安徽黄缘闭壳龟(Cuora flavomarginata)野生种群的现状及其保护建议

安徽是濒危物种黄缘闭壳龟的重要分布区之一,由于人类活动使得该龟栖息地日益减少,生存空间被挤占。加之近年来日益频繁的黄缘闭壳龟贸易所带来的肆意滥捕以及缺乏有效的保护措施,导致其野生种群衰减严重,数量已经十分稀少,同时买卖和饲养也进一步加剧了黄缘闭壳龟的非自然扩散和引入。目前黄缘闭壳龟在安徽的具体产地一直缺乏一个较为科学的研究,而了解黄缘闭壳龟在安徽的具体分布状况,对于该龟的保护至关重要。2011年—2012年5月至10月间,采用市场和访问调查以及野外实地调查相结合的方法,对安徽黄缘闭壳龟野生种群现状进行了研究,并对调查结果进行了报道,同时针对保护管理中存在的问题,提出相应的保护建议。

温度对黄缘闭壳龟受精卵孵化的影响

为了探讨温度对黄缘闭壳龟(Cuora flavomarginata)受精卵孵化的影响,挑选84个大小均一、蛋黄下沉、有精斑龟卵,随机分成4组,每组21个,分3个平行,每个平行7个。每个平行小组的龟卵在同一个孵化箱中孵化。4个小组分别对应4个温度梯度。处理1组的孵化温度为(24±0.5)℃,处理2组的孵化温度为(26±0.5)℃,处理3组的孵化温度为(28±0.5)℃,处理4组的孵化温度为(30±0.5)℃。孵化结束后计算孵化率、称量体重量。结果显示,孵化温度为(28±0.5)℃组的孵化率最高,为95.24%;其次为(30±0.5)℃组,孵化率为85.71%;孵化温度为(24±0.5)℃组的孵化率最低,为28.57%。通过对初孵幼龟体质量进行称量,发现孵化温度对初孵幼龟体质量影响显著,以(28±0.5)℃的处理3组初孵幼龟体质量最重,显著地高于(24±0.5)℃的处理1组、(26±0.5)℃的处理2组(P<0.05),但是和孵化温度为(30±0.5)℃的处理4组相比差异不显著(P>0.05)。幼龟孵出30周后体质量以(28±0.5)℃的处理3组最高,与(30±0.5)℃的处理4组相比差异不显著(P>0.05),显著地高于(26±0.5)℃的处理2组(P<0.05),极显著地高于(24±0.5)℃的处理1组(P<0.01)。由于受到孵化温度的影响,(24±0.5)℃的处理1组和(26±0.5)℃的处理2组初始孵化体重较轻,所以8周~30周的体质量增加率显著地高于(28±0.5)℃的处理3组和(30±0.5)℃的处理4组(P<0.05)。但是从幼龟的孵出率和孵出8周、30周的体质量来看,以(28±0.5)℃的处理3组孵化黄缘闭壳龟的孵化效果最好。

一株雷氏普罗维登斯菌的分离鉴定、生物学特性及其基因组学研究

为确定2020年6月浙江杭州一发病黄缘闭壳龟的病原体及病原特征,研究从患病龟肝脏中分离到一株优势菌HZ202006,对该菌进行形态学观察、16S rRNA序列分析、全基因组测序、人工感染实验及药敏试验。结果确认该菌株为雷氏普罗维登斯菌(Providencia rettgeri),短杆状,革兰氏阴性菌。全基因组测序显示该菌株完整基因组序列是由一条4.8 Mb的双链DNA和2个质粒组成。利用耐药基因数据库(CARD)和毒力因子数据库(VFDB)对测序基因进行注释,发现该菌有20个耐药基因和4个毒力因子。药敏试验结果显示,HZ202006只对阿米卡星表现为中度敏感,对青霉素类、头孢类、氨基糖苷类等16种常见的抗生素耐药。研究分离并鉴定了一株使黄缘闭壳龟患病的雷氏普罗维登斯菌,为水产养殖动物防控该菌引起的相关疾病提供参考。

