不同阳离子对Cyanea capillata水母触手提取物溶血活性的影响(英文)

目的探讨血浆对Cyanea capillata水母触手提取物(TOE)溶血活性的影响和孔道形成在其溶血机制中的作用。方法在具有相同红细胞浓度的1%稀释的全血和0.5%红细胞悬液中,检测不同浓度(100、200、400μg/ml)的TOE产生的溶血效应,并在两套体系中分别加入20、50或100 mmol/L的K+、Ca2+、Mg2+、Mn2+、Zn2+、Cu2+、Fe2+、La3+、NH4+等阳离子和离子螯合剂EDTA,观察其对TOE溶血活性的影响。结果在两套溶血检测体系中,TOE均呈现出剂量依赖性的溶血效应,TOE为200μg/ml时在红细胞悬液产生的溶血强度高于稀释的全血;Mn2+、Zn2+、La3+、Cu2+、Fe2+和EDTA均明显降低TOE溶血活性(P<0.05),其中以Zn2+的抑制作用最强,而K+、Ca2+、Mg2+、NH4+可不同程度地增强其溶血活性(P<0.05)。结论血浆对TOE的溶血作用有一定的保护作用,而孔道形成可能在TOE的溶血机制中具有重要作用。

发形霞水母毒素分离产物溶血活性的比较及其影响因素分析

目的:分离发形霞水母刺丝囊毒素(nematocyst venom,NV)与无刺丝囊触手提取物(tentacle-only extract,TOE),比较二者的溶血活性,分析其影响因素。方法:采用自溶、离心方法分离发形霞水母NV和TOE,比较二者的溶血活性,观察提取物浓度、温度和pH值等因素对二者溶血活性的影响。结果:成功分离到NV与TOE;二者浓度相关溶血活性曲线均呈"S"形,溶血分数50%时所对应的质量浓度(HU50)分别为8μg/ml和67μg/ml,前者溶血活性强度约为后者的8.4倍;温度对二者溶血活性影响较大,最大溶血活性都出现在40℃;pH值对二者溶血活性也有影响,在pH8处二者都具有最大的溶血活性,但后者较前者更为敏感。结论:发形霞水母毒素分离产物NV和TOE均具有溶血活性,且前者强于后者;二者溶血活性受浓度、温度和pH值的影响。

发形霞水母触手提取物活性的初步研究

目的初步分离发形霞水母触手提取物并探讨其生物学活性。方法采用自溶、离心的方法去除发形霞水母触手刺丝囊并获取触手提取物,通过阶段梯度阳离子交换色谱,应用0%,20%,40%,100%B液4种比例洗脱液将触手提取物分成4个组分,分别观察分离各组分的溶血、心血管等活性,并与触手提取物平行对比分析。结果成功分离到具有溶血、心血管活性的发形霞水母触手提取物,4个洗脱组分中,0%B液组分无上述3种活性,20%B液组分具有溶血活性、40%B液组分具有心血管活性,而100%B液组分则含有色素。结论通过阳离子交换色谱,初步将发形霞水母触手提取物中具有溶血活性、心血管活性以及色素等组分分离开来,为后续进一步纯化其单一活性组分打下基础。

发形霞水母触手提取物对大鼠离体心脏传导系统的影响

目的观察水母触手提取物(TOE)对大鼠离体心脏传导功能的影响,探讨其心脏毒性可能的作用机制。方法72只SD雄性大鼠随机分为6组(n=12),利用大鼠离体心脏Langendorff模型,分别给予不同剂量的TOE,观察其对大鼠心脏传导系统的影响。结果给予TOE后,与空白组比较,心率减慢和心律失常的几率明显增大,并呈现剂量依赖性。结论TOE对心脏的传导系统具有显著影响,是其心脏毒性的原因之一。

发形霞水母毒素溶血活性研究

目的探讨发形霞水母毒素(Cyanea capillatafull venom,CFV)的体外溶血活性及其影响因素。方法超声破碎法分离得到CFV,测定其半数溶血分数(HU50),探讨温度、pH、放置时间对溶血活性的影响,并进一步研究不同动物红细胞对溶血活性的敏感性。结果CFV溶血活性的HU50为5.82μg.mL-1;溶血活性对温度和pH变化耐受性差,在40℃和pH 8.0时有最大溶血活性;25℃和37℃放置12 h CFV溶血活性迅速下降至18.6%和17.4%;对不同动物红细胞敏感性差异较大,其中以家犬红细胞最为敏感。结论CFV有显著的溶血活性。

