Artificial meat? Feasible approach based on the experience from cell culture studies

This short review is to list pros and cons which are based on the literature and personal experience in cell culture studies related to possible commercial production of artificial meat as functional food. The general view of muscle composition and determinants of meat quality are shortly described. Principles of muscle cell propagation in culture and mutual relationships between different cell types present in this organ are briefly discussed. Additionally, the effects of some cytokines and growth factors for muscle cell growth and muscle tissue development are indicated. Finally, conclusion remarks related to detrimental consequences of meat production to natural environment as well as personal opinion of author on the prospects of artificial meat production are declared.

外源性碱性成纤维细胞生长因子对大鼠阴茎肌源性干细胞增殖的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子对大鼠阴茎肌源性干细胞体外增殖的影响。方法本试验自2020年12月至2021年6月在滕州市中心人民医院精准实验室完成。取健康雄性Wister大鼠5只,体质量(200±50)g,取其阴茎海绵体并采用酶消化法分离肌源性干细胞,应用密度梯度离心法和差速贴壁法进行纯化。取第2代肌源性干细胞分为两组进行培养,实验组:200μl生长培养基+肌源性干细胞,分别用终浓度为10μg/L、30μg/L、50μg/L、70μg/L、90μg/L外源性碱性成纤维细胞生长因子进行干预;对照组:加入200μl生长培养基+肌源性干细胞。分别于培养24 h、48 h、72 h、96 h、120 h、144 h加入四甲基偶氮唑蓝(MTT)溶液。应用免疫细胞化学法鉴定大鼠阴茎肌源性干细胞,MTT比色法检测细胞增殖情况。统计学方法采用独立样本t检验、Tukey检验。结果(1)肌源性干细胞多呈Sca-1阳性反应[表达量为(79.90±1.82)%],少数呈Desmin阳性反应[表达量为(68.60±0.72)%]。(2)两组肌源性干细胞均随培养时间的延长而明显增殖(均P<0.01),出现显著促增殖效应的培养时间均为96 h。(3)与对照组比较,实验组各浓度碱性成纤维细胞生长因子对肌源性干细胞均有明显的促增殖效应;当浓度从10~70μg/L递增时,促增殖作用也随之均显著增强(均P<0.01),至70μg/L时其促增殖作用接近顶峰。结论外源性碱性成纤维细胞生长因子可促进体外培养的大鼠阴茎肌源性干细胞增殖,且呈浓度-时间依赖性增加,96 h与70μg/L为最佳的体外培养时间和浓度。

兔血管平滑肌细胞体外培养及生长特性研究

目的体外分离培养兔血管平滑肌细胞(VSMC)并观察其生长特征。方法采用酶消化结合贴壁法原代培养兔胸主动脉来源的VSMC并传代,倒置显微镜观察和免疫荧光染色法鉴定培养细胞;锥蓝法、绘制生长曲线、MTT法和划痕法分别测定VSMC传代细胞的成活率及其生长、增殖和迁移能力。结果原代培养5d后,VSMC从组织块边缘长出,传代细胞呈典型"峰-谷"状生长,胞质内α-平滑肌肌动蛋白免疫荧光染色阳性;细胞成活率为96%;生长曲线近似"S"形;细胞生长第3～5d内光密度值变化较明显;无血清培养的VSMC在24h内划痕宽度变化最显著。结论体外培养的兔动脉平滑肌细胞为收缩表型且活性高,生长3～5d细胞增殖活力较强,无血清培养的细胞在24h内迁移能力最强,为心血管疾病研究提供了良好的实验材料。

碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子对骨骼肌源性干细胞的促增殖效应

目的观察碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)和表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)单独及联合应用对骨骼肌源性干细胞(musclederivedstemcells,MDSCs)生长的影响。方法取出生24h内的昆明小鼠15只,采用连续预贴壁法从小鼠后肢肌分离培养MDSCs,用含2%胎牛血清的DMEM培养基促进其向骨骼肌细胞分化。取原代MDSCs及MDSCs分化细胞,采用免疫细胞化学染色检测干细胞标志Sca-1和骨骼肌细胞标志α-Sarcomeric肌动蛋白的表达。HE染色观察细胞肌管形成。MTT比色法检测不同浓度(6.25、12.50、25.00、50.00、100.00ng/ml)的bFGF和EGF单独应用96h对MDSCs增殖的影响以及二者(100.00ng/ml)联合作用24、48、72和96h对MDSCs增殖的影响。结果从新生小鼠后肢肌成功分离培养MDSCs,免疫细胞化学染色90%以上的MDSCs呈Sca-1阳性,分化形成的肌管呈α-Sarcomeric肌动蛋白阳性。HE染色可见肌管形成。bFGF、EGF对MDSCs的促增殖效应随浓度的增加而增加。与阴性对照组比较,bFGF于12.50ng/ml出现促增殖效应(P<0.05);25.00ng/ml组与12.50ng/ml组比较,作用提高(P<0.01);50.00、100.00ng/ml组较25.00ng/ml组无明显提升(P>0.05);EGF的作用与bFGF类似,但于50.00ng/ml时趋于饱和。与阴性对照组比较,EGF于72h、bFGF于96h表现促增殖效应(P<0.01),而二者联合应用于24h即表现促增殖效应(P<0.01),并于48、72和96h增殖效应均较单独应用显著提高(P<0.05)。结论bFGF和EGF都能促进MDSCs的增殖,联合作用更快、更强。

煨脓长肉法在压疮护理中的应用

目的:探讨煨脓长肉法在Ⅲ期溃疡期压疮中的应用疗效。方法:选取2011年10月~2013年10月在我院住院的Ⅲ期压疮患者40例,随机等分为观察组和对照组,观察组待腐肉脱落后,采用煨脓长肉法(马应龙痔疮膏外敷联合安普贴)换药;对照组常规采用安普贴换药,观察两组创面愈合情况。结果:观察组患者的治疗效果显著高于对照组(P<0.05)。观察组伤口愈合时间为(10.08±1.98)d显著低于对照组(21.09±2.17)d,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:马应龙痔疮膏外敷联合安普贴煨脓长肉法应用于Ⅲ期压疮患者,可显著提高压疮治愈率,缩短创面愈合时间,减轻患者痛苦,值得在临床护理中进一步推广。

培养软骨、肌肉和骨蜡移植修复生长板缺损的实验研究

目的 比较培养软骨、肌肉和骨蜡移植修复生长板缺损作用 ,证明实验动物模型的可靠性。方法 2 4只 6周龄新西兰白兔随机分为 3组 ,手术造成右侧胫骨近端生长板内侧 1 / 3～ 1 / 2缺损 ,未作处理的左侧胫骨为正常对照。分别将培养软骨、肌肉和骨蜡植入生长板缺损处 ,手术后第 8周行双下肢X线摄片和组织学检查 ,观察胫骨近端发育及生长板缺损修复情况。结果 肌肉和骨蜡植入组胫骨发生明显内翻及短缩畸形 ,两组间比较无显著性差异 (P >0 .0 5)。生长板缺损部位由大量致密新生骨充填。培养软骨植入组胫骨发育良好 ,明显优于肌肉和骨蜡植入组 (P <0 .0 1 )。移植软骨再生修复生长板缺损 ,恢复其组织结构和生长功能。结论 在 6周龄兔胫骨近端内侧生长板 1 / 3～ 1 / 2缺损移植实验中 ,培养软骨可有效修复生长板缺损和防止胫骨畸形 。

