TNF-α诱导Molt-4细胞周期特异性凋亡及cyclin B1的表达

目的:观察TNF-α诱导Molt-4细胞的凋亡现象以及cyclinB1的表达,探讨膜受体途径细胞凋亡机制。方法:用TNF-α处理指数生长期的Molt-4细胞;应用API、免疫印迹电泳等方法检测细胞凋亡和cyclinB1的表达。结果:Molt-4细胞经TNF-α诱导后出现了明显的细胞凋亡,细胞凋亡主要发生在细胞周期的G1期,cyclinB1在G1期呈阳性表达。结论:TNF-α诱导的细胞凋亡具有细胞周期特异性,cyclinB1在G1期细胞中表达升高可能与G1期细胞凋亡有关。

Cyclin B1的启动子在HeLa细胞cyclin B1蛋白调控中的作用

目的通过检测细胞周期素B1(cyclinB1)的启动子在HeLa细胞的不同细胞周期的活性变化,探讨其对cy-clinB1蛋白的调控作用。方法采用PCR法获得HeLa细胞cyclinB1的启动子,通过基因重组插入pGL3promotervector从而获得质粒pGL3/cyclinB1promoter。采用羟基脲(hydroxyurea,HU)对HeLa细胞进行细胞周期G1、S、G2/M期的同步化,通过流式细胞术法确认。用短暂转染的方法,将重组的质粒转染至HeLa细胞。通过双萤光素酶活性检测分析cyclinB1的启动子在HeLa细胞周期G1、S、G2/M期的活性的变化。结果双荧光素酶活性检测cyclinB1的启动子活性在G1期最高,S期最低,G2期中等。结论在HeLa细胞中cyclinB1的启动子活性和cyclinB1蛋白的表达并不同步。

青蒿琥酯引起骨髓瘤细胞RPMI8226 G_2/M期阻滞

目的研究青蒿琥酯对人多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226细胞周期的影响及可能机制。方法分别以浓度为0、25、50μg/mL的青蒿琥酯作用于RPMI8226细胞,用透射电镜观察细胞变化,流式细胞术检测细胞周期分布,蛋白质印迹法检测细胞周期相关蛋白cyclin B1和p34cdc2的变化。结果 50μg/mL青蒿琥酯处理48h后,多数细胞显示出凋亡细胞的特征性形态。随着青蒿琥酯浓度增加,G0/G1期细胞的比例逐渐下降(P<0.05),G2/M期细胞的比例逐渐上升(P<0.05),细胞明显阻滞于G2/M期。细胞周期蛋白cyclin B1表达水平随青蒿琥酯浓度的增加而增加,p34cdc2表达水平随青蒿琥酯浓度的增加而降低。结论青蒿琥酯能将RPMI8226细胞阻滞于G2/M期,其机制可能与cyclin B1的升高及p34cdc2的降低有关。

染料木黄酮影响MDA-MB-453细胞对紫杉醇化疗敏感性的机制

目的:探讨染料木黄酮(genistein,GEN)影响紫杉醇(paclitaxel,PTX)体外化疗HER2/neu高表达人乳腺癌细胞株MDA-MB-453敏感性的作用机制。方法:GEN和PTX单独或联合处理MDA-MB–453细胞,流式细胞仪检测细胞周期分布,免疫细胞化学法检测HER2/neu蛋白、Westernblot检测Akt、p-Akt、CyclinB1、CDK1蛋白表达的变化。结果:GEN和PTX单独作用时MDA-MB-453细胞分别阻滞于G1/S期和G2/M期,HER2/neu、总Akt和CDK1蛋白水平均没有明显变化,但GEN可显著降低p-Akt和CyclinB1蛋白水平,而PTX则明显增加CyclinB1蛋白水平,二者联合处理时GEN拮抗PTX增加CyclinB1蛋白水平和诱导G2/M期阻滞的作用。结论:GEN拮抗PTX增加cyclin B1蛋白水平和G2/M期阻滞的作用,可能是其降低PTX体外化疗MDA-MB-453细胞敏感性的机制之一。

细胞周期素G1在大肠癌中的表达及意义

【目的】探讨细胞周期素G1（Cyclin G2）在大肠癌纽织中的表达及其意义。【方法】应用免疫纽化SP法检测31例正常大肠组织、70例大肠癌组织及相应癌旁组织中的Cyclin G1蛋白的表达。【结果】正常大肠组织未发现Cyclin G1表达；大肠癌组织中可见明显的胞核棕黄色阳性表达，相应的癌旁组织表达很少（P〈0．05）；Cyclin G1在大肠癌中的表达与肿瘤的Dukes分期相关。【结论】Cyclin G1可能参与大肠癌的发生和发展过程，有利于病情评估，并可能成为大肠癌癌基因治疗的新靶点。

反义细胞周期蛋白B1重组AAV抑制骨肉瘤U2OS细胞增殖和诱导凋亡

目的研究携带反义细胞周期蛋白B1（CCNB1）的腺相关病毒载体（rAAV-AS-CCNB1/Neo）对骨肉瘤细胞U2OS的细胞增殖抑制和诱导凋亡的影响。方法将构建的重组AAV载体pd16-95-AS-CCNB1/neo和AAV/腺病毒辅助质粒pSH3共转染HEK293细胞,得到表达AS-CCNB1的重组AAV,纯化并浓缩病毒,测定病毒滴度。用重组AAV感染人骨肉瘤U2OS细胞（感染复数为10^5-10^6v.g./细胞）,采用Western blotting、RT-PCR、四甲基偶氮唑盐（MTT）法、流式细胞术等检测或观察重组AAV对细胞周期蛋白B1表达,瘤细胞体外增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果成功构建rAAV-AS-CCNB1,病毒滴度为1.0×10^11v.g./ml,体外感染U2OS细胞后可明显降低其增殖活性,Western blotting和RT-PCR提示,rAAV-AS-CCNB1可抑制细胞周期蛋白B1表达,流式细胞术提示,细胞出现明显凋亡和G1期阻滞。结论反义CCNB1重组AAV具有明显的抗骨肉瘤U2OS细胞体外增殖作用,其作用可能与其诱导细胞凋亡和周期阻滞有关。

HSP_70与p57^kip2在骨巨细胞瘤中的表达及意义

目的探讨骨巨细胞瘤中HSP_70和p57^kip2皿的表达与其Enneking外科分期及预后的关系。方法应用免疫组化S-P法检测30例骨巨细胞瘤石蜡切片中HSP_70与p57^kip2的表达，并与13例骨软骨瘤作对比。结果随着骨巨细胞瘤Enneking分期的升高，HSP_70的表达强度增加，而p57^kip2的表达强度减弱。1-3期骨巨细胞瘤的HSP_70阳性率分别为22．2％、88．9％、100％，1～3期骨巨细胞瘤的p57^kip2弘阳性率分别为88．9％、88．9％、33．3％。HSP_70与p57^kip2表达存在负相关（r=-0．54，P〈0．01）。HSP_70在侵袭性强的骨巨细胞瘤中高表达，p57^kip2在侵袭性弱的骨巨细胞瘤中高表达。结论HSP_70与p57^kip2与骨巨细胞瘤的发生、发展有关，可为其外科分期和预后判断的提供一定的辅助参考。