拟黑多刺蚁活性组分通过miR-186-5p/Cx43促进结直肠癌SW116细胞凋亡的作用

目的 探究拟黑多刺蚁活性组分促进结直肠癌SW116细胞凋亡的作用机制。方法 采用CCK8法、划痕实验、凋亡实验检测拟黑多刺蚁活性组分对SW116细胞增殖、迁移和凋亡的影响,Western blot法检测拟黑多刺蚁活性组分对SW116细胞Bax、Bcl-2蛋白表达的影响,RT-qPCR法检测miR-186-5p表达,双荧光素酶报告基因实验验证miR-186-5p与GJA1的靶向关系;过表达/抑制miR-186-5p,并检测Cx43蛋白表达;过表达Cx43,并检测拟黑多刺蚁活性组分对凋亡及相关蛋白、PI3K/Akt信号通路的影响。结果 拟黑多刺蚁活性组分能抑制SW116细胞增殖和迁移能力、Bcl-2蛋白表达,促进细胞凋亡、Bax蛋白和miR-186-5p表达。GJA1是miR-186-5p的下游靶基因,过表达miR-186-5p可降低SW116细胞Cx43蛋白表达,抑制miR-186-5p表达可升高SW116细胞Cx43蛋白表达,抑制miR-186-5p表达可逆转拟黑多刺蚁活性组分对Cx43表达的抑制作用。过表达Cx43可逆转拟黑多刺蚁活性组分对SW116细胞凋亡及相关蛋白、PI3K/Akt信号通路的影响。结论 拟黑多刺蚁活性组分抑制SW116细胞恶性生物学行为,通过miR-186-5p/Cx43调控PI3K/Akt信号通路,促进结直肠癌SW116细胞凋亡。

保产无忧散对孕晚期大鼠Cx-43基因表达及宫颈成熟相关指标的影响

目的:探讨保产无忧散对孕晚期大鼠Cx-43基因表达及宫颈成熟相关指标的影响。方法:取受孕成功的孕鼠30只,采用随机法将孕鼠分成模型对照组(孕鼠)、保产无忧散低剂量给药组(低剂量给药组)、保产无忧散高剂量给药组(高剂量给药组)三组,每组10只,另取11只未孕鼠作为正常对照组。保产无忧散煎煮滤过后浓缩为含生药1.17 g/ml和含生药0.585 g/ml。模型对照组、正常对照组均予以蒸馏水灌胃,保产无忧散低剂量给药组(0.585 g/ml)、高剂量给药组(1.17 g/ml)孕鼠于妊娠第16天开始给药,1次/d,均按1 ml/100 g体重灌胃给药。所有动物连续灌胃5 d。采用酶联免疫吸附剂法(ELISA)测定大鼠子宫体Cx-43含量及子宫前列腺素E 2(PEG 2)、宫颈白介素-8(IL-8)以及宫颈基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1),采用免疫组化法检测子宫体Cx-43阳性表达强度。结果:与正常对照组比较,模型对照组、低剂量给药组、高剂量给药组子宫Cx-43表达及子宫平滑肌中Cx-43阳性表达强度均显著升高(t=-8.593,-3.642;均P<0.01),与模型对照组比较,低剂量给药组Cx-43表达及子宫平滑肌中Cx-43阳性表达强度升高(t=-2.883,-1.950,P=0.005,0.033),高剂量给药组表达下降,差异无统计学意义(t=1.147、-0.653,P=0.133、0.261)。与正常对照组比较,模型对照组、低剂量组、高剂量组子宫组织中PEG_(2)、IL-8、MMP-9水平均显著升高(PEG_(2):t=-3.423、-6.004、-5.079,P=0.001、<0.001、<0.001;IL-8:t=-6.097、-7.995、-5.430,均P<0.001;MMP-9:t=-3.619、-6.172、-4.529,均P<0.001;TIMP-1:t=-2.522、-10.938、-10.938,P=0.011、<0.001、<0.001),与模型对照组比较,低剂量给药组子宫组织中PEG_(2)、IL-8、MMP-9、T1MP-1水平均升高(t=-2.157,-3.163,-2.671,-6.912;P=0.022,0.003,0.008,<0.001),高剂量给药组子宫组织中PEG_(2)、IL-8、MMP-9、TIMP-1水平均升高,但差异无统计学意义(t=-1.304、-0.567、-1.189、-1.610,P=0.104、0.289、0.125、0.062)。结论:低剂量保产无忧散通过提高孕晚期大鼠子宫组织中Cx-43表达及PEG_(2)、MMP-9和IL-8含量,参与并介导宫颈成熟。

