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Cyanovirin-N:一种新型灭活HIV-1蛋白的研究进展 被引量:4
1
作者 裴明军 桂向东 宋礼华 《国外医学(预防.诊断.治疗用生物制品分册)》 2004年第5期220-224,共5页
Cyanovirin- N是新发现的一种能够有效抑制 HIV感染的天然蛋白 ,由蓝细菌 N ostoc ellipsosp orum合成分泌。本文综述了 Cyanovirin- N的发现、结构特点、抑制HIV的分子机理以及应用前景。
关键词 cyanovirin-n 抗病毒作用 人类免疫缺陷病毒
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Cyanovirin-N蓝藻的筛选及其分子鉴定 被引量:1
2
作者 郑斯平 陈彬 郑伟文 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期54-57,共4页
目的:从实验室培养的自生蓝藻中筛选出含有能编码抗病毒蛋白(cyanovirin-N,CV-N)基因的藻株并对其进行分子鉴定。方法:应用PCR技术和自行设计的特异性引物从80株蓝藻中筛选目标藻株,通过克隆、测序后,进行blast比对,经在线生物信息学软... 目的:从实验室培养的自生蓝藻中筛选出含有能编码抗病毒蛋白(cyanovirin-N,CV-N)基因的藻株并对其进行分子鉴定。方法:应用PCR技术和自行设计的特异性引物从80株蓝藻中筛选目标藻株,通过克隆、测序后,进行blast比对,经在线生物信息学软件预测该抗病毒蛋白CV-N的一级,二级,三级结构,并推测该基因序列编码的蛋白的抗病毒潜能。结果:筛选出藻株RZHA4,其所含的CV-N基因与已报道的CV-N基因有97%的相似性。结论:经16S rRNA-PCR和序列分析,该藻株与蓝藻Nostocaceae有99%的相似性,为一在实验室常规培养条件下生长良好的念珠藻(Nostoc),有可能成为新的CV-N生产藻株。 展开更多
关键词 蓝藻 抗病毒蛋白-N 蛋白质结构 聚合酶链式反应
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Antiviral Activity of Recombinant Cyanovirin-N against HSV-1 被引量:3
3
作者 Hong YU Zong-tao LIU +1 位作者 Rui LV Wen-qing ZHANG 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2010年第6期432-439,共8页
In this study,a standard strain of HSV-1 (strain SM44) was used to investigate the antiviral activity of the recombinant Cyanovirin-N (CV-N) against Herpes simplex virus type 1 (HSV-1) in vitro and in vivo.Cytopathic ... In this study,a standard strain of HSV-1 (strain SM44) was used to investigate the antiviral activity of the recombinant Cyanovirin-N (CV-N) against Herpes simplex virus type 1 (HSV-1) in vitro and in vivo.Cytopathic effect (CPE) and MTT assays were used to evaluate the effect of CV-N on HSV-1 in Vero cells.The number of copies of HSV-DNA was detected by real-time fluorescence quantitative PCR (FQ-PCR).The results showed that CV-N had a low cytotoxicity on Vero cells with a CC50 of 359.03±0.56 μg/mL,and that it could not directly inactivate HSV-1 infectivity.CV-N not only reduced the CPE of HSV-1 when added before or after viral infection,with a 50% inhibitory concentration (IC50) with 2.26 and 30.16μg/mL respectively,but it also decreased the copies of HSV-1 DNA in infected host cells.The encephalitis model for HSV-1 infection was conducted in Kunming mice,and treated with three dosages of CV-N (0.5,5 & 10 mg/kg) which was administered intraperitoneally at 2h,3d,5d,7d post infection.The duration for the appearance of symptoms of encephalitis and the survival days were recorded and brain tissue samples were obtained for pathological examination (HE staining).Compared with the untreated control group,in the 5mg/kg CV-N and 10mg/kg CV-N treated groups,the mice suffered light symptoms and the number of survival days were more than 9d and 14d respectively.HE staining also showed that in 5mg/kg CV-N and 10mg/kg CV-N treated groups,the brain cells did not show visible changes,except for a slight inflammation.Our results demonstrated that CV-N has pronounced antiviral activity against HSV-1 both in vitro and in vivo,and it would be a promising new candidate for anti-HSV therapeutics. 展开更多
关键词 Recombinant cyanovirin-n Herpes simplex virus type 1(HSV-1) Antiviral activity Real-time FQ-PCR ENCEPHALITIS
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cyanovirin-N抗HIV的作用机制
4
《传染病网络动态》 2001年第5期24-24,共1页
关键词 cyanovirin-n HIV 作用机制 病毒细胞 靶细胞
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抗HIV抑制剂cyanovirin-N的研究进展
5
作者 李斯文 顾觉奋 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第23期2326-2329,2339,共5页
Cyanovirin-N(CV-N)是一种天然蛋白,由蓝细菌合成分泌,低浓度(0.1~36.8 nmol.L-1)能有效抑制HIV感染免疫细胞,高浓度(45~400 nmol.L-1)对正常细胞无直接的毒副作用。CV-N是作用于吸附过程的HIV抑制剂并且作为局部用(阴道、直肠等)抗HI... Cyanovirin-N(CV-N)是一种天然蛋白,由蓝细菌合成分泌,低浓度(0.1~36.8 nmol.L-1)能有效抑制HIV感染免疫细胞,高浓度(45~400 nmol.L-1)对正常细胞无直接的毒副作用。CV-N是作用于吸附过程的HIV抑制剂并且作为局部用(阴道、直肠等)抗HIV药物正处于临床前开发阶段。本文对Cyanorivin-N的理化性质、结构和抗病毒作用机制等进行了概述。 展开更多
关键词 cyanovirin—N 获得性免疫缺陷综合征 抗病毒活性
原文传递
新型抗病毒蛋白CVN的构建及原核表达 被引量:3
6
作者 刘玉生 李昌 +2 位作者 金宁一 于芳 金洪涛 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期395-398,共4页
