Cryoloop和CPS超速玻璃化冷冻人三原核胚胎效果比较

目的:比较冷冻环(Cryoloop)和闭合型拉细麦管(CPS)超速玻璃化冷冻方法冻存人早期卵裂期胚胎的效果差异,以期建立1种有效的超速玻璃化冷冻方法。方法:将人三原核孕卵发育形成的126个6-10细胞胚胎随机分为3组:对照组30个、Cryoloop组36个和CPS组60个。通过形态学观察,比较胚胎复苏后存活率;经罗丹明123染色,激光扫描共聚焦显微镜摄片分析,测定复苏后存活胚胎线粒体跨膜电位(△Ψm)。结果:Cryoloop组复苏后胚胎存活率达100%,显著高于CPS组(P<0.05);Cryoloop组△Ψm显著高于CPS组(P<0.05),而与未冷冻对照组相比,无明显差异(P>0.05)。结论:Cryoloop超速玻璃化冷冻法获得了更高的胚胎存活率和胚胎活力,该方法更适于冷冻人早期卵裂期胚胎。

超速玻璃化冷冻载体Cryotop和Cryoloop冻存小鼠卵裂期胚胎的效果比较

目的应用冷冻薄膜(Cryotop)和冷冻环(Cryoloop)两种超速玻璃化冷冻载体,氯化胆碱替代氯化钠的低钠磷酸盐缓冲液配置的玻璃化冷冻保护剂冷冻小鼠胚胎,比较两种载体的效果差异。方法将300个小鼠胚胎随机分为3组:对照组60个、Cryotop组120个和Cryoloop组120个。比较复苏后胚胎存活率和继续发育能力。结果 Cryotop组复苏后胚胎存活率达93.3%,Cryoloop组90.4%,无显著性差异(P>0.05);继续发育率:Cryotop组和Cryoloop组比较,4细胞率分别为48.2%和29.8%(P<0.05),囊胚率分别为31.5%和16.1%(P<0.05),差异具有显著性。结论Cryotop和Cryoloop两种玻璃化冷冻载体相比,Cryotop操作更为简便,复苏后小鼠胚胎获得了更高的继续发育能力。

冷冻环玻璃化法冷冻小鼠卵母细胞的效果评价

目的评价ED15(15%ethylene glycol,EG+15%dimethylsulphoxide,DMSO)冷冻环玻璃化法冻存小鼠成熟卵母细胞的效果,以及对其纺锤体形态、染色体分布和发育潜能的影响。方法分别以小鼠新鲜成熟卵母细胞为对照组,玻璃化冷冻复苏卵母细胞为冷冻组。玻璃化冷冻以冷冻环为载体,以乙二醇(EG)及二甲亚砜(DMSO)联合作冷冻保护剂。解冻后观察细胞存活情况并对解冻后培养0、1、2h的卵母细胞行纺锤体及染色体免疫荧光染色,激光共聚焦扫描显微镜观察;其余卵母细胞行体外受精培养,计算受精率、囊胚形成率。结果冷冻组成熟卵母细胞存活率为98.2%,复苏后卵母细胞培养0、1、2h的纺锤体形态正常率及染色体分布正常率与对照组比较无显著性差异(分别为87.0%、90.9%、90.3%vs95%,P>0.05;91.3%、95.4%、93.5%vs90%,P>0.05);冷冻组受精率及囊胚形成率与对照组比较均无显著性差异(81.3%vs85.2%,P>0.05;76.1%vs75.4%,P>0.05)。结论ED15冷冻环玻璃化法冻存小鼠成熟卵母细胞复苏存活率高,对其纺锤体形态、染色体分布及发育潜能无明显影响。

精子冷冻环无保护剂玻璃化冷冻方法的初步研究

目的探讨精子冷冻环无保护剂玻璃化冷冻方法的可行性。方法正常精液标本上游处理后,进行常规冷冻和冷冻环无保护剂的玻璃化冷冻,复苏后分别从活力参数及电镜下超微结构等指标比较两种冷冻方法的效果。结果两种方法冷冻后精子存活率、活动率之间差异无显著性(48%∶48%;44.5%∶43.5%,P>0.05),但均较未冷冻的89%和88.5%明显下降(P<0.001)。超微结构亦较未冷冻时发生了一定的改变,但核结构基本保持完整。结论精子冷冻环无保护剂的玻璃化冷冻是一种简单、方便而行之有效的冷冻方法。

