日本血吸虫TCTP编码基因DNA免疫的效果评价

目的评价pEGFP-TCTP真核重组质粒联合免疫佐剂CpG诱导小鼠保护性免疫的效果。方法构建日本血吸虫TCTP真核重组质粒,将pEGFP-TCTP注射入BABL/c小鼠,采用ELISA法检测免疫小鼠血清中IFN-γ水平;尾蚴攻击感染后45d处死小鼠,收集成虫和虫卵,计算减虫率和减卵率;小鼠肝脏送病理切片,计算虫卵肉芽肿的数量。结果TCTPDNA免疫保护性效果显示:实验组与阴性对照组相比,显示出一定的保护性效果,TCTP组的减虫率和减卵率分别为43.91%和53.48%,与GST组效果相似。DNA免疫后及感染后期,TCTP组与PBS对照组血清IFN-γ水平有显著性差异(P<0.05);攻击感染前后组间比较发现,GST组和GST+CpG组有显著性差异(P<0.05),提示CpG显著提高了DNA免疫的效果。结论SjTCTPDNA免疫能诱导较明显的保护性Th1免疫应答,CpG基序可以有效的诱导保护性Th1免疫应答,是一种有效的DNA免疫佐剂。

胃癌的表观遗传学研究

胃癌高度恶性且预后较差,目前随着对胃癌基础研究的不断深入,表观遗传学改变在胃癌发生发展中的重要作用逐渐被人们认识,因此可通过检测基因的异常甲基化等表观遗传学改变对胃癌进行早期诊断、治疗及预后评价。本文总结分析胃癌相关基因甲基化状态及表观遗传学的临床应用前景,以期探讨表观遗传学对胃癌的早期诊断及治疗的指导作用。

具有免疫刺激活性的非甲基化寡核苷酸链的研究进展

富含非甲基化碱基CG的寡核苷酸链 (CpG oligodeoxynucleotides,CpG ODN) ,具有免疫刺激活性 .其骨架及侧翼核苷酸序列决定CpG ODN免疫效应的强度及特异性 .最近研究发现 ,通过对CpG ODN中核苷酸上的基团进行化学修饰 ,或改变侧翼核苷酸序列均能影响CpG ODN的免疫活性、种属及细胞特异性 .这对CpG

同型半胱氨酸修饰甲基-Cp G结合蛋白2与自闭症谱系障碍相关

目的探讨高浓度的同型半胱氨酸(Hcy)在自闭症谱系障碍(ASD)发病中的可能机制。方法 ASD患儿和对照组c DNA样本来自本课题组前期研究,实验中的细胞株包括人胚肾上皮细胞系HEK-293T、小鼠神经干细胞系NE-4C和小鼠海马神经元细胞系HT22,实验动物为野生型C57BL/6J小鼠。采用实时荧光定量PCR比较ASD患儿和对照组外周血c DNA中甲硫氨酰-tRNA合成酶(MARS)表达水平;串联亲和纯化法检测与MARS存在互作关系的转录因子;免疫沉淀和液相质谱法研究Hcy对该转录因子的修饰作用以及可能的赖氨酸残基修饰位点;Ch IP实验在细胞系和小鼠中验证该转录因子与其下游靶基因启动子的结合受MARS或Hcy的影响;比较ASD患儿和对照组c DNA样本中这些靶基因的转录水平。结果①ASD患儿的MARS转录水平高于对照组(P<0.01),MARS与MeCP2互作;②Hcy可修饰到MeCP2的7个赖氨酸残基位点上,以此抑制MeCP2与DNA甲基化Cp G结合,使受MeCP2调控的下游神经发育基因GRIN2A、BDNF等转录水平上调(P<0.01);③42.9%ASD患儿GRIN2A、BDNF、EAAT1~4基因转录水平高于对照组均值;ASD患儿EAAT2、EAAT4基因平均转录水平高于对照组(P<0.05)。结论高MARS表达水平和Hcy浓度使MeCP2被Hcy修饰,降低了MeCP2蛋白与DNA甲基化Cp G的结合活性,从而影响MeCP2下游神经发育基因的转录水平。