基于COI基因的浙江省内黄缘闭壳龟遗传多样性研究

为了解浙江省内不同黄缘闭壳龟(Cuora flavomarginata)群体的种质资源现状,基于线粒体DNA COI序列对来自浙江省内野外和养殖场的8个黄缘闭壳龟群体的遗传多样性和遗传结构进行比较分析。结果表明:黄缘闭壳龟线粒体COI基因序列长度为1040 bp,A=27.4%、T=30.5%、C=24.6%、G=17.5%,有较强的AT偏好性;共定义9个单倍型,单倍型多样性(Hd)为(0.79900±0.21000),核苷酸多样性(Pi)为(0.00209±0.00147),呈“高Hd低Pi”遗传分布;不同黄缘闭壳龟群体间的遗传距离为0~0.003,群体内部的遗传距离为0~0.004,其中磐安后阁村(YS)群体内部的遗传距离最大,为0.004;单倍型系统发育树并未呈现明显的谱系结构;群体间遗传分化指数(FST)为-0.34752~0.82222,8个群体的遗传分化不显著(p>0.05);中性检验(Tajima’s D=-0.36627,Fu’s FS=-0.605)与核苷酸错配分布均表明,浙江省内黄缘闭壳龟群体并未经历种群扩张事件,同时,由Mantel检验可知,遗传距离与地理距离没有显著的相关性(R=0.2938,p>0.05);AMOVA分子方差结果显示,群体内的遗传变异高于群体间(85.06%>14.94%)。研究表明,浙江省内黄缘闭壳龟群体之间为高单倍型多样性和低核苷酸多样性的遗传特征,并且存在一定水平的遗传分化,群体内存在明显的基因交流,根据COI基因分析显示,在磐安县获得的野生黄缘闭壳龟个体确定为黄缘闭壳龟浙江种,同时也发现存在浙江种与安徽种的杂交种,建议将分化程度不同的黄缘闭壳龟群体划分为不同单元保护。研究结果为浙江省内黄缘闭壳龟种质资源开发利用和合理制定保护措施提供了基础依据。

温度对黄缘闭壳龟孵化和稚龟表型特征的影响

为研究温度对黄缘闭壳龟受精卵孵化和稚龟表型特征的影响,采用恒温孵化法,设置3个孵育温度(26±0.5)、(28±0.5)、(30±0.5)℃,每个温度放置卵30个,检测孵化期、孵化率和孵化稚龟表型特征并进行统计分析。试验结果表明,28℃试验组的孵化成功率最高,达到93.3%,孵化期75 d,相对较短,所孵幼体的体质量和13个表型性状显著高于26℃试验组(P<0.05),有利于幼体的生长;依据孵化率高低、稚龟体质量和表型特征大小,28℃是黄缘闭壳龟在北京及周边地区孵化的适宜温度条件。因此,孵化温度显著影响龟卵孵化效果和稚龟表型特征,该试验结果对黄缘闭壳龟在京津冀地区的繁育孵化具有重要的参考价值。

黄缘闭壳龟主要形态性状与体质量的关系

为确定影响黄缘闭壳龟Cuora flavomarginata体质量的主要形态性状,随机选取1、2、3龄的黄缘闭壳龟为试验对象(每个年龄组120尾),测量其体质量(y)、背甲长(x_1)、背甲宽(x_2)、背甲高(x_3)、甲桥斜高(x_4)、腹甲长(x_5)、腹甲宽(x_6)、甲桥长(x_7)、喉盾宽(x_8)、肱盾宽(x_9)、胸盾宽(x_(10))、股盾宽(x_(11))、肛盾宽(x_(12))、喉盾缝长(x_(13))、肱盾缝长(x_(14))、胸盾缝长(x_(15))、腹盾缝长(x_(16))、股盾缝长(x_(17))和肛盾缝长(x_(18))19个性状,采用相关分析、主成分分析、通径分析和回归分析的方法,计算相关系数、通径系数和决定系数,获得相关回归方程,对不同年龄组间的形态性状对体质量的影响程度进行了比较研究。结果表明:1龄组龟甲桥长对体质量的直接作用较大,2龄组龟肱盾宽和背甲长对体质量的影响较大,3龄组龟肱盾宽对体质量的影响较大;1、2、3龄龟第一主成分由大至小依次综合为增重因子、背甲增长因子、腹甲增长因子→增重因子、腹甲增长因子→腹甲增长因子;利用逐步回归分析方法,以体质量为依变量(y),形态性状为自变量(x_1～x_(18)),建立了黄缘闭壳龟不同年龄最优多元线性回归方程分别为y_A=-21.193+13.874x_7+4.834x_(10),y_B=-60.626+24.880x_9+11.750x_1-34.040x_(16),y_C=223.604+145.260x_9-153.201x_8-33.241 x_5,式中y_A、y_B、y_C分别为1、2、3龄组龟的体质量(g)。本研究结果可为黄缘闭壳龟良种选育的具体应用提供理论参考。

华中与华南地区黄缘闭壳龟形态学差异

通过体质量、背甲长、背甲宽、腹甲长、腹甲宽、体高等形态参数,以及背甲长/背甲宽、腹甲长/腹甲宽、背甲长/腹甲长、背甲宽/腹甲宽、背甲长/体高、腹甲长/体高等形态参数比值研究华中、华南地区黄缘闭壳龟群体形态学差异.主成分分析、聚类分析等4种统计分析结果表明:华中地区黄缘闭壳龟形态学与华南地区黄缘闭壳龟形态学的相似程度较小,差异性较大,形态参数差异极显著(P<0.01),形态参数比值差异显著或极显著(P<0.01或P<0.05);而华中地区A、B两群体黄缘闭壳龟形态学的相似程度较大,差异性较小.

