作用不明显。 (2 ) 3种治疗药物对心肌免疫损伤均有明显保护作用 ,小柴胡汤作用明显优于分解Ⅰ号和分解剂Ⅱ号 (P <0 0 5)。而分解剂Ⅰ号和分解剂Ⅱ号比较未见显著性差异 (P >0 0 5)。结论 :小柴胡汤和分解剂Ⅱ号对病毒性心肌炎NK细胞活性和T细胞亚群具有双向调节作用 ,3种治疗药物对心肌的免疫损伤均有明显保护作用。

双黄连粉针剂抗柯萨奇病毒B_3型效应的实验研究

目的 探讨双黄连在体外抗柯萨奇病毒 (CVB3)的效应。方法 在Wish细胞上采用微量细胞病变抑制法。结果 (1) 3 0mg/ml、1 5mg/ml双黄连均可直接杀伤 10 0、10TCID50 病毒 ,且 3 0mg/ml直接灭活CVB3 的效应明显。 (2 ) 0 5、0 2 5、0 12 5mg/ml双黄连可分别阻断 10 0、10、1TCID50 病毒吸附细胞。 (3) 1 5、0 2 5、0 2 5mg/ml双黄连可分别抑制 10、5、1TCID50 病毒在胞内复制。结论 在细胞培养上 ,双黄连不仅直接杀伤柯萨奇病毒、阻断或减缓病毒吸附细胞的作用明显 ,而且对细胞内低滴度病毒复制具有一定的抑制作用。

黄芪对柯萨奇病毒B_3感染小鼠心肌线粒体结构及离子泵活性的影响

目的 :观察柯萨奇病毒B3 (CVB3 )感染小鼠心肌线粒体结构和离子泵活性的变化 ,以及黄芪的治疗作用。方法 :雄性Balb/c小鼠随机分为CVB3 感染组、CVB3 感染加黄芪治疗组和对照组 ,比较线粒体超微结构及线粒体Na+ K+ ATP酶、Ca2 + ATP酶活性。结果 :感染组线粒体结构破坏 ,Na+ K+ ATP酶、Ca2 + ATP酶活性下降。黄芪治疗组线粒体结构破坏较轻 ,Na+ K+ ATP酶、Ca2 + ATP酶活性较感染组高。结论 :CVB3 感染早期即可见心肌线粒体结构破坏 ,离子泵活性下降。黄芪可提高离子泵活性 。

牛磺酸对培养大鼠心肌细胞感染柯萨奇B_3病毒的影响

[目的 ]探讨牛磺酸对由柯萨奇B3 病毒感染的大鼠心肌细胞的抗病毒和保护作用 ,为该药的临床应用提供理论依据 .[方法 ]取新生SD大鼠的乳鼠心室肌制备搏动心肌细胞 ,培养 48h后接种10 3TCID5 0的柯萨奇B3 病毒做为实验性病毒性心肌炎模型 .[结果 ]牛磺酸明显减轻感染柯萨奇B3 病毒心肌细胞的病变 ,使细胞搏动增强 ;提高心肌细胞的琥珀酸脱氢酶活性 ,降低乳酸脱氢酶活性 ;抑制心肌细胞感染柯萨奇B3 病毒后导致的乳酸脱氢酶和谷草转氨酶释放 .牛磺酸提高正常心肌细胞和感染柯萨奇B3 病毒的心肌细胞存活率 ,其作用具有剂量依赖性 .[结论 ]牛磺酸对感染柯萨奇B3

维生素C对柯萨奇B_3病毒感染的心肌细胞的保护作用研究

观察维生素Ｃ对柯萨奇Ｂ３（ＣＶＢ３）病毒的复制和对病毒感染心肌细胞的影响，结果表明：维生素Ｃ（ＶｉｔＣ）对ＣＶＢ３感染的心肌细胞具有保护作用，加ＶｉｔＣ培养２４ｈ后，随时间延长，保护作用越来越明显（Ｐ＜０．０５）；实验结果还表明：ＶｉｔＣ在细胞外并无直接灭活病毒作用，而是作用于细胞，影响病毒的复制，从而使心肌细胞得到保护。

苦豆总碱、苦参总碱体外抗柯萨奇B_3病毒的作用

目的 通过对苦豆总碱、苦参总碱的体外抗柯萨奇B组 3型病毒 (CVB3 )作用的对比研究 ,为其在临床应用提供实验依据。方法 以盐酸胍作为实验阳性对照药物 ,采用细胞培养技术及细胞病变效应 (CPE)抑制法、噻唑蓝 (MTT)比色法、组织培养半数感染 (TCID50 )微量法进行苦豆总碱、苦参总碱的体外抗CVB3 作用研究。结果 苦豆总碱、苦参总碱均有明显的抗CVB3 作用 (P <0 .0 5 ) ,对CVB3 的抑制指数均 >2 ,细胞保护率最高可达 95 % ,其中感染后给药及药物与病毒先作用 2小时然后加入细胞层的给药方法抗病毒效应较强。结论 苦豆总碱、苦参总碱在体外有明显抗CVB3 。

