莪术多糖的分离提取及其生物学活性研究

目的:从莪术饮片中分离多糖,并研究其生物学活性。方法:莪术饮片的热水浸提液经浓缩、醇析、活性碳吸附除色素、Savage 法除蛋白得其粗多糖,经DEAE-52柱层析,分离各组分。苯酚-硫酸法测多糖含量。采取腹腔注射与口服两种途径在小鼠测其生物学活性。结果:莪术饮片中总糖的含量为33.12%,多糖提取率为1.938%。莪术多糖可以提高小鼠的脾指数、淋巴细胞转化率;提高血液中超氧化物歧化酶的活力;具有抑瘤作用;体外具有抗羟自由基的能力。腹腔注射时抑瘤率明显高于口服途径,并呈现剂量依赖性。结论:莪术多糖可以提高小鼠的免疫调节能力,表现出抗氧化活性;并具有较高的抗H22肝癌腹水瘤的能力。

莪术多糖对雏鸡抗氧化能力和免疫功能的影响

采用160只7日龄健康雏鸡,随机分为4组,即正常对照组(Ⅰ)、环磷酰胺组(Ⅱ)、环磷酰胺+莪术多糖组(Ⅲ)、莪术多糖组(Ⅳ),分别测定血细胞的吞噬率、吞噬指数,血清的SOD活性及LPO含量,同时处死雏鸡,测定法氏囊和脾脏指数,观察其组织结构。结果表明,莪术多糖对.OH和O2-有明显的清除作用,最高清除率分别是88.91%和98.5%;SOD活性显著增加,与对照组相比最高可提高145%;LPO含量下降,与对照组相比最大可降低40.95%;各组雏鸡体重从使用药第2周开始快速增长,最大平均周增重为48.75 g/周;莪术多糖可使血细胞的吞噬率及吞噬指数、法氏囊和脾脏的相对重量均明显升高,并能促进法氏囊和脾脏的快速发育;环磷酰胺加莪术多糖组上述指标接近正常对照组,说明莪术多糖能补偿环磷酰胺对雏鸡免疫系统的抑制作用。由此可见,莪术多糖具有一定的抗氧化能力,提高机体免疫力,而且能促进雏鸡生产性能,修复组织损伤。

黄芪-莪术不同提取物抗肿瘤作用研究

目的研究不同方法提取的黄芪-莪术提取物的抗肿瘤作用。方法建立人肝癌细胞株HepG2模型,分别以95%乙醇、50%乙醇、水提醇沉、传统水煎四种方法为提取工艺,用CCK-8法检测不同提取物对HepG2细胞抑制生长作用,并用流式细胞法检测其体外诱导HepG2细胞凋亡的情况。用小鼠肝癌H22细胞建立移植性肝癌模型,检测上述提取物体内抗肿瘤活性,用免疫组织化学法检测H22肝癌组织中NF-κB p65的表达情况。结果CCK-8结果显示,与阴性组相比,黄芪-莪术95%乙醇和50%乙醇提取物组最高抑制率分别为89.13%、78.36%,差异有统计学意义(P<0.05),醇沉和水煎提取物组最高抑瘤率分别为20.38%、18.78%,差异无统计学意义(P>0.05)。流式细胞术结果显示,95%乙醇提取组和50%乙醇提取物组能明显诱导HepG2细胞凋亡,水提醇沉组和传统水煎组效果不明显。95%乙醇、50%乙醇、水提醇沉、传统水煎四种提取物对小鼠H22荷瘤均有一定的抑瘤效果,抑瘤率分别为47.55%、36.12%、29.96%、34.68%。与模型组相比,95%乙醇和50%乙醇提取物组能明显降低H22荷瘤组织中NF-κB p65水平的表达(P<0.05)。结论黄芪-莪术95%乙醇、50%乙醇、水提醇沉、传统水煎四种提取物均有抑制小鼠H22荷瘤生长作用,但是只有95%乙醇和50%乙醇提取物能抑制NF-κB p65蛋白的表达,并有抑制人肝癌HepG2细胞生长及诱导其发生细胞凋亡的作用。