目的构建重组抗病毒蛋白CVN原核表达载体,并进行表达和鉴定。方法采用全基因合成的方法合成目的基因CVN(Cyanovirin-N),将该片断插入到pBluescriptⅡSK(+)载体中后,亚克隆至原核表达载体pET28a(+),构建pET-CVN表达载体,转入大肠杆菌BL21... 目的构建重组抗病毒蛋白CVN原核表达载体,并进行表达和鉴定。方法采用全基因合成的方法合成目的基因CVN(Cyanovirin-N),将该片断插入到pBluescriptⅡSK(+)载体中后,亚克隆至原核表达载体pET28a(+),构建pET-CVN表达载体,转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。用SDS-PAGE,Western-blot等方法分析鉴定表达产物。结果合成的目的基因全长303bp,重组载体pET-CVN经PCR和双酶切鉴定,证实构建成功。将其导入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物相对分子量为17 000左右,与理论预期值完全相符。凝胶成像分析表明最高表达量可占菌体总蛋白的46.4%。SDS-PAGE,West-ern-blot分析表明目的蛋白得到了很好的表达。结论成功构建了pET-CVN原核表达载体,并得到了大量的表达,为进一步研究其生物学功能奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 抗病毒蛋白 原核表达 cyanovirin-n
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抗AIDS新型导向毒素CVN-LP1融合基因的构建及原核表达 被引量:1
7
作者 李昌 金宁一 +5 位作者 刘玉生 于芳 金洪涛 李臻 佟敬山 胡宁宁 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期100-104,共5页
目的:构建重组抗病毒融合蛋白CVN-LP1原核表达载体,并进行表达和鉴定。方法:将已经构建好的pET-CVN和pET-LP1重组质粒,EcoRI和HindⅢ同时进行双酶切,保留LP1片段前端的linker序列。将所得的CVN片段连入pET-LP1载体上,构建pET-CVN-LP1融... 目的:构建重组抗病毒融合蛋白CVN-LP1原核表达载体,并进行表达和鉴定。方法:将已经构建好的pET-CVN和pET-LP1重组质粒,EcoRI和HindⅢ同时进行双酶切,保留LP1片段前端的linker序列。将所得的CVN片段连入pET-LP1载体上,构建pET-CVN-LP1融合表达载体,转化入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。SDS-PAGE、Western-blot鉴定表达产物。结果:重组载体pET-28a(+)-CVN-LP1经PCR及XhoI/EcoRI和EcoRI/HindIII双酶切鉴定,证实构建成功。将其转化入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物相对分子量约为20kDa,与理论大小一致。凝胶成像分析表明最高表达量可占菌体总蛋白的49.58%。SDS-PAGE、Western-blot分析表明目的蛋白得到了很好的表达。结论:构建了pET-CVN-LP1原核表达载体,并得到了目的融合蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 核糖体失活蛋白 原核表达cyanovirin-n LuffinP1
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蓝藻抗病毒蛋白N 被引量:2
8
作者 陆源 文建凡 《生命的化学》 CAS CSCD 2004年第2期92-93,共2页
蓝藻抗病毒蛋白N(cyanovirin N)是Boyd等 1997年在蓝藻中发现的一种抗病毒蛋白 ,其抗病毒机制是与病毒表面衣壳蛋白上的甘露寡糖结合 ,阻止病毒与宿主细胞表面的受体结合。由于近年不断发现它对各种严重的RNA逆转录病毒的抗病毒活性而... 蓝藻抗病毒蛋白N(cyanovirin N)是Boyd等 1997年在蓝藻中发现的一种抗病毒蛋白 ,其抗病毒机制是与病毒表面衣壳蛋白上的甘露寡糖结合 ,阻止病毒与宿主细胞表面的受体结合。由于近年不断发现它对各种严重的RNA逆转录病毒的抗病毒活性而倍受关注。 展开更多
关键词 蓝藻 抗病毒蛋白 蓝藻抗病毒蛋白N(cyanovirin-n)
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蓝藻抗病毒蛋白N基因的原核表达及重组蛋白的纯化和复性 被引量:8
9
作者 吕锐 于红 +2 位作者 刘宗涛 庞峰 张文卿 《医学研究生学报》 CAS 2007年第11期1139-1142,共4页