柯萨奇B_3病毒mAb对心肌细胞形态及多种酶代谢的影响

目的 通过心肌细胞形态学及培养液中多种酶的变化 ,探讨柯萨奇 B3 病毒 m Ab对体外培养心肌细胞的作用 .方法 应用间接免疫荧光法将培养小池中用冷丙酮固定的心肌细胞与自备的 2 6种柯萨奇 B3 病毒 m Ab(CVB3 - m Ab)进行反应 ;并筛选出 2种与大鼠心肌细胞结合的阳性 m Ab(2 A3,2 G12 ) ,进一步与体外培养搏动的大鼠心肌细胞作用 ,观察m Ab-大鼠心肌细胞培养液中心肌酶的改变 ,搏动百分比及细胞病变 .结果 荧光显微镜下观察 ,有 12种病毒抗体可与大鼠心肌细胞纤维结合 ,而另外 14种无此结合反应 .筛选出的2种 CVB3 - m Ab加入搏动的大鼠心肌细胞中 ,取其不同时间细胞培养液检测 .与对照组比较 ,心肌细胞培养液中心肌酶(CK,CK- MB,L DH,L DH- 1,HBDH)及肌钙蛋白 I(c Tn I)等均增高 (P<0 .0 5 ) ,并可引起心肌细胞形态改变 .结论 部分病毒抗体可引起心肌细胞形态学及培养液中多种酶的改变 。

外周血单个核细胞Tim-3及其配体HMGB1在HBV相关肝癌诊断中的意义

目的:检测Tim-3-HMGB1在HBV相关肝癌患者中的表达水平.方法:收集35例肝癌患者及40例健康对照外周血,采用Ficoll-Hypaque梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC),分别提取血清病毒DNA及总RNA,普通聚合酶链反应(PCR)检测HBV-DNA、Tim3表达水平;实时荧光定量PCR检测HMGB1表达水平.结果:HBV相关肝癌患者外周血单个核细胞Tim-3(P<0.01)-HMGB1(P=0.019)表达水平均增高.结论:HBV相关肝癌患者外周血单个核细胞Tim-3-HMGB1表达水平增高,可作为辅助诊断指标应用.

黄芪甲苷对柯萨奇B组3型病毒感染乳鼠心肌细胞及病毒性心肌炎乳鼠心肌细胞的修复作用观察

目的观察黄芪甲苷(Astragaloside Ⅳ,AsⅣ)对柯萨奇B组3型病毒(coxsackie virus B3,CVB3)感染的乳鼠心肌细胞和病毒性心肌炎(VMC)乳鼠心脏的修复作用,并探讨其可能作用机制。方法 ①分离培养原代乳鼠心肌细胞,测算AsⅣ对乳鼠心肌细胞的最大无毒浓度(TC0),取乳鼠心肌细胞分为正常对照组、病毒对照组、AsⅣ组。病毒对照组和AsⅣ组分别用1000 TCID50的CVB3病毒感染心肌细胞。AsⅣ组分为五个亚组,细胞长至单层细胞时,分别加入20、10、5、2.5、1.25 mg/L的AsⅣ,当病毒对照组中75%以上的细胞出现病变时结束培养。 MTT法观察各组细胞存活情况(以OD值表示),收集各组细胞上清液,全自动生化分析仪检测乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CK-MB)含量。②75只小鼠分为正常对照组、模型对照组、AsⅣ高剂量组、AsⅣ中剂量组、AsⅣ低剂量组,每组15只。除正常对照组外,其余各组小鼠均腹腔注射1000 TCID50的 CVB3病毒液0.1 mL/只,建立VMC动物模型。接种病毒24 h时,AsⅣ高、中、低剂量组分别给予4、2、1 g/kg的AsⅣ灌胃,正常对照组、模型对照组每日予0.5%羧甲基纤维素钠20 mL/kg灌胃,各组均灌胃7 d,灌胃第8 d脱颈椎处死小鼠,取心肌组织,观察心肌组织病理学变化,全自动生化分析仪检测各组小鼠血清中LDH、CK-MB含量。结果与空白对照组比较,病毒对照组及AsⅣ组各亚组细胞OD值降低( P 均<0.05);与病毒对照组比较,及AsⅣ组各亚组细胞OD值降低( P 均<0.05)。与正常对照组比较,病毒对照组心肌细胞LDH、CK-MB含量升高( P 均<0.05);与病毒对照组比较,10、20 mg/L的AsⅣ组心肌细胞LDH、CK-MB含量降低( P 均<0.05)。与空白对照组比较,病毒对照组心肌组织排列紊乱,淋巴细胞和单核细胞出现介导的炎性浸润、心肌细胞出现明显出血水肿甚至坏死。AsⅣ组不同剂量心肌组织排列紊乱情况轻,淋巴细胞和单核细胞出现介导的炎性浸润、心肌细胞轻微出血水肿,心肌组织坏死以点状炎症和坏死灶为主。与空白对照组比较,模型对照组心肌细胞LDH、CK-MB含量升高( P 均<0.05);与模型对照组比较,AsⅣ高、中、低剂量组心肌细胞LDH、CK-MB含量降低( P 均<0.05)。结论 AsⅣ对CVB3感染的心肌细胞和VMC乳鼠心肌细胞均具有明显的保护作用,其机制可能为AsⅣ降低LDH、CK-MB含量。