Cx-43、Caspase-3、MMP-2在人粥样硬化冠状动脉内皮中的表达及意义

目的观察Cx-43、Caspase-3、MMP-2表达的相关性以及与动脉粥样硬化进展程度的关系,为研究人冠状动脉粥样硬化的发病机制和靶点治疗方面提供依据。方法采用免疫组织化学法检测冠状动脉血管内皮细胞Cx-43、Caspase-3、MMP-2的表达情况。应用SPSS 13.0软件包进行统计学分析。结果 Cx-43与MMP-2、Caspase-3在粥样硬化冠状动脉内皮的表达强度呈正相关。结论 Cx-43、Caspase-3、MMP-2的表达与冠状动脉粥样硬化病变有关,并且Caspase-3、MMP-2与斑块的不稳定有关。Cx-43在冠状动脉粥样硬化中的强表达可以促进动脉粥样硬化病变的发展。

骨形态发生蛋白-2在骨髓源性心肌干细胞向心肌分化中的作用

目的研究骨形态发生蛋白-2(BMP-2)对骨髓源性心肌干细胞(MCSC)向心肌分化的作用,探讨MCSC向心肌分化中的BMP-2信号转导机制.方法从SD大鼠骨髓中筛选MCSC,用BMP-2诱导向心肌定向分化.RT-PCR检测诱导前后BMP-2受体BMPRIA和BMPRII、心肌早期转录因子Nkx2.5和GATA-4以及cTnT mRNA的表达.免疫细胞化学标记诱导后细胞cTnT和Cx-43的表达.结果用BMP-2诱导后,MCSC的形态和排列发生变化.RT-PCR检测结果显示,诱导前BMPRIA和BMPRII以及Nkx2.5和GATA-4呈低表达,诱导后1周表达增加,3～4周表达明显.cTnT mRNA在诱导前不表达,诱导后1周开始表达,3～4周表达明显.免疫细胞化学染色显示,cTnT和Cx-43从诱导后2周开始表达.3～4周cTnT表达增强,呈现密集的横纹样结构.Cx-43在2周位于细胞膜下,3周分布于相邻细胞连接处,4周呈颗粒状密集分布于肌管的相邻细胞连接处. 结论BMP-2通过BMPRIA和BMPRII的介导作用诱导MCSC分化为心肌细胞.

缝隙连接蛋白43与基质金属蛋白酶9在人股动脉粥样硬化斑块中表达分析

目的探讨缝隙连接蛋白43(CX-43)与基质金属蛋白酶9(MMP-9)在人股动脉粥样硬化(AS)斑块中的表达及其与斑块稳定性关系。方法收集股动脉内膜剥脱术后所得AS斑块标本47例,正常脾动脉、肠系膜上动脉组织标本21例作为对照组。根据术前彩超及术后病理检查结果进行分组:稳定斑块组(22例)和不稳定斑块组(25例),免疫组织化学SP法检测各标本中CX-43和MMP-9的表达以及两者之间的相关性。结果 CX-43和MMP-9蛋白在对照组、稳定斑块组及不稳定斑块组中的表达均有差异(F_(CX-43)=662.971,F_(MMP-9)=397.716),差异有统计学意义(P<0.05)。和对照组比较,斑块组CX-43和MMP-9表达均增高,差异有统计学意义(P<0.05)。不稳定斑块组较稳定斑块组CX-43和MMP-9表达明显增强,且差异有统计学意义(P<0.05)。相关性研究结果显示,CX-43和MMP-9在AS组表达呈正相关(r_(稳定斑块组)=0.640,P<0.05;r_(不稳定斑块)=0.715,P<0.05),对照组研究结果提示CX-43与MMP-9无明显相关性。结论 CX-43和MMP-9蛋白表达的上调促进人股动脉粥样硬化斑块形成以及斑块组织的不稳定性。