紫杉醇预处理对猪体外成熟卵母细胞玻璃化冷冻的影响

为了提高猪成熟卵母细胞细胞玻璃化冷冻效果。本试验拟添加紫杉醇,比较其对冷冻环冷冻效果的影响。结果显示使用1.0μmol.L-1紫杉醇预处理卵母细胞,冷冻后其形态完整率(89.93%)和FDA染色存活率(83.33%)都显著高于未处理组的79.12%和70.97%(P<0.05),继续提高紫杉醇浓度则表现为对卵母细胞的毒副作用。在不同预处理时间上,预处理30 min组冷冻后卵母细胞形态完整率和FDA染色存活率最高,分别达到90.21%和84.13%。预处理浓度1.0μmol.L-1,30 min是比较合适的处理方法;紫杉醇、细胞松弛素B(CB)或两者联合添加能显著提高猪成熟卵母细胞的玻璃化冷冻的效果(P<0.05),但两者之间没有显著差异(P>0.05)。

应用冷冻环玻璃化法冷冻猪MⅡ期卵母细胞

利用冷冻环玻璃化法对猪MⅡ期卵母细胞进行冷冻试验。结果表明:冷冻环玻璃化法冻后存活率达80.00%,显著高于OPS法和细管法的72.50%和53.33%;冷冻环玻璃化法激活后的卵裂率为7.22%,也显著高于后两者的4.85%和0;紫杉醇和细胞松弛素预处理能在一定程度上提高猪MⅡ期卵母细胞的抗冻能力,两种添加物对冻后卵母细胞的存活率和卵裂率无显著影响。

人卵裂胚和囊胚的玻璃化冷冻及临床应用

目的探索人卵裂胚及囊胚玻璃化冷冻的有效性。方法来源于生殖中心IVF或ICSI助孕的共270个胚胎(卵裂胚167个,囊胚103个),用Cryoloop作为胚胎载体和相同的玻璃化方法进行冷冻、复苏和移植,观察其复苏存活率、临床妊娠率、植入率和流产率。结果卵裂胚和囊胚的复苏率、植入率和妊娠率分别为97.0%、33.1%、42.9%和96.1%、43.9%、52%,流产率分别为13.3%和15.4%。结论以Cryoloop为胚胎载体,使用相同的玻璃化冷冻方法对人类卵裂胚和囊胚均可获得同样理想的冷冻效果和临床结局。

自制冷冻环人卵巢组织玻璃化冷冻的可行性研究

目的探讨应用自制冷冻环进行人卵巢组织玻璃化冷冻的效果。方法2008年5月至9月在华中科技大学同济医学院附属同济医院收集5例人卵巢组织标本,以乙二醇、二甲基亚砜、蔗糖作为冷冻保护剂,自制冷冻环为载体进行玻璃化冷冻。并观察卵巢新鲜组织和冻融后组织始基卵泡和初级卵泡的形态学变化、凋亡情况、超微结构变化及体外培养内分泌功能。结果新鲜及冻融后组织形态正常卵泡比值分别是89.46±4.94、84.47±4.66,无统计学意义(P>0.05)。凋亡面积分别是(0.07±0.02)%、(0.10±0.05)%,无明显增加(P>0.05)。超微结构无明显改变。新鲜组织及冻融后组织体外培养上清液雌二醇含量分别(2549.73±711.87)pmol/L、(2514.87±714.66)pmol/L,无统计学意义(P>0.05)。结论自制冷冻环可作为一种便宜、方便、可行的人卵巢组织低温保存的可替代方法。