复方中药心复康抗柯萨奇B组3型病毒的实验研究

本文采用组织培养法和染料摄入法，观察研究了复方中药制剂心复康对ＨｅＬａ细胞生长以及对柯萨奇Ｂ组３型病毒（ＣＢＶ３）增殖的影响。结果表明，高浓度心复康（稀释度≤１∶４）对ＨｅＬａ细胞生长有毒性作用，中低浓度（稀释度≥１∶８）对细胞生长无毒性作用，１∶６４稀释时似具有促进细胞生长作用。中浓度心复康对ＣＢＶ３增殖有明显抑制作用。比较心复康作用细胞和病毒的不同环节，提示心复康除具有保护细胞减轻病毒感染功能外，还有直接杀伤ＣＢＶ３的作用。

苦参碱对柯萨奇B_3型病毒感染心肌细胞的保护作用及其与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B通路的关系

目的探讨苦参碱对柯萨奇B3型病毒(CVB3)感染心肌细胞的保护作用及其与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号传导通路的关系。方法通过CVB3感染原代培养的Wistar新生大鼠心肌细胞的方法,制备病毒性心肌炎体外实验模型。实验分为5组,正常对照组:不感染病毒、不加苦参碱及PI3K抑制剂;病毒组:感染病毒、不加苦参碱及抑制剂Wort;病毒+Wort组:加入抑制剂Wort(200 nmol.L-1)后感染病毒;苦参碱治疗组:感染病毒后再加入苦参碱(0.3 g.L-1);苦参碱治疗+Wort组加入抑制剂Wort后感染病毒,再加入苦参碱。倒置显微镜下观察各组心肌细胞病变效应(CPE)变化,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡情况,免疫细胞化学法及Western blot法检测心肌细胞内磷酸化AKTSer-473蛋白的表达。结果与正常对照组比较,病毒组、苦参碱治疗组心肌细胞CPE变化明显,细胞凋亡率增加,磷酸化AKTSer-473蛋白表达上调(Pa<0.05)。与病毒组比较,苦参碱治疗组心肌细胞CPE变化不明显,细胞凋亡率降低,磷酸化AKTSer-473蛋白表达明显增强(Pa<0.05);病毒+Wort组心肌细胞CPE变化明显,心肌细胞凋亡率增多(Pa<0.05),磷酸化AKTSer-473蛋白的表达下调(P<0.05)。与苦参碱治疗组比较,苦参碱治疗+Wort组CPE变化明显及细胞凋亡率增多,磷酸化AKTSer-473蛋白表达减少(Pa<0.05)。结论苦参碱对CVB3感染心肌细胞具有保护作用,这种保护作用至少是部分通过PI3K/AKT信号通路介导的。

反义硫代寡核苷酸体外抑制柯萨奇病毒B_3增殖的研究

目的 在CVB3 易感的Vero细胞系中观察与CVB3RNA 5’NCR的nt 5 81- 6 0 1区域互补的 2 1聚硫代AODN抗病毒活性。方法 采用MTT法测定细胞活性 ,直接观察CPE ,测定培养上清TCID50 ,并分别用ELISA和斑点杂交法检测CVB3 抗原及其RNA。结果 1.AODN可推迟和减轻CPE ,且随AODN浓度增加 ,对CPE的抑制作用增强 ,感染细胞存活率也随AODN浓度升高而升高 ;2 .AODN可抑制CVB3 抗原表达及RNA的合成 ,且呈剂量依赖关系 ;3.培养上清中病毒滴度随AODN浓度升高而降低。AODN抗病毒活性在转染后 48h效果较好 ;10 μmol/L浓度抑制效果较好。本研究结果也显示 10 μmol/LSODN对CVB3 感染细胞CPE有较弱的抑制作用 ,但RODN未显示抗病毒活性 ;AODN未显现对HSV - 1感染细胞CPE抑制活性 ,但对其他肠道病毒如CVB5,Polio - 1和ECHO - 6有较弱的抑制活性。