黄淮白山羊冠状动脉和心肌组织结构及CX-43蛋白的分布观察

为观察黄淮白山羊冠状动脉、心肌组织结构及其CX-43蛋白的分布特点,将10只健康成年黄淮白山羊经麻醉后颈动脉放血致死,取其心制作标本。一部分通过冠状动脉血管铸型标本制备,心肌及冠状动脉标本常规石蜡切片,经MASSON三色、VVG和免疫组织化学染色后显微观察并摄影;另一部分冠状动脉标本通过戊二醛磷酸盐缓冲液固定后,于60℃300 g/L的KOH溶液中浸泡、0.1 mol/L磷酸盐缓冲液冲洗、37℃胶原纤维酶Ⅱ溶液处理6 h后通过20 g/L鞣酸浸泡2.5 h,10 g/L四氧化锇浸泡、梯度乙醇脱水,喷镀氯化金,扫描电子显微镜观察并摄影。结果表明,黄淮白山羊冠状动脉主要形成左冠状动脉旋支、前降支、左前降支对角支及窦房结支;右冠状动脉可形成右冠状动脉旋支,前、后降支和窦房结支等重要分支,黄淮白山羊冠状动脉属于左优势型。弹性冠状动脉管壁中弹性纤维捆扎成束,部分弹性纤维呈螺旋状,肌性冠状动脉管壁平滑肌丰富,少见或偶见弹性纤维。隔缘肉柱心内膜下方分布有浦肯野细胞束,小动脉位于其近中央分布;乳头肌细胞排列整齐,细胞间有少量胶原纤维,浦肯野细胞束沿乳头肌中血管边缘分布;心耳心肌细胞间的胶原纤维明显多于室中隔心肌细胞间的胶原纤维含量;CX-43蛋白主要分布于隔缘肉柱、乳头肌、心房和室中隔的心肌细胞连接处和浦肯野细胞胞膜。

温胆汤含药血清对10 mmol/L谷氨酸条件下星形胶质细胞PSD-95、GAP-43、JIP-3、Cx-43表达的影响

目的:以谷氨酸作用的星形胶质细胞为细胞模型,通过检测突触可塑性相关蛋白的变化,并从突触可塑性角度探讨温胆汤改善精神分裂症认知障碍的分子机制。方法:将大鼠随机分成5组:正常对照组、氯氮平0.02 g/kg组和温胆汤20、30、40 g/kg组。正常对照组灌胃生理盐水,其余各组灌胃相应药物,1次/d,7 d后取血,制备含药血清。采用MTT法确定谷氨酸对星形胶质细胞的作用浓度和时间点;观察温胆汤含药血清对谷氨酸造模的星形胶质细胞形态变化的影响;RT-qPCR法检测星形胶质细胞中突触后致密蛋白95(Psd95)、生长相关蛋白43(Gap43)、Jnk相互作用蛋白3(JIP3)、连接蛋白43(Cx43)mRNA表达;WB法检测星形胶质细胞中PSD-95、GAP-43、JIP-3、Cx-43蛋白表达。结果:根据不同浓度谷氨酸对星形胶质细胞增殖率影响的结果,确定谷氨酸浓度为10 mmol/L的条件下作用星形胶质细胞48 h为细胞实验条件。与正常对照组比较,模型对照组星形胶质细胞形态皱缩、拉长、呈多边形,突触少而且短,形态简单,细胞密度低;其Psd95、Gap43、Jip3、Cx43 mRNA和蛋白表达显著下调(P<0.01);与模型对照组比较,温胆汤20、30、40 g/kg含药血清组星形胶质细胞、突触的形态和状态均有比较大的改善,且细胞密度更密集,并明显上调Psd95、Gap43、Jip3、Cx43 mRNA和蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。结论:温胆汤能有效改善精神分裂症认知缺陷,其作用机制可能是通过减轻星形胶质细胞病理损伤,上调PSD-95、GAP-43、JIP-3、Cx-43表达,进而增强突触可塑性。

天然类胡萝卜素抑制细胞恶性转化机理的初步研究

实验对天然类胡萝卜素抑制细胞恶性转化的机理进行研究,结果表明: 斑蝥黄素、β-胡萝卜素和番茄红素均能显著升调细胞间隙连接通讯功能、抑制细胞生长,并使细胞周期时相左移、M期百分比下降、MI降低;细胞转化及类胡萝卜素处理过程中不伴随间隙连接蛋白基因Cx 43染色体DNA的丢失或突变。 提示: 类胡萝卜素抑制细胞增殖,升调细胞间隙连接通讯功能及其参入间隙连接蛋白基因Cx 43的表达与调控可能是其抑制细胞恶性转化的重要机制之一。

