Cyclophilin B与人类肿瘤关系的最新研究进展

亲环素家族(Cyps),为免疫抑制剂环孢素A(CSA)的细胞内受体,通过肽基脯氨酰顺反异构酶(PPIase)的活性和分子伴侣在细胞内发挥重要的作用。CypA在亲环素家族中首次被报道出来是其在肿瘤中呈上调表达,但是对于CypB在肿瘤中的表达尚不清楚。近年来研究发现CypB在乳腺癌、胰腺癌、肝细胞癌、胃癌及胶质母细胞瘤中表达升高,并与肿瘤细胞的生长、增殖、运动、细胞周期进程和肿瘤的形成有关。CypB可能是恶性肿瘤早期诊断潜在的生物学标志物和肿瘤治疗的靶点。现就CypB与肿瘤关系的研究进展做一综述。

重组人亲环蛋白CypB的制备及活性鉴定

目的·构建人源亲环蛋白B(hCypB)的表达载体,通过原核表达体系制备有活性的hCypB。方法·通过双酶切法将编码hCypB基因构建到p GEX-6p-1表达载体中,采用亲和层析法一步纯化hCypB,最后通过GST-pulldown验证过表达的hCypB的活性。结果·经DNA测序验证,成功构建了hCypB的表达质粒。通过GST柱纯化可以从1 L过夜诱导的大肠埃希菌菌液中获得26 mg,纯度达到90%的GST-hCypB融合蛋白,且GST-pulldown试验证明该重组蛋白可以与脯氨酸-3-羟化酶1(P3H1)及软骨相关蛋白(CRTAP)形成三元复合物。结论·利用该实验方法可以在短期内获得大量高纯度、有活性的人源亲环蛋白CypB。

日本血吸虫Sj Cyclophilin B基因的克隆、表达及免疫保护效果分析

本研究克隆和表达了日本血吸虫Cyclophilin B(Sj CyPB)编码基因的cDNA,分析其在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,评估该重组抗原在小鼠体内诱导的抗血吸虫免疫保护效果。本研究以日本血吸虫童虫cDNA为模板,RT-PCR扩增其基因全长cDNA,提交序列到NCBI,登录号为GQ403665。荧光实时定量PCR分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体的表达情况,构建重组表达质粒,表达纯化重组蛋白。利用Western blotting检测重组蛋白的抗原性。以重组抗原免疫小鼠,评估其对小鼠诱导的免疫保护效果。结果表明,RT-PCR获得了Sj CyPB编码基因的全长cDNA,其开放阅读框为672bp。经分析确定其为CyPs家族中的CyPB基因,命名为Sj CyPB。荧光实时定量PCR分析表明,该基因在18d童虫期表达量最高,32d次之。构建了重组表达质粒pGEX-6P-1-SjCyPB,并在大肠杆菌中成功表达,表达产物分子量为49.5kDa。Western blotting试验显示该重组蛋白具有良好的抗原性,在小鼠免疫试验中,与空白对照组比较,免疫组小鼠获得31.5%的减虫率和41.01%的肝脏减卵率。本研究获得了日本血吸虫童虫期高表达的Sj CyPB基因的全长cDNA,成功构建了Sj CyPB原核重组表达质粒,并在大肠杆菌中成功表达,证实该重组抗原在小鼠体内诱导产生了部分免疫保护效果。