细胞因子佐剂白介素23和佐剂CpG2216对呼吸道合胞病毒重组疫苗免疫原性的影响

目的研究细胞因子佐剂白介素23（IL-23）和佐剂CpG2216。对呼吸道合胞病毒（RSV）重组疫苗G1F／M2免疫原性的影响。方法将编码IL-23的质粒（简称IL-23）单独作为佐剂以及将IL-23和CpG2216联合作为佐剂与GIF／M2共免疫BABL／c小鼠三次，在每次免疫后10d取血，分离血清，用间接ELISA法测定三次免疫后的血清IgG抗体效价，观察佐剂对体液免疫的影响。第3次免疫后2周处死小鼠，取脾细胞，用LDH法检测CTI。活性、ELISPOT法检测分泌IL－4和7－干扰素（IFN－7）的淋巴细胞水平、流式细胞仪检测CD4＾＋、CD8＾＋的效应记忆和中央记忆T细胞，观察佐剂对细胞免疫的影响。结果ELISA结果表明：除PBS组外，各佐剂组均诱导了高滴度的IgG抗体，其中IL－23＋G1F／M2组的IgG水平显著低于PBS＋G1F／M2组和IL23＋CpG2216＋GIF／M2组，另外，PBS＋GIF／M2组与IL－23＋CpG2216相比差异无统计学意义；CTL杀伤实验显示：IL－23＋CpG2216＋G1F／M2组的CTL杀伤活性显著高于其他组；ELISPOT结果显示IL－23＋CpG2216＋G1F／M2组分泌IFN一7淋巴细胞数量显著多于其他组，且各组分泌IFN－γ的淋巴细胞数显著多于分泌IL－4的淋巴细胞；流式细胞仪检测结果表明，IL－23和IL23＋CpG2216对G1F／M2诱导产生记忆细胞有明显增强作用。结论佐剂IL－3和佐剂CpG2216联合使用能够增强RSV重组疫苗的免疫应答。

细胞因子佐剂IL-23、IL-27对呼吸道合胞病毒重组蛋白疫苗免疫原性的影响

目的研究细胞因子佐剂白介素27（IL-27）及佐剂白介素23（IL-23）与佐剂CpG2216对呼吸道合胞病毒（RSV）重组疫苗（G1F/M2）免疫原性的影响。方法质粒IL-27、IL-23与佐剂CpG2216单独或联合与疫苗G1F/M2共免疫Balb/c小鼠3次,每次免疫后10 d取血,分离血清,用间接ELISA法测定3次免疫后的血清IgG抗体效价,第3次免疫后2周处死小鼠,取脾细胞,用LDH法检测CTL活性,ELISPOT法检测分泌IL-4和IFN-γ的淋巴细胞水平,流式细胞仪检测CD4＋及CD8＋细胞的效应记忆和中央记忆T细胞。结果 ELISA结果表明：除PBS组外,各组均诱导了高水平的IgG抗体,与PBS＋G1F/M2组相比,只有IL-23＋G1F/M2组的IgG水平是显著降低的,而其余各组相比无显著性差异;CTL杀伤实验显示：IL-23＋CpG2216＋G1F/M2组和IL-23＋IL-27＋G1F/M2组的CTL杀伤活性显著高于其他各组（P〈0.05）,IL-23＋CpG2216＋G1F/M2组的CTL最为显著;ELISPOT结果显示：IL-23＋IL-27＋G1F/M2组、IL-23＋CpG2216＋G1F/M2组、IL-27＋CpG2216＋G1F/M2组中分泌IFN-γ的淋巴细胞数量显著高于其他组分泌IFN-γ的淋巴细胞数量,且各组分泌IFN-γ的淋巴细胞数量显著高于同组分泌IL-4的淋巴细胞数量（P〈0.05）;流式细胞仪检测结果说明IL-23＋IL-27对增强G1F/M2诱导记忆应答方面具有显著优势。结论佐剂IL-23、IL-27与CpG2216联合使用均能增强RSV重组疫苗的免疫应答。