卵巢组织中结蹄组织、肝细胞生长因子及间隙连接蛋白在多囊卵巢综合征患者中的表达及其干预治疗

目的探讨卵巢组织中结蹄组织生长因子(CTGF)、肝细胞生长因子(HGF)及间隙连接蛋白(Cx-43)水平在多囊卵巢综合征(PCOS)患者内的变化,同时对患者进行干预,寻求较为有效的治疗手段。方法选择2012年2～12月就诊于湖北医药学院附属太和医院的PCOS患者60例,将其作为PCOS组,另选择同期健康体检者60例作为对照组,对PCOS组患者行药物治疗干预,每天口服达英-35,连续服用21 d。利用显微镜对研究对象进行卵巢形态学的观察,CTGF、HGF、Cx-43水平测定采用双抗体夹心法。结果卵巢形态学观察结果显示,对照组多个不同发育程度的卵泡形态完整,PCOS组卵泡呈扩张状,且排列松散,经干预,PCOS组颗粒细胞层数有所增加,形态趋于完整。与对照组比较,PCOS组干预前颗粒细胞及卵泡膜细胞中,CTGF[(9.01±2.31)μg/L]、HGF[(9.88±3.21)μg/L]水平显著升高(P<0.05),Cx-43[(11.1±4.3)μg/L]表达水平降低(P<0.05)。经干预,PCOS组CTGF[(6.32±1.17)μg/L]、HGF[(7.13±2.56)μg/L]水平降低(P<0.05),Cx-43[(13.4±5.4)μg/L]表达水平升高(P<0.05)。结论 CTGF、HGF、Cx-43表达在PCOS的高胰岛素血症、高雄激素血症的形成和无排卵中起着重要的作用,可选择达英-35对PCOS患者进行干预治疗。

胎儿心界嵴的形态学特征及其意义

目的:为研究心的基础和射频消融治疗房颤提供胎心界嵴的形态和组织学资料。方法:取52例非正常分娩正常胎心,分别进行大体解剖学、组织学、免疫组织化学和透射电镜电镜观测。结果(:1)胎心界嵴,可分为4类:①全程隆起者占22.2%;②上、中段隆起,下段平坦者占37.8%;③上段隆起,中、下段平坦者占20%;④全程平坦者占20%。(2)界嵴的肌纤维分深、浅两层。深、浅层之间有纤维联系。(3)电镜下界嵴的细胞分3类:心肌细胞、P样细胞和T细胞。(4)免疫组织化学染色显示界嵴上、中、下段均有Cx43阳性表达。Cx43表达大多数在细胞的侧-侧连接上,端-端连接表达较少见。结论:胎心界嵴的形态具有多样性。界嵴内存在P样细胞,可能是心房异位起搏的形态学基础。界嵴细胞间的侧-侧连接多于端-端连接,增加了心肌细胞间的横向传导,可能是心电折返的形态基础。

电针对帕金森病大鼠纹状体缝隙连接蛋白43的表达及谷氨酸含量的影响

目的:观察电针对帕金森病(PD)大鼠纹状体缝隙连接蛋白(Cx)43及谷氨酸(Glu)的影响,探讨电针治疗PD的作用机制。方法:雄性SD大鼠,随机分为正常组、假手术组、模型组、电针组,每组10只。用立体定向微量注射法向大鼠右侧纹状体注射6-羟基多巴胺制备偏侧PD大鼠旋转模型。电针组电针"风府""太冲"穴,每次30min,每日1次,7d为1个疗程,共治疗2个疗程。行为学测试观察PD大鼠旋转行为的改变,运用HPLC荧光法检测纹状体Glu含量,采用Western blot法检测纹状体Cx 43蛋白活性表达的变化。结果:电针组大鼠治疗后旋转行为较治疗前及模型组改善明显(P<0.01,P<0.05)。模型组大鼠Cx43表达较正常组和假手术组显著升高(P<0.01),Glu含量显著升高(P<0.01)。电针组大鼠Cx 43表达较模型组显著降低(P<0.01),Glu含量降低(P<0.05)。结论:电针防治帕金森病的机制可能与针刺能够抑制纹状体Cx 43的表达,减少星形胶质细胞释放Glu有关。