放养密度对池塘养殖施氏鲟幼鱼生长和肌肉成分的影响

在24.4℃~19.2℃下,运用陆基围隔实验生态学方法,研究在静水土池塘养殖条件下放养密度对施氏鲟Acipenser schrenckii幼鱼生长的影响。将初始体质量(54.86±10.19g)的施氏鲟幼鱼饲养在高密度双面涂塑的聚乙烯编织步制成的面积16m2(4m×4m)、水深1.7m^1.9m围隔中46d,放养密度为2000、3000、4000和5000尾/667m2。结果显示:试验鱼终末体质量、特定生长率、增重率、成活率随放养密度的增大显著降低(P<0.05),饲料系数随放养密度的增大显著升高(P<0.05),产量在放养密度为4000尾/667m2时最高,为352.27±22.38kg/667m2。肌肉中粗蛋白质和粗脂肪含量随放养密度的增加而显著降低(P<0.05),水分和灰分含量的变化不显著(P<0.05)。研究表明:静水土池塘养殖施氏鲟幼鱼(50g左右)的适宜放养密度为3000~4000尾/667m2。

机械生长因子对骨骼肌卫星细胞激活的影响及与其增殖的量效关系

目的:通过离体实验,观察机械生长因子(MGF)对于骨骼肌卫星细胞(SC)的激活作用及促进其增殖的量效关系,探讨MGF对SC在细胞水平的调节机制,为骨骼肌损伤的修复提供理论依据。方法:原代SC取自4周龄雄性SD大鼠双侧的腓肠肌与比目鱼肌。使用不同浓度的MGF干预第三代细胞后测定增殖效果。血清饥饿后通过MGF和DMEM干预骨骼肌卫星细胞,使用流式细胞仪检测其所处细胞周期,判断激活情况。结果:干预48h后,25ng/ml组、50ng/ml组A值显著高于对照组(P<0.01),100ng/ml组、200ng/ml组与对照组之间差异没有显著性(P>0.05);96h后25ng/ml组、50ng/ml组、100ng/ml组、200ng/ml组之间差异没有显著性(P>0.05)。25ng/mlMGF干预G0期的SC24h后MGF组低于对照组(P<0.01)。结论:MGF可以促进SC增殖;MGF可以激活4周龄SD大鼠的G期SC。

固态培养对普洱熟茶后发酵过程中优势菌日本曲霉原变种生长的影响

本文通过不同碳原、氮原、pH值和温度的实验，对普洱熟茶后发酵优势菌之一的日本曲霉原变种的生物学特性进行研究。同时，对菌落的生长规律及形态特征进行了观察与分析。结果表明，该菌株对酸碱度有广幅的适应性；在硝酸钠或硫酸铵为氮源，麦芽糖或玉米粉为碳源的培养基中生长迅速；培养温度以30℃最为适宜。研究结果为该菌株的大量培养，以及普洱茶的规范化生产技术提供了基础。

紫杉醇对兔血管内皮和平滑肌细胞增生影响的差异及意义(英文)

目的：探讨紫杉醇对兔血管内皮和平滑肌增生影响的差异及意义.方法：将兔血管平滑肌细胞接种于共培养体系上室、内皮细胞接种于下室建立体外内膜修复模型,观察紫杉醇对兔血管平滑肌和内皮细胞3H-TdR掺入、细胞计数和迁移率的影响,用直线回归法计算紫杉醇对平滑肌和内皮细胞增生迁移的半数有效抑制浓度IC50.结果：在1 nmol·L^-1～1 μmol·L^-1之间,紫杉醇呈浓度依赖地抑制平滑肌细胞^3H-TdR掺入、细胞计数和迁移（n=6, P＜0.01）.在10 nmol·L^-1～1 μmol·L^-1之间,紫杉醇呈浓度依赖地抑制内皮细胞3H-TdR掺入、细胞计数和迁移（n=6, P＜0.01）.1 nmol·L^-1紫杉醇对内皮细胞3H-TdR掺入和细胞计数有抑制倾向,但与对照组相比无统计学差异.而1 nmol·L^-1的紫杉醇却已显著抑制内皮细胞迁移（n=6, P＜0.01）.紫杉醇对兔血管平滑肌细胞增生、迁移抑制的IC50分别为 10.09±0.47、9.16±0.54 nmol·L^-1,对内皮细胞增生、迁移抑制的IC50分别为 19.05±0.35、5.37±0.51 nmol·L^-1.10 nmol·L^-1紫杉醇作用 20 min 在观察时间内能持续抑制融合内皮组平滑肌增生,而对数内皮组平滑肌增殖在10 d时明显高于对照组.结论：紫杉醇在抑制兔血管平滑肌细胞增生的同时也抑制内皮增生,紫杉醇干预后平滑肌细胞增生延迟与内皮细胞再生延迟密切相关.