不同硫代修饰CpG ODN佐剂活性的比较

目的评价相同序列不同硫代修饰CpG ODN佐剂联合重组乙型肝炎疫苗表面抗原(rHBsAg)在BALB/c小鼠中的免疫原性,及在HEK-BlueTM hTLR9细胞上的活性。方法将4种(全硫代修饰的QCX1、部分硫代修饰的HS1和HS2及非硫代修饰的NS)CpG ODN及其阳性对照(全硫代修饰的CpG7909)按照相同配比分别与rHBsAg混合,使CpG ODN和rHBsAg终浓度均为20μg/mL,同时设等剂量抗原对照组(rHBsAg)及空白对照组(生理盐水)。分别肌肉免疫BALB/c小鼠,每只100μL,于免疫后1、2、4周摘眼球采血后处死小鼠,分离血清,应用化学发光微粒子免疫分析技术检测乙型肝炎病毒表面抗体(antibody to hepatitis B virus surface antigen,Anti-HBs)水平;取小鼠脾脏,制备脾细胞悬液,分离脾单个核细胞(mononuclear cell,MNCs),应用ELISPOT技术检测抗原特异性IFNγ、IL-2的分泌水平。体外应用HEK-BlueTM hTLR9细胞,检测4种CpG ODN及阳性对照CpG7909在该细胞上的活性,以及血清中放置不同时间后在该细胞上的活性。结果免疫后1、2、4周,各组小鼠血清Anti-HBs水平逐渐升高,其中免后2、4周,QCX1组小鼠血清抗体水平高于抗原对照、HS1、HS2、NS组;QCX1组小鼠MNCs在rHBsAg刺激下,分泌IFNγ和IL-2的能力显著高于HS1、HS2、NS和抗原对照组(P均<0.01);QCX1和HS2组刺激HEK-BlueTM hTLR9细胞活性的半数有效浓度(EC50)分别为5.94和6.52μg/mL,明显低于HS1(46.54μg/mL)和NS组(49.10μg/mL);随着不同硫代修饰CpG ODN在血清中放置时间的延长,仅全硫代修饰QCX1和CpG7909组细胞培养物A655基本不变,其他组均出现不同程度降低。结论全硫代修饰组QCX1佐剂增强小鼠细胞和体液免疫的能力与CpG7909相当,且在HEK-BlueTM hTLR9细胞上呈现较好的活性,在血清中也具有较好的稳定性。

原花青素对抑郁小鼠认知功能改善的表观遗传机制

【目的】探索分析原花青素对抑郁小鼠认知功能改善的表观遗传学机制。【方法】采用慢性束缚应激实验建立小鼠抑郁模型,并分别使用低、中、高3 个浓度的原花青素对抑郁小鼠进行药物干预,通过跳台实验和八臂迷宫实验观察各组小鼠的认知功能,观察原花青素对抑郁小鼠认知功能的改善情况,并通过Western blotting 技术检测小鼠海马组织中脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)和甲基化CpG 结合蛋白2(methyl CpG-binding protein 2,MeCP2)的蛋白表达情况,分析原花青素对抑郁小鼠认知功能改善的表观遗传机制。【结果】慢性束缚应激可缩短小鼠跳台实验中的潜伏期,增加其错误次数,能够增加小鼠八臂迷宫实验中总探究时间,增加工作记忆错误和参考记忆错误的数量,并能够降低小鼠海马组织中BDNF和MeCP2 的蛋白表达,上述差异均有统计学意义(P<0.05)。低、中浓度的原花青素可以减轻慢性束缚应激引起的小鼠认知功能障碍,并提升BDNF 和MeCP2 的蛋白表达。【结论】原花青素可通过提升小鼠海马组织中MeCP2 的蛋白表达,进行表观遗传修饰,可提升记忆相关分子BDNF 的蛋白表达,改善抑郁小鼠的认知功能。