目的:构建蓝藻抗病毒蛋白(CV-N)基因原核表达载体,表达、纯化并复性其重组蛋白。方法:根据GenBank中CV-N的全基因序列,人工合成CV-N序列,进行PCR扩增。将扩增的PCR产物克隆至原核表达载体pET30a(+)上,构建重组表达载体pET30a-CV-N,测序... 目的:构建蓝藻抗病毒蛋白(CV-N)基因原核表达载体,表达、纯化并复性其重组蛋白。方法:根据GenBank中CV-N的全基因序列,人工合成CV-N序列,进行PCR扩增。将扩增的PCR产物克隆至原核表达载体pET30a(+)上,构建重组表达载体pET30a-CV-N,测序鉴定后,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达蛋白,SDS-PAGE和Westenblot鉴定表达产物,Ni Sepharose柱纯化目的蛋白,稀释法复性蛋白。结果:重组质粒pET30a-CV-N测序结果显示,插入片段为303 bp,与GenBank中的CV-N基因序列完全相同。经IPTG诱导的CV-N基因可在E.coli中高效表达;SDS-PAGE分析表明,相对分子质量11000处出现一条新条带,主要以包涵体形式存在,37℃诱导2、4、6、8 h后,表达蛋白分别占菌体蛋白的3.87%、19.10%、33.98%和31.58%。Western blot结果显示,重组蛋白能与抗His单抗特异性反应。将诱导6 h的菌体超声破碎后,Ni Sepharose柱纯化,相对分子质量11 000处显示出清晰的单一条带,且蛋白复性效果良好。结论:成功地构建了CV-N原核表达载体,表达并纯化出重组蛋白,为深入研究其抗病毒的活性奠定了基础。 展开更多
关键词 蓝藻抗病毒蛋白N 基因 原核表达 蛋白纯化 复性
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CVNH结构域的进化分析和选择压力检测 被引量:3
10
作者 齐小琼 高磊 +1 位作者 苏应娟 王艇 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期87-94,共8页
蓝藻抗病毒蛋白-N(Cyanovirin-N,CV-N)具有广谱抗病毒活性,其同源物构成CVNH(Cyanovirin-N homology)蛋白家族,并且家族成员的抗人类免疫缺陷病毒结构域在进化上非常保守。文章通过重建基因树对CVNH结构域的"零散分布"特点作... 蓝藻抗病毒蛋白-N(Cyanovirin-N,CV-N)具有广谱抗病毒活性,其同源物构成CVNH(Cyanovirin-N homology)蛋白家族,并且家族成员的抗人类免疫缺陷病毒结构域在进化上非常保守。文章通过重建基因树对CVNH结构域的"零散分布"特点作了更为细致的了解,发现在黑曲霉、费氏曲菌、产黄青霉、粗糙脉孢霉、蓝杆藻和水蕨等物种中存在多份该结构域拷贝。在此基础上,分别采用机理式模型(Mechanistic model)和MEC模型(Mechanistic-empirical combination model)对CVNH结构域序列位点进行适应性进化分析,结果显示:1)两类模型均未检测到统计上显著的正选择位点;2)净化选择对CVNH起主导作用;3)MEC模型更适合所研究的数据。进一步使用"支-特异"模型和"支-位点"模型对蓝杆菌菌株7822和7424的祖先分支进行检测,发现该分支经历过适应性进化,并且鉴定出6个正选择位点(34L、63L、13H、76C、78K和80I)。 展开更多
关键词 CVNH 蓝藻抗病毒蛋白-N 基因复制 净化选择 适应性进化
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抗人类免疫缺陷病毒蓝藻蛋白-N研究进展 被引量:10
11
作者 李奇渊 章军 《中国新药与临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期371-375,共5页
蓝藻抗病毒蛋白 N (cyanovirin N ,CV N )是一种从椭孢念珠藻 (Nostocelliposporum )中分离出的抗病毒活性蛋白 ,能够有效地抑制多个亚型的人类免疫缺陷病毒Ⅰ (HIV Ⅰ ) ,Ⅱ (HIV Ⅱ )以及猴免疫缺陷病毒 (SIV )。CV N的上述特性使它... 蓝藻抗病毒蛋白 N (cyanovirin N ,CV N )是一种从椭孢念珠藻 (Nostocelliposporum )中分离出的抗病毒活性蛋白 ,能够有效地抑制多个亚型的人类免疫缺陷病毒Ⅰ (HIV Ⅰ ) ,Ⅱ (HIV Ⅱ )以及猴免疫缺陷病毒 (SIV )。CV N的上述特性使它可能成为艾滋病 (AIDS)的潜在高效治疗药物。大量研究证明 ,CV N与包膜糖蛋白 12 0 (GP12 0 )具有高度亲和性并能够阻断由包膜蛋白介导的细胞融合过程从而阻止病毒的扩散。CV 展开更多
关键词 蓝藻抗病毒蛋白-N 艾滋病 人类免疫缺陷病毒 包膜糖蛋白120