神经生长因子干预大鼠骨骼肌卫星细胞增殖及α-肌动蛋白的表达

背景:临床研究证实,向神经受损部位注射神经生长因子可改善骨骼肌的运动功能。目的:观察神经生长因子对大鼠原代骨骼肌卫星细胞增殖的影响。方法:采用组织块培养法培养大鼠原代骨骼肌卫星细胞。将第3代骨骼肌卫星细胞分3组培养:对照组加入培养液,低、高浓度组分别加入含10,20 U/mL神经生长因子的培养液。培养2,4,6 d时,倒置相差显微镜与苏木精-伊红染色观察细胞形态,免疫组化染色观察细胞α-肌动蛋白表达;培养1,2,3,4 d后,采用CCK-8法检测细胞增殖活性。结果与结论:①倒置相差显微镜显示,随着培养时间的增加,各组骨骼肌卫星细胞数量逐渐增多,细胞形态由圆形逐渐变为细长的梭形、纺锤形或多角形,并逐渐融合并沿同一个方向排列,并且高浓度组细胞数量多于低浓度组、对照组(P<0.05);②苏木精-伊红染色显示,各组骨骼肌卫星细胞轮廓清晰可见,密集分布,胞核较大且深染,组间无明显差异;③免疫组化染色显示,各组均可见α-肌动蛋白阳性表达,3组间α-肌动蛋白阳性表达吸光度值比较差异无显著性意义(P>0.05);④CCK-8检测显示,低、高浓度组细胞活力高于对照组(P=0.000);⑤结果表明,高、低浓度的神经生长因子均能促进骨骼肌卫星细胞的增殖,但对α-肌动蛋白表达无影响。

机械生长因子对骨骼肌卫星细胞增殖及MGF mRNA表达的影响

目的骨骼肌卫星细胞是肌源性干细胞,该细胞的增殖受一系列生长因子的影响。而机械生长因子(mechano growth factor,MGF)是近年来发现的一种对力学信号敏感的自分泌局部生长因子,可以激活肌卫星细胞的增殖。本研究采用不同浓度的MGF干预体外培养的骨骼肌卫星细胞,探讨促进卫星细胞增殖的适宜浓度。方法用Ⅱ型胶原酶和胰蛋白酶两步酶消化法分离骨骼肌卫星细胞,待细胞同步化后,分别应用不同浓度的MGF(0ng/ml、25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml和150ng/ml)干预原代培养的骨骼肌卫星细胞96小时,采用RT-PCR技术检测肌卫星细胞MGF mRNA的表达,用CCK-8检测卫星细胞的增殖情况,并检测细胞总蛋白含量。结果与0ng/ml MGF组相比,25ng/ml和50ng/ml组OD值在各时间点均显著性增加,其中25ng/ml组在24h至96h内OD值具有高度显著性(P<0.01),50ng/ml组在24h至72h内也有高度显著性的增加(P<0.01);25ng/ml和50ng/ml组MGF mRNA的表达量均显著高于对照组(P<0.05),其它组的表达与对照组无显著性差异。总蛋白含量也显示,与0ng/ml MGF组相比,25ng/ml和50ng/ml组均有显著性升高(P<0.05)。结论适宜浓度的MGF具有促进肌卫星细胞增殖的作用,其中浓度为25ng/ml和50ng/ml时具有较强的促增殖作用,但有一定的时间差异。