河南信阳黄缘闭壳龟省级自然保护区黄缘闭壳龟种群现状调查

为了解黄缘闭壳龟的野外生存环境及资源现状,我们于2014年9月4日~16日,对河南省信阳黄缘闭壳龟省级自然保护区境内的罗山、商城、新县等地黄缘闭壳龟的分布、数量和栖息地环境进行了调查。结果显示,除罗山境内少量地区人为干扰较强,目前难觅黄缘闭壳龟外,其余地区均有黄缘闭壳龟分布,栖息地环境较好。根据走访调查,2012~2014年间共记录黄缘闭壳龟121只,野外实地调查发现黄缘闭壳龟2只。3 a通过调查分别发现黄缘闭壳龟47只、46只和28只,呈急剧下降趋势。为拯救这一珍贵物种,保护区应尽快组织后续的专项资源调查,以监测黄缘闭壳龟的种群动态,并积极开展该种的就地保护和迁地保护工作。

黄缘盒龟肝脏与肾脏的超微结构

在透射电子显微镜下观察黄缘盒龟的肝脏和肾脏的超微结构.结果显示肝实质内结缔组织少,肝小叶分界不清楚;肝细胞具两种形态,即L细胞和D细胞.肾小球由毛细血管构成;肾小囊外壁由扁平细胞构成,内壁可见足细胞附于其上;颈段由单层纤毛立方上皮细胞构成,细胞核较大,细胞游离面有很多纤毛伸向管腔,细胞核周围排列密集的线粒体;近曲小管由单层柱状上皮细胞构成,细胞核圆形,位于细胞中部,胞质内含有丰富的线粒体;中间段由单层纤毛立方上皮构成;远曲小管由单层柱状上皮细胞构成,细胞核位于细胞中部,其周围分布有许多线粒体,细胞底部可见丰富的质膜内褶;收集管由单层柱状上皮细胞组成,胞质内可见较丰富的膜迷路.黄缘盒龟肝脏的超微结构与其他爬行动物相似.肾脏结构与其生态习性有关.

野生黄缘闭壳龟资源分布与濒危机制研究

黄缘闭壳龟属世界珍稀濒危物种,中国重点野生保护动物.20世纪70年代前野生黄缘闭壳龟曾广泛分布于中国的河南、安徽、湖北、湖南、浙江、江苏、广西、台湾等省和琉球群岛,野生资源十分丰富,仅河南信阳大别山区的分布面积多达39万hm^2,野生种群数量约40万只.但自20世纪80年代后,随着盗猎强度的加剧,黄缘闭壳龟的分布区和栖息地遭到地毯式的搜索,猎捕手段的多样化及其过度猎捕致使黄缘闭壳龟野生资源日益枯竭.目前只在河南大别山区、安徽皖南山区、安徽皖西山区等地还有少量野生个体生存,稳定的黄缘闭壳龟野生种群仅分布于台湾和琉球群岛.导致黄缘闭壳龟野生资源濒危的原因主要是其性成熟周期长、种群繁殖力低、栖息地遭受干扰破坏等因素,另外,人类贪婪无尽地对其野生资源的索取是导致黄缘闭壳龟自然种群濒危灭绝的重要原因.加强黄缘闭壳龟保护区的建设与管理,加大打击盗猎行为,提高公众的保护意识,建立生态补偿机制,开展自然种群的恢复与重建是拯救黄缘闭壳龟濒危灭绝的有效措施.