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蓝藻抗病毒蛋白-N在大肠杆菌中的表达及其抗体的制备 被引量:1
12
作者 黄小花 章军 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1117-1121,共5页
目的:构建抗病毒蓝藻蛋白-N(Cyanovirin-N,CV-N)表达载体并在大肠杆菌中稳定表达,并进一步制备用于检测转CV-N基因表达产物的特异抗体。方法:以已构建的pMD(CV-N)为模板,设计引物,利用PCR技术扩增出CV-N基因,将成熟CV-N的编码框序列构... 目的:构建抗病毒蓝藻蛋白-N(Cyanovirin-N,CV-N)表达载体并在大肠杆菌中稳定表达,并进一步制备用于检测转CV-N基因表达产物的特异抗体。方法:以已构建的pMD(CV-N)为模板,设计引物,利用PCR技术扩增出CV-N基因,将成熟CV-N的编码框序列构建到原核表达载体pET-His中,氨苄青霉素平板筛选及PCR、酶切鉴定,挑选出阳性克隆进行扩增,DNA测序正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE以及MALDI-TOF/MS分析鉴定,采用透析法重折叠复性,亲和层析分离纯化得到分子量为12700的带有组氨酸标签的重组CV-N融合蛋白。用亲和层析分离纯化后的CV-N融合蛋白作为抗原,采用皮下多点注射免疫的方法免疫昆明小鼠,经过31天的免疫,获得抗CV-N的多克隆抗体。结果:成功地获得了CV-N基因,并且以包涵体的形式表达于大肠杆菌中,表达量高达42.0%。用间接酶联免疫吸附(ELISA)方法,测得抗体效价超过1∶8000,Westernblot检测结果显示,该抗体能特异性地与CV-N抗原产生明显免疫亲和反应。结论:建立原核高效稳定表达CV-N系统,获得具有生物学活性的CV-N蛋白,所制备的抗体具有很好的灵敏性和特异性,为进一步研究其功能奠定基础。 展开更多
关键词 抗病毒蓝藻蛋白-N 克隆表达 酶联免疫吸附反应 WESTERN BLOT
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重组蓝藻抗病毒蛋白N抗单纯疱疹病毒2型作用的实验研究 被引量:2
13
作者 安立冰 刘宗涛 于红 《社区医学杂志》 2008年第13期7-8,共2页
目的研究重组蓝藻抗病毒蛋白N(CV-N)并探讨其抗单纯疱疹病毒2型(HSV-2)的作用。方法以不同剂量的CV-N分别作用于HSV-2病毒复制的各个环节,通过观察药物毒性、细胞病变效应(CPE)、MTT比色法检测细胞增殖。判断CV-N的抗病毒效果。结果重组... 目的研究重组蓝藻抗病毒蛋白N(CV-N)并探讨其抗单纯疱疹病毒2型(HSV-2)的作用。方法以不同剂量的CV-N分别作用于HSV-2病毒复制的各个环节,通过观察药物毒性、细胞病变效应(CPE)、MTT比色法检测细胞增殖。判断CV-N的抗病毒效果。结果重组CV-N对Vero细胞毒性较低,对HSV-2无直接灭活作用,可干扰病毒向宿主细胞的吸附,其抗病毒生物合成的活性优于阳性对照药物阿昔洛韦。结论重组CV-N在体外具有良好的抗HSV-2病毒作用。 展开更多
关键词 重组蓝藻抗病毒蛋白N 单纯疱疹病毒2型 抗病毒
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蓝藻抗病毒蛋白N全长基因原核表达克隆的构建
14
作者 庞峰 于红 《世界感染杂志》 2007年第3期200-202,共3页
目的构建蓝藻抗病毒蛋白(CV-N)全长基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达。方法根据GeneBank中CV-N的全基因序列,人工合成CV-N序列,进行PCR扩增。将扩增的PCR产物经双酶切后,克隆到原核表达载体pET30a(+)上,构建重组表达载... 目的构建蓝藻抗病毒蛋白(CV-N)全长基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达。方法根据GeneBank中CV-N的全基因序列,人工合成CV-N序列,进行PCR扩增。将扩增的PCR产物经双酶切后,克隆到原核表达载体pET30a(+)上,构建重组表达载体pET30a—CV-N。重组质粒经核苷酸测序鉴定后,转化宿主茵BL21(DE3)诱导表达目的蛋白。结果CV-N基因可在大肠杆菌中高效表达,重组蛋白相对分子质量为11Kd,以包涵体形式存在。结论成功地构建了CV—N原核表达载体,为CV—N的纯化及其抗病毒的活性研究奠定了基础。 展开更多
关键词 蓝藻抗病毒蛋白N 基因 原核表达