切应力作用下与血管平滑肌细胞联合培养的内皮细胞PDGF-B含量的变化

目的 探讨切应力作用下联合培养的血管平滑肌细胞 (VSMC)对内皮细胞 (EC)PDGF B含量变化的影响 ,为组织工程血管和预防血管移植物再缩窄研究提供一些实验资料。方法 应用免疫细胞化学方法和图像分析技术 ,以静态条件下单独培养的EC和联合培养的EC为两对照组 ,研究了切应力作用下单独培养的EC和与VSMC联合培养EC的PDGF B含量的变化。结果 静态条件下联合培养EC的PDGF B的含量比单独培养的EC减少 ;切应力作用下 ,联合培养EC的PDGF B含量在切应力作用 1h左右有瞬时上升 ,随后下降至低于联合培养条件下的静态水平 ,且瞬时上升的时间点比单独培养的EC提前。结论 切应力作用下 ,与VSMC联合培养EC的PDGF B含量下降 ,这可能有利于抑制VSMC的增殖 。

扇贝裙边糖胺聚糖对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响(英文)

目的 研究扇贝 (Placopectamagellanicus)裙边中提取的糖胺聚糖 (SS GAG)是否如肝素一样抑制血管平滑肌细胞 (VSMC)的增殖。方法 采用胎牛血清和碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)所诱导的大鼠胸、腹主动脉VSMC增殖模型 ,通过细胞计数、结晶紫染色及MTT比色法观察SS GAG对VSMC增殖的影响 ,并运用免疫组织化学技术和计算机图像分析系统检测SS GAG对VSMC的增殖细胞核抗原(PCNA)和血小板衍化生长因子 (PDGF)表达的影响。结果 SS GAG 5 0 ,10 0和 2 0 0mg·L- 1对 2 0 %胎牛血清和 5 0 μg·L- 1bFGF所诱导的VSMC增殖均有明显抑制作用 ,并能抑制VSMC增殖时PCNA和PDGF的表达。结论 SS GAG能抑制VSMC的增殖 ,该作用可能是通过抑制PDGF和PCNA的表达而实现的。

Effects of heparin on growth factor-induced mitogenic and proliferative responses of rat pulmonary a

目的：探讨肝素是否能抑制生长因子诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）分裂和增殖．方法：应用含１０％ＦＢＳ的Ｍ１９９培养液培养大鼠ＰＡＳＭＣ．细胞分裂及细胞增殖分别用［ｍｅｔｈｙｌ３Ｈ］ＴｄＲ和细胞计数监测．结果：ＦＢＳ（１０％），以及ＦＢＳ（１％）与ＰＤＧＦ（５０μｇ·Ｌ－１），ＦＧＦ（５０μｇ·Ｌ－１），或ＩＬ１α（１００ｎｇ·Ｌ－１）联合应用均能增加大鼠ＰＡＳＭＣ分裂．肝素（１００ｍｇ·Ｌ－１）抑制１０％ＦＢＳ诱导的大鼠ＰＡＳＭＣ增殖（２８％±６％）和胸腺嘧啶摄取反应（２７％±７％），抑制ＦＢＳ（１％）与ＰＤＧＦ（５０μｇ·Ｌ－１），ＦＧＦ（５０μｇ·Ｌ－１），或ＩＬ１α（１００ｎｇ·Ｌ－１）联用诱导的大鼠ＰＡＳＭＣ增殖（２５％±６％，２７％±７％，２０％±４％），以及胸腺嘧啶摄取反应（２３％±７％，２６％±６％，２０％±６％）．结论：肝素抑制生长因子诱导的大鼠ＰＡＳＭＣ的分裂与增殖．