发形霞水母丝氨酸蛋白酶家族原核表达载体的构建及其表达

目的获得发形霞水母丝氨酸蛋白酶,为深入研究发形霞水母丝氨酸蛋白酶的功能奠定基础。方法综合运用生物信息学分析发形霞水母丝氨酸蛋白酶分子的序列特征和活性功能。通过设计带有特异性酶切位点的引物,将编码发形霞水母丝氨酸蛋白酶的核苷酸序列(CcSP1,CcSP2和CcSP3)从cDNA文库中扩增出来,利用pET-24a(+)载体构建重组表达质粒(pET24a-Cc SP1、pET24a-CcSP2和pET24a-CcSP3),经过筛选和鉴定正确后转入表达菌Rosetta(DE3).plysS。重组质粒转化表达菌在IPTG诱导下表达,利用SDS-PAGE电泳和Western-blot分析表达的重组蛋白。结果 SDS-PAGE电泳结果可见重组质粒转化的表达菌分别在34、42和30kDa处有蛋白条带,Western-blot检测显示,这些蛋白可特异性与抗His抗体反应,分别与预测重组蛋白分子量一致,鉴定为正确表达的目的重组蛋白。结论本研究成功构建了发形霞水母丝氨酸蛋白酶家族原核表达载体,获得了目标蛋白,为进一步研究水母丝氨酸蛋白酶的活性和功能奠定基础。

发形霞水母触手提取物的蛋白稳定性及其溶血活性

目的探讨不同环境因素和处理方法对发形霞水母（Cyanea capillata）触手提取物（tentacle extract,TE）蛋白稳定性及其溶血活性的影响。方法结合蛋白浓度测定、溶血活性检测和SDS-PAGE分析等方法研究不同环境因素和处理方法对TE蛋白稳定性及其溶血活性的影响。结果 TE溶血活性呈明显的剂量依赖关系,其半数溶血分数HU50=226μg/ml;40℃水浴1 h,能去除TE中大量杂蛋白,但仍保持显著溶血活性;TE在4℃放置28 d,其溶血活性保持稳定,25℃下3 d内其溶血活性变化不明显;p H值对TE溶血活性的影响呈钟形曲线,在p H 6.0-11.0之间活性相对稳定,p H 8.0是TE保持溶血活性的最优p H条件;不同缓冲液对TE稳定性及其溶血活性影响显著,浓度大于26%的硫酸铵溶液对TE溶血蛋白具有良好的盐析作用。结论 40℃水浴1 h预处理可显著减少TE中非活性蛋白组分,并降低样品黏性;4℃和p H 8.0是TE保持蛋白稳定性和溶血活性的最适条件;浓度大于26%的硫酸铵盐析有利于溶血蛋白组分富集。

马来沙水母和发形霞水母不同生长阶段消化酶活性研究

[目的]研究马来沙水母和发形霞水母在不同生长阶段4种消化酶活性。[方法]采用ELISA法测定2种水母的螅状体、幼体和成体的纤维素酶、胃蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶4种消化酶活性。[结果]马来沙水母除了成体阶段的脂肪酶和幼体阶段的淀粉酶活性低于发形霞水母,其他发育阶段各消化酶活性普遍高于发形霞水母,且差异极显著(P<0.01)。马来沙水母的胃蛋白酶和脂肪酶活性均随着个体的生长呈现下降趋势,而纤维素酶和淀粉酶活性随着个体的生长呈现先下降后上升趋势;发形霞水母4种消化酶的活性均随着个体生长呈现先下降后上升趋势。2种水母螅状体阶段消化酶活性最高,且与其他阶段差异极显著(P<0.01)。马来沙水母螅状体、成体阶段胃蛋白酶活性与脂肪酶活性均呈显著正相关,马来沙水母幼体发育阶段和发形霞水母螅状体阶段胃蛋白酶活性与纤维素酶活性呈显著正相关,发形霞水母螅状体阶段脂肪酶活性与淀粉酶活性呈极显著正相关,幼体阶段纤维素酶活性与淀粉酶活性也呈极显著正相关。[结论]水母在不同生长阶段消化酶活性各有不同,应根据各个水母不同生长阶段消化酶的活性变化,及时调整饵料中蛋白质、脂肪、淀粉和纤维素的比例,提高饵料利用率,促进水母的生长。

发形霞水母共附生微生物的分离鉴定及其发酵液的抑菌活性研究

目的对发形霞水母(Cyanea capillata)共附生微生物进行分离鉴定并测定其抑菌活性,以期获得具有较高抑菌活性的菌株。方法利用4种分离培养基从C.capillata各部位分离共附生微生物,首先对挑选的单个菌落进行反复的划线分离,获得各菌株的纯培养;利用形态学观察、生理生化特征检测和16SrDNA序列测定和分析等手段对获得的菌株进行鉴定;以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌作为指示菌,利用滤纸片扩散法测定菌株发酵液的抑菌活性;通过正交试验方法进一步优化发酵条件,提高菌株发酵产生抑菌活性物质的能力。结果从C.capillata触手、胃囊、伞部、肌肉4个部位共分离出83株菌株,其中放线菌11株,细菌31株,真菌41株;其中菌株cmf-2经鉴定属于假单胞菌属。抑菌活性检测发现,在31株细菌中有14株对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌均有较强的抑菌活性,占分离菌株的45.2%;正交试验结果显示,菌株cmf-2发酵液的最优条件为:培养温度35℃,pH 7.3,培养时间7d,蔗糖50g/L,蛋白胨10g/L。结论分离到的发形霞水母共附生微生物中含有较高比例的能产生抑制细菌生长的活性物质的细菌菌株,这些菌株具有较强的研究和开发价值。