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蓝藻抗病毒蛋白-N衍生物的克隆、发酵与纯化 被引量:1
15
作者 杨辉 吴崇超 +5 位作者 陈佳 陈伟 杨依丽 罗勇 姚冬生 熊盛 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期116-120,共5页
蓝藻抗病毒蛋白-N(Cyanovirin-N,CVN)能特异性与病毒表面糖蛋白结合,抑制病毒进入宿主细胞及抑制病毒感染细胞与未感染细胞的融合。通过分子设计及优化,在CVN的N-末端连接了5个氨基酸的柔性多肽(GGGGS),构建了SUMO-L5-CVN融合表达系统。... 蓝藻抗病毒蛋白-N(Cyanovirin-N,CVN)能特异性与病毒表面糖蛋白结合,抑制病毒进入宿主细胞及抑制病毒感染细胞与未感染细胞的融合。通过分子设计及优化,在CVN的N-末端连接了5个氨基酸的柔性多肽(GGGGS),构建了SUMO-L5-CVN融合表达系统。SUMO-L5-CVN在大肠杆菌BL21中呈可溶性表达;通过表达条件优化,以0.5 mmol/L IPTG在20℃诱导24 h是最佳的诱导表达条件;SUMO-L5-CVN表达量占菌体总蛋白的30%;经Ni-NTA亲和层析获得融合蛋白SUMO-L5-CVN,SUMO蛋白酶酶切,以及进一步从Ni-NTA亲和层析获得的目的蛋白L5-CVN蛋白纯度>98%。结果表明,低浓度的L5-CVN与流感病毒表面糖蛋白gp120就有较高的亲和力。 展开更多
关键词 蓝藻抗病毒蛋白-N 连接肽 发酵 纯化
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蓝藻抗病毒蛋白N衍生物的细胞毒性及抗病毒活性检测 被引量:1
16
作者 陈佳 吕芬 +5 位作者 吴崇超 彭舟 魏博 杨辉 陈伟 熊盛 《安徽农业科学》 CAS 2013年第8期3323-3326,共4页
[目的]研究蓝藻抗病毒蛋白N(CVN)衍生物(LCVN)对永生化上皮角质形成细胞(HaCaT)的毒性及LCVN凝胶的制备和体外活性检测。[方法]用MTT法测定LCVN对HaCaT细胞株的半数毒性浓度(CC50)以及LCVN对流感病毒毒株A/HK/8/68(H3N2)的半数抑制浓度(... [目的]研究蓝藻抗病毒蛋白N(CVN)衍生物(LCVN)对永生化上皮角质形成细胞(HaCaT)的毒性及LCVN凝胶的制备和体外活性检测。[方法]用MTT法测定LCVN对HaCaT细胞株的半数毒性浓度(CC50)以及LCVN对流感病毒毒株A/HK/8/68(H3N2)的半数抑制浓度(IC50);用流式细胞检测法检测LCVN对HaCaT细胞周期与细胞凋亡的影响;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测LCVN凝胶与HIV包膜蛋白GP120的相互作用。[结果]培养24和48 h后,LCVN对HaCaT的CC50分别为(9.25±1.21)与(1.94±0.12)μmol/L,将LCVN做成凝胶后,与HIV外膜蛋白GP120的结合在一定浓度范围内具有剂量关系,LCVN凝胶对A/HK/8/68(H3N2)毒株的IC50为(98.20±0.03)nmol/L。[结论]LCVN对HaCaT细胞的毒性明显小于CVN,当做成凝胶以后LCVN对流感病毒A/HK/8/68(H3N2)具明显抑制作用,并能与HIV包膜蛋白GP120相互作用。 展开更多
关键词 蓝藻抗病毒蛋白N 流感病毒 GP120
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蓝藻抗病毒蛋白-N及其基因工程研究进展
17
作者 申灵 付香斌 《农产品加工(下)》 2012年第8期105-106,112,共3页
蓝藻抗病毒蛋白-N(Cyanovirin-N,CV-N)具有独特的广谱高效抗病毒活性,特别是因其能有效抑制人类免疫缺陷病毒(HIV)而备受关注。综述了蓝藻抗病毒蛋白-N的结构、理化性质。
关键词 蓝藻抗病毒蛋白-N 结构 抗病毒活性 基因工程
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蓝藻抗病毒蛋白-N基因的克隆、表达、纯化及活性鉴定 被引量:8
18
作者 陈伟 韩波 +2 位作者 钱垂文 刘秋英 熊盛 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期538-544,共7页