CpG ODN佐剂对呼吸道合胞病毒重组疫苗诱导的细胞免疫应答的作用

目的:研究CpG2216佐剂对呼吸道合胞病毒(RSV)重组蛋白疫苗诱导的细胞免疫应答的作用。方法:重组RSV疫苗G1F/M2与CpG2216佐剂混合,或与CpG2216及常规佐剂Al(OH)3混合,鼻腔(i.n.)或腹腔注射(i.p.)免疫BALB/c小鼠三次,最后一次免疫后2周杀小鼠,取脾细胞,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测脾细胞特异性杀伤活性;用ELISPOT法检测分泌IFNγ-和IL-4的细胞;用流式细胞仪检测CD4+/CD8+效应及LDH记忆细胞。结果:与G1F/M2相比,CpG+G1F/M2鼻腔或腹腔注射免疫均诱导了显著的杀伤活性;而且G1F/M2+Al+CpG(i.p.)诱导的杀伤活性显著高于CpG+G1F/M2(i.p.)。ELISPOT结果显示:CpG+G1F/M2鼻腔免疫和腹腔注射免疫组的分泌IFNγ-和IL-4的淋巴细胞数量明显多于G1F/M2组;CpG+Al+G1F/M2(i.p.)组的细胞数显著多于CpG+G1F/M2(i.p.)组;且各组分泌IFNγ-的淋巴细胞数显著多于分泌IL-4的淋巴细胞,即均诱导了Th1型优势应答,有利于宿主抗病毒。流式细胞仪检测结果表明:CpG+G1F/M2(i.n.)仅诱导CD44+单阳性的细胞,而CpG+G1F/M2(i.p.)和CpG+Al+G1F/M2(i.p.)既诱导产生了CD44+单阳性细胞,也产生了CD44+CD62L+双阳性的记忆细胞。结论:CpG2216作为RSV重组疫苗G1F/M2的佐剂,可显著增强细胞免疫应答。

IL-23、IL-27对呼吸道合胞病毒重组蛋白疫苗保护性和安全性的影响

目的研究细胞因子佐剂IL-27及IL-23与佐剂CpG2216对呼吸道合胞病毒（RSV）重组疫苗G1F／M2免疫病理的调节作用。方法培养RSV并测定TCID50；用佐剂和G1F／M2共同免疫小鼠，共免疫3次，每次免疫后10d取血，分离血清，第3次免疫后10d用RSV攻击免疫后的Balb／c小鼠，攻毒后5d处死。留取肺组织一部分用PCR检测RSV的看家基因N；实时定量PCR检测RSV—N基因的表达量；检测细胞因子INF-1、IL-5、eotaxin、Gro—Q、GATA3、T-bet及gob-5的mRNA的表达量；另一部分肺组织福尔马林保存做病理切片。结果RSV滴度TCID50=10^-6.76／0．1ml。用PCR和实时定量PCR扩增RSV—N基因，结果显示：PBS组明显被RSV感染，各佐剂组的保护效果显著。实时定量PCR结果表明：INF-γ同IL-5比较IL-27＋G1F／M2组、IL-23＋IL-27＋G1F／M2组和IL-23＋CpG7216＋G1F／M2组的INF-γ/IL-5比值显著高于其他组，T—bet和GATA3比较IL-23＋IL-27＋G1F／M2组的T-bet／GATA3增高的比值最大，IL-23＋IL-27＋G1F／M2组eotaxin的mRNA的量显著低于其余各组，IL-27、IL-23＋IL-27和IL-23＋CpG2216佐剂组的Gro-α显著低于其余各组，IL-27＋G1F／M2组、IL-23＋IL-27＋G1F／M2组gob-5水平显著比其他组低。病理切片结果说明与正常小鼠肺组织结构相比，各组在收到RSV攻击后均有不同程度的炎症细胞浸润，其中IL-23＋IL-27＋G1F／M2组的肺部浸润的炎症细胞最少。结论IL-23＋IL-27是RSV重组疫苗的较理想免疫组合。