针刺“长强”穴对自闭症模型大鼠学习记忆能力和前额叶皮层缝隙连接相关蛋白表达的影响

目的:观察针刺"长强"穴对自闭症模型大鼠学习和记忆能力及对前额叶皮层缝隙连接相关蛋白(CX)表达的影响,探讨针刺"长强"穴改善自闭症大鼠学习记忆能力的可能机制。方法:Wistar孕鼠予以腹腔注射丙戊酸钠后所产子代,经睁眼试验、游泳试验筛选后,确定为自闭症大鼠模型,随机挑选30只,分为长强组、非穴组、模型组,每组10只,正常Wistar大鼠子代随机挑选10只作为空白组。长强组针刺"长强",每次1min,10d为1个疗程,干预3个疗程;非穴组取胁下非经非穴点针刺。采用Morris水迷宫观察大鼠学习记忆能力,免疫组化法检测大鼠前额叶皮层CX 43、CX 32、CX 36蛋白的表达。结果:自闭症模型组幼鼠睁眼时间在出生后14d(PN 14)、PN 15、PN 16较空白组晚(P<0.05),游泳能力在PN 13和PN 15时较空白组低下(P<0.05)。治疗前长强组、非穴组、模型组逃避潜伏期及平均速度与空白组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗后长强组较模型组及非穴组明显改善(P<0.05)。与空白组比较,模型组CX 43、CX32、CX 36蛋白的表达显著降低(P<0.05);治疗后,长强组CX 43、CX 32、CX 36蛋白的表达显著高于模型组和非穴组(P<0.05)。结论:针刺"长强"穴能通过提高前额叶皮层CX 43、CX 32、CX 36蛋白的表达来改善自闭症模型大鼠学习和记忆能力。

电针传统针刺助产处方对孕晚期大鼠子宫平滑肌协调收缩的影响

目的:通过观察电针传统针刺助产处方(合谷-三阴交穴)对孕晚期大鼠子宫平滑肌协调收缩的影响,进而部分阐释传统针灸助产处方的科学内涵。方法:选用健康成年初孕Wistar雌鼠22只,随机分为电针治疗组和妊娠模型对照组;健康成年未孕Wistar雌鼠11只做为空白对照组。电针治疗组孕鼠均在妊娠第20天上午进行电针,以先电针双侧合谷穴20min,再加刺双侧三阴交穴5min,共针刺25min,电流强度0.2-0.3mA,2/50Hz疏密波为干预方法。同一时间段,模型对照组与空白对照组大鼠布袋束缚25min。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测大鼠血清中雌二醇(E2)、孕酮(P)及子宫组织中前列腺素F2α(PGF2α)的含量,并采用蛋白免疫印记(Western Blotting)法检测大鼠子宫组织中缝隙连接蛋白-43(Cx-43)的表达。结果:与空白对照组比较,模型对照组和电针治疗组血清E2、P、E2/P含量均显著升高(P<0.05,P<0.01),子宫PGF2α含量和Cx-43表达均显著升高(P<0.01);与模型对照组比较,电针治疗组血清E2含量显著升高(P<0.05),P含量下降但无显著差异,E2/P升高但无显著差异,子宫PGF2α含量和Cx-43表达显著升高(P<0.05)。结论:电针刺激优化传统针灸助产处方通过改变孕晚期大鼠血清及子宫组织中相关激素水平而促进孕晚期大鼠子宫向活跃期转变,并通过增加子宫缝隙连接蛋白的表达而发挥其促进子宫协调收缩的作用。可认为是该处方发挥促分娩作用的主要途径之一。部分阐释传统针灸助产处方的分子生物学机制,为针灸在产科中的应用提供科学依据。

发育心肌和心肌干细胞分化后心肌特异蛋白表达的比较研究

为探讨MCSC移植修复缺血性心肌的可能性,观察了大鼠发育心肌和MCSC分化为心肌细胞的cTnT和Cx-43表达特点。结果表明从胚胎发育至成年,心肌cTnT mRNA表达逐渐上调;用BMP-2诱导1周的MCSC可检测到cTnT mRNA表达,3～4周表达显著升高,诱导2周能观察到cTnT蛋白,3～4周可见cTnT呈现横纹样结构。胚胎第11 d心肌可检测到Cx-43 mRNA表达,生后7 d达高峰,以后逐渐降低,17 d趋于稳定。胚胎期Cx-43蛋白多分布于肌膜下,生后10 d位于细胞连接处。诱导的MCSC中Cx-43 mRNA表达特征与cTnT mRNA相似,2周可观察到Cx-43蛋白,3～4周可见Cx-43位于相邻细胞连接处。本研究结果提示,在BMP-2诱导下MCSC可分化为心肌细胞,表现为成熟心肌细胞的结构特征。MCSC有望成为治疗缺血性心脏病的理想种子细胞。