导向药物转化生长因子α-Sporin对增殖平滑肌细胞生长的抑制作用

为证实生物导向药物对平滑肌细胞增殖的作用 ,用SPDP化学联结法合成了转化生长因子α -Saporin ,通过MTS比色法观察了转化生长因子α-Saporin对培养中的增殖平滑肌细胞的细胞毒性作用 ,并用氚标胸腺脱氧嘧啶核苷掺入法进一步探讨了转化生长因子α -Saporin对平滑肌细胞的DNA合成的影响以及过量转化生长因子α对转化生长因子α -Saporin的受体竞争抑制作用。结果发现 ,联结后的转化生长因子α -Saporin可明显抑制平滑肌细胞的增殖 ,而Saporin的抑制作用却很弱。转化生长因子α -Saporin对培养的平滑肌细胞氚标胸腺脱氧嘧啶核苷掺入量有明显抑制作用 ,与对照组比较氚标胸腺脱氧嘧啶核苷掺入量降低了 39.1% (P =0 .0 0 17) ,而在加入表皮生长因子受体的配体转化生长因子α后可明显竞争抑制转化生长因子α -Saporin对平滑肌细胞增殖的细胞毒性作用。实验结果提示 :转化生长因子α saporin通过表皮生长因子受体介导已具有较Saporin明显增强的细胞毒性作用 ,本实验为转化生长因子α saporin在经皮腔内冠状动脉成形术术后再狭窄的临床防治中的应用的研究提供初步的实验依据。

不同饲料对稻田养殖克氏原螯虾生长、非特异性免疫酶及体成分的影响

为探明在稻田养殖模式下,不同饲料对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)生长、非特异性免疫酶和体成分的影响,于2018年3—5月,将体重为(2.09±0.20)g、体长为(4.54±0.13)cm的克氏原螯虾虾苗随机分为6组(A1~A6组,每组7100尾),其中向A1~A5组分别投喂5种不同饲料(A1组饲喂玉米、A2组饲喂大豆、A3组饲喂添加了复方黄芪多糖蛋白质含量≥26%的饲料、A4组饲喂蛋白质含量≥26%的饲料、A5组饲喂蛋白质含量≥28%的饲料),A6组不投喂饲料,每组设置一个平行组。养殖周期为60 d,测定该虾的生长性能、非特异性免疫以及体成分等指标。结果显示:1)A3组体重增加率最大,与A5组差异不显著(P>0.05),与其它组差异显著(P<0.05);A3组体长增加率最大,与A4和A5组差异不显著(P>0.05),与其它组差异显著(P<0.05)。2)A2组超氧化物歧化酶(SOD)的活性最高,但与其它组差异不显著(P>0.05);A5组酸性磷酸酶(ACP)的活性最高,与A1组差异不显著(P>0.05),与其它组差异显著(P<0.05);A6组溶菌酶(LSZ)的活性最高,与A1组、A2组和A3组差异不显著(P>0.05),但与A4和A5组溶菌酶(LSZ)的差异显著(P<0.05)。3)含肉率和系水力方面,A1组克氏原螯虾的含肉率最高,与其它组差异显著(P<0.05);A3组系水力最高与A2组、A4组和A6组差异不显著(P>0.05),与A1组和A5组差异显著(P<0.05);A6组的含水率最高与其它组差异显著(P<0.05)。4)粗蛋白含量最高的是A5组,与其它各组差异不显著(P>0.05);A1组粗脂肪含量最高,其次为A5组,两组差异不显著(P>0.05),两组与其它各组差异显著(P<0.05);粗灰分含量最高的是A4组,但各组差异不显著(P>0.05)。在本试验条件下,综合分析不同饲料对克氏原螯虾生长、非特异性免疫酶和体成分的影响,添加了复方黄芪多糖蛋白含量≥26%的饲料优于其它饲料。