高产莪术细胞悬浮系建立及产物前体对挥发油合成的调控研究

研究了高产莪术细胞悬浮系培养的条件及前体物质添加对挥发油合成的调控。结果表明:淡黄色颗粒状愈伤组织是建立高产细胞悬浮系的最佳供试愈伤组织;最佳培养基成分是MS培养基添加葡萄糖与蔗糖各15—30g/L(1:1),氮源为NH_4^+和NO_3^-,比例为1:3,总量为80mmol/L;激素组合为6-BA 3.0-5.0mg/L、2,4-D 1.0mg/L;光下培养10-15天再转入优化条件下的暗培养,可形成稳定的高产细胞悬浮系;其细胞周期中的最大细胞生长量及挥发油含量分别是248g/L和2.28%;前体物质泛酸钙、乙酸铵、乙酸钾的添加均可有效提高培养细胞合成挥发油的百分含量,其中乙酸铵最有效,在指数生长中期添加0.5mmol/L乙酸铵,挥发油的最高含量可达3.11%,产量为8.27g/L,分别是添加前的1.25倍及1.2倍。

莪术多糖的分离纯化

研究莪术多糖分离纯化的最佳条件,优化莪术多糖的提取纯化工艺,为进一步探讨莪术多糖的生物活性奠定基础.莪术经热水提取,酒精沉淀,脱色,脱蛋白得粗多糖.粗多糖用50%、75%乙醇分级沉淀得2个级分CZ1、CZ2,进行DEAE-纤维素柱层析.调节DEAE-纤维素的pH值,比较洗脱曲线的不同.CZ1经DEAE-纤维素柱层析得到1个组分,CZ2在酸性、中性条件下层析得2个组分,在碱性条件下得1个组分,随pH升高,回收率降低,纯度增高.各纯化得到的多糖组分经纸层析、琼脂糖凝胶电泳鉴定为单一成分.实验证明,pH是影响层析的一个重要因素,因此莪术多糖的最佳纯化pH值为7.0.

蓬莪术水提物抗肿瘤作用

蓬莪术水提物(Cur)抑制小鼠移植肿瘤宫颈癌U14生长,5～20g·kg-1(相当生药)ip10d,抑制率为11.8～44.8％。Cur对体外培养的小鼠白血病P388细胞生长、集落形成和MTT甲化合物生成有显著抑制作用,并和剂量呈正相关。0.25-4g·L-1处理细胞24h,细胞生长抑制率为1.0～86.3％;MTT甲化合物生成抑制百分率为1.9～74.6％;处理细胞12h,P388细胞软琼脂集落形成抑制率为3.6～66.9％。

药用植物莪术的组织培养快速繁殖与植株再生的研究

通过茎尖培养实现了中药莪术试管苗的快速繁殖并从试管苗基部诱导出了愈伤组织。实验表明 :以 MS培养基为基本培养基 ,附加 ZT 4.0 mg/ L + IAA 0 .5～ 1.0 m g/ L适于丛生芽的诱导与增殖 ;附加 2 ,4- D 1.0 mg/ L+ KT4.0～ 6 .0 m g/ L 适于愈伤组织的诱导 ;附加 2 ,4- D1.0～ 2 .0 mg/ L + KT0 .2～ 0 .5 mg/ L 适于愈伤组织的继代培养 ;附加 KT 4.0 m g/ L + NAA 0 .2 m g/ L适于愈伤组织的分化。

莪术药材的闪蒸气相色谱测定及其模式识别分析研究

建立了莪术药材的闪蒸-气相色谱法(FE-GC),采用FE-GC测定了3个产地的9个莪术样品.0.4 mg的粉末样品,在200℃下闪蒸,经色谱分离,基于闪蒸色谱图上分离鉴定到的35个共有峰的相对强度,结合化学模式识别即主成分分析和系统聚类分析法对莪术样品进行了鉴别分析.3个产地的莪术样品可以很好地得到区别.本法快速、简便、准确,不失为药材质量控制的良好方法.

柴胡莪术汤配合针刺治疗肝癌介入术后顽固性呃逆的临床疗效

目的:观察柴胡莪术汤联合针刺治疗肝癌介入术后顽固性呃逆的疗效。方法:选择本院2013年1月-2014年1月收治肝癌介入术后发生顽固性呃逆的患者60例作为研究对象,按照数字随机法分为两组,对照组采取针刺太冲、足三里、内关及公孙穴位进行治疗,观察组在此基础上联合应用柴胡莪术汤进行治疗,疗程为10天,观察并比较两组患者的治疗总有效率和不良反应的发生情况。结果:观察组治愈19例(63.3%),显效7例(23.3%),有效3例(10.0%),治疗总有效率为96.7%;对照组治愈13例(43.3%),显效6例(20.0%),有效6例(20.0%),治疗总有效率为83.3%。观察组的临床疗效显著优于对照组,差异具有统计学意义(X2=7.95,P<0.05)。两组患者治疗后的不良反应发生率无明显差异(P>0.05)。结论:柴胡莪术汤配合针刺治疗肝癌介入术后顽固性呃逆疗效较佳,且不良反应少,较为安全,具有重要临床应用价值。