大别山区黄缘闭壳龟形态生物学的种群特征分析(Ⅱ)

根据腹甲形态以及背甲与腹甲的闭合程度等特征,将大别山区黄缘闭壳龟分为两个自然种群,对其中一个自然种群的形态生物学特征进行研究报道。该自然种群的形态生物学特征为腹甲中部较平,背甲与腹甲完全闭合不紧密,头部、四肢可部分露出,可量性状研究表明,背甲长/背甲宽、背甲长/腹甲长、背甲宽/腹甲宽的统计分析分别为:1.37±0.06、1.04±0.02、1.30±0.04。背甲长与腹甲长的回归方程为Y=1.0512X-1.3141、背甲长与体高的回归方程为Y=0.4665X+0.6157,线性相关极其显著。体重与背甲长、体重与背甲宽、背甲宽与腹甲宽等存在着比较显著的线性关系。而年龄与体重(相关系数为r=0.3640)不存在明显的线性相关性。

三线闭壳龟、黄喉拟水龟、黄缘盒龟及其地方品系外部形态特征比较研究

首次对中国珍稀龟类三线闭壳龟(Cuora Trifasciata)、黄喉拟水龟(Mauremys mutica)、黄缘盒龟(Cistoclemmys flavomarginatas)及其地方品系的外部形态特征和差异进行了比较研究,为制定相应的龟类种质标准,保护和合理利用龟类资源提供技术资料。

安徽省黄缘盒龟资源现状及驯养繁育调查

为弄清安徽省黄缘盒龟资源现状及驯养繁殖情况，2011年8～10月对安徽省皖南山区的黟县、泾县、广德及大别山区霍山县、金寨县等12个县区进行了调查。调查共发现安徽本地黄缘盒龟共34只，其中皖南山区27只，大别山区7只，另外发现台湾黄缘盒龟8只；安徽省有16个黄缘盒龟驯养基地，共有亲本2194只，2011年繁殖幼龟2280只。分析认为：黄缘盒龟资源严重衰退，存在种质混杂风险。建议加强资源管理，建立皖南、大别山黄缘盒龟保护区，建立安徽原产地黄缘盒龟繁殖中心，防止因台湾黄缘盒龟进入造成种质混杂。

黄缘闭壳龟微卫星分子标记的开发及遗传多样性分析

采用FIASCO法构建了黄缘闭壳龟基因组微卫星富集文库,开发了18个具有多态性的微卫星分子标记. 18个位点的等位基因数目为2~14个不等,每个位点平均等位基因数为6.3个;观测杂合度在0.032和0.936之间变化(平均值为0.329),期望杂合度在0.148和0.903之间变化(平均值为0.635).黄缘闭壳龟微卫星分子标记的开发,将为其遗传学和种群结构分析研究提供有力的分子工具,并为制定新的保护策略提供理论依据.

黄缘闭壳龟死亡病例的感染病原探究

本试验中死亡的1例黄缘闭壳龟幼龟来源于北京某养殖场。剖检发现体腔内充盈溢出的肠道内容物,十二指肠的浆膜层表面可见穿孔及存在针尖状出血点。组织病理切片可见其肝脏、肾脏组织中存在大量菌团,提示可能发生了严重的细菌感染。为明确致病病原,进一步采用PCR与二代测序技术进行了病原菌的鉴定。结果显示,肝脏与十二指肠组织中存在致病菌口龟杆菌(Chelonobacter oris)。基于病理学观察和分子生物学鉴定数据,推测该菌是引起该病例死亡的感染病原。

黄缘闭壳龟头骨、椎骨及附肢骨骼系统研究

为揭示黄缘闭壳龟(Cuora flavomarginata)的骨骼形态特征,使用X射线透视法对黄缘闭壳龟进行拍照及相关研究。研究发现,黄缘闭壳龟的头骨窄而细长,与身体占比小,颅长为背甲长的27.09%~30.93%,颅宽为背甲宽的21.40%~27.66%,颅长为颅宽的1.35~1.72倍;脊椎骨由4枚颈椎、7枚躯椎、2或3枚荐椎和21或22枚尾椎组成,第1~7躯椎两侧连接着肋骨,肋骨宽度大小与躯椎的宽度一致,最后两枚躯椎所连接的肋骨宽度较窄;前肢骨比后肢骨长且粗壮,后肢扁平,骨骼较短小,通过胸盾和腹盾之间的铰链结构,黄缘闭壳龟的头、尾和四肢可完全缩入壳内,其腹甲前端(喉盾和肱盾)和后端(股盾和肛盾)分别与背甲闭合,将肉体完全封闭保护。通过骨骼系统特征得出,黄缘闭壳龟具有与生活习性相匹配的骨骼结构;X射线透视法可以清晰地观察黄缘闭壳龟骨骼结构,但由于物种特性,受背腹甲的影响,躯椎、荐椎和尾椎骨清晰度略低。黄缘闭壳龟骨骼的研究丰富了龟类的基础研究,可以为其分类及演化提供参考,并为在无损伤前提下研究珍惜或名贵物种提供了思路。