目的:用不同序列Cp G ODN刺激牙周膜细胞(PDLCs),筛选对PDLC有促增殖作用的Cp G ODN序列,为Cp G ODN在牙周病治疗上的应用提供实验依据。方法:收集因正畸治疗需要而拔除的健康前磨牙48颗,年龄10～15岁。利用组织块原代培养法培养人PDLCs...目的:用不同序列Cp G ODN刺激牙周膜细胞(PDLCs),筛选对PDLC有促增殖作用的Cp G ODN序列,为Cp G ODN在牙周病治疗上的应用提供实验依据。方法:收集因正畸治疗需要而拔除的健康前磨牙48颗,年龄10～15岁。利用组织块原代培养法培养人PDLCs,取第4和5代细胞用于实验。实验组用1～12号Cp G ODN刺激PDLCs,分别培养24、48和72h,用PBS做对照组,MTT比色法检测吸光度A492值。结果:原代培养的PDLCs呈长梭形或星形,胞突细长,中央有圆形或椭圆型的胞核,抗波形丝蛋白染色阳性,抗角蛋白染色阴性,为中胚层来源细胞。与对照组比较,实验组Cp G ODN的A均值升高,其中9、11号Cp G ODN与对照组比较A值明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:Cp G ODN有促人PDLCs增殖作用,其中9、11号Cp G ODN可显著促进人PDLCs增殖。展开更多
Cp G ODN是以非甲基化Cp G为核心的经硫代修饰的单链脱氧寡核苷酸高分子聚合物,具有免疫刺激作用。近年来,Cp G ODN引起了疫苗、哮喘、肿瘤等预防及治疗中的广泛研究。Cp G ODN通过固相法进行合成时,易产生n-1,n-2杂质序列,使得目的序...Cp G ODN是以非甲基化Cp G为核心的经硫代修饰的单链脱氧寡核苷酸高分子聚合物,具有免疫刺激作用。近年来,Cp G ODN引起了疫苗、哮喘、肿瘤等预防及治疗中的广泛研究。Cp G ODN通过固相法进行合成时,易产生n-1,n-2杂质序列,使得目的序列纯度降低。因此,文章建立了一种反相色谱法对合成后的序列进行检定。通过采用反向层析色谱C18柱,甲醇-六氟异丙醇溶液为流动相,线性梯度洗脱,体积流量为0.25 m L/min,检测波长为260 nm,柱温60℃,进样量5μL,获得了精确度较高的检定结果。之后,对比了毛细管凝胶电泳及反相色谱分别对杂质序列的检测结果,发现反相色谱的检测结果更优,分离度达1.4以上,而毛细管电泳法无法有效检定n-1序列。此外,该方法进行了方法学的验证,在16.5~660μg/m L浓度范围内线性良好,R2=0.991 2。回收率为98.7%,进行了6个批次样品的精密度与重现性检定,检定结果良好,RSD≤5%。因此文章所述纯度检定方法效果较佳,精密度及准确度更高,适合于Cp G ODN序列的纯度检测,为核酸序列在未来的应用奠定了基础。展开更多
文摘目的:用不同序列Cp G ODN刺激牙周膜细胞(PDLCs),筛选对PDLC有促增殖作用的Cp G ODN序列,为Cp G ODN在牙周病治疗上的应用提供实验依据。方法:收集因正畸治疗需要而拔除的健康前磨牙48颗,年龄10～15岁。利用组织块原代培养法培养人PDLCs,取第4和5代细胞用于实验。实验组用1～12号Cp G ODN刺激PDLCs,分别培养24、48和72h,用PBS做对照组,MTT比色法检测吸光度A492值。结果:原代培养的PDLCs呈长梭形或星形,胞突细长,中央有圆形或椭圆型的胞核,抗波形丝蛋白染色阳性,抗角蛋白染色阴性,为中胚层来源细胞。与对照组比较,实验组Cp G ODN的A均值升高,其中9、11号Cp G ODN与对照组比较A值明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:Cp G ODN有促人PDLCs增殖作用,其中9、11号Cp G ODN可显著促进人PDLCs增殖。
文摘Cp G ODN是以非甲基化Cp G为核心的经硫代修饰的单链脱氧寡核苷酸高分子聚合物,具有免疫刺激作用。近年来,Cp G ODN引起了疫苗、哮喘、肿瘤等预防及治疗中的广泛研究。Cp G ODN通过固相法进行合成时,易产生n-1,n-2杂质序列,使得目的序列纯度降低。因此,文章建立了一种反相色谱法对合成后的序列进行检定。通过采用反向层析色谱C18柱,甲醇-六氟异丙醇溶液为流动相,线性梯度洗脱,体积流量为0.25 m L/min,检测波长为260 nm,柱温60℃,进样量5μL,获得了精确度较高的检定结果。之后,对比了毛细管凝胶电泳及反相色谱分别对杂质序列的检测结果,发现反相色谱的检测结果更优,分离度达1.4以上,而毛细管电泳法无法有效检定n-1序列。此外,该方法进行了方法学的验证,在16.5~660μg/m L浓度范围内线性良好,R2=0.991 2。回收率为98.7%,进行了6个批次样品的精密度与重现性检定,检定结果良好,RSD≤5%。因此文章所述纯度检定方法效果较佳,精密度及准确度更高,适合于Cp G ODN序列的纯度检测,为核酸序列在未来的应用奠定了基础。