蓝藻抗病毒蛋白-N(Cyanovirin-N,CVN)具有强效抗HIV及其他包膜病毒活性,该蛋白序列特殊,难以重组制备,在大肠杆菌细胞质中形成包涵体。本研究根据大肠杆菌密码子偏好性对CVN原始核苷酸序列进行优化,通过多次PCR合成SUMO-CVN的全长DNA序... 蓝藻抗病毒蛋白-N(Cyanovirin-N,CVN)具有强效抗HIV及其他包膜病毒活性,该蛋白序列特殊,难以重组制备,在大肠杆菌细胞质中形成包涵体。本研究根据大肠杆菌密码子偏好性对CVN原始核苷酸序列进行优化,通过多次PCR合成SUMO-CVN的全长DNA序列,构建pET3c-SUMO-CVN重组表达质粒,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),获得表达菌株。通过对诱导剂浓度和诱导时间的优化,发现以0.5mmol/LIPTG在20℃诱导24h可获得最高表达,SDS-PAGE结果显示,SUMO-CVN为可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的28%;经特异性的SUMO蛋白酶对融合蛋白进行酶切及两步Ni-NTA凝胶亲和层析可以得到纯度较高的重组CVN蛋白。ELISA结果表明,重组蛋白CVN与gp120蛋白有较高的亲和力。体外抗病毒活性实验表明,重组蛋白CVN在纳摩尔浓度具有很好的抗HSV-1和HIV-1/ⅢB活性;这为开发基于CVN的新型、高效抗病毒药物打下了基础。 展开更多
关键词 蓝藻抗病毒蛋白-N 表达 纯化 HSV-1 HIV-1
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CVN重组蛋白体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒作用的研究 被引量:2
19
作者 韦应芳 冀池海 +7 位作者 汪志 盛金良 孙彦阔 刘乙兴 李琪 蔡孟楷 王衡 张桂红 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1242-1249,共8页
本研究以Gen Bank中蓝藻抗病毒蛋白N(CVN)基因序列(DQ668406.1)为基础,合成CVN基因,构建表达质粒pMAL-c5x-CVN,通过优化诱导条件,表达出可溶性CVN重组蛋白。利用cck8试剂盒检测CVN重组蛋白对Marc-145细胞的毒性,并在安全浓度范围内... 本研究以Gen Bank中蓝藻抗病毒蛋白N(CVN)基因序列(DQ668406.1)为基础,合成CVN基因,构建表达质粒pMAL-c5x-CVN,通过优化诱导条件,表达出可溶性CVN重组蛋白。利用cck8试剂盒检测CVN重组蛋白对Marc-145细胞的毒性,并在安全浓度范围内进行了抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)试验。在PRRSV感染Marc-145细胞的吸附、穿入和复制三个阶段进行检测,探究CVN体外抗PRRSV的作用效果。各阶段的病毒TCID50检测、间接免疫荧光试验以及qPCR测定结果表明,CVN在PRRSV感染宿主细胞过程中的入侵阶段发挥阻断作用,而在病毒吸附细胞和在细胞内复制的阶段没有抑制效果。本研究为新型抗PRRSV药物的研发奠定了试验基础。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 蓝藻抗病毒蛋白N 抗病毒效应 间接免疫荧光试验
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米曲霉中蓝藻抗病毒蛋白-N基因的克隆与表达
20
作者 谢露 付显令 +4 位作者 孙萍 林俊芳 郭丽琼 云帆 黎倩怡 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期126-129,157,共5页
[目的]提高蓝藻抗病毒蛋白-N(CVN)的异源表达量,获得大量高纯度可溶性蛋白。[方法]采用RT-PCR从酱油发酵酱醪宏基因组中克隆获得CVN基因cvn-SF,构建了重组表达载体p ET32a-cvn-SF,转化E.coli BL21菌株,获得工程菌株,优化表达条件,通过Ni... [目的]提高蓝藻抗病毒蛋白-N(CVN)的异源表达量,获得大量高纯度可溶性蛋白。[方法]采用RT-PCR从酱油发酵酱醪宏基因组中克隆获得CVN基因cvn-SF,构建了重组表达载体p ET32a-cvn-SF,转化E.coli BL21菌株,获得工程菌株,优化表达条件,通过Ni-NTA凝胶亲和层析对CVN-SF蛋白进行纯化。[结果]工程菌株在温度30℃、添加1 mmol/L的IPTG诱导剂、培养时间12 h的条件下获得最高表达量的可溶性蛋白。Ni-NTA凝胶亲和层析纯化得到了230.8 mg/L的CVN蛋白,占提取总蛋白含量的33.37%。[结论]所得CVN蛋白高于目前报道的CVN在大肠杆菌的最高表达量140 mg/L^([11])。 展开更多
关键词 蓝藻抗病毒蛋白-N 酱醪 米曲霉 基因克隆 基因表达
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