冷冻膜及冷冻环在人早期胚胎玻璃化冷冻中的应用比较

目的探讨冷冻膜和冷冻环2种载体行玻璃化冷冻对人卵裂期胚胎和囊胚的效果。方法采用回顾性队列研究分析912个解冻复苏周期,比较2种载体行玻璃化冷冻后胚胎复苏结局和临床结局的差异及其相关危险因素。结果 (1) 385枚卵裂期胚胎中,冷冻环组(n=251)和冷冻膜组(n=134)的胚胎复苏率、完整胚胎存活率、临床妊娠率、种植率、流产率、移植周期出生率、双胎出生率、早产率及出生男女比率差异均无统计学意义(P>0.05);冷冻环组新鲜周期优质胚胎率(24.78%)、平均移植周期数(1.3±0.6)、复苏后优质胚胎率(40.76%)、复苏后平均移植胚胎数[(2.1±0.4)个]及低体质量儿出生率(19.01%)均明显高于冷冻膜组[18.59%,P=0.002;1.2±0.4,P=0.001;28.13%,P=0.001;(1.9±0.4)个,P=0.000;4.08%,P=0.015]。(2) 527枚囊胚中,冷冻环组(n=287)和冷冻膜组(n=240)的平均移植周期数、胚胎复苏率、完整胚胎存活率、复苏后囊胚扩张率、流产率、双胎出生率、早产率、低体质量儿出生率及出生男女比率差异均无统计学意义(P>0.05);冷冻环组的临床妊娠率(67.94%)、种植率(49.72%)、移植周期出生率(52.96%)、新鲜周期优质胚胎率(27.0%)、平均移植胚胎数[(1.9±0.4)个]显著高于冷冻膜组[54.17%, P=0.001;39.58%,P=0.002;41.25%,P=0.047; 23.0%, P=0.002;(1.8±0.5)个,P=0.004]。Logistic回归显示,新鲜周期优质胚胎数、内膜厚度及冷冻胚胎所用载体类型与冷冻囊胚复苏移植后临床妊娠密切相关(P=0.017、P=0.049、P=0.044),而年龄、复苏后平均移植胚胎个数、复苏后囊胚扩张数、平均移植周期数及内膜分型等差异均无统计学意义(P>0.05)。结论对于卵裂期胚胎,冷冻膜和冷冻环冷冻胚胎的复苏结局和临床结局均是相当的。对于囊胚,冷冻环组的临床结局优于冷冻膜组。

玻璃化冷冻方法三种冷冻载体冻存卵裂期胚胎效果的比较

目的应用冷冻环、冷冻膜和自制麦管片三种冷冻载体,采用玻璃化冷冻方法冻存昆明小鼠卵裂期胚胎,比较三种载体的冻存效果。方法采集通过体外受精在体外培养第2天得到的4-8细胞期的昆明小鼠胚胎247个,对其中177个按载体不同随机分为冷冻环组59个,冷冻膜组59个,自制麦管片组59个;剩余的新鲜胚胎70个作为对照组,比较冻融后鼠胚的复苏率和囊胚形成率。结果冷冻环组、冷冻膜组和自制麦管片组的胚胎复苏率分别为98.3%、98.3%和94.9%,三组比较差异无统计学意义(P>0.05);冷冻环组、冷冻膜组和自制麦管片组的囊胚形成率分别是84.5%、86.2%和82.1%,三组比较无统计学差异(P>0.05);新鲜对照组囊胚形成率为94.3%,与冷冻环组、冷冻膜组分别比较无统计学差异(P均>0.05),与自制麦管片组有统计学差异(P<0.05)。结论采用玻璃化冷冻方法冻存小鼠卵裂期胚胎,使用冷冻环和冷冻膜作为冷冻载体具有复苏率高、囊胚形成率高的优点,更适合应用于临床。

人卵母细胞冷冻保存的初步研究

目的比较慢速冷冻、冷冻环和自制叶片2种不同载体玻璃化冷冻应用于人卵母细胞冷冻保存的效果。方法经患者本人同意和伦理委员会的批准,收集未成熟的MI期卵,体外自然成熟后冷冻保存,解冻121个卵,存活卵用ICSI方法受精,比较慢速冷冻、玻璃化冷冻(冷冻环和自制叶片2种载体)在存活率、受精率、卵裂率、优质胚胎率方面的差异,同时与常规新鲜MⅡ卵ICSI后相应指标进行比较。结果人卵母细胞玻璃化冷冻能取得较好的存活率,明显高于慢速冷冻;玻璃化冷冻后的存活卵母细胞ICSI受精率与常规ICSI无明显差异,但卵裂率、优质胚胎率明显低于常规ICSI。结论玻璃化冷冻人卵母细胞能取得较高的存活率;自制叶片和冷冻环都是较为理想的冷冻载体,二者用于玻璃化冷冻效果相近,自制叶片具有成本低、易操作的优点;体外自然成熟卵玻璃化冷冻后继续发育潜能降低,人卵母细胞的冻存还需要更多的研究。