蝉蜕蛋白的提取工艺优化及体外抗氧化活性研究

目的:优化蝉蜕蛋白的提取工艺,并考察其体外抗氧化活性,为蝉蜕蛋白的深入研究提供参考。方法:以蛋白提取量为响应值,在单因素试验基础上,采用Box-Behnken响应面法对超声波辅助提取蝉蜕蛋白的液料比、超声时间、提取次数等条件进行优化,并进行验证试验。以维生素C(VC)为阳性对照,以对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和2,2′-连氮基-双-(3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)自由基的清除率为指标,评价蝉蜕蛋白的体外抗氧化活性。结果:蝉蜕蛋白的最佳提取条件为液料比28∶1(mL/g),超声时间65 min,提取2次。验证试验中,蝉蜕蛋白的平均提取量为65.45 mg/g(RSD=1.68%,n=3),与预测值的相对误差为5.48%。蝉蜕蛋白对ABTS和DPPH自由基均有一定的清除效果,当蝉蜕蛋白质量浓度为0.2 mg/ L时对ABTS自由基的清除率即达97.0%,其作用与VC相当;蝉蜕蛋白对DPPH自由基的清除能力稍弱,半数清除浓度为0.96 mg/mL,其作用不及VC。结论:采用Box-Behnken响应面法优化蝉蜕蛋白的提取条件准确、可靠;蝉蜕蛋白具有一定的体外抗氧化活性。

动物药残留毛的显微鉴定研究——蝉蜕及其混淆品的鉴别(英文)

目的以动物药残留毛的显微特征为依据,对中药蝉蜕及其易混淆品进行鉴别。方法对黑蚱、蟪蛄、焰螓蝉的干燥蜕壳粉末进行显微制片观察,结合图像测量软件提取刚毛的直径、长度、毛窝直径等显微特征参数,进行比较分析。结果黑蚱、蟪蛄、焰螓蝉的虫体体表刚毛在形态、颜色、直径、长短等方面以及毛窝的形态、颜色、大小等方面均具鉴别特征,并将之汇集成蝉蜕及混淆品的刚毛鉴定检索表。结论利用动物药残留毛的显微特征差异,可以达到蝉蜕真伪鉴别的目的。

基于3D景深合成技术的蝉蜕药材鉴别研究

目的:建立蝉蜕药材的现场快速鉴别方法。方法:采用3D景深合成技术,从样品喙的长短、上唇的大小及明显程度、下唇突出的程度及其上横沟的颜色、足部主刺和侧刺的数量以及形态、腹部气门的明显程度、腹板数目、侧板的数目及形态、背板环数、尾器等方面对50批蝉蜕及其混淆品样品进行鉴别。结果:50批样品中,S1~S5、S26~S30、S36~S50为真品蝉蜕;S21~S25为真品蝉蜕增重后的混淆品;S31~S35为真品蝉蜕提取后的混淆品;S6~S20分别为焰螓蝉、山蝉、北京僚蝉蜕皮,均为混淆品。蝉蜕与其混淆品的主要鉴别特征为真品蝉蜕腹部腹面呈三角形,其余品种腹部腹面近平行;山蝉蜕皮气门明显,其余品种气门不明显;山蝉蜕皮尾器侧面观较其余品种尖锐;焰螓蝉蜕皮前足副刺和端刺呈锐角,北京僚蝉蜕皮前足副刺和端刺呈钝角。结论:该方法简便、可靠,可用于现场快速鉴别蝉蜕及其混淆品种。

蝉蜕HPLC定量分析方法的建立和质量评价研究

目的建立蝉蜕Cicadae Periostracum中乙酰多巴胺二聚体A和B的定量分析方法,并用于蝉蜕药材的质量评价。方法建立HPLC-UV方法,并进行方法学验证,同时对4个基原40批市售药材的2种乙酰多巴胺二聚体进行含量测定,并进行聚类分析。采用优化的Alltima C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,乙腈-水流动相,2种成分能与其他色谱峰分开,并达到基线分离,在测定浓度范围内线性关系良好,平均加样回收率在97.53%~102.75%,方法精密度和重复性的RSD均小于5%,样品在24 h内稳定;依据2种乙酰多巴胺二聚体含量进行聚类分析。结果所建立的分析方法简便,准确度和精密度良好,能作为蝉蜕药材常规定量评价方法;40批蝉蜕药材可聚为3类,但2种乙酰多巴胺二聚体的含量没有基原特征性。黑蚱蝉基原的蝉蜕商品中乙酰多巴胺二聚体的含量差异较大,可能与不同来源的商品污染泥沙的量不同有关。结论山蝉、华南蚱蝉和蟪蛄基原的蝉蜕含有较高的乙酰多巴胺二聚体,且整体色谱特征与黑蚱蝉基原蝉蜕相似,是蝉蜕药材的潜在资源,严控泥沙应该是保证蝉蜕药材质量稳定一致的主要措施。

自贡市贡井区蝉蜕的资源调查

结合走访调查、野外考察、样本采集、标本鉴定、资料查阅等方法,调查自贡市贡井区的蝉蜕资源。有13个样地的17个随机样方套中出现了蝉蜕,分布在海拔262~402 m的草丛和针叶林中,年蕴藏量约30吨;代表区域外的蝉蜕集中出现在龙都早香柚林区域,初步估算年蕴藏量约20吨;蝉蜕的资源年总蕴藏量约50吨。开发利用自贡市贡井区蝉蜕资源,扶持其产业化发展,市场价值可观,产业前景广阔。