兔膀胱平滑肌细胞的分离培养与鉴定

目的建立分离、培养高纯度兔膀胱平滑肌细胞的方法,并进行细胞学鉴定与分析。方法正常成年新西兰白兔共6只,运用显微手术器械在肉眼下仔细剔除膀胱黏膜层及浆膜层后,完整分离膀胱平滑肌层。然后以酶分离法获取兔膀胱平滑肌细胞,体外原代和传代培养分离细胞。在倒置显微镜下观察细胞形态及生长状况,同时进行细胞爬片H-E染色和透射电镜等形态学观察分析,并应用免疫荧光染色平滑肌特有的α-肌动蛋白进行细胞学鉴定分析。最后根据细胞计数绘制细胞生长曲线和增殖曲线。结果24h可见膀胱平滑肌细胞贴壁生长,7d可进行传代,传至第10代时细胞仍迅速生长,倒置显微镜下观察细胞相互交叉、重叠生长形成多层,高低起伏呈"谷和峰"样结构,至第12代时,细胞开始变形,至第15代时细胞已失去平滑肌细胞的典型形态特点,细胞生长杂乱且不规则,至第20代时细胞已死亡。以第4代细胞进行形态学细胞爬片H-E染色和透射电镜观察分析,以及平滑肌特有的α-肌动蛋白免疫荧光染色分析均证实,该分离培养的细胞为膀胱平滑肌细胞,且纯度高达100%。结论酶分离法在短时间内成功培养大量高纯度的膀胱平滑肌细胞,为深入研究膀胱平滑肌细胞的病理生理及分子生物学奠定了基础。

血小板源生长因子BB对人血管平滑肌细胞钙调素的影响

为研究血小板源生长因子BB对培养的人血管平滑肌细胞钙调素的影响 ,采用培养的人血管平滑肌细胞 ,应用磷酸二酯酶法观察不同浓度的血小板源生长因子BB对钙调素含量变化的影响及其时间效应。结果发现 ,平滑肌细胞在进入细胞增殖周期后 ,细胞内钙调素含量逐渐增加 ,在 9h时出现一个短暂的高峰 ,随后细胞内钙调素含量逐渐下降。血小板源生长因子BB可促进钙调素含量的增加 ,并呈现出明显的浓度依赖关系 ,30 μg L血小板源生长因子BB作用最为显著。结果提示 ,血小板源生长因子BB可明显促进培养的人血管平滑肌细胞钙调素含量的增加 ,并存在着一定的量效依赖关系及时间反应性。

细胞联合培养杯膜的孔径对血小板源性生长因子通透的影响

目的探讨细胞联合培养杯膜的孔径对生物大分子通透的影响,解决血管细胞分子力学生物学实验的关键技术问题。方法以杯底PET膜孔径为0.4μm和1.0μm的两种型号细胞联合培养杯作为研究对象,将大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)和内皮细胞(endothelial cells,ECs)分别种植于联合培养杯底PET膜的内外侧面。实验分为EC/VSMC联合培养施加低切应力组、PET膜未接种细胞静止组、PET膜单侧接种细胞静止组和PET膜双侧接种细胞静止组。ELISA检测低切应力组ECs侧和VSMCs侧培养液中血小板源性生长因子(platelet-derived growth factor BB,PDGF-BB)含量,Western blotting检测重组PDGF-BB(rPDGF-BB)刺激后,各组细胞内信号转导分子p-ERK1/2和p-Akt以及核骨架蛋白Lamin A的表达变化。结果 EC/VSMC联合培养施加0.5 Pa层流低切应力12 h后,0.4μm联合培养杯VSMCs侧PDGF-BB浓度显著高于ECs侧。0.4μm和1.0μm两种孔径的PET膜未接种细胞时,rPDGF-BB上调了隔开培养细胞的p-ERK1/2和p-Akt表达,并下调Lamin A表达。PET膜外侧面接种单层细胞时,rPDGF-BB上调了对侧细胞的p-ERK1/2和p-Akt表达,并下调Lamin A表达。PET膜内外侧面均接种细胞时,rPDGF-BB仅能影响0.4μm PET膜同侧细胞的p-ERK1/2、p-Akt和Lamin A表达,对对侧细胞无明显作用;而1.0μm PET膜两侧细胞的p-ERK1/2、p-Akt和Lamin A表达无显著性差异。结论两种有孔PET材料本身均允许生物大分子的通透,而细胞接种会影响有孔PET膜对生物大分子的通透。0.4μm孔径PET膜两侧均接种细胞时,对生物大分子的通透明显减弱,更接近于在体情况。